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Articulo Efectos Pasteutizción Homogenizacion - En.es
Articulo Efectos Pasteutizción Homogenizacion - En.es
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2942 LI ET AL.
como el alumbre, los taninos y algunos polifenoles, se Efecto de la grasa en la astringencia percibida: los estudios que
denominan moléculas astringentes (Green, 1993). Se cree que encontraron que el contenido de grasa afectaba la astringencia
el mecanismo popular de la astringencia es el resultado de la utilizaron alimentos con viscosidades significativamente más altas que
agregación y precipitación de las proteínas salivales, lo que la leche. En los alimentos con menor viscosidad, puede ser necesario un
provoca la pérdida de la capacidad de lubricación de la saliva mayor contenido de grasa para lograr una reducción de la astringencia
(Jöbstl et al., 2004). La precipitación de proteínas salivales percibida porque los alimentos de menor viscosidad serían más fáciles
provocada por moléculas astringentes produce una sensación de eliminar de las superficies orales y, por lo tanto, tendrían una
de sequedad en la boca por sensación arenosa o interrupción protección reducida contra los compuestos astringentes.
de la película salival (Gibbins y Carpenter, 2013). Sin embargo, Claramente, la astringencia es un atributo sensorial
Rossetti et al. (2009) encontraron que la epicatequina no podía complejo y tiene múltiples mecanismos. Se ha realizado un
precipitar las proteínas de la saliva, pero causaba una número significativo de estudios sobre la astringencia del
sensación de astringencia en la boca similar al galato de vino y el té porque se sabe que son astringentes. Otros
epigalocatequina (EGCG), que precipitó proteínas salivales alimentos astringentes han recibido poca atención en la
cuando se usó en la misma concentración (Rossetti et al., 2009). literatura. Por ejemplo, la ultrapasteurización (ARRIBA) de
Por otro lado, las soluciones de leche semidesnatada-EGCG se la leche puede aumentar la vida útil de la leche en
percibieron como menos astringentes que la solución de EGCG comparación con la pasteurización HTST; sin embargo, la
sola, aunque ambas soluciones indujeron la pérdida de leche UP se percibe como más astringente (Datta et al.,
lubricación en las superficies recubiertas de saliva (Rossetti et 2002; Lee et al., 2017). El aumento de la astringencia, así
al., 2009). Por lo tanto, no se puede encontrar una relación como otros cambios sensoriales y fisicoquímicos, como el
directa entre la precipitación de las proteínas de la saliva y la sabor cocido y la amargura, el cambio de color, el
astringencia para todas las sustancias astringentes. sedimento de proteínas y la gelificación por envejecimiento,
Los mecanismos específicos detrás de la astringencia de la leche se debe al tratamiento térmico más severo en UP versus
no han recibido mucha atención en la literatura. El aumento de la HTST (Datta et al., 2002). ). Sin embargo, la literatura
astringencia también se asoció con un mayor tamaño de partícula y publicada no explica el mecanismo de astringencia en la
proteínas de suero de leche alteradas por calor (Josephson et al., leche UP. Es posible que el mecanismo esté relacionado con
1967). Por otro lado, se encontró que la astringencia de la leche y la el aumento de la desnaturalización de la proteína de suero
presencia de γ-caseínas están relacionadas (Harwalkar et al., 1993). de leche por UP. Las proteínas de suero desnaturalizadas
Withers et al. (2014) encontraron que las caseínas se unen más tienen un mayor número de interacciones entre sí y con las
fuertemente a las superficies orales que la β-lactoglobulina. Sin caseínas, y forman grandes complejos que influyen en los
embargo, varios estudios realizados por estos autores sugirieron atributos de sensación en la boca (Morales et al., 2000). Por
que tanto la caseína como las proteínas de suero contribuyeron a lo tanto, el objetivo de este estudio fue determinar cómo el
la astringencia de la leche (Withers et al., 2013, 2014). Aunque la contenido de grasa,
astringencia de la leche está claramente relacionada con los
cambios en las proteínas de la leche, no se ha logrado un consenso
sobre qué proteínas y cambios específicos contribuyen a la MATERIALES Y MÉTODOS
astringencia de la leche.
