Acetyl Cholinesterase Inhib

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Revista Internacional de
Ciencias Moleculares
Artículo
Estudios cinéticos in vitro e in silico de derivados

patentados de 1,7-dietilo y 1,7-dimetilaminoalcanol como
nuevos inhibidores de la acetilcolinesterasa
2
Blazej Grodner ÿ 1,*, Mariola Napiórkowska y Dariusz Maciej Pisklak 3
1
Presidente y Departamento de Bioquímica y Farmacogenómica, Universidad Médica de Varsovia, 1 Banacha
Street, 02-097 Varsovia, Polonia Departamento de Bioquímica, Universidad Médica de Varsovia, 1 Banacha
2
Street, 02-097 Varsovia, Polonia; mariola.napiorkowska@wum.edu.pl Departamento de Química Física,
Universidad Médica de Varsovia, 1 Banacha Street, 02-097 Varsovia, Polonia; dpisklak@wum.edu.pl *
3
Correspondencia: bgrodner@wum.edu.pl; Teléfono: +48-22-5720735
Resumen: Dos derivados aminoalcanoles de 1,7-diEtil-8,9-difenil-4azatriciclo (5.2.1.02.6) dec-8-eno 3,5,10-

triona y dos derivados de 1,7-dimetil-8, 9-difenil-4-azatriciclo (5.2.1.02.6) dec-8-eno-3,5,10- triona fueron
evaluados in vitro por su eficacia inhibidora de la acetilcolinesterasa. Los ángulos de pendiente Km, Vmax,
de los diagramas de Lineweaver-Burk, los valores Ki y IC50 mostraron que los cuatro derivados de
aminoalcanol son inhibidores competitivos de la acetilcolinesterasa cuya potencia inhibidora depende, en
grado variable, de la naturaleza de los cuatro sustituyentes diferentes presentes en el compuesto principal.
estructura compuesta. Los estudios han demostrado que los inhibidores de acetilcolinesterasa más potentes
son derivados que contienen isopropilamina y/o sustituyentes metilo en su estructura. Por el contrario, los
sustituyentes dimetilamina y/o etilo parecen tener un efecto más débil, aunque visible, sobre la potencia
Cita: Grodner, B.; napiórkowska,
inhibidora de la acetilcolinesterasa. Además, los estudios de acoplamiento sugieren que los compuestos
METRO.; Pisklak, DM In Vitro e In
estudiados se unen con el sitio aniónico periférico y no entran en el bolsillo catalítico debido a la presencia
Silico Kinetic Estudios de Patentado
del sustituyente estéricamente extendido.
1,7-dietilo y 1,7-dimetilo
Derivados de aminoalcanol como nuevos
Palabras clave: inhibidores de la acetilcolinesterasa; enfermedad de Alzheimer; derivados de aminoalcanol; medicamentos contra
Inhibidores de la Acetilcolinesterasa.
el cancer
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270. https://
doi.org/10.3390/ijms23010270
Editor académico: Sung-Kun
(Sean) Kim 1. Introducción

Recibido: 24 noviembre 2021
La acetilcolinesterasa (AChE; EC 3.1.1.7) pertenece al grupo de las hidrolasas. La función más
Aceptado: 22 de diciembre de 2021 importante de la AChE es la hidrólisis de un importante neurotransmisor , la acetilcolina, a colina y ácido
Publicado: 27 diciembre 2021
acético, según el esquema que se muestra en la Figura 1.
Nota del editor: MDPI se mantiene neutral
La acetilcolina (ACh) es uno de los neurotransmisores más importantes porque está presente
con respecto a reclamos jurisdiccionales en
tanto en el sistema nervioso periférico, como en el sistema nervioso central y en el sistema nervioso
mapas publicados y afiliación institucional autónomo [1–3]. Realiza muchas funciones diferentes dependiendo del lugar de su operación. Las
aciones. estructuras básicas que interactúan directamente con la ACh son los receptores nicotínicos que se
encuentran en los ganglios autónomos, las terminaciones nerviosas motoras y el sistema nervioso
central , y los receptores muscarínicos que se encuentran en las terminaciones nerviosas parasimpáticas
[4,5]. La acción principal de ACh es estimular la contracción del músculo esquelético. Sin embargo, la
Copyright: © 2021 por los autores. condición para una contracción muscular eficaz y precisa, que conduzca al movimiento pretendido, es
Licenciatario MDPI, Basilea, Suiza.
la adecuada secreción de acetilcolina (ACh) en las terminaciones nerviosas motoras y su rápida
Este artículo es un artículo de acceso abierto
inactivación. Para que este último proceso funcione sin problemas, se necesita una enzima apropiada con una ac
distribuido bajo los términos y
Como se mencionó al principio, la principal enzima responsable de la degradación y mantenimiento de
condiciones de Creative Commons
niveles adecuados de acetilcolina es la AChE. La ACh también hace que los vasos sanguíneos se
Licencia de atribución (CC BY) (https://
ensanchen, lo que reduce la presión arterial. Al mismo tiempo, reduce el ritmo cardíaco y la fuerza de
creativecommons.org/licenses/by/
su contracción. También provoca contracciones de los músculos lisos de los bronquios,
4.0/).
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270. https://doi.org/10.3390/ijms23010270 https://www.mdpi.com/journal/ijms

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Mol. ciencia 2022, 23, Google
x PARA REVISIÓN POR PARES 2 de 20
frecuencia cardíaca y la fuerza de su contracción. También provoca contracciones de los músculos 2lisos
de 19
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270
de los bronquios, los intestinos (estimulando así su peristalsis) y la vejiga urinaria. Además, provoca la
constricción de las pupilas y estimula las funciones secretoras de las glándulas. También se le atribuye la
activación de los procesos cognitivos y de la memoria en los intestinos (estimulando así su peristalsis) y la
vejiga urinaria. Además, provoca
[6].
constricción de las pupilas y estimula las funciones secretoras de las glándulas. Tambien es
acreditado con la activación de procesos cognitivos y de memoria [6].
Figura 1. Esquema de reacción de descomposición de acetilcolina catalizada por acetilcolinesterasa (AChE).

Figura 1. Esquema de la reacción de descomposición de la acetilcolina catalizada por la
acetilcolinesterasa Ciertos compuestos, como por ejemplo los compuestos organofosforados y
carbamatos (AChE).
libras o gases de guerra (sarin, soman, tabun) [7], al ser inhibidores irreversibles de la AChE, causan
una elevación significativa de los niveles de ACh. Los primeros síntomas que aparecen como consecuencia de estos
Ciertos compuestos, como, por ejemplo, los inhibidores de organofosforados y carbamatos son la
constricción de las pupilas, seguida de dolor en el globo ocular, broncoespasmo con
compuestos o gases de guerra (sarin, soman, tabun) [7], siendo inhibidores irreversibles de la AChE, tos y
dificultad para respirar, dolor torácico y babeo. Otros síntomas incluyen vómitos que causan una elevación
significativa de los niveles de ACh. Los primeros síntomas que aparecen como consecuencia de ing, dolor
abdominal con diarrea, paso involuntario de orina y heces, temblores musculares,
estos inhibidores son la constricción de las pupilas, seguido de dolor en el globo ocular, seguido de
convulsiones y parálisis muscular. En la etapa final, la víctima del envenenamiento
broncoespasmo con tos y dificultad para respirar, dolor en el pecho y babeo. Otros suelen caer en coma y
se asfixian durante el mismo. Parálisis de los músculos respiratorios y
los síntomas incluyen vómitos, dolor abdominal con diarrea, orina involuntaria, el músculo
cardíaco suele ser fatal [8]. Por el contrario, se utilizan muchos inhibidores de la AChE reversibles.
y heces, temblores musculares, seguidos de convulsiones y parálisis muscular. En la final de medicina
como drogas. Los ejemplos incluyen donepezilo, rivastigmina y galantamina, que
etapa, la víctima del envenenamiento generalmente cae en coma y se asfixia durante el mismo. Parálisis
al inhibir la actividad de la acetilcolinesterasa, al mismo tiempo inhibe la descomposición de
de los músculos respiratorios y del músculo cardíaco suele ser fatal [8]. Por el contrario, muchos ACh en
el cerebro y esto a su vez conduce a un aumento en la concentración de acetilcolina
Los inhibidores
donepezilo reversibles
y un aumento en de AChE se utilizan
la comunicación enlas
entre medicina
célulascomo fármacos.
nerviosas [9-11].Los ejemplos incluyen
Rivastigmina y Galantamina, que al inhibir la actividad de la acetilcolinesterasa, si no fuera por la
acetilcolina, nuestra memoria no funcionaría correctamente y tendríamos
simultáneamente inhiben la descomposición de ACh en el cerebro y esto a su vez conduce a problemas
para mantener la atención y procesar la información. Por lo tanto, la deficiencia de
aumento en la concentración de acetilcolina y un aumento en la comunicación de esta sustancia se asocia
a menudo con la enfermedad de Alzheimer. La investigación ha demostrado que las personas
entre las células nerviosas
[9-11]. que sufren de esta forma de demencia senil tienen un 73% menos de concentración de acetilcolina
cuerpo Si no fuera
superior al por la acetilcolina,
de las personas sanasnuestra
conmemoria no funcionaría
una cantidad correctamente
media de este compuestoy [12].
tendríamos un
tendría problemas
en el para mantener
cuerpo detiene la atención
la activación y procesar
de los impulsos la información.
nerviosos Por lo tanto, muy poca acetilcolina
y reduce
la deficiencia
tiene de las
la fuerza de estacontracciones
sustancia a menudo se asocia
musculares, lo quecon la enfermedad
puede conducir a de Alzheimer.
su parálisis. LaLa investigación
falta de esto
demostrado
menor que lastambién
(acetilcolina) personas que el
afecta padecen estadeforma
desarrollo de demencia
miastenia senil
gravis, es tienen
decir, un un componente 73%
concentración de acetilcolina en el cuerpo que las personas sanas con una cantidad
enfermedad muscular autoinmune. Luego, hay fatiga general, párpados caídos, deglución promedio de
sedevuelve
este compuesto [12]. problemas con la respiración y visión doble [13].
difícil y aparecen
Muy poca acetilcolina
disminución de los niveles en el
decuerpo
ACh endetiene la activacióndel
áreas específicas decerebro
los impulsos nerviosos
es mucho mayory durante
reduce La
la fuerza
sueño NREMde las
quecontracciones musculares,
durante el sueño lo que
REM, lo que puede
indica queconducir a su parálisis.
la ACh ejerce La falta de esta vigilia o
una importante
componente
influencia en la(acetilcolina) también afecta
inducción (formación) el desarrollo
del sueño de la miastenia
REM [14-16]. gravis,
Por lo tanto, es decir, una
la deficiencia de acetilcolina
enfermedad
puede provocarmuscular autoinmune.
problemas de sueño,Luego,
ya quese presenta
puede cansancio
provocar general, párpados
la desaparición caídos, lafase
de la denominada deglución
REM o,
se vuelve difícil
consecuencia, y aparecen
a su completaproblemas con durante
ausencia, que la respiración y visión
esta etapa, doble [13].
aparecen los como
sueños.
La disminución
regulación de los niveles
de la actividad de la de AChpor
AChE, en áreas específicas
lo tanto, es de grandel cerebro esporque
importancia muchoalmayor
influirdurante la
vigilia
de ACh oen ellas
sueño NREM que
hendiduras duranteprovoca,
sinápticas, el sueñodependiendo
REM, lo que indica quede
del grado la ACh ejerce un nivel/concentración
suinfluencia significativa
actividad, estimulaciónen la inducción
excesiva (formación)dedel
o inhibición la sueño REM
actividad de[14-16]. Por loapropiadas
sustancias tanto, los receptores
(nicotínicas y
La deficienciaque,
muscarínicos), de acetilcolina puede causar
como se mencionó problemas
anteriormente, ende sueño, ya que
consecuencia puedeallevar
conduce cambiosa laen
desaparición
muchos
de
la funciones
llamada fasedel REM
organismo [4–6].
o, en consecuencia, a su completa ausencia, que durante esta En la regulación de la
acetilcolinesterasa,
escenario, aparecen los compuestos de naturaleza activadores y
sueños.PorSelo utilizan
tanto, inhibidores.
la regulaciónLos
de compuestos activadores
la actividad de AChE es de AChE y los compuestos
gran importancia porqueque aceleran
al influir en lala
descomposición de ACh
el nivel/concentración hay sustancias
de ACh que
en hendiduras pertenecen
sinápticas, a varios
provoca, grupos químicos.
dependiendo del grado Algunos
de sus iones simples como
Mg2+, Ca2+, apropiada
la actividad Mn2+ y Na+ [17]; otros
(nicotínica son más
y libras complejos
[18-20]. como la actividad,
Una característica comúnlade
estimulación excesiva o es
todos los activadores la inhibición de
la activación
demuscarínicos),
la acetilcolinesterasa
que, como se mencionó anteriormente, en consecuencia conduce a cambios que conducen
a organismo
una descomposición excesiva
[4–6]. síntomas de la acetilcolina,
de deficiencia cuyas consecuencias
de acetilcolina, estreñimiento,afectan muchasproblemas
gastroparesia, funciones del
de
memoria, dificultad
con recuerdo de palabras al hablar, dificultades de aprendizaje, boca seca, ojos secos, ortostática
hipotensión, tono muscular bajo, estado de ánimo deprimido, frecuencia cardíaca rápida, inflamación crónica,
inestabilidad emocional y muchos otros síntomas descritos previamente [21-30].
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 3 de 19
Por el contrario, una característica de los inhibidores de AChE es la reducción de la actividad de AChE, que en
a su vez provoca una degradación reducida de ACh y por lo tanto un aumento en su concentración en
la hendidura sináptica y la estimulación excesiva de los receptores colinérgicos. Esto a su vez conduce a
muchas de las anomalías de muchas funciones corporales diferentes antes mencionadas y
en última instancia, la muerte por insuficiencia respiratoria por parálisis de los músculos respiratorios [31].
Los compuestos del tipo de los inhibidores de la AChE son los fármacos antes mencionados pero también un
número de otras sustancias, como los análogos de 9-amino-1,2,3,4-tetrahidroacridina [32].
Recientemente, también han aparecido artículos que describen la síntesis de nuevas AChE
inhibidores, como las amidas del ácido hidroxibenzoico [33] y los derivados de la quinoxalina [34].
Otro trabajo describe la síntesis de derivados de amonio y betaína, la potencia
del cual es comparable a la potencia de la piridostigmina, pero la toxicidad del amonio
y los derivados de betaína es menor [35].
Como podemos ver, el nivel adecuado de ACh es responsable del curso adecuado de muchos
procesos fisiológicos.
También es bien sabido que sobre el mantenimiento de un nivel adecuado de ACh en varios
estructuras del cuerpo tiene la influencia de muchos factores. uno de ellos es el adecuado
actividad de la AChE. El segundo incluye todo tipo de sustancias químicas.
Además de la actividad enzimática, se postula que la AChE también se presenta como no enzimática.
actividad, que tiene una influencia en muchas vías fisiológicas, incluida la adhesión celular,
crecimiento de neuritas y formación de fibrillas de amiloide. El sitio aniónico periférico (PAS), ubicado
alrededor de la región externa de la garganta estrecha de AChE, sirve como el sitio de unión secundario de
ACh y ligandos cuaternarios sin actividad enzimática y son responsables de algunos de
actividades no catalíticas. Por ejemplo, una de las hipótesis sobre el amiloide ÿ (Aÿ) en
La enfermedad de Alzheimer (EA) sugiere que la deposición de Aÿ es un marcador patogénico importante
del inicio y progresión de la EA. Estudio de Inestrosa et al. [36] reveló AChE como
una chaperona molecular, que acelera el ensamblaje de Aÿ en oligómeros y fibrillas en
amiloidosis a través del sitio aniónico periférico (PAS). Por lo tanto, los inhibidores de AChE que bloquean
los sitios pueden actuar como agentes modificadores de la enfermedad que retrasan la formación de placas de amiloide. Este
Es por esto que fue crucial predecir el posible sitio de interacción de los compuestos estudiados y
estimar si interactuarían preferentemente con el sitio activo de una enzima o se unirían a
PAS de AChE.
La acetilcolinesterasa juega un papel extremadamente importante en el mantenimiento de un nivel adecuado
de acetilcolina en muchas áreas del cuerpo y tiene influencia en muchas
vías bioquímicas. Por ello, en este trabajo decidimos investigar la inhibición
efectos de los derivados aminoalcanol de 1,7-diEtil-8,9-difenil-4azatriciclo [5.2.1.02,6]
dec 8-eno-3,5,10-triona (I) y (II) y derivados de 1,7 -dimetil-8,9-difenil-4-azatriciclo
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA 4 de 20
REVISIÓN POR PARES [5.2.1.02.6] dec-8-ene-3,5,10-trione (III) y (IV) sobre acetilcolinesterasa. Estos compuestos
(Figura 2) fueron evaluados in vitro por su eficacia inhibidora de la acetilcolinesterasa.
Figura 2. 2.
Figura Estructuras dede
Estructuras loslos
derivados dede
derivados aminoalcanoles (I),(I),
aminoalcanoles (II),(II),
(III)(III)
y (IV).
y (IV).
La síntesis, la caracterización química y la actividad anticancerígena de los compuestos (I), (II), (III) y
(IV) mencionados anteriormente se describieron previamente en una solicitud de patente [37]. Toxicidad de los
compuestos estudiados para células de leucemia mielógena crónica, K562
La síntesis, caracterización química y actividad anticancerígena de los compuestos (I), (II), (III)
y (IV) antes mencionados se describieron previamente en una solicitud de patente [37].
La toxicidad de los compuestos estudiados para las células de leucemia mielógena crónica, K562 y células HeLa estuvo
en el rango de 400 a 100 µM [37].
Estos compuestos también fueron investigados en nuestros trabajos previos sobre la posibilidad
de su determinación [38–41] y su efecto inhibitorio sobre la fosfatasa alcalina [42] y la fosfatasa ácida
prostática [43]. Los resultados interesantes descritos en nuestros trabajos previos [42,43] nos
impulsaron a realizar una investigación sobre la influencia de los derivados aminoalcanoles
mencionados con potencial actividad anticancerígena en la actividad enzimática de la
acetilcolinesterasa, una enzima extremadamente importante en nuestro cuerpo.
En este estudio, utilizamos, desarrollado por nosotros, el método de electroforesis capilar
(CE) para determinar los parámetros cinéticos y de inhibición de la acetilcolinesterasa en presencia
de los inhibidores (I), (II), (III) y (IV).
2. Resultados
En este estudio se analizó la inhibición de la actividad enzimática para determinar la inhibición de AChE por
derivados de aminoalcanol.
2.1. El método de
electroforesis capilar (CE) experimental nos permitió realizar un seguimiento selectivo de acetilcolinesterasa humana
(AChE), yoduro de acetiltiocolina (ACth), ácido 5,5-ditiobis (2- nitrobenzoico) (DTNB), 4,4-ditio-bis- ácido nitrobenzoico
(DBAN), ácido 5-tio-2-nitrobenzoico (NTB), y compuestos (I), (II), (III) y (IV) (Figura 3).
En este trabajo utilizamos el método combinado de Ellman con el método de electroforesis

