Bacteria (Staphylococcus aureus): siembra, identificación y

recuento
Mayra Fernanda Alvarez Derazo

Resumen
La bacteria Staphylococus aureus hace parte de los microorganismos que con el tiempo
se han convertido en focos de estudio, esto es debido a que son las causantes de enfermedades
con la capacidad del deterioro en gran medida de tejidos del ser humano y también son de
carácter muy resistente, por lo cual los antibióticos necesitan ser de carácter letal para poder
contrarrestar sus efectos. En el presente estudio se busca saber que tan contaminado esta
un alimento con bacterias del género estafilococo , sometiendo a estudio una muestra casera
de carácter lácteo para realizar un conteo de unidades formadoras de colonia de este tipo ,
además se busca la apropiación de la siembra mediante diluciones seriadas con su
correspondiente siembra e identificación.

Palabras clave: inoculación, siembra, identificación, análisis.

1. Introducción

Staphylococus aureus es un convertido en un problema de gran

microorganismo perteneciente a la
rama de las bacterias, con la facilidad
de desarrollarse de forma anaerobia
facultativa, además es de carácter
grampositivo, es decir que luego de
una tinción de Gram es de color
purpura. Fue descubierta por
Alexander Ogston en 1880, quien
descubrió en sus investigaciones que el
pus producido en las heridas es
producido por esta bacteria1;
generalmente se alojan en animales en
donde son muy difíciles de eliminar, al
igual que en las personas donde se ha
magnitud debido a que esta ha
generado gran resistencia a los
antibióticos, además también se
alberga en alimentos de origen vegetal
como las verduras y frutas.
Un punto de proliferación de este tipo
de bacteria es la parte anterior de las
fosas nasales, pero esto no indica que
pueda encontrarse en otros sitios del
cuerpo humano, naturalmente forma
parte de la flora normal del humano,
entre 25 y 50% de la población sana
está colonizada por esta bacteria,
 constituyendo un riesgo por su
diseminación.
Taxonomía
La bacteria analizar pertenece al
género Staphylococcus, dentro de
familia Staphylococcaceae, que incluye
además otros cuatro géneros menos
conocidos: Jeotgalicoccus, Macrococcus,
Nosocomiicoccus y Salinicoccus,
observados microscópicamente de
acuerdo con la Figura 1.
Figura 1. Bacteria S. aureus escapando de
la destrucción por leucocitos humanos
Características microbiológicas
Pertenece al genero coco grampositivo, y
tienen de 0,5 a 1,5 um de diámetro, estos
tienen la capacidad de agruparse de tal
manera que llegan a formar racimo, y
además tienen carácter inmóvil; se
diferencia de otras bacterias por poseer la
capacidad de coagular la sangre y ser
resistente al calor
Por otro lado, es capaz de crecer en
concentraciones elevadas de cloruro
sódico, lo cual otro microorganismo no
puede hacer, en su mayoría todas las cepas
de S. aureus producen enzimas de
coagulasa el factor de afinidad por el
fibrinógeno (o clumping factor) y la
nucleasa termoestable (DNasa), y son
fermentadoras del manitol, lo que
permiten diferenciarlos del resto de
especies de estafilococos1
Metabolismo y Genoma
Tiene la facilidad de desarrollarse
fácilmente, sin embargo, lo que hace es
fermentar los carbohidratos del
hospedador sin producir un gas,
ocurriendo esto en ausencia de oxígeno, en
este proceso también se generan colores
característicos como lo es un amarillento
típico del pus de las heridas o en otros
casos un color blanco.
El factor de virulencia este contenido en
profagos, plásmidos y transposones, los
cuales pueden ser transferidos entre las
diferentes especies de estafilococos y sus
cepas.
Componentes estructurales
Los mecanismos patógenos dependen de
diversos factores del microrganismo
mismo tales como sus toxinas, enzimas y
factores de adhesión.
El factor de virulencia depende de