La presencia de grasa tiene un efecto significativo sobre la Diseño experimental
astringencia percibida. Las sensaciones astringentes y relacionadas
con la fricción se pueden reducir cubriendo las superficies orales Se diseñaron experimentos para determinar el efecto de diferentes
con grasa (de Wijk y Prinz, 2005, 2006; des Gachons et al., 2012). Se variables (contenido de grasa, tiempo de almacenamiento, método de
ha demostrado que la astringencia percibida en natillas (de Wijk y pasteurización y presión de homogeneización) sobre las propiedades
Prinz, 2005, 2006), quesos para untar (Bayarri et al., 2011) y helados mecánicas y los atributos sensoriales y para determinar cómo se
(Soukoulis et al., 2010) disminuye con un mayor contenido de relacionan las propiedades mecánicas con los atributos sensoriales en
grasa. Por otro lado, no se ha demostrado que el contenido de la leche. Por lo tanto, se utilizó leche descremada (grasa <0,2%), 2%
grasa afecte significativamente la astringencia de la leche (Phillips grasa y 5% grasa para estudiar la influencia del contenido de grasa en
et al., 1995; Campbell et al., 2003; Ares et al., 2009). Sin embargo, las propiedades mecánicas y sensoriales. La leche con diferentes
estos estudios generalmente utilizaron muestras con menor contenidos de grasa se pasteurizó mediante el método HTST o UP-
contenido de grasa (≤2%); puede ser necesario un mayor contenido indirecto para determinar el efecto de los métodos de pasteurización
de grasa para afectar las sensaciones astringentes. Un estudio en las propiedades mecánicas y sensoriales. Se utilizaron tres niveles de
utilizó leche con un contenido de grasa de 3. 2% y mostró que tenía presión de homogeneización diferentes (13,8, 20,7 y 27,6 MPa) para
la misma capacidad para reducir la sensación astringente de los estudiar el efecto de la presión de homogeneización en las propiedades
extractos antioxidantes que la leche descremada (Ares et al., 2009). mecánicas y sensoriales. La leche se almacenó a 4 °C hasta que se
La viscosidad puede desempeñar un papel en la eficacia analizó la sensibilidad.
propiedades químicas y mecánicas después de períodos de En la etapa de preparación, la leche pasteurizada se enfrió a 85
almacenamiento de 1, 4 y 8 semanas. La leche fue procesada °C, luego se homogeneizó a una presión total de 13,8 MPa
en la Universidad Estatal de Carolina del Norte (NCSU) por (2000 psi), 20,7 MPa (3000 psi) o 27,6 MPa (4000 psi) usando
duplicado con 2 meses de diferencia, y cada duplicado se una homogeneización de 2 etapas, luego se enfrió con un
analizó por triplicado a menos que se indique lo contrario. El refrigerador secundario a 10 ± 2°C antes del envasado. La
análisis proximal y la evaluación sensorial se realizaron en presión de la segunda etapa fue el 15% de la presión total, la
NCSU. Microscopía de barrido láser reológica, tribológica, SDS- cual fue de 2,07 MPa (300 psi), 3,10 MPa (450 psi) y 4,14 MPa
PAGE y confocal (CLSM) los análisis se completaron en la (600 psi), para 13,8, 20,7 y 27,6 MPa, respectivamente.
Universidad de Idaho.
Análisis aproximado
Procesamiento de leche
Los contenidos de sólidos, grasas y proteínas de la leche se
La leche bovina cruda desnatada (3,1 % de proteína, 0,06 % de midieron con un analizador de lácteos infrarrojo de
grasa) y la nata cruda (45,1 % de grasa) se obtuvieron de la planta transformada de Fourier (LactoScope FTIR, Delta Instruments
lechera de NCSU (Raleigh) y se pasteurizaron en NCSU. La leche BV, Drachten, Países Bajos). La prueba se completó en cada
cruda se estandarizó al 2,0 % (peso/peso) o al 5,0 % (peso/peso) de muestra de leche directamente después de la pasteurización y
grasa usando crema cruda, y las leches se procesaron usando los las muestras se midieron por duplicado. La pasteurización
procedimientos descritos por Lee et al. (2017). Brevemente, para completa de cada leche se confirmó mediante la prueba de
cada lote de leche, se pasteurizaron 37,85 L de leche utilizando una fosfatasa alcalina (método 14.060; Wehr y Frank, 2004).
unidad de pasteurización Microthermics EHVH (Microthermics,
Raleigh, NC) mediante pasteurización indirecta UP o HTST seguida Análisis sensorial
de homogeneización en dos etapas (GEA Niro Soavi, Parma, Italia).
La leche homogeneizada se enfrió, se envasó en botellas de leche Los atributos sensoriales para la evaluación de muestras de
de polietileno de alta densidad de 473 ml (Container & Packaging leche se realizaron en NCSU de acuerdo con las regulaciones de la
Supply, Eagle, ID) y se almacenó a 4 °C para las pruebas. La Junta de Revisión Institucional de NCSU. La astringencia y la
viscosidad sensorial, la astringencia, la viscosidad mecánica y los viscosidad sensorial se seleccionaron para su evaluación en base a
comportamientos de fricción de la leche se evaluaron 1, 4 y 8 la literatura publicada que sugería que la astringencia estaba
semanas después de la pasteurización. Las muestras nuevas de relacionada con la fricción y que el espesor (viscosidad sensorial)
HTST se procesaron 1 semana antes de la prueba en la semana 8 estaba relacionado con la viscosidad mecánica en otros alimentos
debido a las restricciones de vida útil. Después del envasado, la (de Wijk y Prinz, 2005).