capilar desarrollado por nosotros para la determinación de 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN)
(producto principal de la reacción enzimática) en presencia de acetiltiocolina (ACth), ácido 5-tio-2-
nitrobenzoico (NTB), ácido 5,50 -ditio-bis-2-nitrobenzoico (DTNB), acetilcolinesterasa (AChE) e
inhibidores (I), (II), (III) y (IV) de acetilcolinesterasa. Para el desarrollo de este método, optimizamos el
pH del tampón, separando la concentración, la longitud de onda, la temperatura y el voltaje del
electrolito de fondo (BGE). Se investigó la separación de todos los compuestos a tres valores de pH
(7.0, 7.5 y 8.0), tres temperaturas (20, 25 y 30 ÿC), cuatro voltajes (5, 10, 15 y 20 kV), tres
concentraciones de separando BGE (20, 30 y 50 mM) y cuatro longitudes de onda (280, 300, 412 y
420 nm). Todos estos sistemas de separación se probaron para lograr los mejores parámetros de
separación, resolución y tiempo de análisis para todos los componentes de la mezcla de reacción. La
mejor separación de 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN), acetiltiocolina (ACth), ácido 5-tio-2-
nitrobenzoico (NTB), ácido 5,50 -ditio-bis-2-nitrobenzoico (DTNB) , se obtuvo acetilcolinesterasa
(AChE) y los compuestos (I), (II), (III), (IV) con tampón fosfato 100 mM (pH 7,5). Las medidas se
tomaron a 412 nm con un capilar de sílice fundida (longitud efectiva: 20 cm, diámetro: 50 µm). La
temperatura capilar fue de 20 ÿC, lo que permitió alcanzar la mejor resolución. La separación se llevó
a cabo a 15 kV. Cada muestra se añadió al capilar bajo inyección hidrodinámica. Los tiempos promedio
de detección para DBAN, ACth, NTB, DTNB, AChE y los compuestos (I), (II), (III), (IV) fueron 0,85,
1,79, 2,75, 4,10, 6,00 y 13,25 min, respectivamente (Figura 2) . Las curvas construidas fueron lineales
en el rango de concentración de 0,36 a 46,00 mM utilizado para ACth. La actividad enzimática básica
se investigó utilizando nueve concentraciones de sustrato de reacción (ACth) (0,36, 0,72, 1,44, 2,88,
5,75, 11,50, 23,00, 34,50 y 46,00 mM) en presencia de la enzima (AChE). El efecto de inhibición de
los compuestos (I), (II), (III) y (IV) se determinó mediante un estudio de cinética enzimática en un
sistema que contenía concentraciones crecientes del sustrato a una concentración constante (0,08
mM) del inhibidor (I ), (II), (III) y (IV).
Se encontró que el coeficiente de correlación para ACth en ausencia de inhibidores era 0,998 y la pendiente de la curva
era 1,546. A la concentración de 0,08 mM para los compuestos (I), (II), (III) y (IV), los coeficientes de correlación se
determinaron en 0,997–0,998 y las pendientes de las curvas en 2,736–4,019 para los compuestos (I), (II ), (III) y (IV), según
el tipo de inhibición y la fuerza inhibitoria (Tabla 1, Figura 4).
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA REVISIÓN POR 5 de 20

PARES Int. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 5 de 19
Figura 3. Electroforegramas representativos de los compuestos investigados en presencia de (I), (II),

Figura 3. Electroforegramas
(II), (III) y (IV) inhibidores derepresentativos de los compuestos
AChE a la concentración investigados
de 0,08 mM y (1) 1,44en
mMpresencia de (I),
de acetiltiocolina
(III) y (IV) inhibidores
ditio-bis-ácido de AChE(DBAN),
nitrobenzoico a la concentración de 0,08
(3) 5-tio -Ácido mM y (1) 1,44
2-nitrobenzoico mM de
(NTB), (4)acetiltiocolina
5,50 - (ACth), (2) 4,4-
(ACth), (2) 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN), (3) ácido 5-tio-2-nitrobenzoico (NTB), (4) 5,5ÿ-
ácido ditio-bis-2-nitrobenzoico (DTNB), (5) acetilcolinesterasa (AChE). (A): (2) 0,41 mM de ácido 4,4-
ditio ditio-bis-2-nitrobenzoico (DTNB), (5) acetilcolinesterasa (AChE). (A): (2) 0,41 mM de 4,4-
bis-ácido nitrobenzoico (DBAN) en presencia del inhibidor (III). (B): (2) 0,48 mM de 4,4-ditio-bis-ácido
ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN) en presencia del inhibidor (III). (B): (2) 0,48 mM de 4,4-di
nitrobenzoico
tio-bis-ácido (DBAN) en(DBAN)
nitrobenzoico presencia
en de inhibidor
presencia de(IV). (C): (2)
inhibidor 0,52
(IV). mM
(C): (2)de 4,4-ditio-bis-ácido
0,52 nitroben
mM de 4,4- ditiozoico
(DBAN) en presencia del inhibidor (I). (D): (2) 0,58 mM de 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico
bis-ácido nitrobenzoico (DBAN) en presencia del inhibidor (I). (D): (2) 0,58 mM de 4,4-ditio-bis
(DBAN)
ácido en presencia
nitrobenzoico del inhibidor
(DBAN) (II). (E):
en presencia del (2) 0,66 mM
inhibidor (II).de 4,4-ditio-bis-ácido
(E): nitrobenzoico (DBAN)
(2) 0,66 mM de 4,4-ditio-bis-ácido
sin inhibidores.
nitrobenzoico (DBAN) sin inhibidores.
En este trabajo utilizamos el método combinado de Ellman con el método de electroforesis

capilar desarrollado por nosotros para la determinación de 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico
(DBAN) (producto principal de la reacción enzimática) en presencia de acetiltiocolina (ACth) , 5-
ácido tio-2-nitrobenzoico (NTB), ácido 5,5ÿ-ditio-bis-2-nitrobenzoico (DTNB), acetilcolina
esterasa (AChE) e inhibidores (I), (II), (III) y (IV) de acetilcolinesterasa. Para el desarrollo de
este método, optimizamos el pH del tampón, separando la concentración del electrolito de
fondo (BGE), la longitud de onda, la temperatura y el voltaje. Se investigó la separación de
todos los compuestos a tres valores de pH (7,0, 7,5 y 8,0), tres temperaturas (20, 25 y 30 °C),
cuatro voltajes (5, 10, 15 y 20 kV), tres concentraciones de separar BGE (20, 30 y 50 mM) y
cuatro longitudes de onda (280, 300, 412 y 420 nm). Todas estas separaciones
Tabla 1. Ecuación de regresión y cuantificación de acetiltiocolina para 6 repeticiones de cada muestra

(n = 6) en el rango de concentración 0,36–46,00 mM, en presencia de los inhibidores (I), (II), (III) y (IV)
a una concentración de 0,08 mM.
Concentración Rango de linealidad de

Inhibidores (I), Sustrato DSR LOD LOQ Regresión
R2 Desviación Estándar
(II), (III) y (acetiltiocolina) (%) (mM) (mM) Ecuación
(IV) (mM) (mM)
Pendiente Interceptar
0,36–46,00 0,998 2,53 0,10 0,36 y = 1,546x + 1,544 y =
±0,039 ±0.025
0 (I) 0,36–46,00 0,997 3,21 0,12 0,36 2,785x + 1,543 y =
±0,065 ±0.041
0,08 (II) 0,36–46,00 0,998 2,98 0,15 0,36 2,736x + 1,542 y =
±0,061 ±0.036
0,08 (III) 0,36–46,00 0,998 3,35 0,13 0,36 2,989x + 1,580 y =
±0,051 ±0.040
0,08 (IV) 0,08 0,36–46,00 0,998 3,42 0,15 0,36 2,808x + 1,559 LOD,
±0,055 ±0.043
límite de detección; LOQ, límite de cuantificación; RSD, desviación estándar relativa.
El poder estadístico para cada conjunto de datos y cada valor del parámetro cinético fue
logrado midiendo seis veces cada valor obtenido para las nueve concentraciones de
sustratos y productos de reacción en el sistema sin inhibidores y para cuatro sistemas en el
presencia de inhibidor 0,08 mM (I), (II), (III) y (IV). Después de superar el valor de 0,08 mM,
no hubo más aumento en la inhibición; por lo tanto, se consideró el valor de 0.08 mM
el valor de corte para ambos inhibidores.
Los efectos inhibidores de los compuestos (I), (II), (III) y (IV) sobre la AChE se muestran en la
7 de 20
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA REVISIÓN POR PARES
forma de electroforegramas en la Figura 3, con los datos detallados presentados en la Tabla S1 en el
Sección de Materiales Suplementarios.
Figura 4. Gráficos de Lineweaver-Burk para sistemas con inhibidores (I) y (II) (A) y (III) y (IV) (B) en
concentraciones de 0,01,
Figura 4. Gráficos de 0,02, 0,04, 0,06 y 0,08
Lineweaver-Burk mM.sistemas con inhibidores (I) y (II) (A) y (III) y (IV) (B) en
para
concentraciones de 0,01, 0,02, 0,04, 0,06 y 0,08 mM.
2.2. Análisis
La primera etapa del trabajo consistió en realizar estudios cinéticos para obtener información
2.2. Análisis
sobre el mecanismo de inhibición de AChE con el uso de (I), (II) y (III), (IV) aminoalcanol
La primera etapa del trabajo consistió en realizar estudios cinéticos para obtener información
de las derivadas. Sobre la base de los datos de inhibición obtenidos en estado estacionario, Lineweaver–
mación en el mecanismo de inhibición de AChE con el uso de (I), (II) y (III), (IV) se prepararon
gráficos de Burk aminoal (Figura 4) que muestran la relación recíproca de la reacción
derivados de canol. Sobre la base de los datos de inhibición obtenidos en el estado estacionario, la
concentración de sustrato de Lin (acetiltiocolina) al recíproco de la velocidad de reacción.
Se prepararon gráficas de eweaver-Burk (Figura 4) mostrando la relación recíproca de las Gráficas de
líneas rectas con diferentes ángulos de pendiente (Km/Vmax) obtenidas para los cinco
concentración de sustrato de reacción (acetiltiocolina) al recíproco de la velocidad de reacción.
concentraciones de inhibidor (I), (II) y (III), (IV) intersecadas en un punto sobre el eje y corre Gráficas
de líneas rectas con diferentes ángulos de pendiente (Km/Vmax) obtenidas para los cinco
correspondientes al valor recíproco de la velocidad de reacción (Vmax). Tal sistema es sugerido por
concentraciones de inhibidor (I), (II) y (III), (IV) intersectadas en un punto sobre el eje y correspondiente
al valor recíproco de la velocidad de reacción (Vmax). Tal sistema es sugerido por una inhibición de
AChE competitiva reversible. Los valores de Km y Vmax calculados para sistemas con diferentes
concentraciones de compuestos (I), (II) y (III), (IV) también indican un tipo competitivo de inhibición
(Tabla 2).
una inhibición competitiva reversible de la AChE. Los valores de Km y Vmax calculados para los sistemas
con diferentes concentraciones de los compuestos (I), (II) y (III), (IV) también indican una competencia
tipo de inhibición (Tabla 2).
Tabla 2. Los datos analíticos que describen los efectos de la inhibición de la acetilcolinesterasa por aminoalcanol
derivadas (I), (II), (III) y (IV) y ecuación de regresión para acetiltiocolina para 6 repeticiones para
cada muestra (n = 6) en el rango de concentración 0.36–46.00 mM, en presencia de inhibidores (I), (II),
(III) y (IV), a una concentración de 0,01, 0,02, 0,04, 0,06 y 0,08 mM.
compuesto (yo)
Concentración Línea recta R2 Ángulo de inclinación (ÿ )
(mM) Ecuación
(yo) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

