UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DEL VALLE DE TOLUCA

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

GRUPO IBT5MB

FUNDAMENTOS DE BIOPROCESOS

PRÁCTICA 4: “EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SALES SOBRE LA

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA"

FACILITADOR: ARAUJO GUZMÁN ALMA FABIOLA

ALUMNOS:

● AGUILAR NAVA MARÍA FERNANDA

● GARCÍA DÍAZ DANIELA GUADALUPE

● RAMÍREZ PERDOMO JUAN CARLOS

● RUIZ MARTINEZ MARIAJOSÉ

● SALGADO OTAÑEZ KARLA YARELI

ALMOLOYA DE JUÁREZ, 01 DE MARZO 2022

RESUMEN

Se realizó el análisis del efecto de la concentración de sales sobre la actividad

enzimática del producto obtenido de nuestro trigo (enzima α-amilasa) en donde
primero se obtuvo el sustrato y se dividió en seis tubos diferentes para posterior a
ello poder añadir a cada uno una solución del sulfato de amonio el cual fue diluido
en agua destilada a diferentes concentraciones; una vez separadas las soluciones
en los diferentes tubos con el sustrato se colocaron a baño maría a una temperatura
óptima y poder observar la reacción que sufría a determinado tiempo.
INTRODUCCIÓN

La actividad enzimática a nivel celular, se encarga de cumplir el papel importante de

la activación y aceleración de diversos procesos celulares y metabólicos específicos
sabiendo que es un catalizador biológico. Es una proteína que acelera la velocidad
de una reacción química específica en la célula y no se destruye durante la reacción
utilizándose una y otra vez. Una célula contiene miles de diferentes tipos de
moléculas de enzimas específicas para cada reacción química particular.

Las propiedades de las enzimas derivan del hecho de ser proteínas y de actuar
como catalizadores. Como proteínas, poseen una conformación natural más estable
que las demás conformaciones posibles. Así, cambios en la conformación suelen ir
asociados a cambios en la actividad catalítica. Los factores que influyen de manera
más directa sobre la actividad de un enzima son:
● pH: La mayoría de las enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.
Desviaciones de pocas décimas por encima o por debajo del pH óptimo
pueden afectar drásticamente su actividad.
● Temperatura: En general, los aumentos de temperatura aceleran las
reacciones químicas: por cada 10ºC de incremento, la velocidad de reacción
se duplica.La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama
temperatura óptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de
velocidad de la reacción debido a la temperatura es contrarrestado por la
pérdida de actividad catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la
actividad enzimática decrece rápidamente hasta anularse.
● Cofactores: Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos
covalentemente a la enzima se llaman grupos prostéticos. La forma
catalíticamente activa de la enzima, es decir, la enzima unida a su grupo
prostético, se llama holoenzima.

Las enzimas tienen una enorme variedad de funciones dentro de la célula: degradan
azúcares, sintetizan grasas y aminoácidos, copian fielmente la información genética,
participan en el reconocimiento y transmisión de señales del exterior y se encargan
de degradar subproductos tóxicos para la célula, entre muchas otras funciones
vitales.
MARCO TEÓRICO

“Efecto de la temperatura sobre la actividad y la velocidad enzimática de la

alfa-amilasa”.

Se comprobará la influencia de la temperatura (T) en la cinética de la enzima

alfa-amilasa salival en su acción sobre los enlaces alfa 1-4 del almidón. Para ello
nos basaremos en la desaparición del almidón en la unidad de tiempo mediante el
seguimiento de la reacción de color que produce el mismo, así como sus productos
de hidrólisis con el Iodo en disolución de Ioduro de potasio (Reactivo de Lugol).

La enzima alfa-amilasa puede ser obtenida a partir de saliva humana o a partir de

granos de cereales germinados macerados en agua.

Dado que el almidón está integrado por dos fracciones, la amilosa y la amilopectina,
debe tenerse en cuenta las reacciones que ambas producen (así como sus
respectivos productos de hidrólisis) con el reactivo de Lugol. Cuando se mezcla el
almidón (mezcla de amilosa y amilopectina), amilasa salival con yodo, produce un
color azul violeta. Mientras que sus productos de hidrólisis, maltosa, glucosa y
dextrinas límite con el yodo no producen coloración.

En toda reacción enzimática si se incrementa la concentración de la enzima, se

formará una mayor cantidad de producto por unidad de tiempo. El incremento en la
concentración de enzima es directamente proporcional al incremento de la velocidad
de reacción siempre y cuando la cantidad de sustrato no sea limitante,

La concentración afecta la velocidad de reacción en muchas formas. El proceso

catalítico usualmente requiere de que la enzima y el sustrato tengan grupos
químicos en una forma iónica para poder interactuar, el pH modifica el estado y por
tanto la velocidad de reacción
OBJETIVOS DE LA PRÁCTICA

Como objetivo principal de la práctica correspondiente es la identificación de la

estructura química y los factores que afectan la actividad enzimática, de nueva
cuenta haciendo uso de procedimientos vistos con anterioridad en las demás
prácticas de laboratorio ya realizadas.