leche se envió durante la noche en refrigeración (4°C) a la Se utilizó un panel sensorial entrenado (n = 7, 6 mujeres, 1
Universidad de Idaho (Moscú). hombre, de 23 a 54 años de edad) para evaluar la astringencia y la
viscosidad sensorial entre las muestras de leche dentro de cada
Muestras de Leche Pasteurizadas por Diferentes contenido de grasa o dentro de diferentes presiones de
Tratamientos Térmicos homogeneización a las 1, 4 y 8 semanas después Procesando. Cada
panelista había recibido capacitación previa (un mínimo de al
Para los tratamientos HTST, la leche descremada y con un contenido menos 50 h) con identificación y escala de astringencia y viscosidad
de grasa del 2 y el 5% se precalentó a 60 °C, se homogeneizó y consistente con el método de análisis descriptivo de Spectrum
pasteurizó a 78 °C durante 15 s, luego se enfrió a 10 ± 2 °C usando un (Meilgaard et al., 2007). Los panelistas también recibieron
intercambiador de calor indirecto. La leche descremada y con 2 y 5% de instrucciones específicas sobre el formato y protocolo de prueba
contenido de grasa para UP se procesó precalentando la leche cruda a actual. Cuarenta mililitros de cada leche se dispensaron en copas
90 °C y luego pasteurizándola en el intercambiador de calor indirecto a de soufflé de 59 ml con tapa (Dart Container Corp., Mason, MI) con
140 °C durante 2,3 s. La leche se enfrió a 85 °C para la códigos ciegos aleatorios de 3 dígitos y templados a 10°C. Los
homogeneización, luego se enfrió mediante un enfriador secundario panelistas utilizaron pinzas nasales (Adinstruments, Colorado
(intercambiador de calor de placas) a 10 ± 2 °C antes del envasado. Springs, CO) mientras evaluaban muestras de leche para
Tanto los procesos HTST como UP utilizaron agua como medio de enmascarar otros atributos sensoriales. Se instruyó a los panelistas
calentamiento y enfriamiento en los intercambiadores de calor para que colocaran aproximadamente la mitad de cada muestra en
indirectos. Toda la leche se homogeneizó a una presión total de 20,7 la boca, la mantuvieran durante aproximadamente 10 s y luego
MPa con 3,4 MPa en la segunda etapa. expectoraran. Después de evaluar cada muestra, se les pidió que
cuantificaran la intensidad percibida de los atributos de
Muestras de leche homogeneizadas a diferentes presiones astringencia y viscosidad de 0 a 15, donde 0 = atributo no
detectado y 15 = atributo extremadamente fuerte. Se impuso un
La leche con un contenido de grasa del 2,0% se procesó mediante el descanso de 10 minutos entre las muestras, y los panelistas se
método UP indirecto descrito anteriormente. En la homogeneiza- enjuagaron con agua de manantial seguida de agua al 0,1 %.
solución peso/peso de carboximetilcelulosa (TIC Gums, White vol) solución de lavavajillas (Procter & Gamble,
Marsh, MD) durante el período de descanso. Se utilizó una Cincinnati, OH), seguido de limpieza con etanol al 75% y
boleta digital para recopilar los datos (Compusense Cloud, toallitas de laboratorio.
Compusense Inc., Guelph, Canadá).
PAGINA SDS
viscosimetría
Los análisis SDS-PAGE se realizaron con o sin un agente reductor según el método descrito
Las mediciones de la viscosidad mecánica de la leche se por Havea et al. (1998) y Jovanovic et al. (2007). Para la preparación de muestras no reducidas, se
realizaron en un reómetro DHR-3 (TA Instrument, New Castle, diluyeron 5 μL de muestra de leche con 15 μL de Laemmli (Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules,
DE) a 25°C. Se usó una geometría de cilindro concéntrico CA) y 80 μL de agua destilada en un tubo de plástico de 2 mL. Para muestras reducidas, se
(diámetro de bob de 28,04 mm y longitud de bob de 21,10 mm) diluyeron 5 μL de leche con 15 μL de Laemmli y 75 μL de agua destilada mezclada con 5 μL de 2-
para la prueba. La leche se analizó después de 1, 4 y 8 semanas mercaptoetanol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Las muestras preparadas se agitaron durante 10 s,
de almacenamiento y se realizaron 3 repeticiones en cada se incubaron a 100 °C durante 5 min y se diluyeron 70 ml de tampón Tris/glicina/SDS 10x (Bio-Rad
muestra. Para cada repetición, se pipeteó una muestra de Laboratories Inc.) con 630 ml de agua destilada desionizada. Las muestras se analizaron
leche de 8 ml en la copa de 30 mm de diámetro; se utilizó este utilizando un gel de poliacrilamida prefabricado del 4 al 15 % (8,6 × 6,7 cm, ancho × largo; Bio-Rad
volumen de leche porque cubría completamente la parte Laboratories Inc. ) y celdas de electroforesis de miniproteínas (Bio-Rad Laboratories Inc.). Se
superior de la lenteja. Después de equilibrar la muestra a la utilizaron estándares de color dual de proteína Precision Plus (Bio-Rad Laboratories Inc.) para