(yo) 0,01 = 1,6989x + 1,5868 y = 0,9984 ± 0,0008 59,52 ± 0,04
(yo) 0,02 1,8424x + 1,6078 y = 0,9981 ± 0,0015 69,90 ± 0,06
(yo) 0,04 2,2472x + 1,5579 y = 0,9992 ± 0,0007 65,42 ± 0,05
(yo) 0,06 2,6975x + 1,5421 y = 0,9986 ± 0,0012 69,66 ± 0,05
(yo) 0,08 2,7965x + 1,5284 0,9988 ± 0,0010 70,32 ± 0,03
Concentración Vmax
Km (mM/mL) Ki (mM) CI50 (mM)
(mM) (mM/min)
1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

(yo) 0,00
(yo) 0,01 1,07 ± 0,01 0,63 ± 0,02 14,31 ± 0,02
(yo) 0,02 1,15 ± 0,03 0,62 ± 0,03 11,90 ± 0,04
(yo) 0,04 1,44 ± 0,02 0,64 ± 0,01 2,87 ± 0,04 0,037 ± 0,001
(yo) 0,06 1,75 ± 0,02 0,65 ± 0,01 1,64 ± 0,03
(yo) 0,08 1,80 ± 0,01 0,65 ± 0,01 1,35 ± 0,03
Compuesto (II)
(mM) Ecuación
(II) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

(II) 0,01 = 1,6950x + 1,6198 y = 0,9986 ± 0,0012 59,46 ± 0,03
(II) 0,02 1,7820x + 1,5882 y = 0,9976 ± 0,0018 59,60 ± 0,08
(II) 0,04 2,1631x + 1,5495 y = 0,9981 ± 0,0016 65,19 ± 0,06
(II) 0,06 2,6080x + 1,5316 y = 0,9991 ± 0,0008 69,02 ± 0,05
(II) 0,08 2,7504x + 1,5348 0,9988 ± 0,0009 70,02 ± 0,04
Concentración Vmax
(mM) (mM/min)
1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

(II) 0,00
(II) 0,01 1,05 ± 0,02 0,62 ± 0,03 22,24 ± 0,03
(II) 0,02 1,09 ± 0,03 0,63 ± 0,02 14,01 ± 0,03
(II) 0,04 1,40 ± 0,02 0,65 ± 0,01 2,98 ± 0,05 0,039 ± 0,001
(II) 0,06 1,70 ± 0,02 0,65 ± 0,01 1,83 ± 0,03
(II) 0,08 1,79 ± 0,02 0,65 ± 0,01 1,42 ± 0,02
Compuesto (III)
(mM) Ecuación
(III) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

(III) 0,01 = 1,7325x + 1,5761 y = 0,9988 ± 0,0007 60,01 ± 0,03
(III) 0,02 1,9031x + 1,5936 y = 0,9978 ± 0,0010 62,28 ± 0,03
(III) 0,04 2,3998x + 1,5596 y = 0,9986 ± 0,0006 67,38 ± 0,04
(III) 0,06 2,8117x + 1,5726 y = 0,9995 ± 0,0004 70,42 ± 0,02
(III) 0,08 2,9892x + 1,5806 0,9989 ± 0,0009 71,50 ± 0,03
Tabla 2. Cont.
Concentración Vmax
(mM) (mM/min)
1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

(III) 0,00
(III) 0,01 1,09 ± 0,01 0,63 ± 0,01 10,20 ± 0,01
(III) 0,02 1,19 ± 0,03 0,63 ± 0,02 5,19 ± 0,02
(III) 0,04 1,50 ± 0,01 0,64 ± 0,03 2,01 ± 0,04 0,033 ± 0,001
(III) 0,06 1,80 ± 0,01 0,64 ± 0,03 1,25 ± 0,03
(III) 0,08 1,90 ± 0,01 0,63 ± 0,02 1,11 ± 0,02
Compuesto (IV)
Concentración Línea recta 2
R Ángulo de inclinación (ÿ )
(mM) Ecuación
(IV) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

(IV) 0,01 = 1,7032x + 1,5791 y = 0,9987 ± 0,0010 59,58 ± 0,04
(IV) 0,02 1,7387x + 1,5842 y = 0,9997 ± 0,0002 60,09 ± 0,04
(IV) 0,04 2,2025x + 1,5617 y = 0,9989 ± 0,0009 65,58 ± 0,03
(IV) 0,06 2,7115x + 1,5761 y = 0,9988 ± 0,0009 69,76 ± 0,03
(IV) 0,08 2,8082x + 1,5592 0,9989 ± 0,0009 70,40 ± 0,03
Concentración Vmax
(mM) (mM/min)
1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

(IV) 0,00
(IV) 0,01 1,08 ± 0,03 0,63 ± 0,02 13,10 ± 0,01
(IV) 0,02 1,10 ± 0,03 0,63 ± 0,02 10,33 ± 0,02
(IV) 0,04 1,41 ± 0,03 0,64 ± 0,03 2,45 ± 0,03 0,035 ± 0,001
(IV) 0,06 1,72 ± 0,01 0,63 ± 0,01 1,39 ± 0,03
(IV) 0,08 1,83 ± 0,03 0,64 ± 0,03 1,22 ± 0,02
El siguiente objetivo del trabajo fue estudiar la fuerza inhibitoria y la unión

fuerza de los inhibidores individuales (I), (II) y (III), (IV) al centro activo de AChE. Para
para ello, en base a los valores obtenidos de los parámetros cinéticos, los valores de las constantes de
Michaelis Menten (Km), velocidades máximas (Vmax), constantes de inhibición (Ki) y medias máximas
concentración inhibitoria (IC50) se calcularon para cinco concentraciones diferentes de inhibidores
(I), (II) y (III), (IV) (Tabla 2).
Los resultados así obtenidos indicaron un tipo competitivo de inhibición, como lo demuestran los
valores variables (crecientes) de Km (de 1,07 a 1,83 mM/mL) para el compuesto
(I), (de 1,05 a 1,79 mM/mL) para el compuesto (II), (de 1,09 a 1,90 mM/mL) para el compuesto
(III) y (de 1,08 a 1,80 mM/mL) para el compuesto (IV) y común, similar
Valores de Vmax (que oscilan en el rango de 0,62 ± 0,03 a 0,65 ± 0,02 mM/min) para cuatro
inhibidores (Tabla 2). Inicialmente, en base a las diferencias en los valores de Km entre individuos
compuestos, se puede demostrar que el inhibidor competitivo más fuerte de la AChE es el compuesto
(III), como lo demuestran los valores más altos de Km para el derivado de aminoalcanol (III) (de
1,09 a 1,90 mM/mL). Otro inhibidor más débil fue el derivado (IV) (Km de 1,08 a
1,80 mM/mL), luego derivado (I) (Km de 1,07 a 1,83 mM/mL). La competencia más débil
el inhibidor de AChE fue el derivado (II) (Km de 1,05 a 1,79 mM/mL).
El siguiente valor que se tuvo en cuenta para determinar la fuerza de inhibición fueron los ángulos de
las líneas rectas de Lineweaver-Burk, cuyos valores aumentaron con el aumento de la
concentración de inhibidores (I), (II) y (III), (IV) hasta el valor límite de concentración de 0,08 mM
por encima del cual no se observó un aumento adicional en la inhibición. Los ángulos de la pendiente fueron los
mayor para la derivada (III) (de 60,01ÿ a 71,50ÿ ), menor para la derivada (IV) (de 59,58ÿ
a 70.40ÿ ), luego derivada (I) (de 59.52ÿ a 70.32ÿ ) y la menor por derivada (II)
(de 59,46ÿ a 70,02ÿ ) (Tabla 2). Comparaciones de los ángulos de Lineweaver-Burk para cinco inhibidores
concentraciones de los compuestos (I), (II) y (III), (IV), también sugirió que el derivado (III) era
el inhibidor competitivo más fuerte de AChE y el derivado (II) fue el más débil (Tabla 2,
Figura 4).
Luego, se calcularon las constantes de inhibición (Ki) para los inhibidores (I), (II) y (III),
(IV) con concentraciones crecientes secuencialmente (Tabla 2).
Los valores de Ki obtenidos a cinco concentraciones (0,01 mM, 0,02 mM, 0,04 mM, 0,06 mM y
0,08 mM) de inhibidor (III) en comparación con los valores de Ki para el inhibidor (IV), para el inhibidor (I) y
para el inhibidor (II) (Tabla 2) indique la unión más fuerte del inhibidor (III) a la AChE activa
sitio en comparación con los inhibidores (IV), (I) y (II). Por lo tanto, se puede concluir que el compuesto
(III) es el inhibidor de AChE más fuerte, mientras que los compuestos (IV) y (I) fueron inhibidores más débiles
y el inhibidor de AChE más débil fue el compuesto (II).
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA 10 de 20
REVISIÓN POR PARES Para obtener información sobre la cantidad de compuestos individuales (I), (II),
(III) y (IV) necesarios para inhibir la AChE en un 50% y así obtener valores adicionales que
caractericen la potencia de los compuestos (I), (II), (III) y (IV) para inhibir la AChE, la mitad del máximo
se calculó la concentración inhibitoria (IC50) (Tabla 2, Figura 5).
Figura 5. Determinación gráfica de IC50 para los inhibidores de acetilcolinesterasa (I), (II), (III) y (IV) .
Figura 5. Determinación gráfica de IC50 para los inhibidores de acetilcolinesterasa (I), (II), (III) y (IV).
Basado en una comparación de los valores IC50 para el compuesto (III) (0,033 ± 0,001 mM),
compuesto
En base a (IV) (0,035 ± 0,001
una comparación mM),
de los compuesto
valores IC50 para (I) (0,037 ± 0,001
el compuesto mM)± y0,001
(III) (0,033 compuesto
mM), (II)
com
libra (0,039
(IV) ± 0,001
(0,035 ± 0,001mM),
mM),se compuesto
puede observar que el± compuesto
(I) (0,037 0,001 mM)(III) provoca el(II)
y compuesto efecto inhibidor
(0,039 a una de la AChE
concentración menor que los compuestos (IV), (I) y (II). Por lo tanto, puede
± 0,001 mM) se puede ver que el compuesto (III) provoca el efecto inhibidor de AChE en este decirse que también
casoen
compuesto (III) resultó ser el inhibidor de AChE más fuerte, mientras que los inhibidores
menor concentración que los compuestos (IV), (I) y (II). Así, se puede decir que también en este
El (IV) y (I) mostraron
compuesto una
case (III) inhibición
resultó ser elmás débil.de
inhibidor El AChE
inhibidormás defuerte,
AChE mientras
más débilque
fuelos
el compuesto
inhibidores (II).
(IV)
Resumiendo, se puede decir que todos los resultados obtenidos indican un tipo competitivo de
y (I) mostró una inhibición más débil. El inhibidor de AChE más débil fue el compuesto (II).
Inhibición de AChE por derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV). Además, la investigación
Resumiendo, se puede decir que todos los resultados obtenidos indican que un tipo competitivo
llevado a cabo indicó que la potencia inhibidora y la fuerza de afinidad de los cuatro derivados
de inhibición de AChE por derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV). Además, dependen del
tipo de cuatro sustituyentes (isopropilamina, dimetilamina, etilo y metilo)
la búsqueda realizada indicó que la potencia inhibidora y la fuerza de afinidad de los cuatro
presentes en la molécula química principal de los compuestos (I), (II), (III) y (IV) (Tabla 3).
Los derivados dependen del tipo de cuatro sustituyentes (isopropilamina, dimetilamina, etilo y metilo)
presentes en la molécula química principal de los compuestos (I), (II), (III) y (IV) (Cuadro 3).
Int. J. Mol. En t.2022,

ciencia
ciencia J. Mol.
2022,
23,ciencia
23, x PARA
x PARA 2022, 23, x PARA
REVISIÓN
REVISIÓN POR
POR REVISIÓN
PARES
PARES POR
Int.
Int. J.J. PARES
Mol.
Mol. 11 de 20 20 11de
11 10
de de19
20 20 de
11
REVISIÓNPOR ciencia
POR PARES 2022, 23,
Int. 270
J.J.Mol.
Mol. Int. J. Mol.
ciencia ciencia
2022, x2022,
23,23,
xPARA
PARA23, x REVISIÓN
PARA
REVISIÓN 11 de 11
11 de 20
POR
PARES PARESInt. Int. J. Mol. ciencia
ciencia 2022,
2022, 23, x PARA
REVISIÓN 20 20
20 11 de 20 11 11 de de
POR PARESInt. POR
Int.J.J.PARES
Int. J. Mol. ciencia
ciencia 2022,Mol.
2022, 23,
Int.
Mol.ciencia
ciencia J. 2022,
Mol.
2022,
23, xx PARA
ciencia
23,
PARA REVISIÓN
2022,
23,xxPARA
PARA
REVISIÓN POR
23, x PARA
REVISIÓN
REVISIÓN
POR PARES
REVISIÓN
POR
POR PARES
PARES
PARES Int. J. Mol. de 20 de de
20 20
11 11
Tabla3.3. Tabla del