Material de laboratorio:
Tubos de ensaye 1.5 x 15 cm.
Vaso de ppdo. 250 ml.
Gradillas.
Pipetas 1 ml, 5 ml.
Matraces de 50 ml
Mechero y tina para baño maría.
Termómetro.

Reactivos:
Sulfato de amonio
Agua destilada

Material biológico:
Enzima, de acuerdo al tipo de enzima para la determinación de su actividad.
Sustrato (dependiendo del tipo de enzima).

PROCEDIMIENTO

Preparación de la enzima:

● A partir de semillas germinadas, prepare 30 mL de un macerado acuoso con

10 g de semillas de germen ya germinadas en agua a una temperatura de
50°C.
● Deje reposar de 15 - 20 minutos entre 30-45ºC y filtre el extracto obtenido .
● Añada 5 gotas de glicerina para extraer lo más posible las enzimas
Concentración de sales sobre la actividad enzimática

● Realización de 5 soluciones de sulfato de amonio a diferentes

concentraciones siendo estas a 10%, 20%, 30%, 40% y finalmente a 50%
● Tome los tubos de tubos de ensayo necesarios dependiendo de la cantidad
de soluciones de sulfato de amonio

● Etiquete los tubos del 1 al x

● Una vez etiquetados los tubos de ensayo agregue los reactivos en el orden
de la siguiente tabla

Tubo 10 ml sulfato de Extracto enzimático Substrato

amonio (%) mL mL
1 10 1 1
2 20 1 1
3 30 1 1
4 40 1 1
5 50 1 1
x X 1 1

● Incube los 6 tubos 30 minutos a la temperatura óptima de la enzima, estos

siendo monitoreados en un plazo de cada 5 minutos, detenga la reacción
colocando los tubos en un baño de hielo.
● Finalmente observe el efecto de la concentración las sales sobre la actividad
enzimática o en dado caso la desnaturalización de la enzima en cada tubo
RESULTADOS Y DISCUSIONES

El resultado obtenido de la práctica correspondiente después de hacer y seguir el

procedimiento dictado fué la obtención de 5 de los 6 tubos de ensayo cuyas
propiedades en función de la enzima fueron desnaturalizados en diferente medida,
pasados los 30 minutos de observación se concluyó que la desnaturalización
presente en cada tubo fue llevada a cabo debido a la concentración del sustrato,
debido a que entre más concentrado esté el sustrato la enzima se irá
desnaturalizando de manera progresiva ya que la reacción no solo está en función
del sustrato, sino que también de la temperatura y del tiempo.

Como fue mencionado anteriormente la concentración del sustrato en este caso de

la sal, debido a que aumenta la actividad de la enzima hasta cierto nivel, pero
demasiada sal puede disminuir la velocidad de reacción de la enzima o la actividad
al desnaturalizar las enzimas. La naturaleza de la sal también es importante, ya que
los iones monovalentes no pueden afectar demasiado a la actividad, mientras que
los iones divalentes, especialmente los iones metálicos, pueden inhibir la actividad
de las enzimas bloqueando las enzimas.

No solo la concentración sino también la naturaleza de la sal también afecta la

actividad enzimática al afectar la fuerza iónica de la solución.
CONCLUSIONES

Las enzimas cumplen un papel meramente importante ya que estas tienen la

función de acelerar reacciones metabólicas a nivel celular, es por esto que es de
gran importancia entender y analizar su función, además de que bien sabemos que
para la realización de las actividades enzimáticas es necesario tener un correcto
medio para su desarrollo, es por esto que al realizar la presente práctica pudimos
realizar una comparativa significativa entre su desarrollo con un medio óptimo a uno
que generó su desnaturalización.

En primera instancia obtuvimos nuevamente nuestra enzima como en las prácticas

anteriores, colocando 1 ml de este en cada uno de los 6 tubos de ensayo, para
posteriormente ser agregados 1 ml de almidón y la disolución de sulfato de amonio
al 50%, siendo analizados en periodos de 5 minutos pudimos ir observando como
existía un cambio de densidades ya que a pesar de estar a una temperatura óptima,
los tubos con mayores concentraciones de sulfato no presentaron reacción alguna a
comparación de aquellos tubos con concentraciones mínimas o inexistentes,
concluyendo que los medios con altas concentraciones de sales evitan el proceso y
desarrollo enzimático, provocando su muerte y solamente la aparición de la
decantación del almidón al fondo del tubo, en comparativa con aquel tubo sin
reactivo en el cual se podían observar distintas separaciones en las cuales pudo
desarrollarse la enzima.
ANEXOS