temperatura de prueba, la velocidad de corte se incrementó identificar el peso molecular de las proteínas detectadas. Se añadieron diez microlitros de cada
logarítmicamente de 0,01 a 100 s.−1. muestra al puerto de inyección y se corrieron a 300 V durante 15 min. El gel se tiñó con la solución
de tinción Coomassie Brilliant Blue (R-250; Bio-Rad Laboratories Inc.) durante 90 min, luego se
Tribometría destiñó en una solución de metanol/ácido acético (10 % de metanol, 40 % de ácido acético, 50 %
Los perfiles de fricción de la leche almacenada durante 1, 4 y 8 semanas se (Syngene USA, Frederick, MD). Se añadieron diez microlitros de cada muestra al puerto de
realizaron en un reómetro DHR-3 a 25 °C con un contacto de fricción que consiste inyección y se corrieron a 300 V durante 15 min. El gel se tiñó con la solución de tinción
en una geometría de placa de doble bola y un polidimetilsiloxano (PDMS) disco (40 Coomassie Brilliant Blue (R-250; Bio-Rad Laboratories Inc.) durante 90 min, luego se destiñó en
mm de diámetro). Todas las placas de PDMS se fabricaron utilizando un kit de una solución de metanol/ácido acético (10 % de metanol, 40 % de ácido acético, 50 % de agua
elastómero de silicona de dos componentes (Dow Corning Corporation, Midland, desionizada). ). Los geles desteñidos se escanearon usando el software GeneSys (Syngene USA,
MI) según el método de Bongaerts et al. (2007a). Tanto el disco PDMS como las Frederick, MD). Se añadieron diez microlitros de cada muestra al puerto de inyección y se
bolas utilizadas en la medición se seleccionaron para aproximarse a la dureza de corrieron a 300 V durante 15 min. El gel se tiñó con la solución de tinción Coomassie Brilliant Blue
los tejidos orales. La geometría de doble bola constaba de 2 bolas de polipropileno (R-250; Bio-Rad Laboratories Inc.) durante 90 min, luego se destiñó en una solución de metanol/
(15,88 mm de diámetro, McMaster-Carr, Elmhurst, IL) dispuestas de manera que ácido acético (10 % de metanol, 40 % de ácido acético, 50 % de agua desionizada). ). Los geles
sus centros estuvieran separados por 27 mm. Se seleccionó una fuerza normal de desteñidos se escanearon usando el software GeneSys (Syngene USA, Frederick, MD).
1 N para todas las mediciones de fricción (Bongaerts et al., 2007b) y se basó en una
fuerza en la boca durante la deglución de 0,01 a 10 N (Miller y Watkin, 1996). Para
montar el disco de PDMS en la base del reómetro, se adhirió la cara lisa de un
cuadrado de papel encerado al disco de PDMS usando pegamento de silicona (DAP Microscopía de escaneo láser confocal
Product Inc., Baltimore, MD). Después de dejar que el pegamento de silicona se
asentara a temperatura ambiente (22 ± 2 °C) durante la noche, la cara rugosa del Los procedimientos de tinción y el análisis CLSM se basaron
papel encerado se unió a la base del reómetro con pegamento de cianoacrilato en el método de Ong et al. (2010). Brevemente, se agregaron
(Henkel Corporation, Rocky Hill, CT). Para cada prueba, se esparció 1 mL de leche 10 ml de cada leche a una solución de 4 mg de fast green
sobre el disco PDMS en una capa delgada. Después de bajar las bolas a la fuerza (Sigma-Aldrich) en 150 μl de acetona (Sigma-Aldrich) para teñir
normal deseada, la velocidad de deslizamiento se incrementó gradualmente de los glóbulos de grasa. Después de mantener durante 30 min,
0,15 a 750 mm/s. Las muestras se probaron por cuadruplicado y las bolas y los se añadió a la muestra una solución de 2 mg de rojo Nilo (TCI
discos se cambiaron cada 4 muestras para mitigar los efectos del desgaste en los America, Portland, OR) en 150 μL de acetona y se mantuvo
resultados de las pruebas. la velocidad de deslizamiento se incrementó durante otros 30 min para teñir las proteínas de la leche.
gradualmente de 0,15 a 750 mm/s. Las muestras se probaron por cuadruplicado y Luego, 100 μL de la muestra teñida se transfirieron a un
las bolas y los discos se cambiaron cada 4 muestras para mitigar los efectos del portaobjetos de cavidad (BRAND, Wertheim, Alemania) y se
desgaste en los resultados de las pruebas. la velocidad de deslizamiento se cubrieron con un cubreobjetos de vidrio con 2 gotas de aceite
incrementó gradualmente de 0,15 a 750 mm/s. Las muestras se probaron por en el centro del cubreobjetos. Las muestras se observaron a 22
cuadruplicado y las bolas y los discos se cambiaron cada 4 muestras para mitigar ± 2 °C utilizando un microscopio de barrido láser confocal
los efectos del desgaste en los resultados de las pruebas. (Olympus Corporation, Tokio, Japón) equipado con una lente de
Para eliminar la acumulación de grasa en las superficies tribológicas, inmersión en aceite de 60x. El rojo Nilo se excitó a una longitud
tanto las bolas como el disco se limpiaron con un 5% (vol/ de onda de 488 nm y el FCF verde rápido a 633 nm.