Efecto 3.
del Efecto
tipo de del tipo de sustituyentes
sustituyentes que aparecenque aparecen
en enprincipal
la estructura principal del de derivado deTabla
aminoalcanol
Tabla 3.Efecto
Efecto
Efecto
Tabla
Tabla
Tabla 3.
delEfecto
del
3.
Efecto
3.
tipode
tipo
tipo
Efecto del
de
de del sustituyentes
sustituyentes
sustituyentes
tipo
del tipo
de de
tipo de queaparecen
presentes
que
sustituyentes
sustituyentes
sustituyentes
aparecen
que en
que la
enen lala
aparecen
aparecen
que aparecen
estructura
laestructura
estructura
estructura en
en en
principal
principal
principal
la estructura
estructura
la estructura
la
del
del
deprincipal
los
del derivado
aminoalcanol
derivados
derivado
principal
principal deldedel dede aminoalcanol
deriva
aminoalcanoles
aminoalcanol
derivado
aminoalcanol
los derivados dederivado
Tabla
3.
aminoalcanol
de
aminoalcanol
aminoalcanol
Tabla 3. Tabla
Efecto
aminoalcanol
(III) y Tabla
(IV) 3.
aminoalcanol
(I),
del (II), 3.
Efecto
tipo
sobre Efecto
de
Tabla
la del
(I),ypotencia
(III) (II),
(IV) del
tipo
(III)
sobre
sustituyentes
3. Efecto tipo
de deldepotencia
(IV)
la )sustituyentes
y sustituyentes
que sobre
tipo
inhibitoria la
aparecen
de que que
aparecen
potencia
inhibidora
en
sustituyentes
(IC50) y la la
fuerza aparecen
(IC50) en
inhibitoria
estructura
que
de y la
laen
aparecen
afinidad la (Ki)
fuerza estructura
estructura
(IC50)
principalenyde la
dela principal
fuerza
afinidad
de los principal
estructura
AChE. de deafinidad
(Ki)
derivados los
de deAChE.
los(Ki)
de
principal derivados
derivados
de de
tivos
losde
AChE.
(I),de(II),
derivados de(II),
Tabla
tivos
(I), aminoalcanol
3.(I),
aminoalcanol Efecto
(II),
(III) y(I), del
(III)
y(IV) (I),
ytipo
sobre
(II), (IV)(II),
(III)dela (III) ysobre
potencia
la(IV) la(IV)
sustituyentes
ysobre sobre
potencia que
inhibitoria
la la aparecen
potencia
inhibitoria
potencia (IC50) inhibitoria
en
y(IC50)
lay
inhibidora la
fuerza lade
(IC50) (IC50)
yestructura
fuerza
afinidad dey la
principal
y laafinidad
fuerza fuerza
afinidad
(Ki) de de
de(II), de
los
(Ki)
AChE.
afinidad afinidad
derivados
de AChE.
(Ki) de (Ki)dede(II),
AChE. AChE.
y (IV) sobre
inhibitoria
(I),
(IC50)
fuerza
(II),
la
potenciade y
(III)
potencia
la
(IV)
inhibitoria
fuerza
afinidad
sobre
inhibitoria
(Ki)de(IC50)
deafinidad
potencia
(IC50)
AChE.y la(Ki) y la
fuerza
tivos de
inhibitoria
fuerza
de(II),
AChE.
(I), de
afinidad(IC50)
afinidad
tivos
(III) y (Ki)
(I),
(IV)
la
(Ki)
de
(II),
sobre
fuerza
de
AChE.
(III)lay
de
AChE.
tivos
(IV)
potencia tivos (Ki)
(I),
(I),inhibitoria
sobre (II),
la (III)de
potencia
AChE.
(III)
y(IC50)
(IV) ysobre
(IV)tivos
sobre
inhibitoria
y la
(I), ladetivos
la potencia
(IC50)
fuerza y
(III)
la
afinidad (Ki) de AChE. Ki IC50
energíaenergía
energía KiKi
Ki IC50IC50Ki IC50
Acoplamiento Acoplamiento
de
Acoplamiento de de
Compuesto
Compuesto R1 R2 R3 Ki IC50 Ki IC50
Ki IC50 IC50 de
Energía acoplamiento
Energía de acoplamiento
Compuesto
Compuesto
Compuesto R1 R1
R1 R1 R2
R2 R2 R3
R3 R3 R2 R3 energía [mM]
Ki Ki
Ki IC50
[mM]
IC50 Acoplamiento
IC50
Energía
[kcal/mol]
de acoplamiento
Unión cósmica
Acoplamiento
Energía
Acoplamiento Energía
de
Compuesto
Compuesto
Compuesto R1 R1
R1 R1 R2
R2 R2 R3
R3 R3 R2 R3 [mM] [mM] Ki[mM]IC50 [mM]Energía [kcal/mol]
de [kcal/mol]
acoplamiento
Energía dedeacoplamiento
Compuesto
Compuesto
Compuesto
Compuesto R1 R1
R1R2
R2R3R2 R3 R2 R3
R3 Ki [mM] [mM]
[mM]
[kcal/mol]
[mM]
[mM]
[mM] [mM]
CI50
[mM] [mM] Energía
[kcal/mol]
acoplamiento
[kcal/mol] [kcal/mol] [kcal/mol]
Energía
[mM] [mM]
Compuesto R1 [mM] [mM] [kcal/mol]
[mM] [mM] [kcal/mol]
[kcal/mol] [kcal/mol][mM]
[kcal/mol] [mM][mM] [mM]
Derivada Derivada
(yo) (I) (yo)
Derivada 1.35 0.037
0.037 -8.1 0.037
0.0371.35
1.35 -8.1
1.35
0.037 1.35
0.037 1.35
1.35
ÿ8,1
ÿ8,1
Derivada (I)
Derivada (yo) 0.037
1.35 1.35
0.037 0.037
1.35 -8.1
0.037 ÿ8,1
Derivada
Derivada (yo) (I)
Derivada (I) 0.037 1.351.35 0.037
0.037 -8.1
0.037 0.037 ÿ8,1
1.35
1.35 ÿ8,1
ÿ8,1
ÿ8,1
Derivada Derivada
(yo)
Derivada (I)
(yo)
Derivada (I) ÿ8,1ÿ8,1
Derivada (yo)
Derivada (II) 0.039 1.42

