UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

Facultad de Ciencias de la salud

Escuela Académica Profesional de Enfermería

DIAGNOSTICO DE TBC YERSINIA PESTIS Y

BARTONELLA

ASIGNATURA

Microbiología y Parasitología

DOCENTES

Dr. Carlos Enrique Holguin Mauricci

Mg. Francis More Calero

Mg Manuel Feria Zevallo

ALUMNA

Fiestas Nunura, Esther Abigail

SEMESTRE ACADÉMICO

2022-I I

Piura, Perú

2022
 OBSERVACIÓN DE MYCOBACTERIUM, YERSINIA Y BARTONELLA

1.1. Observación de micobacterias

1.2.1. La baciloscopia (examen microscópico)

1.2.1.1. Preparación del extendido y fijación

La baciloscopia es un examen directo, se toma como muestra un esputo y es obtenida

después de un esfuerzo de tos. Sin embargo, una muestra con apariencia de saliva puede ser
positiva. Se le entrega al paciente un envase para que expectore, luego se hace el extendido en
la lámina.

Tener en cuenta que la extensión sea homogénea y lo suficientemente grueso. Si es

demasiado delgado, es posible obtener un resultado falso negativo. Si es muy espesa, el
material puede desprenderse durante la tinción, o los bacilos pueden ser difíciles de ver debajo
de una gruesa capa de moco.

Para la fijación utilice un portaobjetos electrónico para el montaje o, si esto no es posible,

tome un de cada frotis presecado, sosteniendo el lado de la muestra hacia arriba, y déjelos
secar con el siguiente flujo de aire de GBS. Colocar cada corredera fija sobre la base. La
tinción con fucsina fenicada da como resultado la muerte de Bacillus

1.1.1.2 Coloración de zihel neelsen

Materiales

 Fucsina 3 humos
 Alcohol acido
 Azul de metileno
 Procedimiento

 Coloración durante 5 min

 Coloque las dos varillas de vidrio, una al lado de la otra, a unos 5 cm de distancia,
en el contenedor de manchas.
 Colocar las hojas fijas sobre la base, manteniendo la secuencia de números por
encima del y dejando una distancia de al menos 1 cm entre ellas. cubre
completamente la superficie del pincel con fucsia. Dosificar el tinte con cuidado sin
salpicar ni tocar las hojas de los envases que contienen tintes.
 Caliente suavemente el área de abajo con un algodón humedecido en alcohol y con
un movimiento de ida y vuelta hasta que vea los primeros humos blancos, deje de
calentar y repita el proceso dos veces más. No calentar con soplete, y no hierva el
fucsia, porque la pared de bacilos puede destruirse y el color puede ser malo.
 Aclarar con abundante agua fría a baja presión (el agua caliente quita las manchas)
muy suave y cuidadosamente de la superficie, eliminando completamente la
solución de fucsina. Voltee el cepillo y lave cuidadosamente la parte posterior
también. Levante con cuidado el portaobjetos con pinzas o con la mano desde el
extremo más cercano al usuario. El agua fría es importante para que la pared abierta
por el calor vuelva a ser natural.
 Incline el portaobjetos para eliminar el exceso de agua y evitar la dilución de los
reactivos utilizados

 Decolorar durante 3 minutos

 Cubrir toda la grasa con alcohol ácido y dejar actuar 3 minutos.

 Lavar con abundante agua a baja presión.
 Asegúrese de que el tinte sea de color (no puede obtener más de tinte en áreas más
gruesas con un tinte de rosa). Si ve manchas rojas o un color rosa fuerte, cubra
nuevamente con solución de lejía, deje actuar de 1 a 3 minutos y lave nuevamente.
 Eliminar el exceso de agua inclinando el portaobjetos
 Tinción de fondo con azul de metileno durante 1 minuto

 Cubrir toda la muestra con solución de azul de metileno.

 Dejar 1 minuto.
 Enjuague las sábanas por ambos lados con agua a baja presión y limpie la parte
inferior con alcohol algodón, si se mancha. Asegúrese de que el número de placa
sea claro y visible. Si no, enuméralos de nuevo.
 Dejar secar los portaobjetos a temperatura ambiente y colocarlos verticalmente
sobre papel absorbente. No coloque papel absorbente sobre la mancha.

1.1.1.2 Observación microscópica

Esputo

1000x 1000x 1000x

 1.1.1.3 Reporte de resultados

1.2. Yersinia (coloracion gram) cultivo bacteriano

Yersinia es un coco bacilo Gram-negativo aerobio y anaerobio facultativo de borde

redondeado con una amplia distribución mundial y un reservorio natural que se encuentra en
muchos animales. La transmisión a humanos es principalmente por vía fecal-oral, aunque
también se ha descrito transmisión por transfusión de sangre.

1.2.1 Pruebas de diagnóstico de laboratorio

La peste debe sospecharse en pacientes febriles expuestos a roedores en áreas endémicas

conocidas. La rápida detección y confirmación de la enfermedad a través de pruebas de
laboratorio es fundamental para que el paciente reciba un tratamiento que le salve la vida.