Composición
Los datos tribológicos se graficaron usando Origin 8 (OriginLab, Viscosidad mecánica medida a los 50 s−1de leche procesada por
Northampton, MA). Las desviaciones estándar se calcularon para todos diferentes métodos de pasteurización se muestran en la Tabla 2. En general,
los datos y se usaron como base para las barras de error en todos los la leche UP indirecta tenía una viscosidad mecánica insignificantemente más
gráficos que se muestran en la sección Resultados y discusión. Los alta en comparación con la leche pasteurizada HTST. El contenido de grasa
perfiles de tribología se analizaron en busca de diferencias estadísticas aumentó significativamente la viscosidad de la leche. La leche con 5% de
utilizando barras de error como indicación. Si las barras de error en grasa tenía una viscosidad significativamente mayor que la leche con 2% de
cada punto entre diferentes tratamientos no mostraban superposición, grasa y descremada; La viscosidad de la leche con 2% de grasa no fue
los puntos se consideraban significativamente diferentes. Debido a que significativamente diferente de la de la leche descremada. La viscosidad de la
la viscosidad mecánica de las muestras de leche medidas mostró un leche descremada UP no cambió significativamente con el aumento del
comportamiento líquido newtoniano, los datos de viscosidad a una tiempo de almacenamiento. Los perfiles de viscosidad mecánica de leche
velocidad de corte de 50 s−1, la velocidad de corte aproximada de la homogeneizada a presión con un contenido de grasa del 2% se muestran en
deglución (Morris 1983), se utilizaron para el análisis. Tanto los datos de la Tabla 3. En todos los puntos de tiempo, no se observaron diferencias
viscosidad mecánica como los datos sensoriales se analizaron mediante significativas en la viscosidad entre las muestras de leche homogeneizadas a
ANOVA de 1 vía seguido de la comparación de Tukey utilizando Minitab diferentes presiones. ANOVA de dos vías mostró que el método de
(Minitab Inc., State College, PA; α = 0,05). La viscosidad mecánica pasteurización y el tiempo de almacenamiento tenían una interacción
también se analizó mediante ANOVA de 2 vías utilizando Minitab (α = significativa (PAGS<0,05).
0,05). El tamaño de los glóbulos de grasa de la leche homogeneizada a
diferentes presiones se analizó mediante ANOVA unidireccional seguido Propiedades tribológicas
de la comparación de Tukey utilizando Minitab (α = 0,05). El análisis de
regresión se completó con Minitab para estudiar las correlaciones entre Los perfiles de fricción de la leche procesada bajo diferentes
la puntuación de astringencia y el coeficiente de fricción a una tratamientos térmicos y diferentes presiones homogeneizadas se
velocidad de deslizamiento de 100 mm/s, y las correlaciones entre la muestran en las Figuras 1 y 2, respectivamente. En general, UP
puntuación de viscosidad sensorial y la viscosidad mecánica a una aumentó los perfiles de fricción de la leche en el régimen mixto en
velocidad de corte de 50 s.−1. comparación con la pasteurización HTST, excepto para la leche
descremada y con 5% de grasa en la semana 1 y leche con 5% de grasa.
Tabla 2. Viscosidad mecánica (mPa∙s) medida a los 50 s−1de leche procesada por diferentes métodos de pasteurización1
Leche desnatada 1,91 ± 0,01F 2,07 ± 0,02CDEF 1,99 ± 0,04definitivamente 2,15 ± 0,04código 1,98 ± 0,04definitivamente 1,97 ± 0,03ef
Leche 2% grasa 2,11 ± 0,01CDEF 2,25 ± 0,02C 2,15 ± 0,03código 2,18 ± 0,01discos compactos 2,12 ± 0,03CDEF 2,10 ± 0,05CDEF
Leche 5% grasa 2,46 ± 0,01b 2,60 ± 0,02abdominales 2,56 ± 0,01abdominales 2,69 ± 0,05a 2,61 ± 0,07abdominales 2,61 ± 0,06abdominales
a–fLas medias en la tabla que no comparten una letra son significativamente diferentes (PAGS<0,05).
1Las muestras nuevas de HTST se procesaron 1 semana antes de la prueba debido a las restricciones de vida útil y se usaron como comparación en la semana 8. UP = ultrapasteurizado.
en la semana 8, que no tuvo diferencias significativas entre los diferentes de leche con 2% de grasa en la semana 1 y leche con 5% de grasa en la
tratamientos térmicos. El contenido de grasa disminuyó significativamente semana 1 y 4. La leche homogeneizada a 13,8 MPa mostró una
los perfiles de fricción de la leche en el régimen mixto para todas las viscosidad sensorial significativamente mayor que la leche
muestras, independientemente del tratamiento térmico o el tiempo de homogeneizada a 20,7 y 27,6 MPa. Sin embargo, la presión de
almacenamiento. La leche descremada UP mostró perfiles de fricción homogeneización no tuvo efecto sobre la astringencia.