1.42
1.42 0.039
0.039
0.039 -8.51.42
1.42 0.039 ÿ8,5
Derivada
Derivada (II)
Derivada
(II) (II)(II)
Derivada -8.5 1.42 0.039
1.42
1.42 1.42
0.039
0.039 0.039
-8.5
1.42 1.42 ÿ8,5
0.039
0.039 ÿ8,5
Derivada
Derivada Derivada
(II) (II)(II)
Derivada (II) 0.039 -8.5
0.039 1.42
1.420.039
0.039 -8.5
-8.51.42 ÿ8,5
1.42 ÿ8,5
ÿ8,5
ÿ8,5ÿ8,5
Derivada Derivada
(II)
Derivada (II)(II) ÿ8,5
Derivada (II)
Derivada Derivada
(III) (III)(III)
Derivada 0.033 1.11
1.11
1.11 0.033
0.033
0.033 -8.91.11
1.11 0.033 ÿ8,9
ÿ8,9
Derivada (III)
Derivada
Derivada (III) -8.9
1.11 1.11
0.0330.033
1.11 1.11
1.11 0.033
0.03-8.1 1.11
0.033
0.0330.033
1.11
0.033 ÿ8,9
-8.9 1.11 ÿ8,9
Derivada
Derivada (III) (III)
Derivada
Derivada
Derivada
(III)
Derivada
(III)
(III)
(III)
ÿ8,9
ÿ8,9 ÿ8,9
ÿ8,9
Derivada (III)
(III) ÿ8,9
Derivada Derivada
(IV) (IV)
Derivada (IV) 0.035
-9.2 1.22-9.21.22
1.221.22
0.035 0.035
0.0350.035
1.22 1.22
1.221.22
0.035
0.035 0.035
0.035
1.22
-9.2 ÿ9,2
1.22 ÿ9,2ÿ9,2
Derivada Derivada
(IV)
Derivada (IV)
(IV) 0.035 -9.2 0.035
0.035 0.035
1.22
-9.20.035 1.22
0.035
1.22 0.035
1.22
0.035 ÿ9,2
ÿ9,2
ÿ9,2
Derivada
Derivada (IV) (IV)
Derivada (IV) 1.22 0.035 ÿ9,2
Derivada Derivada
(IV)
Derivada (IV)
(IV) ÿ9,2
ÿ9,2
Derivada (IV)
en cuenta Teniendo
estructurala estructura en cuenta
espacial espacial
conocidala estructura
conocida deespacial
laestructura
de la acetilcolinesterasa conocidayde
acetilcolinesterasa la la yacetilcolinesterasa
estructurala cuenta
estructuraTeniendo Teniendo eny la estructura
en cuenta Teniendo
la
espacial deconocida
espacial
conocida de
la acetilcolinesterasadelalaacetilcolinesterasa
conocida acetilcolinesterasa
de layestructura
acetilcolinesterasa
laestructura
estructura yTeniendo
ylalaTeniendo
estructuray en Teniendo
la estructura
en Teniendo
cuenta en
Teniendo
la en cuenta
estructura en teniendo
laespacial
cuenta
estructura lacuenta
en cuenta
estructura
espacial la estructura
delade laestructura
espacial
conocida
laacetilcolinesterasa
estructura
acetilcolinesterasa
en cuenta
espacial ylala estructura
estructura
conocida
y la
de espacial
la espacial
conocida
acetilcolinesterasa de cuenta
conocida
layinhibidoras dela estructura
acetilcolinesterasa
la estructura la acetilcolinesterasa
Teniendo
espacial
yacetilcolinesterasa
la estructura
en cuenta yconocida
conocida laTeniendo
la estructura
estructura
la
enTeniendo
cuenta
analizamosde su conocida
posibilidad
la posibilidad
interacción
de de de su de
Teniendo ace
interacción
su tilcolinesterasa
interacción
en tura
cuenta de
turala y
moléculas
de la estructura
moléculas
estructura inhibidoras
espacial de moléculas
competidoras,
conocida inhibidoras
competidoras,
de la también competidoras,
también analizamos analizamos y también
lala laespacial
posibilidad
estructura
moléculas moléculas
inhibidorasdemoléculas
inhibidoras
tura moléculas
inhibidoras
competidoras,
inhibidoras
competidoras, inhibidoras
competidoras, también
competidoras,
tambiéncompetidoras, analizamos
también
analizamos
también
también
analizamos analizamos
lalaposibilidad
posibilidad
analizamos
la tura
posibilidad
dedesu la
su laposibilidad
interacción
posibilidad
de su interacción
interacción
de desu
tura su interacción
deinteracción
tura
moléculas
tura
de moléculas turade
inhibidorasde
competidoras,
analizamos también
de la
posibilidad dos también
posibilidad
conanalizamos
de su
el analizamos
de
interacción
sitio su la
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posibilidad
interaccióncon posibilidad
la la de
tura
sitio
enzima. su
de
activo
Se de su
interacción
moléculas
de
sabe interacción
laque tura
inhibidoras
enzima.
el sitiodeSe de
moléculas
sabe
activo moléculas
competidoras,
de que inhibidoras
AChEel sitioinhibidoras
se también
activo
componecompetidoras,
de competidoras,
analizamos
AChE
de dos se también
con la
compone
el sitio
activo de
el
está compuesto la
sitio enzima.
competidoras, activo
por Se
de
dos sabe
también
AChE
sitios: que
se el
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componesitio activo
lade dos de
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con de estásu compuesto
interacción la por
con
enzima. dos
el tipos
sitioSe activode
sabe moléculas
de
que la el enzima.
sitio inhibidoras
activoSe sabe
de AChEque
con
la enzima.
que el sitio
el sitio
sitio activo
Se activosabe de
que
de con la
AChE enzima.
el sitio se activo Se
compone sabe
de AChE que
de dos el sitio
se compone activo
con activo
el sitio de
deactivo AChE
dos con
de se
la compone
elenzima.
sitio activo Se de de dos
sabe con
la enzima.
que el sitio
el sitio activo
Se activo
sitio sabe de
lade
AChE
AChE
enzima. sitio
se
con
Se
periférico
sitio
coincide
periférico
compone
el
sabe (PAS).
catalítico
catalíticocon (PAS).que
ely el
de
activoel
El
AChE
sitio
El
dos
sitio de
sitio
sitio
activo
sitio
la
activo
consta
aniónicode
el sitio
enzima.
catalítico
catalítico lade
de activo
Se
AChE
AChE
sitios:
enzima.
periférico
AChE
sabe eldesitio
está
consta
Se(PAS).
consiste
la
que
sabe
enzima.
el
compuesto
de sitio
sitios:
catalítico
que
El sitio el
Se por
yel
sitio
sabe
el de
dos
sitio
catalíticositio
activo
que
AChE
sitios:
catalítico
aniónico
AChEde
el sitio
se
el
AChE sitio
y activo
compone
el
con elAChE catalítico
sitio
periférico
está
de de AChE
aniónicodos
(PAS).
compuesto
sitio catalítico y el se
con
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periférico
El el
sitio
por
ysitios: aniónico
dos (PAS).
catalítico de dos
activo
sitios:
el sitioelaniónico de
El
de
el
sitios:
catalítico
aniónico elyEl sitio
el catalítico
sitio catalítico
periférico aniónico (PAS). y el sitio
periférico
El sitio aniónico
(PAS). periférico
ElAChE (PAS).
sitioelcatalítico ElAChE sitio catalítico
sitios:yconsta sitiode sitios: el consta sitio de
catalítico yEl sitio
el sitio
sitio
periférico
consta de
tríada (Ser
(PAS).
uncatalítico
sitios:
sitio
tríada
203, el
catalítico
(Ser
Glu
sitio
AChE
sitio203,
334, consta
catalítico
compuesto
Glu 334,
His447) y yAChE
de el sitios:
porsitio
His447)
un una
sitio: elcatalítico
consta
aniónicositio
tríada
, elHis447)de
sitio
sitios:
catalítico
periférico
(Ser y consta
catalítico
consta
203,ysitio el
(PAS).
Glu de
ytríada
elsitio
334,
dos
de
catalítico
sitio aniónico
Eltríada
His447)
subsitios:
aniónico
elperiférico
sitio catalítico yperiférico
un
un
catalítico
aniónico
de
sitio
sitio (PAS).
AChE
catalítico
catalítico
(PAS).
y Elel sitio
periférico
consta
sitio
compuesto
compuesto
aniónico
(PAS).
catalítico
de dos por AChE
subsitios:
por una
una
consta consta
de dos
de
subsitios:
un dosde
sitio
dos
subsitios:
subsitios:
un
subsitios:
sitio
catalítico un unsitio
catalítico
compuesto
un sitio
catalítico
sitio catalítico
compuesto
catalítico
por compuesto
una compuesto
por
tríada
compuesto
una portríada
(Ser una
por 203,
por
una
(Ser
una
tríada
Glu 203, (Ser
334, (Ser
Glu 203,
His447)
(Ser
203,
334, Glu 203,334,
Glu
His447)
y un
Glu
334,
constay
334,
His447) His447)
un yEl
His447)
sistema
de un
dos
sitio
y un sistema
de
catalítico
yconsta
subsitios:
un
dos
AChE
de sitio
dos
subsitios:
un
catalítico
compuesto compuesto
compuesto
por una por
por
tríada una
una(Ser tríada
tríada
203, (Ser
(Ser
Glu 203,
203,
334, Glu
Glu
His447) 334,
334, His447)
His447)
y “aniónico”
un la sistema y
y un
un sistema
consta
de His447)
dos de de
subsitios: dosdos subsitios:
subsitios:
un sitio un un
catalítico sitio
sitio catalítico
catalítico
sitio
una
Tyr "aniónico"
sitioun con
cargada tríada
“aniónico”
sitio que
(Ser
elcatalítico
aminoácido
que
positivamente
une
203,
une
compuesto
la
Glu
parte
Tyr
la del334,
partesitio por
ligando
cargada
His447)
“aniónico”
cargada una con yelun
tríada
positivamente
que
positivamentesitio
(Serune
aminoácido 203,
del
parte
elGlu
Tyr
ligando
que
cargada
ligando334, con
une
conel
la
el parte
positivamente uncargada
aminoácido
aminoácido y sitio sitio Tyr
delTyr positivamente
ligando
“aniónico”
sitio consta
"aniónico"que decompuesto
con el del
dos
une que la ligando
aminoácido
subsitios:
parte por
une
cargada la
positivamente parte
positivamente cargada
delcon ligando positivamente
del ligando
con el con
sitio del
el ligando
sitio
"aniónico" con
"aniónico" delune el aminoácido
del
aminoácido aminoácido Tyr Tyr que Tyr se "aniónico"
que se
une acargada une
la parte que
a la une
parte la parte
cargada
cargadacon eldel
positivamente Tyradel
ligando conligando el sitio "aniónico" delsitio aminoácido Tyrparte quede se une apositivamente
lacon parte positivamente
aminoácido
86sede enzima.
encuentra
del entrada
residuos
una ligando
enzima.
sitio
PAS
la
(Tyrde
entrada
con
PAS elelelsitio
se
72
aminoácido
“aniónico”
encuentra
del activo
, aminoácido
se áspid
encuentra
que
sitio a Tyr
unelaTyr
consta
activo sitio
la
entrada
la86
parte
yentrada
de “aniónico”
consta
de delcargada
5 residuos
una deenzima. que
5sitio positivamente
activo
residuos
(Tyr 72,
PAS la
y consta
sitio
(Tyr
se cargada
del
“aniónico”
72,
encuentra 86 5ligando
residuos
de una
que
en (Tyr
laenzima.
une ellaaminoácido
entrada 72,
parte
PAS
al del
86sitio deseligando
cargadauna Tyrenzima.
encuentra
activo 86 deauna
positivamente
consta PAS
lade 5
PAS enzima.
sedel
encuentra encuentraPAS en se
la aencuentra
laconsta
entrada entrada del aa dela
sitio entrada
elactivo
sitio activo del
del
consta sitioconsta
de activo
activo
5 deyyuna
residuos consta
5consta
residuos(Tyr dede72, 5 5residuos
(Tyr residuos
86 72,
de 86
una (Tyr
(Tyr
de una
enzima. 72,
72, 8686
enzima.
PAS de
de una
unasePAS enzima.seal sitio
encuentra
deen la entrada
5 286,
residuos
Asp activo
74, (TyrTyr sitio
consta 72,
124, activo
86de de
Trp 5 286,residuos
una enzima
Tyr de (Tyr
341) 5 residuos
PAS72,
agrupados86
se (Tyr
de una
encuentra 72,
alrededor 86
enzima.
en dela de PAS
entrada
la enzima.
se
entrada encuentra
al sitio PAS
al activoseenTyr
desfiladero encuentra
la
consta entrada
del de en
activo5 la
al286,
sitio
residuosentrada
Asp activo
74, (TyrTyrconsta
72,
124,
Trp
Asp 74,286, Tyr
agrupados
entrada
laTyrentrada 341)
124, del Trp agrupados
sitio
al286, alrededor
activo
desfiladero
286, Tyr alrededor
y de
341) la
consta
del entradadede
sitio activo. 5la al
entrada
residuosdesfiladero al
(Tyr desfiladero
del
72, 74,acti Tyr vedel 86
124, activo
de Trp una Asp
286, enzima.
74,
Tyr 341)PAS124, seTrp
agrupados encuentra Tyr
alrededor en
341) la de
alrededor
124,
al
Tyr
agrupados Trp
dedesfiladero
la 341)
entrada
Tyr
agrupados
alrededor 341)
al desfiladero
del activo de laagrupados
agrupados
alrededor
Asp entrada
del
74, activo
Tyr
alrededor
dealrededor
la
del
124,
entrada
desfiladero
Asp Trp 74,
dede
286,
la la
del del entrada
entrada
Tyrdesfiladero
124,
Tyr activo
341)Trp
deldel deldesfiladero
desfiladero
Asp
286,
agrupados
activo
74,
Tyr Tyr
341) Asp deldel
124,
alrededor
74,
agrupadosTrp activo
activo Tyr
de286,Asp
124,
la
Asp
Tyr 74,
alrededor
entrada
74,
Trp Tyr
341) Tyr
286, 124, Tyr
agrupados
de
del
Trp
341)
la entrada
desfiladero
del activo Asp
sitio.
sitio. sitio.
Aspsitio. 74,
74, Para Tyr Tyr
sitio.124, 124,
estimar
sitio. Trp Trp
sitio.286, 286, Tyr
la conformación 341)
Tyr 341) se agruparon agrupados bioactiva alrededor
alrededorpotencial de la
de la entradaentrada
de los compuestos del desfiladero
al desfiladero del del sitio
y sitio activo. sitio. activo. sitio.
el fin
sitio. de
interacciones
Para Con
estimar
estimarel fin la de
estabilizando
la estimar lalabioactiva
conformación
conformación conformación
bioactiva
interacción potencial
potencial bioactiva
proteína-ligando,
de los de potencial
los
compuestos compuestos
métodos yde pos losde compuestos
y pos posibles
acoplamiento y pos Con
molecular
Para estimar bioactiva
compuestos
estimar la conformación
lapotencial
yconformación
pos Para debioactiva
losbioactiva
estimar potencial
compuestos
laposconformación
potencial yde pos losde compuestos
Para loslaestimar
bioactiva compuestos y pos
la
potencial y Para
conformaciónde los
pos estimar
Para compuestos
estimarla conformación
bioactiva lapotencial
yconformación
pos Para de los
bioactiva ypotencial
pos Para de los
estimar compuestos
la conformación y Para
bioactiva estimar potencial conformación
de se utilizaronbioactiva los potencial
compuestos de ylos compuestos
posibles
cómointeracciones
estabilizan
que estabilizan
las estabilizan
moléculas
la Para
interacción
que estabilizan
estudiadas
estimar la la
la interacción interacción
proteína-ligando, pueden
conformación interacción
proteína-ligando,
unirsebioactiva
métodos alproteína-ligando,
proteína-ligando,sitiode
métodos
activo.
potencial métodos
acoplamiento
de métodos
deacoplamiento
los de acoplamiento
acoplamiento
compuestos
molecular
de molecular
acoplamiento
y las
posibles
. Lamolecular
molecular
posibles
interacciones
preguntainteracciones
interacciones interacciones
básica que
era
que
interacción
estabilizan
la interacción
interacción
proteína-ligando,
proteína-ligando,
la interacción
proteína-ligando,
proteína-ligando,
métodosmétodos
proteína-ligando,
de
métodos
métodos
de acoplamiento
acoplamiento
de métodos
de acoplamiento
acoplamientomolecular
molecular
de molecular
molecular
posibles
posibles
posibles
posiblesmolecular
interacciones
interacciones
interacciones
interacciones
interacciones
que que estabilizan
estabilizan queque
que que estabilizan
estabilizan
estabilizan
la la interacción
interacción
la
la
proteína-ligando,
estudiadasligando,
estudiadas
estudiadas pueden
expandido,
posibles se métodos
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puedenpueden
unirse
pueden
interacciones de
con
unirse acoplamiento
métodos
unirse
el
entrar
que sitio
con a con de
activo
el
estabilizan el
sitio molecular
acoplamiento
sitiode activo
activolas
la las que
de
interacción posibles
de molecular.
la se las
AChE que
usaron. interacciones
y se
si,La
proteína-ligando, Laporpregunta
usaron.
pregunta
la Laque
presencia estabilizan
básica
pregunta
básica
se utilizaron era
del era cómo
básica
resto cómola
métodos interacción
imidalas
era
las moléculas
cómo
demoléculas
estéricamente proteína-
las
acoplamiento moléculas
molecular. se La
usaron.
usaron.
se pregunta
usaron. La
La La básica
pregunta
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básica
básica cómo
básica era
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cómo
eracómo moléculas
cómo las moléculas
las estudiadas
moléculas
moléculas estudiadas
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estudiadas unirse
pueden
puedenpueden con
unirse
unirse el
unirse sitio
con
con activo
el
conel sitio
sitio
el activo
sitioactivolas
activo que
de
de se
las
las
de que
que
las
seque se usaron.
usaron. La
LaLa pregunta
pregunta básica
básica era era cómo cómo las las moléculas
moléculas estudiadas
estudiadas pueden
pueden unirse
unirse con con el elsitio
sitio activo
activo de de las las queque se
si,usaron.usaron.
poryimida
la La pregunta
presencia
resto laimida
porestéricamente
si,Para
fueron estudios
usados. pregunta
del básica
estéricamente
resto
de
La básica era cómo
imida
expandido,
acoplamiento
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restoestéricamente
básica cómo
expandido, las
pueden
dosera moléculas
las
cómo moléculas
pueden
ingresar lasestudiadas
expandido, estudiadas
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alexpandido,
centro
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aldelAChE pueden
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estudiadas unirse
yactivo
si ingresar
ellos, lacon
aunirse AChE
eellos,por el
con
interactuar sitio
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elsi,sitio
laypresencia por
con de
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lasi, de las
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tríada de
un quela AChE
resto sedel
catalítica. de lay
AChE imidadel resto presencia
estéricamente
estéricamente imida del
estéricamente
expandido,expandido, imida
pueden pueden estéricamente
expandido, ingresaringresar pueden
a la aAChE
laingresar
AChE y si pueden
alsi
yellos, AChE
ellos,por ylapueden
por sipresencia
la aunirse
presencia por la con
AChE
de yun
presencia
de resto
un
el sitio
por
resto de
imida
activo
la un
imida de
presencia
resto
estéricamente
pueden expandido,
ingresar
la AChE expandido,
asitiola pueden
AChE pueden
yla ingresar
si ellos, ingresar
poralala la a
AChE la
presencia AChE dey si
yacetilcolinesterasa
sitríada
ellos, un ellos,
por
resto la por la
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imida presencia de
estéricamente un de
resto un resto
imida
expandido, imida
estéricamente estéricamente
depueden expandido,
ingresar ade
centros
del de
AChE ingresar
sitiocristal
dos
activo
activo
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cristal
del
estructuras sialellos,
del
ellos,
interactuar
interactúan
centro
sitio
activo
por con
por del
activo
con
con
la presencia
sitio
interactúan
cristalinas presencia
la la
tríada
activo
interactúan
de
la tríada
tríada con
de de
e
enzima
un
catalítica.
catalítica.
catalítica.
un
con
la restoresto
interactuar
la
tríada
Para de
Para
Para
imida
los
con
catalítica.
imida
los
los
estéricamente
la tríada
catalítica. Para
estéricamente
estudios
estudios
estudios dede
catalítica.
Para
los
humana,
de
losexpandido
estudios
acoplamiento,
acoplamiento,
acoplamiento,
una Para
estudios
expandido, de los
estructura
dos
deresto
dos
estudios
pueden
dos
de
acoplamiento,
acoplamiento, fue
centros
centros
centros
imida
ingresar
dede
se
de
expandido,
acoplamiento,
dos
seleccionaron
cristal
cristal aldel
cristal
centros
centro
del
del
sitio
puede
sitio
dos
sitio
activo
activo interactúan
interactúan interactúan
con conlacatalítica.
tríada
la con
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catalítica.
catalítica. catalítica.
Para Para los Para
estudios
los estudioslos estudios
de acoplamiento,
de de
acoplamiento, acoplamiento, dosdos centros dos
centros decentros
cristal
de cristal de
del cristal
delsitiositio del
activo sitio
activo
interactúan con con
la
enzima
acetilcolinesterasa
una la
tríada tríada
catalítica.
acetilcolinesterasa
humana, unaPara Para
loshumana,
estructura los
estudios estudios
una de
selaseleccionó de
estructura acoplamiento,
acoplamiento, se
estructuras se
seleccionó dos
seleccionaron
crys centros
estructuras
de,laque enzimadedos cristal
estructuras
crys del
de lasitio
acetilcolinesterasa activo
cristalinas
enzima interactúan
humana,de la
dos deestructura
centro
estructuras
humana, ladelenzima
acetilcolinesterasa sitio
cristalinas
una
se
activocristalizó
de e
acetilcolinesterasa
se de humana,
seleccionaron
con elacetilcolinesterasa
lainteractuar
enzima una
inhibidor
con
humana,
estructura
estructuras
modelo
tríada
se una donepezilo
catalítica.
humana,
estructura
seleccionó
crys de la enzima
Paraseuna
estructuras
(6o4w)
losestructura
seleccionó estudios dede
enlaza
selaacoplamiento,
estructuras
crysestructura
acetilcolinesterasa seleccionó
enzima
concrys
humana,
ambos sesitios,
estructuras
de la
acetilcolinesterasa
una enzima
estructura
ycrys
seleccionaron
fue
se seleccionaron
crys de (6o4w),
la estructuras
enzima que estructuras
crys
acetilcolinesterasa
se une a crys
la
ambos enzimade la acetilcolinesterasa
humana,
sitios, enzimay el una acetilcolinesterasa
talizado estructura con humana,
el fue humana,
una
cristalizado
inhibidor estructura
modelo una
con el
donepezil fue se(6o4w),
inhibidor fue seque
seleccionaron
modelo seleccionaron
donepezil
se estructuras
une
cristalizóSe
inhibidorsitios,
sitios,
conseleccionaron
modelo
(6o4w), y el
y el
9-aminoacridina
donepezil
que
talized
talizado
se estructuras
une
con
con
(6o4w),
ela
el
(6o4x),
ambos
inhibidor
inhibidor
que que
desitios,
sela se
une
modelo
modelo
enzima y
unea
se ambos
talizó
donepezil
donepezil
selectivamente
acetilcolinesterasa
sitios,
con el
(6o4w),
(6o4w),
y se con
inhibidor
que
PAS.
humana,
cristalizó
que modelo
se
se
une con
une
auna el
a
donepezil
ambos
ambos
estructura
inhibidor
sitios,
se
modelo
(6o4w),
sitios, y el
y
que
el
cristalizó segundo
donepezil
tallized se conaael
une
con
ambos
elen e
ambos
(6o4w),une inhibidor
que seLos une modelo
a ambos donepezil (6o4w), que seelune a ambos sitios, ycon el talado con elque inhibidor modelo donepezil
9-aminoacridina el
PAS.
cristalizó
talado (6o4x),
selectivamente con elque
compuestos inhibidor
consesitios,
une
PAS. yII,
modelo
I,une el segundo
talado
III,
selectivamente
el IV,con
donepezil así inhibidor
(6o4w),
como
con
cristalizó PAS. que
elPAS.
con modelo
compuesto
el se
segundo une
9-aminoacridina donepezil ambos
modelo,
cristalizó (6o4w),
(6o4x), con sitios,
donepezilo, yseelse
9-aminoacridina
que une une
segundo se a ambos cristalizó
acoplaron
(6o4x),
selectivamente sitios,
quecon en
se
con y
que seelcon
con 9-aminoacridina
selectivamente
PAS. une
segundo
elselectivamente
inhibidor
(6o4x),
con PAS.que modelo
cristalizó se
el segundo
con
donepezilo
conselectivamente
PAS. el segundo
cristalizó
9-aminoacridina
(6o4w),
con con que
cristalizó se
9-aminoacridina
(6o4x), el une
que segundo
con se
con ambos
cristalizó
9-aminoacridina
une (6o4x),
selectivamente
sitios,
que con
se y9-aminoacridina
el segundo
(6o4x),
une con que seelcristalizó
selectivamente
PAS. une
segundo(6o4x),
con
cristalizó con
(6o4x), 9-aminoacridina
que (6o4x), que se une selectivamente con PAS. el segundo cristalizó con 9-aminoacridina
selectivamente
Los
aminoacridinaIV con
Compuestos I,
también. III,seI,
II, PAS. I,une
IV, laII,así
como selectivamente
estructura
III, como
IV,se
compuestoasíelcomocristalográfica
como
compuesto con
elelmodelo,
modelo, PAS.
compuesto del
modelo, elsitio
donepezil, segundo activo
modelo,
donepezil,
todos cristalizó
de
donepezil,AChE
también
setambién
acoplaron con sese9-aminoacridina
utilizando
acoplaron.
acoplaron.
al segundo el programa Los
Los (6o4x), Autodock
Compuestos
Compuestos
cristalizado queconse 9-I, une
Vina.
II, III,
Los Compuestos I,
IVcompuesto II,como
también.
así III,(6o4x),
IV,II,
comoasíIII,
elmodelo,
queIV,
como
compuesto así
el compuestoelune selectivamente
compuesto
modelo, compuesto modelo,
donepezilo,
con
modelo,
donepezilo, PAS.
donepezil,
fueron donepezil,
todos
todos fueron
acoplados se se acoplaron.
acoplaron.
acoplados Los LosLos
Los
compuestos Compuestos
Compuestos
compuestos I,compuesto
II, III,I, IV,
II, I,III,
II,
asíIII,
IV,
como el
modelo, compuesto
donepezil,
donepezil,
Los valores todos modelo,
también
obtenidosse sedonepezilo,
donepezil,
acoplaron.
acoplaron de la en
función se
eltodos
Lossitio
de fueron
acoplaron.
Compuestos
activo
puntuación acoplados
Los
de la Compuestos
I, II,
estructura
para Los
III,
todosIV Compuestos
I,
también. II,
cristalográfica
los III,
compuestos IV,
como I,así
II,
el
AChE III,
como IV,
compuesto
probados así
el
utilizando como
se modelo,el el
programa
significaron
Autodock
de la estructura Vina.
en activo
la estructura
Los en la
compuestos
cristalográficaestructura
cristalográfica I,
AChE cristalográfica
II, III, del
IV,
utilizando sitio
así como del
activo
el sitio
el
programade activo
AChE
compuesto AChE
usando
Autodock modelo,utilizando
el
Vina. programa
donepezil,
en el
la programa
Autodock
se
estructura acoplaronAutodock
Vina.
cristalográficaen Vina.
el sitiodel activo
sitio
utilizando
programa AChE
el utilizando
programa
Autodock Autodock
Vina. el programa
en la Vina.
estructura Autodock
en la estructura Vina. en
cristalográfica la delestructura
cristalográfica sitio del
activo cristalográfica
sitio
AChE activo del sitio
AChE
utilizando activo AChE
utilizando
el programa el
Autodocksignificativamente
cristalográfica Vina.
estructura del ensitio la estructura
cristalográfica
activo AChE cristalográfica
del sitio
utilizando activoel delAChE sitio activo
utilizando AChE el utilizando
programa elelprograma
Autodock Vina.Autodocken Vina.
laprobados.
estructura seen la en
Se
Losensignificaron
valores Los
la estructuraLos valoresvalores
obtenidos los valores obtenidos
más
obtenidos
cristalográfica
de
bajos
obtenidos
la valores dedel
función
de
en la
la obtenidosfunción
comparación
de
función
desitio laprograma
activo
puntuación función
de de con
puntuación
de de
AChE
para
Autodock
puntuaciónel donepezilo,
puntuación
para
usando paraVina.
todos todos
para para los
lostodos
elpuntuación
programa compuestos
cual
compuestos los
Autodockla unión
compuestos probados
estimada
probados
Vina. se fueron estimó
significaron
probados fueronsignificativos
fueron
Los significativos
significativos
valores
Los
obtenidos Los Los valores
de valores
la obtenidos
función
de
obtenidos de
lade la todos
función
de
puntuación función delos
la función paradecompuestos
puntuaciónde
todos puntuación
los
para probados
todos
para
compuestos para todoslos fueron
todos compuestos
loslos
analizadoscompuestos
compuestos probados
fueron probados
un pocofueron unmenor
fueron
menor poco significativos
significativos
significativos
en en menor
significativos comparación
comparación LosLos Los
en-11,1
valores
valoresvalores
comparación con obtenidos
obtenidos
obtenidos
kcal/mol.
con el Los
el donepezilo con
donepezilo
de
de de
lala
valores la
elfunción función
donepezilo
función
más
para para de
decual
altos
el de
el puntuación
para
cual
puntuación
puntuación
se la laelunión
obtuvieron
unión cual
para
para para la
todos
todos
para
estimada todos
unión
estimada elloslos los compuestos
estimada
se
compuestos
compuestos
compuesto
se estimó estimó IV en yse probados
estimó
en
probados
ensayados
III,
Los unvalores
estimados pocoen en
fueron
obtenidos
significativamente más de la comparación
bajosfunción
en con de puntuación
comparación con para todos
donepezil ellos compuestos probados sefueron
un poco
menor
ÿ11,1 en
un
poco poco
menor
menor
menor
menor enmenor
en
en
comparación
comparación
kcal/mol,
ÿ11,1
kcal/mol.
en
kcal/mol.
Los
en
comparación
comparación
comparación
comparación
con
Los
valores con
con
donepezil
respectivamente.
con donepezil
valores
más
con
para
Se
altos para
más se
con donepezil
donepezil
donepezil
donepezil
donepezil el
altos
para
para
para
cual
obtuvieron
el cual else
obtuvieron
para
la el
el
el
para
el
cual
cual
cual
unión
enlace
resultados
obtuvieron
para lapara
cual
el
la
estimada
estimado
el
el la
lacual
unión
estimado
unión
unión
ligeramente
para fue
compuestoel
cual
se
unión
la
estimada
estimada
launión
estimada
estimó
estimado
unión
estimada
se
seen
inferiores
compuesto
IV y
estimada
se estimó
estimada
estimó
estimó
ed
III, un
IVa
para en
III,en
poco
ÿ9,2
y
estimados
se
estimó
en
se
un
estimó
un en
estimó
un poco
poco
menor
kcal/mol
estimados
en enenen
un
poco
y ÿ8,9
ÿ11,1 en
-11,1 kcal/mol.
poco más
kcal/mol.
kcal/mol.Los
bajos
Los valores
en
valores
Los valoresmás
másmás altos
comparación
altos se
se
altos obtuvieron
con el
obtuvieron
se obtuvieron para
donepezilo,
para los
el
para para compuestos
el
compuesto
el cual
compuesto la
IV IV
unión
y
IV y
III,
y III, estimados
estimada
estimados
III, estimados se
en en un
estimó
ÿ11,1
en en
ÿ11,1
kcal/mol.
kcal/mol. kcal/mol.
Los LosLos
valores valores
valores
más másmás
altos altos
altosse obtuvieron
se obtuvieron para el compuesto
para el compuesto IV y
IV III, estimados
y III,yestimados en ÿ11,1
en ÿ11,1
ÿ11,1 ILos
Los II,valores
yvalores
kcal/mol.
respectivamente.
Se para
Los los
más
respectivamente.
Se
obtuvieron más
valores Sealtos
cuales
más
altos sese
los
altos
seobtuvieron
obtuvieron
resultados obtuvieron
resultados
ligeramente
obtuvieron
obtuvieron
valores
se para para
previstos
obtuvieron parapara
el compuesto
resultados
ligeramente
inferiores seelestimaron
ellos
ligeramente compuesto
compuestos
compuesto IV
IV inferiores
inferiores
para ÿ11,1 ypara yen IV
III, estimados
ÿ9,2
kcal/mol. IV
para yyÿ9,2
ÿ8,1
III, III,
III,
estimados
kcal/mol
Los en
valores
estimados
estimados
kcal/mol
ÿ9,2ÿ8,9enkcal/mol,
más ÿ11,1
kcal/mol
ykcal/mol
en
yen
y ÿ8,9
altos se
ÿ11,1
kcal/mol.
ÿ8,9 kcal/mol.
loskcal/mol,
compuestos
kcal/mol,
respectivamente.
obtuvieron para
ligeramenteel compuesto
inferiores
inferiores IV
para yÿ9,2
III,
yÿ9,2 estimados
kcal/mol y en ÿ9,2 kcal/mol
y respectivamente.
ÿ8,9 kcal/mol, yrespectivamente.
ÿ8,9
Se kcal/mol, respectivamente.
Se obtuvieron Se obtuvieron
resultados resultados
ligeramente
parakcal/mol
y ÿ8,9 kcal/mol,
respectivamente. ypara
ÿ9,2 respectivamente.
kcal/mol
ÿ8,9 Se
kcal/mol
ÿ8,9
kcal/mol, kcal/mol,
Se
obtuvieron
ÿ8,9
respectivamente.
obtuvieron
kcal/mol,
resultados Se
resultados
respectivamente.
obtuvieron
ligeramente
obtuvieron
ligeramente
Se
resultados
inferiores
obtuvieron
resultados
inferiores
para ligeramente
para
resultados
ligeramente
ÿ9,2 inferiores
kcal/mol
ligeramente
inferiores
para
y Esto
ÿ8,9 para
ÿ9,2 inferiores
ÿ9,2
kcal/mol
kcal/mol,
respectivamente.
se
el
compuestos sustituyente
II,obtuvieron
cuales
Se
estimaron para
I el
eny II,Se
lospara
valores
-8,1
obtuvieron
etilo
cuales los
kcal/mol
reduce
cuales
los
predichos
resultados y
resultados
-8,5
la
valores
losafinidad
valores
estimados
ligeramente
compuestos
ligeramente
predichos predichos
en se
ÿ8,1
inferiores
I y II,
inferiores
estimaron
se estimaron
kcal/mol
para
para los
los yenpara
ÿ8,5
compuestos
cuales
ÿ8,5
-8,1ÿ9,2
en kcal/mol
los -8,1
kcal/mol
I
valoresy yÿ9,2
kcal/mol,
kcal/mol
II, -8,5
y
para
kcal/mol
respectivamente.
compuestos
ylos
ÿ8,9
previstos -8,5 y ÿ8,9
compuestos
kcal/mol,
cuales
se los ykcal/mol,
I ysugirió
Irespectivamente.
estimaron II, para
valores
en loskcal/que
previstos
-8,1
mol
compuestos
y II, y -8,5los
para Icompuestos
y II, para
cuales los
los Ivalores
y II, para
cuales los los cualespronosticados
valores
pronosticados los se valores
estimó pronosticados
se
en estimaron
ÿ8,1 kcal/mol se
en yestimaron
-8,1
ÿ8,5 kcal/mol
para en
la -8,1
y -8,5
enzima kcal/mol
compuestos
AchE yen-8,5 I
comparación
II, para los
valores
etilo con
compuestos
cuales el grupo
los
predichos
reduce laI y
valores II,metilo,
para
estimados
afinidad porlo en
los
predichos que
cuales
las concordaba
se
ÿ8,1 los valores
estimaron
kcal/mol
kcal/mol, con
en
y ÿ8,5 la kcal/mol,
predichos
-8,1
respectivamente. se
kcal/mol estimaron
y
Esto -8,5 en
compuestos
respectivamente.
sugirió que -8,1el kcal/mol
I
Estoy II, y
para
sugirió
sustituyente -8,5los
que compuestos
etilo cuales
el el I
sustituyente
reduce la y
afinidad
sustituyenteypor
Isugirió las
II, etilo
para
quekcal/mol,
losel cuales
reduce respectivamente.
sustituyente los valores
etilo Esto
previstos
porreduce la sugirió
se estimaron
afinidad que
por el
lassustituyente
enkcal/mol,
ÿ8,1el kcal/moletilo yredujo
ÿ8,5
respectivamente. la sustituyente
afinidad
kcal/mol,Esto por los
respectivamente.
sugirió compuestos
que el lasEsto
afinidad
kcal/mol, por laslakcal/mol,
respectivamente. afinidad Esto las kcal/mol,
respectivamente.
sugirió que elrespectivamente.
Esto sugirió
sustituyente etiloEsto
que sugirió
sustituyente
reduce que el
etilo
la afinidad reduce
por etilo
la afinidad
los datos reduce
por
experimentales. la
quekcal/mol,
respectivamente. el grupo Estorespectivamente.
sustituyente sugirióetilo que el
redujo Esto sugirió
sustituyente
la afinidad que
etilo
por el sustituyente
lareduce laAchE etilo
afinidad reduce
por las la afinidad
kcal/mol, por las
respectivamente. kcal/mol, loEsto
consugirió
enzima
cual
consistente
experi AchE
fuerespectivamente.
con el
consistente encon
metilo, la
Estoloenzima
comparación
sugirió
cual experi
fue con
que elAchE
el grupo en metilo,
sustituyente
consistente con laenzima
comparaciónlo cual
etilo
enzima redujoconla
fue
experien comparación
elafinidad
grupo
consistente
AchE enmetilo,
con
por lala con
el
enzima
comparación el grupo
loexperimento
cual fue
AchE metilo,
conconsistente
elenkcal/mol, cual
comparación
grupo metilo, fue
lalo
experi
comparación
metilo,
datos mentales. quecon
AchE con
fueenla el enzima
comparación
grupo
consistente experi
metilo,
conconAchE
que
el el fue
datos enconsistente
grupo comparación
metilo,
experimentales. que con
confue el grupo
la consistente
enzima metilo,
expericon AchEque fuecomparación
enzima
en consistente
experi AchE con
conen la
el enzima
grupo
Enzima
datos AchE
comparación
mentales.
enzima en comparación
AchE
datos con
en el
mentales. grupocon
comparación el
datos grupo
metilo,con que metilo,
mentales.
el era
grupo que
datos
metilo, era
consistente consistente
mentales.
lo con
cual los
era
datos con
datos
consistentela
mentales. enzima
experimentales.
con
datosAchE
los experimental
mentales.
datos experimentales.
datos en
mentales.
datos mentales.
El análisis de conformaciones bioactivas mostró que los compuestos estudiados por la presencia El
análisis del
La presencia de conformaciones
sustituyente imida bioactivas mostróexpandido
espacialmente que los compuestos estudiados directamente
no puede interactuar por la presencia
con el sitio
catalítico El sustituyente
de la enzima A través deimida espacialmente
la ligera expandido
diversidad de no puede
estructuras, interactuar directamente
las conformaciones bioactivas ycon
de el
la sitio catalítico
enzima. A
través de la ligera diversidad
Las interacciones de estructuras,
intramoleculares las conformaciones
en el complejo ligando-enzimabioactivas
son similares entre todos los com y las
interacciones intramoleculares en el complejo ligando-enzima
libras. Los estudios de acoplamiento mostraron que todos se unen son similares entre todos los
con los compuestos del sitio aniónico
periférico (PAS).
a la entrada Los estudios
del desfiladero deldesitio
acoplamiento mostraron
activo y puede adoptarque
dostodos se unen
posibles conde
modos elunión
sitio aniónico periférico
(Figura (PAS) a la
entrada
6). del desfiladero del sitio activo y puede adoptar dos posibles modos de unión
(Figura 6).
Figura 6.Figura
amarillo) Dos modos
6. Dosdemodos
unión de
delunión
compuesto IV en el sitio
del compuesto IV enactivo periférico
el sitio de la enzima
activo periférico de laAChE (a—
enzima AChE (a—amarillo
baja b—azul).
b—azul).
En
En uno
unode
deellos
ellos(a),
(a),lalacadena
cadenadedeaminoalcanol
aminoalcanolcargada ingresa
cargada al desfiladero,
ingresa peropero
al desfiladero, no puede alcanzar
no puede
ambiente
alcanzar el
. El
sitio
sitio
activo
activo
dedeuna
una
enzima
enzimay los
y los
anillos
anillos
aromáticos
aromáticoshidrofóbicos
hidrofóbicos
están
están
expuestos
expuestos al al
medio
medio
ambiente.
entorno Enmedio ambiente
tal caso, para losEn tal caso, para
compuestos II y IVlos compuestos
que II ylaIV
contienen N, que contienen
conformación N, N-dimetil
del bioac fracción
del resto N- bioactiva
dimetilo se estabiliza
La conformación mediante
activa la interacción
se estabiliza electrostática
por la interacción con Asp 74
electrostática pero
con Aspsimultáneamente
74, pero al mismo tiempo se
desestabiliza por la interacción
claramente desestabilizado pordonante-donante desfavorable con
la interacción donante-donante Tyr 124. Para
desfavorable con los
Tyrcompuestos I y III con
124. Para com
grupo
libras IN-isopropilo, la unión
y III con grupo con la enzima
N-isopropilo, la uniónsecon
estabiliza principalmente
la enzima se estabilizapor interacción con los aminoácidos
principalmente
aromáticos Tyr 341, Tyr 337 y Phe 338. En el otro modo de unión (b),
por interacción con los aminoácidos aromáticos Tyr 341, Tyr 337 y Phe 338. En el otro
enlace
ing modo, el
(b),resto hidrofóbico
el resto hidrofóbico aromático interactúa
aromático interactúa por por interacción
interacción ÿ-ÿ conÿ–ÿ
PAScon aminoácidos
formador aromáticoaromáticos
(Tyr
341, Trp 286) que
aminoácidos e interacción hidrofóbica
forman PAS (Tyr 341,con
TrpLeu
286)76. Además, hidrofóbica con Leu 76. Los enlaces de
e interacción
hidrógeno entre amino
unión, el grupo el grupo carbonilo
cargado de la parte
se expone imidaambiente.
al medio y la Ser 293 estabilizan la interacción . En este modo de
bilizar la interacción. En este modo de unión, el grupo amino cargado se expone a las
interacciones
medioambiente. de
Lasunión obtenidas
interacciones conobtenidas
de unión la enzimaconque se muestran
la enzima en la en
se representan Figura 7. 7.
la Figura

