PRACTICAS DE BIOQUIMICA

E.P NUTRICION HUMANA

UNAP

APELLIDOS Y NOMBRES: MAYIN IVONNE FAUSTINO HUALLPA

Practica N° 03

REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

Identificación Cualitativa

Las proteínas son macro nutrientes presentes en todos los alimentos que integran la
dieta del ser humano. El rol principal de las proteínas es la de suministrar aminoácidos al
organismo para que sintetice sus propias proteínas. La alimentación humana debe contener
cantidades adecuadas de aminoácidos. Los aminoácidos realizan una multitud de funciones
estructurales, hormonales y catalíticas esenciales para la vida.
Además, participan en funciones intercelulares como la transmisión nerviosa, la regulación
del desarrollo celular, la biosíntesis de porfirinas, purinas, pirimidinas, así como la urea.
Debido a que todas las proteínas están compuestas de aminoácidos unidos entre si por
enlaces peptídicos, estas macromoléculas presentan variación notable en sus propiedades
físicas, químicas y biológicas.
El propósito de estos experimentos es de conocer algunas de las propiedades químicas
de aminoácidos y proteínas.
En general se puede decir que la proteína refleja las propiedades químicas de los
aminoácidos que contiene, la mayoría de reacciones coloreadas de las proteínas depende de
la existencia de un aminoácido específico en ella.
Prueba de Biuret
El sulfato de cobre contenido en el reactivo de biuret reacciona con compuestos que
contiene dos o más enlaces péptidicos dando un complejo de color violeta o morado. La
intensidad del color obtenidos es una medida del número de enlaces péptídicos, ya que
cualquier compuesto que contengan dos grupos carbonilos, unidos por un átomo de nitrógeno
o de carbono da un resultado positivo.
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Prueba de Ninhidrina
Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre,
reaccionan con la ninhidrina. La positividad se manifiesta por la aparición de un color púrpura
azulado, o amarillo que indica presencia de Prolina. Debido a que las proteínas y los
aminoácidos poseen esta característica, la reacción sirve para identificarlos.

Prueba de Millon
La reacción es debida a la presencia del grupo hidroxifenílico (C6H4OH) en la molécula
proteica. Cualquier compuesto fenólico no sustituido en la posición 3,5 como la tirosina, fenol y
timol, dan positiva la reacción (coloración rojiza). El mecanismo de la reacción es poco
conocido, posiblemente por la formación del complejo óxido de mercurio y fenol.

Reacción Xantoproteica
Los aminoácidos que contienen un núcleo aromático forman nitroderivados cuando se
calienta con ácido nítrico concentrado, las sales de estos derivados son de color naranja.
Esta reacción es positiva, tanto en proteínas en solución, como en aquellas que se
encuentran en estado sólido que contengas aminoácidos aromáticos.

OBJETIVO
Que el estudiante aprenda a determinar la presencia de aminoácidos y proteínas
empleando diferentes pruebas químicas.

MATERIALES

 08 Tubos de ensayo (por prueba)

 01 gradilla
 Pipetas graduadas
 Vaso de precipitados de 100 ml
 Pinzas de madera para tubos
 Propipetas
 Hornilla eléctrica
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Reactivos y Soluciones
 Reactivo de Biuret
 Reactivo de Ninhidrina
 Reactivo de Millon
 Acido Nítrico Concentrado
 Solución de Tirosina al 1%
 Solución de Valina al 1%
 Solución de Leucina al 1%
 Solución de Metionina al 1%
 Solución de Prolina al 1%
 Solución de caseína al 2%
 Solución de Gelatina 2%

PROCEDIMIENTO IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS

1.- Prueba de Biuret

Rotular los tubos de ensayo con un lápiz marcador con el nombre de la muestra. Colocar
1 ml de solución de cada muestra. Considerar un tubo de ensayo con agua destilada que será
rotulado como blanco.
Agregar a cada tubo 1 ml de reactivo de Buret, agitar. Luego de 15 minutos observar y anotar
resultados.
2.- Prueba de Ninhidrina
Rotular los tubos de ensayo con un lápiz marcador con el nombre de la muestra. Colocar
1 ml de solución de cada muestra. Considerar un tubo de ensayo con agua destilada que será
rotulado como blanco.
Agregar a cada tubo 7 gotas de reactivo de Ninhidrina, agitar y calentar los tubos en un baño
de agua a 100°C durante 10 minutos. Observar y anotar resultados.

3.- Prueba de Millon

Rotular los tubos de ensayo con un lápiz marcador con el nombre de la muestra. Colocar
1 ml de solución de cada muestra. Considerar un tubo de ensayo con agua destilada que será
rotulado como blanco.
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Agregar a cada tubo 6 gotas de reactivo de Millon, agitar y luego calentar los tubos en un
baño de agua a 30°C hasta la aparición de una coloración rojiza. Observar y anotar resultados.

4.- Prueba Xantoprotéica

Rotular los tubos de ensayo con un lápiz marcador con el nombre de la muestra. Colocar
1 ml de solución de cada muestra. Considerar un tubo de ensayo con agua destilada que será
rotulado como blanco.
Agregar a cada tubo 1 ml de Acido nítrico concentrado, agitar para mezclar, luego calentar
los tubos en un baño de agua suavemente hasta la aparición de una coloración amarilla.
Observar y anotar resultados.

