MEDICIÓN DE POTENCIAL HÍDRICO EN PAPA

INTRODUCCIÓN

Uno de los conceptos más utilizados en la actualidad para entender la relación de

las plantas con el agua, tanto en la absorción y transporte como la pérdida de
agua por transpiración, es el potencial hídrico, que se basa en la ciencia de la
termodinámica, aplicándose los conceptos de energía libre y potencial químico.

El movimiento del agua en las plantas depende dela potencial hídrico de sus
tejidos, que al estar determinados por las características órgano-funcionales de
raíces, tallo, hojas o sus componentes, adoptan dependiendo de su metabolismo y
relaciones con el entorno, distintos valores de potencial hídrico (ψ).

Para medir el potencial hídrico existen métodos como la medición de las

variaciones de peso o volumen en un tejido u órgano determinado al colocarlos en
soluciones con diferentes concentraciones de sacarosa, manitol o polietilenglicol
entre otros (Salisbury y Ross, 1991). La finalidad consiste en establecer
condiciones de hiper, iso e hipotonicidad, lo que se busca es una condición
isotónica, es decir, aquella solución donde la concentración externa e interna sean
iguales, lo cual corresponderá al potencial hídrico (ψ) del tejido, en esta condición
no hay flujo de agua. Las concentraciones de cada solución se transformarán a
valores de ψ con la ecuación de Van’t Hoff que se describe y explica en la
metodología. En la figura 1, la flecha punteada indica el punto de isotonicidad, es
decir, donde no hay ganancia ni pérdida neta de peso (Azcon-Bieto et al., 2008).

Figura 1. Punto isotónico del tejido dentro de soluciones osmóticas con valores diferentes de
potencial hídrico.
Métodos para determinar el ψ:

a) Gravimétrico que se basa en los cambios de peso que experimentan

trozos de tejido al colocarse en soluciones de distintas concentraciones de
sacarosa. El ψ de la solución en la cual no cambie de peso corresponderá
al ψ del tejido.

b) Refractométrico que consiste en sumergir fragmentos de tejidos en

soluciones de potencial osmótico variable, dejar reposar por 2 hrs y leer la
densidad óptica de la solución con un refractómetro.

c) Chardakov consiste en depositar una gota de solución coloreada y

concentración conocida en la parte media de la solución equivalente donde
estuvieron reposando los tejidos. Por el flujo de agua entre tejido y la
solución, la densidad puede disminuir, mantenerse sin cambios o aumentar.
En la primera situación la gota se irá al fondo del tubo, en la segunda
permanecerá en la parte media y en la tercera subirá. El potencial hídrico
del tejido corresponderá al potencial hídrico de la solución en la cual
permaneció en la parte media (Taiz y Zeiger, 2010).

OBJETIVO

Medir el potencial hídrico de fracciones de papa (Solanum tuberosum L.) mediante

los métodos de: cambio de peso, refractométrico y Chardakov.

MATERIAL Y MÉTODOS

Material aportados por equipo:

 2 papas grandes
 1 navaja o cutter

Material aportados por el laboratorio:

 7 frascos gerber  Refractómetro para azúcares

 Servitoallas en grados Brix
 Sacabocados  100 mL de soluciones de
 14 tubos de ensayo de 25 mL sacaraosa (0.0, 0.10, 0.20,
 Una gradilla 0.30, 0.40, 0.50 y 0.60 molal)
 1 pipeta Pasteur  Piseta con agua destilada
 1 pipeta de 10 mL y propipeta  Colorante
 Balanza (precisión de 0.01g)
Procedimiento:

1. Separe los tubos de ensayo en dos series y agregue las cantidades de

solución que se indican en el cuadro siguiente.