Figura 7. Estructura del sitio activo de AChE y posibles tipos de interacciones de dos modos de unión
Figura 7. Estructura del sitio activo de la AChE y posibles tipos de interacciones de dos
enlaces
modos(a,b) entre
(a,b) loslos
entre inhibidores competitivos
inhibidores (III) III
competitivos y (IV)
y IVyylos
losaminoácidos
aminoácidosenenelelPAS
PASdede
la la
enzima.
enzima.
3. Discusión
3. Comparación
Discusión y de la potencia de inhibición (IC50) de los derivados de aminoalcanol (I), (II), (III)
(IV) con compuestos modelo como Physostigmine, Donepezil, Rivastigmine y
Comparando la potencia de inhibición (IC50) de los derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y
Derivados de donepezilo [44], se puede ver claramente que ocupan el cuarto lugar de todos
(IV) con compuestos modelo como fisostigmina, donepezilo, rivastigmina y derivados de donepezilo
14 inhibidores de la acetilcolinesterasa [44].
[44], se puede ver claramente que clasifican en cuarto lugar de todos, la potencia de inhibición de
donepezilo (uno de los inhibidores de AChE más potentes) es de 0,027 µM, que
14produce
[44]. inhibidores de la acetilcolinesterasa
derivados de aminoalcanol (I) (IC50 = 37 µM), (II) (IC50 = 39 µM), (III) (IC50 = 33 µM) y
La potencia
ÿM, (IV) (IC50 = 35 µM))de inhibición de donepezilo
1370, 1444, 1222 y 1296 (uno de los
veces inhibidores
menos de AChE
inhibidores másque
de AChE potentes) es 0,027
donepezilo,
que produce derivados de aminoalcanol (I) (IC50 = 37 ÿM), (II) (IC50 = 39
respectivamente. En el caso del SI 26 del derivado Donepezil (IC50 = 14 µM), aminoalcanolÿM), (III) (IC50 = 33
ÿM) y (IV)
derivados son(IC50 = 35 ÿM))
inhibidores 1370, solo
de AChE 1444, 1222
2,6, 2,8,y2,4
1296 veces
y 2,5 menos
veces másinhibidores de AChE que los
débiles, respectivamente,
donepezilo, respectivamente. En el caso del
comparación con el SI 26 del derivado de Donepezil [44].SI 26 del derivado de Donepezil (IC50 = 14 ÿM), en
losen derivados de aminoalcanol son inhibidores de AChE solo 2,6, 2,8, 2,4 y 2,5 veces
comparación con la potencia de inhibición de los derivados de aminoalcanol (I), (II), más(III)
débiles,
y (IV)
respectivamente, en comparación con SI 26 del derivado de donepezilo
[44]. con Physostignmine, para el cual IC50 = 0.18 µM, se puede ver que en este caso aminoalcanol
los derivados (I), (II), (III) y (IV) son inhibidores de AChE solo 206, 217, 183 y 194 veces más débiles
en comparación con la fisostigmina [44], respectivamente.
La situación es completamente diferente cuando comparamos la potencia de inhibición
de los derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) con Rivastigmina, para la cual IC50 = 71 µM.
En este caso, los derivados del aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) son, respectivamente, 1,9, 1,8, 2,2 y 2,0
veces más potentes inhibidores de la AChE en comparación con la rivastigmina [44].
En comparación con los otros derivados de donepezilo [40], la potencia de inhibición de los
derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) es mucho mayor, lo que significa que los derivados de
aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) son inhibidores de AChE mucho más potentes (de 3,6 a 29,8) en
comparación con los derivados de donepezilo [45].
En este estudio, también comparamos los valores de la fuerza de afinidad (Ki) de los derivados
de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) con la fuerza de afinidad de Donepezil, Physostig mine y Rivastigmine
por AChE.
Según la forma y el lugar de aparición de la AChE en las tres estructuras cerebrales
principales , es decir, en la corteza, el hipocampo y el cuerpo estriado, los valores de Ki para el
donepezilo oscilan entre 1,4 × 10ÿ1 M y 5,6 × 10ÿ6 M, para la fisostigmina desde 3 × 10-8 M a
9,7 × 10-7 M, y para la rivastigmina de 1,5 × 10-5 M a 1,5 × 10-3 M [46].
Dependiendo de la estructura de los compuestos, los valores de Ki para los derivados de
aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) son 1,35 × 10ÿ3 M, 1,42 × 10ÿ3 M, 1,11 × 10ÿ3 M y 1,22 × 10ÿ3
M respectivamente.
Por lo tanto, al comparar los valores Ki de donepezilo, fisostigmina y rivastigmina
con los valores Ki de los derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV), se puede concluir
que la fuerza de afinidad de los derivados de aminoalcanol por la AChE es de 7,93 × 106
a 2,53 × 102 veces más débil que el donepezilo, de 3,7 × 104 a 1,46 × 103 veces más
débil que la fisostigmina pero comparable al rango de Ki de la rivastigmina (de 1,5 × 10ÿ5
M a 1,5 × 10ÿ3 M) .
Mirando más de cerca los valores de Ki para la rivastigmina, se puede concluir que la fuerza de
afinidad de los derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) es respectivamente 1,11, 1,06, 1,35 y 1,23
veces mayor que la fuerza de afinidad de rivastigmina a la AChE que se produce en la corteza.
Los resultados de la investigación mostraron que los sustituyentes de isopropilamina y