RESUMEN DE LOS PROCEDIMIENTOS

Reactivos Tubos de ensayo conteniendo 1 ml

Calentar
Y V L M P Casein Gelatin Agua

Reactivo Biuret 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml No

Reactivo Ninhidrina 7 gts 7 gts 7 gts 7 gts 7 gts 7 gts 7 gts 7 gts 100°C

Reactivo Millon 6 gts 6 gts 6 gts 6 gts 6 gts 6 gts 6 gts 6 gts 30°C

Acido Nítrico 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 30°C

concentrado

Primeramente tenemos que marcar cada tubo con el nombre de la muestra seguidamente se
introduce 1 ml de cada disolución de aminoácido y proteína a estudiar en cada tubo de ensayo.
Y se prepara un tubo de ensayo con agua destilada como blanco. Comenzaremos con el test
de Biuret, en los tubos de ensayo que ya previamente agregamos cada una de las muestras,
agregaremos a cada uno 1 ml del reactivo de Biuret, agitamos y esperamos unos quince
minutos, pasado este tiempo observamos el resultado y lo anotamos. La reacción se da
positiva en aquellas muestras que se muestra un color morado.
Luego pasamos a ensayar el test de Ninhidrina, agregamos siete gotas de esta disolución a los
tubos de ensayo que ya contienen las muestras. Calentamos los tubos en un baño agua a
100”C durante 10 minutos mientras observamos anotamos los resultados. La aparición de un
color purpura azulado indica la aparición de aminoácidos y si arece un color amarillo indica la
presencia de prolina.
Seguidamente probaremos el test Millon para lo cual añadiremos 5 o 6 gotas de este reactivo
donde previamente hemos puesto las distintas muestras a ensayar, se mescla y se pone a
calentar los tubos a unos 30”C hasta la aparición de una coloración rojiza. Observamos y
anotamos los resultados.
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Por último, ensayaremos el test Xantoproteica, añadiremos 1 ml de ac. Nítrico concentrado en

cada uno de los tubos de ensayo que tienen las muestras atestar luego calentamos
suavemente en un balo de agua hasta la aparición de un color amarillo. Observar y anotar los
resultados.
Anote los resultados de las reacciones de las muestras en el siguiente cuadro. Comente.

Reacción
Tubo de Biuret Ninhidrina Millon Xantoproteica
ensayo

Tirosina Rojizo Amarillo

Valina

Leucina

Metionina

Prolina Amarillo

Caseína
Morado
Gelatina Morado

Agua destilada
(Tubo Blanco)

Fundamente los resultados (fundamente la reacción):

1. Prueba de Biuret:
Esta reacción resulta positiva cuando se ven en las muestras un color morado. La intensidad
del color obtenido es una medida del número de enlaces peptídicos que tiene.

2. Prueba de Ninhidrina:
Esta reacción resulta positiva cuando se ven en las muestras un color amarillo. Esto se debe a
que las proteínas y los aminoácidos poseen esta característica, esta reacción sirve para
identificarlos.
3. Prueba de Millon
Esta reacción resulta positiva cuando se ven en las muestras un color rojizo. El mecanismo de
esta reacción es poco conocido, posiblemente por la formación del complejo óxido de mercurio
y fenol.

Prueba Xantoproteica:
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Esta reacción resulta positiva cuando se ven en las muestras un color amarillo. en proteínas
en solución, como en aquellas que se encuentran en estado sólido que contengan aminoácidos
aromáticos.
Responda;

1.- Qué es el reactivo de Biuret. Composición.

La prueba de biuret (prueba de Piotrowski) es una prueba química utilizada para la detección
de la presencia de enlaces peptídicos . En la presencia de péptidos, un cobre (II) de
iones formas malva -colored complejos de coordinación en un alcalina solución. Varias
variantes de la prueba se han desarrollado, como la prueba de BCA y el ensayo de Lowry
modificado.
La reacción de biuret se puede utilizar para evaluar la concentración de proteínas porque los
enlaces peptídicos se producen con la misma frecuencia por aminoácido en el péptido. La
intensidad del color, y por lo tanto la absorción a 540 nm, es directamente proporcional a la
concentración de proteína, de acuerdo con la ley de Beer-Lambert .
A pesar de su nombre, el reactivo de hecho no contienen biuret ((H 2 N-CO-) 2 NH). La prueba
se llama así debido a que también da una reacción positiva a los enlaces peptídicos-como en la
molécula de biuret.
Detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces
peptídicos en sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico (KOH)
y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC 4O6·4H2O).

2.- Qué es el reactivo de Ninhidrina. Composición.

Es un reactivo común para la detección de amoniaco, aminas primarias y secundarias, también
es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos. Reacciona con todos
los grupos amino para formar un producto colorido azul o púrpura (llamado púrpura de
Ruhemann). También se utiliza para detectar huellas digitales, esto debido a los residuos de
lisina (un aminoácido) que se impregnan en los objetos al tocarlos y puede reaccionar con la
ninhidrina
La amina se condensa con una molécula de ninhidrina para dar una base de Schiff. En este
paso, debe haber también un protón alfa para la transferencia de base de Schiff, por lo que una
amina terciaria no puede ser detectada por la prueba de ninhidrina. La reacción de ninhidrina
con aminas secundarias da una sal de iminio generalmente de color amarillo-anaranjado.
Es una de las reacciones más sensibles para identificar aminoacidos en general, ya que
detecta una parte de aminoacido en 1 500 000 partes de agua. Aminoacidos y muchas aminas
primarias dan un color violeta caracteristico. La prolina da coloración amarilla. Por su
sensibilidad esta reacción se emplea para valoración cuantitativa de amonoacidos por
colorimetria.

3.- Qué es el reactivo de Millon. Composición:

El reactivo de Millon se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de ácido
nítrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio
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conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente

ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica.
Al finalizar la reacción, durante la cual se desprende gran cantidad de óxidos de nitrógeno,
el reactivo se puede diluir con dos veces su volumen en agua y deberá ser decantada algunas
horas después la solución clara sobrenadante.