1.2.1.1. Muestras

Extraiga sangre para cultivo y aspire los ganglios linfáticos agrandados para obtener
muestras y cultivos. Los sueros agudos y convalecientes pueden analizarse para medir las
concentraciones de anticuerpos. En caso de neumonía, se cultiva el esputo, para una posible
meningitis, se toma líquido cefalorraquídeo para análisis y cultivo.
 1.2.1.2. Frotis

Yersinia pestis contiene pequeños bacilos gramnegativos que aparecen en el material

clínico como células individuales o en pares o cadenas cortas. Las tinciones de Wright,
Giemsa o Wayson pueden ser más útiles para teñir probable bubón o material de hemocultivo
positivo por el aspecto bipolar característico (forma de alfiler) de los microorganismos con
estos métodos de tinción, lo cual no tiene lugar con la tinción de Gram directa. Los métodos
de tinción directa más precisos (pueden estar disponibles en laboratorios de referencia)
implican el uso de tintes de anticuerpos fluorescentes dirigidos al antígeno

1.2.1.3. Cultivo

Todas las muestras se cultivan en placas de agar sangre, chocolate y agar MacConkey y
caldo de infusión de cerebro y corazón. El crecimiento en medios sólidos puede ser lento y
tardar más de 8 horas, pero los hemocultivos suelen ser positivos en 2 horas. Los cultivos
pueden identificarse inicialmente por reacciones bioquímicas. Yersinia pestis produce
colonias intolerantes a la lactosa en agar MacConkey y crece mejor a 25°C que a 37°C.

El organismo produce catalasa, pero no indol, oxidasa o ureasa, y está inmóvil. Las dos
últimas reacciones son útiles para distinguir Yersinia pestis de otras Yersinia patógenas. Un
microorganismo con las características anteriores debe enviarse a un laboratorio de salud
pública para la prueba final. La identificación definitiva de cultivos se logra mejor mediante
inmunofluorescencia o lisis con bacteriófagos específicos de Yersinia pestis. Todos los
cultivos son altamente infecciosos y deben manipularse con sumo cuidado en una cabina de
bioseguridad.

YERSINIA YERSINIA PESTIS

(COLORACIÓN WRIGTH)
(COLORACIÓN GRAM) YERSINIA PESTIS
MUESTRA SANGRE
CULTIVO BACTERIANO (COLORACIÓN WAYSON)
HUMANA
 1.3 Bartonella

Son agentes etiológicos de enfermedades emergentes u oportunistas a nivel mundial que

pueden causar infecciones intravenosas graves en humanos y animales. Las manifestaciones
de la enfermedad varían según la especie de Bartonella infectante y el estado inmunitario del
paciente.

1.3.1. Tinción de sangre: (tinción de wright)

La tinción de Giemsa es una variante de la tinción de Romanowsky, está disponible en

todos los laboratorios y permite la detección de eritrocitos infectados con Bartonella
bacilliformis en sus formas bacteriana, cocobacilar o cocoide. Antes de la tinción, la muestra
debe fijarse con metanol.

1.3.2. Materiales

 Metanol
 Varillas de vidrio para coloración.
 ✓ Varillas de vidrio para coloración.
 ✓ Bandeja.
 ✓ Frascos gotero.
 ✓ Papel de filtro.
 ✓ Pinza.
 ✓ Embudo.
 ✓ Reloj.
 ✓ Tampón fosfato
 ✓ Varillas de vidrio para coloración.
 ✓ Bandeja.
 ✓ Frascos gotero.
 ✓ Papel de filtro.
 ✓ Pinza.
 ✓ Embudo.
 ✓ Reloj.
 ✓ Tampón fosfato
 ✓ Varillas de vidrio para coloración.
 ✓ Bandeja.
 ✓ Frascos gotero.
 ✓ Papel de filtro.
 ✓ Pinza.
 ✓ Embudo.
 ✓ Reloj.
 ✓ Tampón fosfatVarillas de vidrio para coloración.
 Embudo
 Reloj.
 Colorante Giemsa
 Solución de trabajo (colorante diluido)
 Frascos gotero
 Tampón fosfato
 Bandeja
 Papel de filtro
 Pinza.

1.3.3. Procedimiento de la coloración de la muestra sanguina

 La muestra de sangre debe estar seca antes de la fijación, el secado puede

acelerarse con calor ligero, como el producido por una lámpara. Evite el calor
excesivo, ya que esto dificultará la coloración.
 Fijar la muestra de sangre sumergiendo el portaobjetos en una botella de metanol
durante tres segundos. Retire y deje secar o coloque el portaobjetos en un palo y
cubra la superficie con metanol y deje que se evapore por completo.
 Prepare el colorante diluido o solución de trabajo inmediatamente antes de iniciar la
coloración y asegúrese que el volumen preparado sea suficiente para las muestras
que se va a colorear (aprox.1 mL por lámina). Debe ser evaluado y ajustado de
acuerdo a la condición y características del color base.
 Filtrar la solución de trabajo con papel de filtro

Coloración sobre varillas de vidrio

Esta es la forma más rápida y puede colorear hasta diez laminas a la vez.

 Coloque una varilla de vidrio en un fregadero o plato para facilitar la eliminación

de líquidos colorantes.
 Las muestras de sangre previamente adheridas al bastoncillo se colocan separadas
unas de otras para una manipulación segura.
 La extensión se cubre durante 15 minutos con un tono de trabajo diluido 1:10. (El
tiempo de dilución y tinción se ajusta según las propiedades del colorante
preparado).
 Deseche el tóner y lave la página con agua corriente suave y continua hasta
eliminar el exceso de tóner.
 Colocar las láminas en diagonal sobre una rejilla para escurrir y dejar secar a
temperatura ambiente.
 Protege la mancha del polvo