dimetilamina ejercían un efecto inhibidor de AChE mucho mayor que los derivados de dietilo y
dimetilo, mientras que los derivados de isopropilamina mostraban un efecto inhibidor más fuerte
que los derivados de dimetilamina y eran los inhibidores de AChE más potentes. Los derivados
de dimetilamina fueron inhibidores menos potentes. Los sustituyentes etilo y metilo parecen
jugar un papel menor en la inhibición de la AChE. Sin embargo, también en este caso, puede
verse que los derivados de metilo eran inhibidores de AChE más potentes que los derivados
de etilo. Así, los inhibidores más fuertes fueron los derivados que contenían isopropilamino
sustituyentes (III) y (I), luego dimetilamino sustituyentes (II) y (IV), metilo (II) y (IV) y los más
débiles fueron etilo (I) y (III). ), mientras que los valores de potencia de inhibición y fuerza de
afinidad mostraron que los derivados de aminoalcanol (I), (II), (III) y (IV) son inhibidores
ligeramente más potentes que la rivastigmina, que inhibe la aparición de AChE en la corteza.
4. Materiales y Métodos 4.1.

Reactivos y productos químicos
Acetilcolinesterasa humana (EC. 3.1.1.7, AChE), yoduro de acetiltiocolina (ACth), ácido 5,50
-ditiobis (2-nitrobenzoico) (DTNB), 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN), El ácido 5 -tio-2-nitrobenzoico
(NTB) se obtuvo de Sigma-Aldrich (Pozna ´n, Polonia). Utilizamos tampón de fosfato (obtenido de
Beckman-Coulter, Brea, CA, EE. UU.). Los compuestos (I), (II), (III) y (IV) fueron sintetizados y analizados
químicamente (espectrometría de masas y espectroscopia de resonancia magnética nuclear) como se
describió previamente [37].
4.2. Instrumentación
Se usó un sistema Beckman Coulter P/ACE MDQ CE para el análisis electroforético.

El instrumento tenía un muestreador automático junto con un detector UV-Visible. Todos los parámetros
de CE se controlaron utilizando el software Karat (v. 32). La separación se llevó a cabo utilizando un
capilar de sílice fundida eCAP (longitud total: 30 cm, longitud efectiva: 20 cm, diámetro interior: 50 µm,
diámetro exterior: 375 µm).
4.3. Condiciones de electroforesis capilar (CE)

Separaciones electroforéticas de 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN) (principal
producto de reacción enzimático) en presencia de acetiltiocolina (ACth), ácido 5-tio-2-
nitrobenzoico (NTB), 5,50 -ditio-bis ácido -2-nitrobenzoico (DTNB), acetilcolinesterasa (AChE)
e inhibidores (I), (II), (III) y (IV) de acetilcolinesterasa, y compuestos (I), (II), (III) y (IV) ) por CE
se realizó utilizando tampón fosfato 100 mM como electrolito de fondo (BGE), a pH 7,5 ajustado
con hidróxido de sodio 100 mM. Las muestras se inyectaron a una presión de 5 psi durante 3 s.
Los experimentos se realizaron en condiciones de corriente constante (85 µA). La temperatura
de separación fue de 20 ÿC y la longitud de onda de detección se fijó en 412 nm. Antes del
ensayo, el capilar se acondicionó con NaOH 0,1 M durante 10 min a 10 psi y con H2O durante
10 min a 10 psi. Luego, se electroacondicionó con el tampón de funcionamiento durante 20 min
a +10 kV y se acondicionó a presión con el tampón de funcionamiento durante 10 min a 10 psi.
Antes de cada inyección, el capilar se lavó con NaOH 1 M durante 2 min, luego con H2O
durante 2 min y finalmente con BGE durante 2 min. Al final de cada día de trabajo, el capilar se
enjuagó durante 10 min con NaOH 0,1 M, 10 min con BGE y 10 min con agua desionizada a 15
psi. Luego, el capilar se expuso al aire durante 10 min a 20 psi y se dejó vacío.
Mezclas de muestra que contienen 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN) (principal

producto de reacción enzimático) en presencia de acetiltiocolina (ACth), ácido 5-tio-2-
nitrobenzoico (NTB), 5,50 -ditio-bis -El ácido 2-nitrobenzoico (DTNB), la acetilcolinesterasa
(AChE) y los inhibidores (I), (II), (III) y (IV) se introdujeron automáticamente mediante inyección
a presión (con una presión de 2 psi durante 5 s en la solución de muestra) . Al final del día, los
viales con tampón de ánodo y cátodo se vaciaron y el tampón de funcionamiento se llenó de
nuevo al comienzo del día siguiente antes del análisis. La longitud de onda del detector se fijó
en 412 nm. Los parámetros apropiados para el análisis de DBAN fueron los siguientes: tampón
fosfato (pH 7,5) de concentración 100 mM, temperatura 20 ÿC y voltaje 15 kV.
4.4. Elaboración de Stock y Estándares de Trabajo

