INFORME MICROBIOLOGIA

1.COLORACIÓN SIMPLE:
Procedimiento:

● Coloque varias gotas de agua destilada en una lámina portaobjetos y realice frotis
con tres tipos diferentes de gérmenes.
● Utilice un asa para tomar una pequeña porción de cultivo en medio sólido y
disuélvalo en la gota de agua. Asegúrese de que los frotis no sean ni muy gruesos
ni muy finos.
● Permita que la preparación se seque a temperatura ambiente o pásela suavemente
por la llama para fijar los frotis.
● Cubra la muestra con dos o tres gotas de azul de metileno de Loeffers, permitiendo
que el colorante actúe durante un minuto. Luego, lave la preparación con agua
corriente, evitando que el chorro de agua caiga directamente sobre los frotis.
● 5. Seque y observe al microscopio usando el lente de inmersión (100X con
aceite de inmersión).

Materiales:
● Set colorante Azul de metileno (solución acuosa 1%)
● Tubo de caldo de cultivo del microorganismo elegido.
Resultados:
En la muestra de frotis, se identifican con un objetivo de inmersión (100x) bacilos con
disposiciones desordenadas y algunas esporas bacterianas, indicando la capacidad aerobia
de estas bacterias debido a su formación de estructuras de resistencia.

Imagen#1 Coloración Simple

Nota: Estas células se encuentran en la mucosa oral, mediante la tinción simple se

pueden observar.
Interpretación:
La técnica de la muestra coloreada con azul de metileno es útil para distinguir y
delimitar morfologías bacterianas, pero no es apropiada para análisis clínicos, ya que
no permite determinar si las bacterias son patógenas o no. Esta información se obtiene
mediante la técnica de Tinción Gram.
 Conclusión:
La coloración simple es útil como introducción para distinguir la morfología
bacteriana y en técnicas de conteo celular por campo visual. Sin embargo, carece de
utilidad en pruebas clínicas o de identificación.

2. COLORACIÓN GRAM:
Procedimiento:
El procedimiento para la tinción de Gram comienza con la preparación de un frotis en
una lámina portaobjetos, seguido por la fijación de la muestra a la llama. Luego, se
aplica colorante cristal de violeta o violeta de genciana durante 1 minuto, se lava con
agua corriente y se cubre con Lugol durante 30 a 60 segundos. Posteriormente, se
decolora la muestra con alcohol-acetona hasta que desaparece el colorante, se lava
nuevamente y se aplica safranina para la coloración de contraste. Después de lavar la
lámina, se observa la muestra al microscopio con la lente de inmersión. Finalmente, se
registran observaciones, interpretaciones y conclusiones.
Materiales:
● Microscopio
● Láminas portaobjetos
● Set de coloración de gram (Solución de cristal violeta, lugol, alcohol acetona,
safranina)
● Tubo de caldo cultivo de la mezcla de E. Coli, Staphylococcus, Streptococcus.
Resultados:
Tras la observación, se detecta un fondo rojo en el campo de visión del microscopio,
indicando la presencia de bacterias Gram Negativas y Gram positivas. Se identifican
estreptobacilos con morfologías desordenadas mediante la coloración de Gram con
objetivo de inmersión (100x).

Imagen #2 Tinción de Gram.

Nota: Se observan bacilos gram negativos en empalizada.

Interpretación:
La tinción de Gram clasifica bacterias en Gram positivas y Gram negativas según su
capacidad para retener un tinte violeta cristalino en la pared celular. Las Gram
positivas retienen el tinte y aparecen moradas, mientras que las Gram negativas no lo
 retienen y se tiñen de rojo. El sarro dental, formado por la mineralización de placa
bacteriana, contiene diversas bacterias bucales. Al examinar el sarro bajo el
microscopio, se observa una predominancia de bacterias Gram negativas, sugiriendo
que el sarro dental mayormente contiene este tipo de bacterias, aunque la
composición puede variar según factores como la dieta y la higiene bucal.
Conclusión:
La composición bacteriana en la cavidad oral varía entre individuos y puede ser
afectada por la dieta, la higiene bucal y otros factores. El sarro dental se forma
cuando la placa dental, que incluye bacterias, restos de comida y saliva, se
mineraliza. La tinción de Gram es crucial para identificar y clasificar bacterias,
siendo fundamental en la elección de tratamientos con antibióticos y en la
comprensión de la estructura bacteriana.