componentes como:
a. Capsula la cual dificulta la
fagocitosis
b. Capa de polisacáridos y acido
teicoico los cuales facilitan la
adherencia a cuerpos extraños y la
 adherencia del estafilococo a la presencia de una pigmentación amarilla
fibronectina
c. Proteína A encargada de fijar
anticuerpos por la porción Fc
Por parte de las enzimas tenemos:
• Coagulasa Cataliza la conversión de
fibrinógeno en fibrina provocando el
depósito de S. aureus, al estar cubierto
por fibrina se vuelve menos
inmunógeno2
• Lipasas Promueven la hidrolisis de
lípidos lo que hace que S. aureus se
disemine en el tejido cutáneo y
subcutáneo3.
Las toxinas por su parte contribuyen en
gran parte a la degradación de células, al
ataque de la Desmogleína-1, producen
síntomas como la diarrea por muerte de
enterocitos y también provocan una
producción masiva de citocinas.
Siembra de S. aureus
El periodo de incubación esta entre las 18-
24 horas después de haber realizado la
inoculación, se suelen observar lisas,
elevadas y en algunos casos brillantes.
Este tipo de bacteria pueden crecer en
medios no selectivos como agar chocolate,
BHI, agar sangre, medios de cultivo
líquidos para hemocultivo, el mas usado en
laboratorios es el agar sal manitol o medio
de Chapman por su elevado contenido de
sal que inhibe el crecimiento de la mayoría
de las bacterias Gram negativas puesto que
permite la identificación de la bacteria con
característica, esto es debido a que se
fermenta el manitol y se genera el viraje
anteriormente mencionado4.
Otros medios usados son el agar sangre
como anteriormente se había mencionado
el cual no tiene los nutrientes necesarios
para el desarrollo de bacterias Gram
negativas. Actualmente se han
desarrollado medios de cultivo que
contiene agar base cromogénico específico
para la detección de S. aureus, en presencia
de enzimas específicas, los sustratos son
modificados y los cromógenos tiñen
específicamente las colonias, permitiendo
realizar la identificación directa de S.
aureus 5.
Identificación
1. Tinción de Gram donde se debe
observar su carácter Grampositivo,
tornándose de color purpura
2. Fermentación de glucosa
encargada de la distinción del genero
analizado con el genero Micrococus
3. Prueba coagulasa esta
principalmente se manifiesta con la
producción de una enzima encargada de
cambiar el aspecto del plasma
2. Materiales y métodos
Medio de cultivo Agar Baird Parker
(BP)
clasificado como moderadamente
selectivo, este compuesto principalmente
con extracto de levadura y carne conocidos
como fuentes principales de carbono y
nitrógeno, glicina, cloruro de litio, telurio
que actúan como agentes selectivos, cabe
destacar que también contiene yema de
huevo que ayuda a la determinación de la
actividad lipasa.
Este agar al tener telurio permite la
identificación de unidades de colonias de
color gris oscuro o negro, esto es gracias a
que el telurio pasa por un proceso de
reducción, por otro lado, la producción de
lecitinasa descompone la yema de huevo
creando así zonas trasparentes alrededor
de la bacteria, ilustrándose en la Figura 2
Figura 2. Bacteria S. aureus en agar BP
Procedimiento experimental
En un principio se pesan 10 gramos de
muestra en una bolsa de Stomacher, que
posteriormente se mezclan con 90 ml de
agua de peptona 0,1% , la solución
resultante se homogeniza durante 3
minutos
 Preparación de diluciones seriadas
A partir de la solución anteriormente
preparada se realizan diluciones de 1 en 10
sucesivamente, de tal forma que con una
micropipeta de tome 1 ml de la solución
inicial y se lleve a otro tuvo de cultivo con
9 ml de agua de triptona al 0,1%, para las
soluciones siguientes se realiza el mismo
procedimiento anteriormente denotado,
pero tomando como partida la solución
inmediatamente anterior como se ilustra en
la Figura 3.
Figura 3. Diluciones seriadas