Se prepararon soluciones estándar madre primarias para los compuestos (I), (II), (III) y (IV)
en agua desionizada (concentración de cada uno = 50 mM). También se prepararon soluciones
estándar primarias para ACth por separado utilizando agua desionizada, con 332,5 mg de ACth
disueltos en 25 ml de tampón fosfato (100 mM, pH 7,5), logrando una concentración de 46,00
mM. La solución de ACth preparada se diluyó con tampón de fosfato (100 mM) y se obtuvieron
soluciones estándar de trabajo mixtas (concentraciones: 34,50, 23,00, 11,50, 5,75, 2,88, 1,44,
0,72 y 0,36 mM).
4.5. Preparación de la
muestra La AChE se disolvió en tampón fosfato 100 mM, pH 7,5 y se dividió en varias
porciones, que se almacenaron a -20 ÿC. Se descongeló una alícuota cada día y se
comprobó la actividad de AChE. Las soluciones de trabajo de DNTB y ACth en
concentraciones apropiadas se prepararon inmediatamente antes de su uso por dilución
con el tampón de fosfato.
La actividad de acetilcolinesterasa se determinó según el método de Ellman et al. [47] y según
el procedimiento descrito por Rosilene R et al. [48] pero ligeramente modificado.
Brevemente: en nueve tubos de ensayo, 1,7 ml de tampón de fosfato (concentración 100 mM, pH 7,5)
que contiene ACth (concentraciones de 0,36–46,00 mM), 0,02 ml de inhibidor (I), (II), (III) o (IV)
solución, 0,1 ml de ácido 5,50-ditio-bis-2-nitrobenzoico 4 mM ( DTNB) y 0,08 ml de H2O .
agregado. A otro tubo (muestra cero, tubo 10), 1,8 mL de tampón fosfato (concentración 100 mM , pH
7,5) que contiene ACth (concentración 0,36 mM), 0,1 mL DTNB 4 mM, 0,02 mL de (I), (II), Se añadió
solución de inhibidor (III) o (IV) y 0,08 ml de H2O . Los tubos que contenían las soluciones se
preincubaron durante 2 min a 25 ÿC. Luego, se introdujeron 0,1 ml de AChE 50 mM en los tubos 1 a
9, con un intervalo de 1 min. Las 10 muestras se incubaron durante 3 min a 25 ÿC. Después de la
incubación, las muestras analíticas se introdujeron en el capilar. La intensidad de color del producto
obtenido se evaluó a 412 nm. Los resultados obtenidos al determinar el tipo de inhibición utilizando la
siguiente ecuación se muestran en el sistema de coordenadas Lineweaver-Burk en la Figura 3, Tabla
1:
1 kilómetros 1
V
=
Vmáx[S]
+ Vmax
La determinación del efecto de inhibición de los compuestos (I), (II) y (III), (IV) sobre la AChE se
determinó gráficamente como % de actividad dependiendo de los cambios en las concentraciones de
los inhibidores (I) y (II). Los valores de IC50 se obtuvieron a partir de las gráficas de actividad (%)
frente a los compuestos (I), (II) y (III), (IV). Las constantes de inhibición (Ki) se calcularon a partir de
las curvas de Lineweaver-Burk trazadas para las cuatro concentraciones de los inhibidores (I), (II), (III) y (IV).
El método se basó en dos pasos (Figura 8).
La tiocolina libre (etapa 1), formada a partir de la acetiltiocolina bajo la influencia de la AChE,
reacciona luego con el DTNB liberando una cierta cantidad de NTB (etapa 2), cuya concentración
depende de la actividad de la AChE.
Estudios de
acoplamiento Para evaluar la posible interacción ligando-AChE, se realizaron experimentos de
acoplamiento molecular utilizando la herramienta de acoplamiento PyRx [49] a través del software
Autodock VINA [50,51]. Las estructuras cristalinas tridimensionales (3D) de la enzima AChE humana
se obtuvieron del RCSB Protein Data Bank. Para los estudios de acoplamiento se seleccionaron dos
estructuras cristalinas 6o4w y 6o4x . La estructura cristalográfica se resolvió con una resolución de
2,35 y 2,30 en complejo con los inhibidores de la Acetilcolinesterasa donepezilo y 9 aminoacridina
respectivamente.
Las estructuras tridimensionales (3D) (formato PDB) de ambas estructuras AChE se analizaron
y prepararon para estudios de acoplamiento utilizando el software PyMOL (The PyMOL Molecular
Graphics System, Version 2.0 Schrödinger, LLC). El bolsillo de unión se seleccionó sobre la base de
los datos de la literatura y consiste tanto en el sitio activo como en el sitio aniónico periférico (PAS).
Ambos sitios fueron localizados en base a la presencia de aminoácidos clasificados como sitios activos
(SER 203, HIS 4447, GLU 334, TRP 86) y PAS (TYR 70, TYR 14, TYR 341, TRP 286).
Los archivos PDB AChE (6o4w, 6o4x) se cargaron en la utilidad PyRx vinculada a
Autodock VINA. La macromolécula se convirtió al formato pdbqt, que elimina automáticamente
las partículas de disolvente, añade hidrógeno y realiza cálculos de cargas de Gasteiger . El
centro de la malla se colocó en los sitios activos en función de la posición de los aminoácidos
seleccionados clasificados como sitio de unión (SER 203, HIS 4447, GLU 334, TRP 86, TYR
70, TYR 14, TYR 341, TRP 286) . La dimensión de la caja de cuadrícula 28 × 26 × 25 se
estableció para cubrir ambos sitios en estructuras cristalinas.
Como ligandos se seleccionaron las cuatro estructuras (I, II, III, IV), así como la estructura de
donepezilo, como inhibidor modelo de AChE. No se utilizaron restricciones en el proceso de acoplamiento.
El valor exhaustivo 40 se utilizó para maximizar el análisis de unión conformacional. Los complejos
acoplados generados se seleccionaron en función de los valores de afinidad de unión (kcal/mol) y
los patrones de interacción de unión (hidrógeno, hidrofobicidad y electrostática), que se analizaron
para obtener una conformación de mayor puntuación. Las representaciones gráficas de todos los
complejos acoplados se realizaron utilizando el visualizador de estudio Discovery versión 4.0
(BIOVIA, San Diego, CA, EE. UU.).
En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA REVISIÓN POR PARES 17 de 20
Figura 8. Esquema de reacción para la determinación de la actividad de acetilcolinesterasa.
5.Figura
Conclusiones
8. Esquema de reacción para la determinación de la actividad de acetilcolinesterasa.
Como los derivados del aminoalcanol no se reconocieron como inhibidores de la PAP y no se informaron
Como ligandos,
de la literatura hasta el se seleccionaron
momento, las cuatro
intentamos estructuras
analizar su efecto(I,sobre
II, III,laIV), así como
actividad de la estructura
AChE. Nuestro
donepezilo,
estudio mostrócomo inhibidor
que la modelo
inhibición de lase
de AChE AChE.
puedeNo se utilizaron
evaluar restricciones
simplemente con unen el proceso de
medicamento acoplamiento.
metabólico El.
in vitro
El valor
que utilizaexhaustivo
el análisis 40
CE.se utilizó para maximizar el análisis de unión conformacional. El sistema
Los Los
complejos
cuatroacoplados
derivadosgenerados se seleccionaron
de aminoalcanol en función
mostraron de los
un tipo valores de de
competitivo afinidad de unión
inhibición de(kcal/mol)
AChE.
y patrones
ángulos de interacción
de línea de unión (hidrógeno,
de Lineweaver-Burk, hidrofobicidad
Ki y IC50 mostraron y electrostática),
que la derivada que La Km, Vmax, los
se fue
(III) analizaron para una
el inhibidor conformación
de AChE de puntuación
más potente. más alta.(IV)
Los derivados Lasyrepresentaciones gráficas
(I) mostraron menor de todos
inhibición.
Dilos
Derivative
complejos
(II)acoplados
fue el inhibidor
se realizaron
de AChEutilizando
más débilDiscovery
de los cuatro
Studio
derivados.
Visualizer
Los
versión
resultados
4.0 (BIOVIA,
obtenidosSan
ego,sugieren
UU.). CA, EE. que la potencia de inhibición depende del tipo de sustituyente presente en el
estructura principal del compuesto. Los sustituyentes isopropilamina y dimetilamina ejercen una
5. Conclusiones
efecto inhibidor de AChE más fuerte que los sustituyentes etilo y metilo. Las diferencias en el
Los valores
Comodelos
IC50 son leves
derivados dely,aminoalcanol
para simplificar considerablemente,
no fueron se podría
reconocidos como decir que
inhibidores de con tan ymínimo
la PAP no se
reportaron diferencias, todos los compuestos estudiados inhiben la acetilcolinesterasa con la misma IC50.
en la literatura hasta el momento, intentamos analizar su efecto sobre la actividad de AChE. Sin
embargo, el método
estudio mostró CE
que la que desarrollamos
inhibición nos permite
de AChE se puede evaluarcapturar tales con
simplemente diferencias mínimas.
un metafármaco in vitro
Además,
sistema bólicolos estudiosanálisis
mediante de acoplamiento
CE. sugieren que los compuestos estudiados se unen con el PAS
y no entran en el bolsillo catalítico debido a la presencia de la extensión estéricamente
Los cuatro derivados de aminoalcanol mostraron un tipo competitivo de inhibición de AChE.
sustituyente
Los ángulos de línea Km, Vmax, Lineweaver-Burk, Ki e IC50 mostraron que el derivado (III) era el inhibidor de
AChE más potente. Los derivados (IV) y (I) mostraron menor inhibición. De 6. Perspectivas de futuro
El derivado (II) fue el inhibidor de AChE más débil de los cuatro derivados. Los resultados obtenidos Los
prometedores resultados de la investigación presentada en este trabajo nos alientan a continuar
sugieren que la potencia de inhibición depende del tipo de sustituyente presente en las principales
investigaciones sobre la búsqueda de nuevos derivados con una eficacia inhibidora mucho mayor
estructura del compuesto. Los sustituyentes isopropilamina y dimetilamina ejercen una acetilcolinesterasa. Por lo
tanto, a más largo plazo, nuestro objetivo es introducir más elaborados
efecto inhibidor de AChE más fuerte que los sustituyentes etilo y metilo. Las diferencias en los o
tipos completamente diferentes de sustituyentes (grupos funcionales) en la estructura principal de
Los valores de IC50 son leves y, para simplificar considerablemente, se podría decir que con tal mínimo la
molécula. Tal solución permitirá la creación de una gran serie de nuevos derivados con
diferencias todos los compuestos estudiados inhiben la acetilcolinesterasa con el mismo
IC50. potencia diferente. De entre estos derivados, queremos obtener (aislar) compuestos
Sin embargo, el método CE que desarrollamos nos permite capturar tales diferencias
mínimas. con la actividad más alta, la potencia de inhibición de la acetilcolinesterasa y los que tienen
la menor toxicidad.
Materiales complementarios: La siguiente información de apoyo se puede descargar en: https: //www.mdpi.com/article/10.3390/
ijms23010270/s1.
Contribuciones de los autores: BG concibió la idea presentada. BG desarrolló el método y la teoría.

MN entregó los compuestos investigados. BG concibió y planeó los experimentos. DMP hizo
que el compuesto de simulación se acoplara al sitio activo de la enzima. BG llevó a cabo los
experimentos, realizó los cálculos analíticos y escribió el manuscrito. Todos los autores han
leído y aceptado la versión publicada del manuscrito.
Financiamiento: Esta investigación no recibió financiamiento externo.
Declaración de la Junta de Revisión Institucional: No corresponde.
Declaración de consentimiento informado: No aplicable.
Declaración de disponibilidad de datos: No aplicable.
Conflictos de interés: Los autores declaran no tener ningún conflicto de interés.
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Acetyl Cholinesterase Inhib

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Estudios cinéticos in vitro e in silico de derivados

Resumen: Dos derivados aminoalcanoles de 1,7-diEtil-8,9-difenil-4azatriciclo (5.2.1.02.6) dec-8-eno 3,5,10-

Editor académico: Sung-Kun

(Sean) Kim 1. Introducción

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270. https://doi.org/10.3390/ijms23010270 https://www.mdpi.com/journal/ijms

Figura 1. Esquema de reacción de descomposición de acetilcolina catalizada por acetilcolinesterasa (AChE).

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 3 de 19

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 4 de 19

En este trabajo utilizamos el método combinado de Ellman con el método de electroforesis

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA REVISIÓN POR 5 de 20

Figura 3. Electroforegramas representativos de los compuestos investigados en presencia de (I), (II),

En este trabajo utilizamos el método combinado de Ellman con el método de electroforesis

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 6 de 19

Tabla 1. Ecuación de regresión y cuantificación de acetiltiocolina para 6 repeticiones de cada muestra

Concentración Rango de linealidad de

límite de detección; LOQ, límite de cuantificación; RSD, desviación estándar relativa.

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 7 de 19

(yo) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

(II) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

(III) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 8 de 19

1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

(IV) 0,00 y = 1,5467x + 1,5447 y 0,9989 ± 0,0009 57,12 ± 0,05

1,00 ± 0,02 0,65 ± 0,02 — —

El siguiente objetivo del trabajo fue estudiar la fuerza inhibitoria y la unión

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 9 de 19

Int. J. Mol. En t.2022,

Tabla3.3. Tabla del

Derivada (II) 0.039 1.42

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA REVISIÓN POR 12 de 20

PARES Int. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 11 de 19

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA REVISIÓN POR 13 de 20

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 13 de 19

Los resultados de la investigación mostraron que los sustituyentes de isopropilamina y

4. Materiales y Métodos 4.1.

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 14 de 19

Se usó un sistema Beckman Coulter P/ACE MDQ CE para el análisis electroforético.

4.3. Condiciones de electroforesis capilar (CE)

Mezclas de muestra que contienen 4,4-ditio-bis-ácido nitrobenzoico (DBAN) (principal

4.4. Elaboración de Stock y Estándares de Trabajo

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 15 de 19

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, x PARA REVISIÓN POR PARES 17 de 20

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 16 de 19

Figura 8. Esquema de reacción para la determinación de la actividad de acetilcolinesterasa.

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 17 de 19

Contribuciones de los autores: BG concibió la idea presentada. BG desarrolló el método y la teoría.

Declaración de la Junta de Revisión Institucional: No corresponde.

Declaración de consentimiento informado: No aplicable.

Declaración de disponibilidad de datos: No aplicable.

Conflictos de interés: Los autores declaran no tener ningún conflicto de interés.

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 18 de 19

En t. J. Mol. ciencia 2022, 23, 270 19 de 19

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