3. COLORACIÓN ZIEHL-NEELSEN:
Procedimiento:
Primero se prepara un frotis y se fija con un mechero. Luego, se tiñe la muestra con fucsia
de fenicada durante 5 minutos, teniendo precaución al calentarla. Después de enfriar, se
lava con agua corriente. Se decolora con alcohol ácido hasta retirar todo el colorante y se
realiza una coloración de contraste con azul de metileno durante 30 segundos. Se lava
nuevamente y se seca. El siguiente paso implica observar la muestra bajo el microscopio,
utilizando una lente de inmersión en aceite.
Resultados:
Se nota un fondo azul en el microscopio, donde se distinguen bacilos con tonalidad
levemente rojiza. Esto indica que los bacilos han resistido la decoloración con ácido
clorhídrico y alcohol etanol. Esta resistencia sugiere que podrían ser bacilos de
Mycobacterium tuberculosis, conocidos por su capacidad para resistir procedimientos de
tinción, siendo esenciales en el diagnóstico de tuberculosis y enfermedades relacionadas.

IMAGEN #3 Coloración de ZIEHL-NEELSEN

Nota: Se observa a la bacteria Mycobacterium tuberculosis, una bacteria alcohol-acido

resistente que se puede observar con la coloración de ZIEHL-NEELSEN.
 Interpretación:
La tinción de Ziehl-Neelsen se emplea para detectar Mycobacterium tuberculosis, la
bacteria causante de la tuberculosis. El proceso incluye la aplicación de carbol
fucsina, un colorante rojo con fenol y ácido fénico para penetrar la pared celular,
seguido de un suave calentamiento. La decoloración con ácido-alcohol elimina el
colorante de células no acidorresistentes, pero las micobacterias retienen el colorante
debido a su gruesa pared celular lipídica. La contra coloración con azul de metileno
mejora la visualización de las bacterias acidorresistentes, como Mycobacterium
tuberculosis.

Conclusión:La tinción de Ziehl-Neelsen es esencial para diagnosticar bacterias

resistentes a los ácidos y alcoholes, como las de la tuberculosis. Su capacidad para
resaltar estas bacterias contribuye significativamente a la detección eficaz de
enfermedades infecciosas, siendo crucial en el ámbito médico y científico.

CUESTIONARIO:
1. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos Gram positivos
y explique: ¿Que función cumple cada uno de ellos.

El peptidoglicano en bacterias Gram-positivas evita la lisis osmótica. Proteínas y ácidos

teicoicos se entrelazan con él. La pared celular activa respuestas inmunitarias innatas y
adaptativas al reconocer PAMP. Esta interacción desencadena la producción de citocinas
inflamatorias, crucial para la defensa contra infecciones. Sin embargo, la inflamación
excesiva puede ser perjudicial. PAMP asociados con la pared celular Gram-positiva
incluyen monómeros de peptidoglicano y ácidos teicoicos. Además, los antígenos de la
pared celular pueden desencadenar respuestas inmunitarias adaptativas, como la
producción de anticuerpos.

2. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos gram negativos

y explique la función que cumple cada uno de ellos.
El componente estructural de las bacterias Gram negativas incluye:

● Membrana Externa: Capa lipídica con fosfolípidos y lipopolisacáridos, actúa como

barrera protectora y regula la permeabilidad.
● Peptidoglicano: Capa más delgada que en las bacterias Gram positivas, proporciona
rigidez y contribuye a resistir la lisis osmótica.
● Periplasma: Espacio entre la membrana externa y el peptidoglicano que contiene
enzimas y proteínas para funciones importantes.
● Lipopolisacáridos (LPS): Componentes esenciales de la membrana externa con
funciones como protección inmunológica, estabilidad y regulación de
permeabilidad.
● Proteínas de Membrana Externa: Incrustadas en la membrana, realizan funciones
de transporte, adhesión y regulación de permeabilidad.

3. Explique el fundamento de la coloración Gram y esquematice.

La coloración de Gram se basa en las diferencias de la composición de la pared celular

bacteriana, clasificando las bacterias en Gram positivas y Gram negativas. Las Gram
positivas tienen una pared celular gruesa de peptidoglicano que retiene el cristal violeta,
formando complejos insolubles. Las Gram negativas, con paredes más delgadas y
membranas externas lipídicas, disuelven fácilmente el complejo durante la decoloración.
Se tiñen luego con un colorante de contraste, como safranina o fucsina, adquiriendo un
color rosa o rojizo.