Concentración de Volumen de solución (mL)

sacarosa (m) Primera serie Segunda serie
0.0 15 5
0.1 15 5
0.2 15 5
0.3 15 5
0.4 15 5
0.5 15 5
0.6 15 5

2. Con el sacabocados o navaja obtenga 21 fracciones de 3 cm de largo x 1

cm de diámetro. Sepárelas en grupos de tres, registre su peso e
introdúzcalas en cada tubo de la primera serie.
3. Incúbelas por 2 hrs.
4. Mientras transcurre el tiempo de espera, utilice el refractómetro para
elaborar, con los tubos de la segunda serie, una curva de calibración, el eje
de la ordenadas coloque la densidad óptica en grados Brix y en el de las
abscisas los valores de potencial hídrico en MPa, de cada solución.
5. Después de realizar la curva de calibración (NO SE DEBE colocar
colorante en el refractómetro), a cada tubo se la segunda serie agregue
dos gotas de colorante, agitey deje reposar.
6. Transcurrido el tiempo de incubación (2 hrs) saque las fracciones de papa
de cada solución, séquelas ligeramente con una servitoalla y péselas
nuevamente. Repita este procedimiento con todas las fracciones incubadas
en el orden en que inicialmente las colocó. No deseche las soluciones de
donde las extrajo.

Calcule el porcentaje de cambio de peso con la siguiente ecuación:

7. Construya una gráfica con el porcentaje de cambio de peso, en el eje de las

ordenadas, y los valores de potencial hídrico en MPa en el eje de las
abscisas.

La ecuación de Van’t Hoff para calcular el potencial osmótico de la solución (ψs)

es:
Donde:

m= concentración molal de la solución

i= constante de ionización (1.0 para sacarosa)

R= constante de los gases (0.00831 MPa Kg-1 mol-1 K-1)

T= temperatura absoluta (K)

8. Determine por interpolación gráfica la concentración en la cual no haya

ocurrido un cambio de peso en las fracciones de papa.
9. Método de refractometría. En la ventana del refractómetro coloque una
gota, a la vez, de cada una de las soluciones que contuvieron las fracciones
de papa (primera serie), obtenga los valores de densidad óptica en grados
Brix e interpole en la curva de calibración que realizó previamente.
10. Método de Chardakov. Ordene la segunda serie de tubos (soluciones
teñidas) con las soluciones de la primera serie (donde se incubaron las
fracciones de papa) como se muestra en el cuadro 1.

Tubos que contienen las soluciones teñidas

0.0 m 0.1 m 0.2 m 0.3 m 0.4 m 0.5 m 0.6 m
Tubos donde se incubaron las fracciones de papa
0.0 m 0.1 m 0.2 m 0.3 m 0.4 m 0.5 m 0.6 m

11. Con una pipeta Pasteur tome un pequeño volumen de cada solución teñida,
introduzca la punta de la pipeta, sin liberar la gota, hasta la mitad del tubo
que contuvo la fracción de papa y libere una gota sin “empujarla”. Anote si
su desplazamiento es ascendente, descendente o estático (Figura 2).
Capture imágenes fotográficas.

Figura 2. Posibles movimientos de la gota de colorante al medir el potencial hídrico por el método
de Chardakov.
Capture sus resultados en el cuadro siguiente:

Concentraciones Ψπ Cambio de peso (g) Refractometría Chardakov

de sacarosa (m) MPA Inicial Final % grados Brix Ascenso-
descenso
de gotas
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6

Análisis y procesamiento de datos

Los resultados de su equipo constituyen una repetición, para calcular los

promedios es necesario que obtenga los datos de los demás equipos. Elabore
gráficas de cambio de peso y refractometría, recuerde incluir los errores estándar.
Para el caso del método de Chardakov, elabore un mosaico fotográfico donde se
observe el comportamiento de la gota por cada potencial hídrico de la solución.

Discuta respecto a las diferencias o coincidencias entre estos métodos.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el fundamento de los métodos de medición de potencial hídrico

utilizados en ésta práctica?
2. ¿Cómo mediría el potencial hídrico de un exudado de floema?
3. Describa una metodología para la medición de potencial hídrico en
epidermis de cebolla.
4. La expresión: “ψ solución de sacarosa = ψs solución de sacarosa” ¿es
correcta o incorrecta? Justifique su respuesta.

REFERENCIAS

Azcón-Bieto, J. y Talón, M. 2008. Fundamentos de Fisiología Vegetal.

Interamericana-McGraw-Hill, Madrid.

Salisbury, F.B. y Ross, C.W. 1991. Plant Physiology. Wadsworth Publishing.

California.

Taiz, l. y Zeiger, E. 2010. Plant Physiology. 6th Ed. Sunderland Massachusetts,

U.S.A: Sinauer associates, inc, publishers.