significativamente más altos en el régimen mixto en la semana 4 y 8 en
comparación con la semana 1. La leche con 5% de grasa pasteurizada con Resultados CLSM
HTST mostró perfiles de fricción significativamente más altos en el régimen
mixto en la semana 8 en comparación con la semana 1 y 4. De lo contrario, el Las imágenes de microscopía de la estructura de la proteína de la
tiempo de almacenamiento no tuvo un efecto significativo en los perfiles de leche se muestran en la Figura 7; las manchas de color verde brillante
fricción. No se encontraron diferencias significativas entre los perfiles de son micelas de caseína. En leche pasteurizada con HTST (Figura 7a, 7b,
fricción de la leche homogeneizada a diferentes presiones para ningún 7c), las micelas de caseína se distribuyeron al azar. Sin embargo,
punto de tiempo. después de UP (Figura 7d, 7e, 7f), es probable que las micelas de
caseína en la leche construyan una estructura de red de proteínas al
Propiedades sensoriales vincular proteínas de suero desnaturalizadas (McMahon, 1996), lo que
no se observó en la leche HTST.
El efecto del método de pasteurización, el contenido de grasa, el Las imágenes de microscopía de la distribución de la grasa
tiempo de almacenamiento y la homogeneización sobre la de la leche se muestran en la Figura 8; las manchas rojas son
viscosidad sensorial y los resultados de astringencia se muestran gotitas de grasa. En general, los tamaños de las gotitas de
en las Figuras 3, 4, 5 y 6, respectivamente. En general, el aumento grasa fueron relativamente uniformes a cada presión de
del contenido de grasa aumentó significativamente la viscosidad homogeneización de 13,8, 20,7 y 27,6 MPa. El diámetro medio
sensorial y disminuyó significativamente la astringencia. El tiempo de los glóbulos de grasa de la leche homogeneizada fue de
de almacenamiento aumentó significativamente la astringencia de 0,92 ± 0,07 a 0,98 ± 0,08 μm (13,8 MPa), 0,90 ± 0,05 a 0,99 ±
la leche UP; sin embargo, no mostró ningún efecto sobre la 0,09 μm (20,7 MPa) y 0,87 ± 0,03 a 0,93 ± 0,02 μm (27,6 MPa).
astringencia de la leche pasteurizada con HTST. No observamos Sin diferencias significativas (PAGS>0,05) en el diámetro medio
diferencias significativas entre las viscosidades sensoriales de la de los glóbulos de grasa entre leches homogeneizadas a
leche en diferentes tiempos de almacenamiento con 2 excepciones. diferentes presiones en diferentes momentos (Tabla 4).
Primero, la leche con 2% de grasa en la semana 8 mostró una
viscosidad sensorial significativamente más baja que en las Resultados de SDS-PAGE
semanas 1 y 4 para la leche UP y HTST. Además, la leche con 5% de
grasa en la semana 4 mostró una viscosidad sensorial Los resultados de SDS-PAGE se muestran en la Figura 9. En la
significativamente más alta que en la semana 1 y 8 para la leche leche UP (carriles 2, 4 y 6), la cantidad de proteína de suero con un
UP. En comparación con la pasteurización HTST, peso molecular <15 kDa fue pequeña en comparación con la leche
pasteurizada con HTST (carriles 1, 3 y 6). y 5). Cómo-
Tabla 3. Viscosidad mecánica (mPa∙s) medida a los 50 s−1de leche ultrapasteurizada (UP) 2% grasa homogeneizada a
diferentes presiones
Figura 1. Perfiles de fricción de la leche procesada por diferentes métodos de pasteurización. Las muestras nuevas de HTST se procesaron 1 semana antes de la prueba debido a las restricciones
de vida útil y se usaron como comparación en la semana 8.
Figura 2. Perfiles de fricción de leche ultrapasteurizada con 2% de grasa procesada bajo diferentes presiones de homogeneización. Los triángulos del lado derecho hacia arriba
indican muestras procesadas a 13,8 MPa, los diamantes indican muestras procesadas a 20,7 MPa y los triángulos al revés indican muestras procesadas a 27,6 MPa. Las barras de error
representan SE.
DISCUSIÓN
Figura 7. Imágenes de microscopía de barrido láser confocal de estructuras proteicas para leche procesada por diferentes métodos de pasteurización. Las proteínas de la leche se
muestran en verde (color claro en la versión impresa). Las muestras nuevas de HTST se procesaron 1 semana antes de la prueba debido a las restricciones de vida útil y se usaron
como comparación en la semana 8. UP = ultrapasteurizado. Versión en color disponible en línea.
Además del contenido de grasa, el tratamiento térmico mostró un efecto La leche congelada mostró viscosidades sensoriales, astringencia y
significativo sobre los atributos sensoriales y las propiedades de fricción de perfiles de fricción significativamente más altos en el régimen mixto en
la leche. ANOVA de dos vías mostró que el tratamiento térmico, el tiempo de comparación con la leche HTST. Lee et al. (2017) también
almacenamiento y su interacción tenían un efecto significativo en la documentaron una mayor astringencia en la leche UP en comparación
viscosidad mecánica (datos no mostrados). ultrapasteur- con la leche HTST. Sin embargo, no hay diferencias significativas
Figura 8. Imágenes de microscopía de barrido láser confocal de glóbulos de grasa para leche con 2% de grasa homogeneizada a diferentes presiones y almacenada durante diferentes períodos de
tiempo. Las gotas de grasa de leche se muestran en rojo (color claro en la versión impresa). Versión en color disponible en línea.
