Bioquímica y microbiología Industrial

PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA INDUSTRIAL

REACCIONES DE RECONOCIMIENTO E IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Y
AMINOÁCIDOS

I.- OBJETIVOS:
Identificar aminoácidos y proteínas por medio de métodos basados en reacciones químicas.

II.- FUNDAMENTOS

REACCIONES DE PRECIPITACIÓN
Son producidas por la acción de reactivos y agentes que alteran el estado coloidal de las
soluciones de proteínas provocando la separación de la fase dispersa por
desnaturalización de las proteínas. La desnaturalización de las proteínas provoca la
ruptura de las estructuras secundarias, terciarias y cuaternarias de ellas. Estos agentes
físicos pueden ser el calor, el etanol, ácidos fuertes, sales de metales pesados, etc. La
caseína precipita en su pH isoeléctrico = 4,7. El etanol se adiciona además porque
deshidrata y coagula la proteína.
REACCIONES DE COLORACIÓN
Las reacciones de coloración son producidas por la acción de reactivos y depende de la
estructura química de la proteína. En éstas reacciona la estructura primaria y sirven para
identificar los enlaces peptídicos o los restos de aa.
Reacción Xantoproteíca
Sirve para caracterizar los aminoácidos con grupos aromáticos de las proteínas, ya que estos se
nitran por acción del HNO3 y producen la coloración característica. Esta reacción da positiva si
en la proteína se encuentran los aminoácidos fenilalanina, tirosina o triptófano.

Reacción de Biuret .- Sirve para caracterizar la unión peptídica, por lo tanto la dan todas
las proteínas. El color observado se debe a la formación de un complejo (soluble en
agua) entre el ión cobre (II) y los pares de electrones sin compartir del nitrógeno del
enlace peptídico. La reacción debe su nombre al biuret, una molécula formada a partir
de dos de urea (H2NCO-NH-CO-NH2), que es la más sencilla que da positiva esta
reacción, común a todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos
consecutivos en sus moléculas.

Facultad de Ingeniería Química y Petroquímica

Dra, Leslie Marielly Felices Vizarreta
Mag. Aldo Hernández Espino
Bioquímica y microbiología Industrial

Reacción de aminoácidos azufrados. - Se pone de manifiesto por la formación de un

precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reacción en la separación mediante un
álcali, del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo,
forma el sulfuro de plomo.

Reacción con Ninhidrina. –

Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre,
reaccionaran con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de un color violáceo
o amarillo. Debido a que las proteínas y los aminoácidos, poseen esta característica, la reacción
sirve para identificarlos. Algunas soluciones de amonio y aminas, dan la coloración característica,
aparentemente debido a una oxidación y reducción intramolecular de la ninhidrina en presencia
de amoníaco. Los aminoácidos prolina e hidroxiprolina, que no poseen grupo amino sino imino
(-NH-), dan un color rojo que pasa rápidamente a amarillo.

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Dra, Leslie Marielly Felices Vizarreta
Mag. Aldo Hernández Espino
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II.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL-

a) Reacción de Precipitación. -
En dos tubos de ensayo colocar en uno 1 ml de albumina y en el otro 1 ml de
glicina. A ambos tubos agregar 1 ml de ácido nítrico y se observa.
En el tubo de la albumina se observa la formación de un precipitado blanco ,se
forma grumos. En el tubo del aminoácido no se observa reacción.
Se repite la operación pero con ácido clorhídrico y se observa.
b) Reacción Xantoproteíca
En tres tubos de ensayo se agrega respectivamente 1ml de albumina, 1 ml de
aminoácido tirosina y 1 ml de alanina. A cada tubo se agrega 1 ml de ácido nítrico,
Se calienta a baño maría por espacio de 5 minutos a una temperatura de 70 °C.
Se observa que en el tubo que contiene tirosina se forma una coloración amarillo
casi naranja y en los otros tubos no se observa cambio.
c) Reacción de Biuret
En dos tubos de ensayo agregar 1 mi de albumina de huevo y en el otro 1 ml de
glicina y agregar 1 ml del reactivo de Biuret a ambos tubos (el reactivo de biuret
es azul), observar. En el tubo con la albumina se forma un compuesto coloreado
color violeta y en el tubo de glicina queda igual.
d) Reacción de aminoácidos azufrados.
En tres tubos de ensayo se agregan aproximadamente 3 ml de NaOH y luego se
agrega 1 ml de acetato de plomo a cada tubo. Las muestras 1 ml albumina, 1 ml
cisteína y 1 ml tirosina, se somete a calentamiento en baño maría. Se observa
prueba positiva para la albumina con una coloración marrón oscuro y en el
aminoácido cisteína levemente ,con la tirosina no se observa cambio.
e) Reacción con Ninhidrina
En tres tubos de ensayo se agregan respectivamente 1 ml de albumina, 1 ml de
alanina y 1 ml de sol. De glucosa. A cada tubo se agrega 10 gotas de reactivo de
ninhidrina al 2%.Se calienta a baño maría por 1 a 2 minutos. Los aminoácidos
pueden tener varias coloraciones entre rojo, amarillo o azul. Se observa
coloración azul oscuro para la alanina y la albumina se tile levemente.
IV.ACTIVIDADES
1.- Escriba la estructura de los aminoácidos que se han trabajado en los diferentes
ensayos.
2.- Que aminoácidos dan positivo con la reacción con la reacción xantoproteica?
3.- Que sustancias reaccionan con la ninhidrina?

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Dra, Leslie Marielly Felices Vizarreta
Mag. Aldo Hernández Espino