Universidad Dr.

Andrs Bello
Facultad Ciencias de la Salud
Licenciatura En Enfermera



Microbiologa y Parasitologa
Dr. Jorge Alberto Morales Zelaya


Trabajo: Coloracin de GRAM
Integrantes:
Yesenia Beatriz Ayala Escobar
Marcela Beatriz Ramrez
Astrid Elizabeth Sandoval Escobar
Jos Eduardo Paniagua
Arsenio Esteban Arias Lara
Misael Jonathan Flores Cortez

Lunes 10 de Febrero del 2014
Microbiologa y Parasitologa
Universidad Dr. Andrs Bello










Objetivo General



Ampliar nuestro conocimiento sobre Microbiologa utilizando los
recursos necesarios que ilustren de forma acertada al objeto de estudio
y que a su vez nos ayude a una fcil comprensin.








Microbiologa y Parasitologa
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Objetivo Especifico



Obtener los Conocimiento necesarios para una efectiva Identificacin de
microorganismos patgenos o no patgenos de acuerdo a la tcnica de
estudio (Coloracin de Gram) para un tratamiento eficaz y congruente a la
necesidad

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Coloracin de Gram y bacterias gram positivas y gram
negativas

En los estudios de bacteriologa y biomedicina, la tincin de Gram es una tcnica de
identificacin de bacterias (aunque tambin de otros pocos microorganismos) que
consiste en la adicin de colorantes a una muestra bacteriolgica; los colores
resultantes de esta tincin diferencial dependern de la estructura de la pared celular
de las bacterias, con lo que en la microscopa, tras haber aplicado el color de contraste
normalmente, cristal violeta o violeta de genciana para tinciones de color azul-
violceo, y safranina o fucsina para el color rojo-carmn, se podr distinguir entre
bacterias gram positivas (si estas quedan teidas de color azul-violceo) o gram
negativas (si la tincin resultante es roscea o carmes)

1. f. Biol. Mtodo de caracterizacin de bacterias que utiliza un colorante
bsico de color carmn.

Tcnica de Tincin de Gram
El primer paso consiste en teir el frotis con cristal de violeta (colorante
bsico), el colorante primario, solo el suficiente para que se cubra el extendido
bacteriano. dejar actuar durante 60 segundos.
A continuacin se trata con una solucin yodada que acta como mordiente. El
yodo intensifica las interacciones entre el colorante y la clula de manera que
esta se tie ms intensamente.
Posteriormente se decolora el frotis lavndolo con acetona o etanol. As las
bacterias gramnegativas perdern la coloracin sin embargo, otras retienen el
cristal de violeta, las bacterias grampositivas.
Finalmente el frotis se tie de nuevo, tincin de contraste, con un colorante
bsico de un color diferente al del cristal de violeta. La safranina, el colorante
de contraste ms comn tie las bacterias gramnegativas de rosa a rojo.




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Observar en un microscopio ptico con un objetivo 100X usando
aceite de inmersin




Bacilos Gram Positivos





Bacilos Gram Negativos


Resumen de los
Pasos de la
Tincin de
Gram
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Fundamento de la tincin de Gram.

**Los lavados con agua tienen el objetivo de arrastrar mecnicamente el exceso de
colorante y quitar el alcohol-acetona.
**El colorante cristal violeta es de naturaleza bsica y por lo tanto tiene afinidad por
sustancias cargadas negativamente como la pared celular de cualquier bacteria. por lo
que bacterias Gram positivas y Gram negativas son teidas de color violeta.
**Un mordiente es una sustancia que aumenta la fijacin de algn colorante sobre una
superficie determinada, en este caso el cristal violeta aumenta su fijacin a la pared
clular bacteriana usando de mordiente a la solucin Yodada , en la pared bacteriana
el yodo forma un complejo con el cristal violeta insoluble en agua lo que evita que se
disuelva y se pierda el colorante durante el enjuague. Ya sabemos que la pared de los
Gram positivos son ricos en cidos teicoicos no saturados estos muestran gran afinidad
por los agentes oxidantes, todos los mordientes por ejemplo el Yodo son agentes
oxidantes y su efecto en general consiste en dar un caracter mas cidez de los cidos
teicoicos lo que aumenta la afinidad de estos por el colorante bsico cristal violeta.
**La mezcla de alcohol-acetona es un disolvente orgnico que decolora la pared
bacteriana disolviendo el complejo cristal violeta-Yodo, esta decoloracin no afecta a
las bacterias Gram positivas, hay varias explicaciones al respecto, les menciono las dos
ms aceptadas.
Una teora dice: El alcohol-acetona, deshidrata la pared rica en peptidoglicano de los
microorganismos grampositivos lo cual cierra los poros de la pared, propiciando una
barrera que no permite la salida del complejo cristal violeta-lugol. En la pared de las
bacterias gramnegativas hay poco pptido glicano y una gran cantidad de lpidos estos
ltimos son disueltos por el alcohol-acetona, lo que permite el escape del complejo
cristal violeta-lugol.
Otra teora dice: Las bacterias Gram positivas tienen una capa muy gruesa de
peptidoglicano con gran cantidad de enlaces entrecruzados de cidos teicoicos los
cuales son poco solubles en alcohol-acetona formando una especie de barrera en la
pared bacteriana que no permite la slida del complejo cristal violeta-lugol por ende se
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retiene el cristal violeta-lugol en la pared en el proceso de decoloracin.

**La safranina es un colorante catinico que tie las paredes bacterianas ya que estas
tienen compuestos cargados negativamente, por consiguiente las bacterias Gram
negativas se tien de color rosa, sin embargo las bacterias Gram positivas no se tien
debido a que su pared clular esta saturada del colorante cristal violeta y esto no
permite la entrada de la safranina.

Factores que considerar en la tincin de Gram.

No se debe sobrepasar los tiempos de tincin y decoloracin.
Los cultivos viejos hacen que las bacterias Gram positivas se tian parcial o
totalmente de color rosa.
Hay que tomar en cuenta que el agua usada en el frotis se encuentre en el rango de
Ph 7-7.8 ya que:
Los gram positivos pueden hacerse gram negativos al aumentar la acidez.
Los gram negativos pueden hacerse gram positivos al aumentar la alcalinidad.










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Conclusiones


Al finalizar la investigacin se puede concluir que:
Estamos Capacitados para la interpretacin de cultivos
utilizando el mtodo de Coloracin de Gram
Conocemos el procedimiento necesario para aplicar dicho
mtodo
Sabemos y comprendemos l porque de las reacciones sobre
los microorganismos







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Bibliografa


Koneman, Diagnostico bacteriolgico, texto y atlas a color, 6ed,
Panamericana, Argentina, 2006.
MacFadin, Pruebas bioqumicas para la identificacin de
bacterias de importancia clnica, 3ed, Panamericana, Argentina,
2003.

Bailey y Scott, Diagnostico bacteriolgico, 12ed Panamericana,
Argentina, 2007.