Tabla 4. Diámetro medio de los glóbulos de grasa en leche ultrapasteurizada (UP) con 2% de grasa homogeneizada a diferentes
presiones
se observaron en la viscosidad mecánica. Presumimos que estos (Donato y Guyomarc'h, 2009). Nuestros resultados
resultados estaban relacionados con los cambios en la estructura concuerdan con esta teoría: después de la adición de 2-
de la proteína en la leche UP basados en el mecanismo de mercaptoetanol, un agente reductor que abre puentes
desnaturalización de las proteínas de suero y la agregación entre disulfuro, las proteínas de alto peso molecular
las proteínas de suero desnaturalizadas y las micelas de caseína desaparecieron y apareció una banda de proteínas con
(Anema y Li, 2003; Donato y Guyomarc'h, 2009). peso molecular <15 kDa, lo que indica que las proteínas de
Las proteínas de suero estaban claramente presentes en las alto peso molecular fueron Proteínas de suero agregadas.
muestras de leche HTST como bandas oscuras en el rango de 10 a 15 Presumimos que la proteína de gran peso molecular es la causa del
kDa (Figura 9). Sin embargo, estas bandas eran mucho más débiles en aumento de los perfiles de viscosidad y fricción. La mayor viscosidad
las muestras de leche UP, lo que indicaba que la UP desnaturalizaba la probablemente resultó de mayores enredos y fuerzas intermoleculares
mayoría de las proteínas del suero. Estas proteínas de suero de leche más fuertes en las moléculas más grandes. Las fuerzas
desnaturalizadas formaron proteínas moleculares muy grandes con un intermoleculares más fuertes darían como resultado mayores
peso molecular >250 kDa. Este resultado fue consistente con el estudio atracciones entre las moléculas, lo que dificultaría el flujo molecular y
anterior de Tran et al. (2008) que la UP indirecta causa del 98 al 100 % daría como resultado una mayor viscosidad. de Wijk y Prinz (2006)
de desnaturalización de β-LG y del 74 % de α-LA, mientras que la propusieron que el tamaño de las partículas juega un papel importante
pasteurización HTST solo desnaturaliza del 5 al 15 % de β-LG (Griffiths, en la astringencia: las partículas más grandes aumentan la astringencia
2010). También estuvo de acuerdo con los resultados de Lee et al. al reducir la lubricación y aumentar la fricción. Nuestro estudio apoyó
(2017), quienes informaron aproximadamente un 20 % de este mecanismo. Durante el almacenamiento, las proteínas de suero de
desnaturalización de la proteína sérica de la leche HTST y leche desnaturalizadas en la leche UP pueden formar agregados. A
aproximadamente un 70 % de la leche UP. El desdoblamiento de las partir de los resultados de astringencia, observamos que el tiempo de
proteínas del suero expone los grupos tiol/disulfuro, que se puede almacenamiento no afectó la astringencia de la leche pasteurizada con
utilizar además para formar agregados entre proteínas de suero de HTST; sin embargo, La astringencia de la leche UP aumentó
leche desnaturalizadas a través de enlaces covalentes (Lyster, 1964). significativamente durante el almacenamiento. Esto apoyó la hipótesis
Estos agregados de β-LG/α-LA interactuarían aún más con la κ-caseína de que la causa de una mayor astringencia se debía a agregados o una
en la superficie de la micela de caseína a través de enlaces disulfuro. red de proteínas formada por proteínas de suero de leche
desnaturalizadas y caseínas sobre
Figura 9. Resultados PAGE de dodecilsulfato de sodio. Los números de carril (0–9) representan lo siguiente: (0) estándares, (1) leche HTST en la semana 1, (2) leche
ultrapasteurizada (UP) en la semana 1, (3) leche HTST en la semana 4, (4) UP leche en la semana 4, (5) leche HTST en la semana 8, (6) leche UP en la semana 8, (7) leche UP en la semana
1 con agente reductor, (8) leche UP en la semana 4 con agente reductor y (9) ) LECHE UP en la semana 8 con agente reductor. Las muestras nuevas de HTST se procesaron 1 semana
antes de la prueba debido a las restricciones de vida útil y se usaron para comparar en la semana 8. La versión en color está disponible en línea.
tiempo. Nuestros resultados de ANOVA de 2 vías que mostraron una No obstante, puede ser posible promover las interacciones entre los
interacción entre la pasteurización y el tiempo de almacenamiento para los componentes de la grasa y la leche (p. ej., grasa y proteína) para mejorar los
resultados de viscosidad también respaldan esta hipótesis: los diferentes efectos de la grasa en los sistemas lácteos. Se necesita más trabajo para
cambios estructurales se vuelven más evidentes con el tiempo. El tiempo de examinar los efectos de las posibles interacciones entre los componentes de
almacenamiento no afectó el diámetro medio de los glóbulos de grasa; por la leche y la grasa en los atributos sensoriales del sistema lácteo final.