Siembra y crecimiento
Siembra mediante extensión en
superficie
Se toma 0,1 ml de las diluciones
intermedias por duplicado de cada una y se
adiciona en cajas de Petri que ya contienen
el agar BP de manera sólida, de tal manera
que con el asa se esparza tratando de cubrir
toda la superficie, finalmente se deja
incubar a 37 ° C aproximadamente por 48
horas
Prueba de coagulasa
Esta determinación consiste en verter en
un tubo de ensayo o,3 ml de plasma de
conejo y EDTA reconstituido, luego se
añade 0,1 ml de cultivo obtenido en caldo
BHI, esto se mezcla y se incuba a una
temperatura de 37°C, el resultado positivo
se manifiesta con la aparición de un
coagulo firme.
3. Resultados
El analito para sembrar es el derivado
de un producto lácteo, en este caso
yogurt, para lo cual en un principio se
preparó la solución inicial y se realizo
las diluciones seriadas como se
menciono anteriormente, cabe destacar
que las diluciones sembradas fueron
10-2, 10-3, 10-4. Después de
transcurrido el tiempo adecuado para
permitir que la bacteria llegue a su
desarrollo optimo, se toman las
siguientes evidencias.
Figura 4. Siembra dilución 10-2
Figura 5. Siembra dilución 10-3
Figura 6. Siembra dilución 10-4
El objetivo principal de las diluciones
seriadas es de tal forma disminuir la
cantidad de microorganismos en la
muestra inicial, para de tal modo
permitir el conteo de las unidades
formadoras de colonia, puesto que si
no se realiza dicho procedimiento lo
que tendríamos en la primera siembra
sería un posible manchón negro debido
a la sobresaturación de
microrganismos. En base a los
resultados obtenidos se tiene como
primera instancia que en la última
dilución no hay crecimiento del
microorganismo y la cantidad aumenta
en las dos diluciones anteriores a esta,
como inferencia podríamos decir que
las bacterias son del género
estafilococo debido a que creció en el
agar moderadamente selectivo, sin
embargo, no es de la especie aureus
puesto que este tipo de bacterias tiene
un especie de aureola alrededor de su
apariencia de tipo negro, lo cual en las
bacterias obtenidas en el cultivo no se
observa, por otro lado no se puede
hacer el conteo con exactitud en base a
los reportado en la literatura, sin
embargo se datan en las 6 cajas de Petri
alrededor de 13 unidades formadoras
de colonia; la poca presencia de esta
bacteria nos da una distinción entre la
calidad o registro sanitario del
 alimento lácteo como tal, esto quiere
decir que en su mayoría en el sitio de
fabricación tienen practicas un poco
rigurosas con los procesos de
fabricación.
4. Discusión
En base a que todo tiende a evolución
en pro de la conservación de cada
especie, esto incluye para esta
instancia la resistencia bacteriana a los
antibióticos, esto inicio con la
resistencia que genero la bacteria S.
aureus a la penicilina, lo cual llevo al
desarrollo de un nuevo medicamento a
partir de cepas bacterianas de la
bacteria en estudio, de tal modo que se
contribuya a generar un estado de
salud optimo, se es conocido que la
mayoría de las enfermedades son
producidas por microorganismos
patógenos.
Por otro lado, los agentes microbianos
han sido estudiados con la inoculación
y siembra en agares que contienen los
nutrientes específicos para permitir el
desarrollo de colonias sometidas a
estudio con el fin de corroborar la
calidad de los productos, así como
también poder verificar el carácter
sanitario de lo mismos con el objetivo
principal de prevenir enfermedades
por parte de bacterias mediante la no
ingesta de alimentos contaminados.
línea] Medigraphic.com.
Disponible en:
<https://www.medigraphic.com/
pdfs/patol/pt-2014/pt141e.pdf>
[Consultado el 22 de noviembre
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Schettino, P., 2021.
Características generales del
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