lo tanto, el aumento de la astringencia no fue el resultado de cambios en el
tamaño de los glóbulos de grasa. Con base en el análisis de regresión (Figuras 10 y 11),
A presiones de homogeneización de 13,8 a 27,6 MPa, la observamos que la viscosidad sensorial y la viscosidad
influencia de la presión de homogeneización sobre el tamaño de mecánica a una velocidad de corte de 50 s−1se correlacionaron
las gotas de grasa no fue significativa (Tabla 4). Presumimos que positivamente (R2= 0.90), como se esperaba. Aunque la
este resultado se debió a la alta eficiencia de la homogeneización correlación entre la astringencia y el coeficiente de fricción a
en 2 etapas. En el rango seleccionado de presión de una velocidad de deslizamiento de 100 mm/s (régimen mixto)
homogeneización, una presión más alta no redujo no fue tan buena como la correlación entre la viscosidad
significativamente el tamaño de los glóbulos de grasa. Estos sensorial y mecánica, aún observamos una R2= 0,71 para leche
resultados fueron respaldados por el estudio de Hayes y Kelly HTST (Figura 11a) y R2= 0,74 (Figura 11b) para leche UP. Estos
sobre la leche bovina: la leche homogeneizada en un proceso de 2 resultados sugieren que otros factores como la saliva pueden
etapas a 50 MPa no tenía diámetros de glóbulos de grasa desempeñar un papel en la sensación de astringencia
significativamente diferentes a los de la leche homogeneizada a 18 impartida por la leche (Jöbstl et al., 2004) y la relación entre la
MPa (Hayes y Kelly, 2003). En comparación con la leche procesada astringencia y la fricción es más complicada que la relación
bajo homogeneización de 1 etapa, que mostró formación de entre la viscosidad sensorial y mecánica.
grupos de glóbulos de grasa durante el almacenamiento, la leche
procesada bajo homogeneización de 2 etapas mostró menos CONCLUSIONES
grupos de glóbulos de grasa durante el almacenamiento (Thiebaud
et al., 2003). Es probable que la homogeneización en 2 etapas El aumento del contenido de grasa aumentó la viscosidad tanto
reduzca las gotas de grasa a un tamaño en el que no es probable sensorial como mecánica en la leche pasteurizada UP y HTST debido a
que se fusionen con el tiempo y la presión utilizada en la la mayor resistencia al flujo impartida por el mayor número de glóbulos
homogeneización en 2 etapas no fue tan importante como la de grasa. El aumento del contenido de grasa también redujo los perfiles
presencia de la segunda etapa. Esto estaba de acuerdo con nuestro de astringencia y fricción en el régimen mixto debido a la capacidad de
estudio, que no mostró un efecto significativo de la presión de lubricación de la grasa. La UP indirecta aumentó la viscosidad sensorial,
homogeneización sobre las propiedades mecánicas y sensoriales. la astringencia y los perfiles de fricción en el régimen mixto en
Las presiones de homogeneización estudiadas tampoco comparación con la pasteurización HTST; estas diferencias se
tuvieron un efecto perceptible sobre la proteína, según lo atribuyeron a los grandes agregados de proteínas o redes de proteínas
determinado por ningún cambio significativo en la formadas por la proteína de suero de leche desnaturalizada y las
viscosidad, los comportamientos de fricción y las imágenes micelas de caseína. El aumento del tiempo de almacenamiento no
de microscopía tanto a través de la presión como a lo largo mostró ningún efecto sobre la viscosidad sensorial, pero aumentó la
del tiempo. Si bien se sabe que la presión desnaturaliza las astringencia. Sin embargo,
proteínas de la leche (Pandey et al., 2000; López-Fandiño et
al., 2006; Anema, 2008) y, posteriormente, altera las
propiedades fisicoquímicas y mecánicas del sistema de la
leche (Anema, 2008; Cadesky et al. , 2017), la mayoría del
trabajo sobre el efecto de la presión sobre las proteínas de
la leche implica mantener la leche a altas presiones (100–
1000 MPa) durante 5 a 110 min (Pandey et al., 2000; Anema,
2008; Bravo et al. ., 2015; Cadesky et al., 2017). Sin
embargo, la homogeneización expone la leche a altas
presiones durante tiempos mucho más breves, del orden
de segundos. De este modo,
En general, el contenido de grasa tuvo un mayor efecto sobre la
viscosidad sensorial y las puntuaciones de astringencia que el tratamiento
térmico, el tiempo de almacenamiento o la presión de homogeneización.
Estos resultados apuntan a la importancia de la grasa láctea en la textura de
la leche y bebidas lácteas similares. No se observaron efectos de interacción
entre el contenido de grasa y las otras variables, lo que indica que la grasa Figura 10. Correlaciones entre la viscosidad sensorial y la viscosidad mecánica.
por sí sola es un poderoso impulsor. Versión en color disponible en línea.
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