4¿Por qué es importante considerar la edad de cultivo bacteriano antes de realizar

una tinción? La edad del cultivo microbiano desempeña un papel crucial en las tinciones
bacterianas, ya que con el tiempo se pueden observar cambios en la morfología y la
estructura celular, como una disminución en el tamaño durante la fase de crecimiento
exponencial. Además, la concentración celular disminuye a medida que se agotan los
nutrientes, y la actividad metabólica y la reactividad de las células experimentan
variaciones en diferentes etapas de crecimiento. Es importante destacar que las células
bacterianas son más propensas a la tinción durante la fase exponencial de crecimiento.
5. ¿A qué se denomina mordiente? Mencione 3 ejemplos

Los mordientes son compuestos que crean sales entre el tejido y el colorante principal,
garantizando una fijación fuerte en la célula. Algunos ejemplos: Solución yodada, el fenol
y el oxalato de amonio.
6. Mencione tres microorganismos (género) que sean Cocos Gram positivos, Bacilos
Gram positivos, Cocos Gram negativos y Bacilos Gram negativos.
Cocos Gram positivos: Staphylococcus, Enterococcus, Micrococcus y
Gemella Bacilos Gram positivos: Bacillus, Clostridium, Corynebacterium y
Listeria Cocos Gram negativos: Neisseria, Haemophilus, Moraxella y
Coxiella Bacilos Gram negativos: Escherichia, Salmonella, Pseudomona y
Klebsiella
7. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos ácido alcohol
resistentes y explique la función que cumple cada uno de ellos .
Los componentes de los microorganismos ácido-alcohol resistentes cumplen diversas
funciones:

● Peptidoglicano: Brinda rigidez y resistencia estructural a la pared celular, evitando

la lisis osmótica.
● Lipoarabinomanano (LAM): Facilita la interacción de la bacteria con el sistema
inmunológico del huésped y puede afectar su patogenicidad.
● Arabinogalactano: Contribuye a la estabilidad estructural de la pared celular.
● Ácido micólico: Componente distintivo que consiste en ácidos grasos largos y
ramificados, otorga impermeabilidad a la pared celular y la hace resistente a
agentes químicos como ácidos fuertes y detergentes.
● Proteínas de superficie: Varían según la cepa y especie, desempeñan diversas
funciones, como actuar como enzimas y servir como adhesinas, permitiendo que la
bacteria se adhiere a las células hospedantes.
●
8. ¿Cuál es el fundamento de la coloración de Ziehl Neelsen?
La tinción de Ziehl-Neelsen se emplea para teñir bacilos ácido-alcohol resistentes
(BAAR), que contienen ácido micólico en su pared celular, haciéndolos resistentes a la
tinción Gram. El colorante fucsina en esta técnica se une al ácido micólico mediante
enlaces iónicos, y al ser resistentes al ácido-alcohol, no se decoloran fácilmente durante el
proceso de tinción.

9. Mencione cuatro líquidos biológicos en los cuales se encuentre el Mycobacterium

tuberculosis.
Los líquidos biológicos donde se encuentra son secreciones respiratorias, esputos, orina,
aspirado gástrico o bronquial y el líquido cefalorraquídeo

10. Relacione los resultados inesperados de una tinción Gram con sus posibles
explicaciones.

❖ Se usó un cultivo guardado de la refrigeradora y al realizar la tinción el organismo

parece rosa, cuando en realidad es Gram positivo (F)
❖ Se usó un cultivo reciente y joven, sin embargo el organismo parece violeta,
cuando en realidad es Gram negativo (A)
❖ Se usó un cultivo recién de joven, sin embargo el organismo parece rosa, cuando en
realidad es Gram positivo (B)
❖ El organismo no tiene color, posiblemente las paredes celulares están
distorsionadas por exceso de calor (D)
❖ Se observa una gran mancha oscura en la lámina. Las células parecen estar
compactadas y apiladas una sobre otra. (C)
❖ Hay células bacterianas visibles en la lámina (E)

A. El portaobjetos no se decoloro el tiempo suficiente.

B. El portaobjetos se decoloró por demasiado tiempo.
 C. El frotis era demasiado grueso y espeso, pues no se dispersó
correctamente.
D. Las células se sobrecalentaron en el portaobjetos durante la fijación por
calor.
E. El frotis no se fijó con calor.
F. Se usó un cultivo que tenía más de 24 horas.

Referencias:
● Madigan, M. T., Guerrero, R., Barrachina, C., and Ruiz Berraquero, F. (2009).
Brock biología de los microorganismos (12a ed.). Pearson Educación.
● Ormaechea, D. E. (2022). ¿En qué consiste la tinción de Gram? CanalSALUD.
Blog Salud MAPFE.
https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/tinci
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● INNST (2021) mycobacterium tuberculosis. Instituto Nacional de Seguridad y
Salud en el Trabajo, Ministerio de Trabajo y Economía Social de España
https://www.insst.es/agentes-biologicos-basebio/bacterias/mycobacterium-tubercul
osis/
● Valdez, M. (2023). Guía de Prácticas- Microbiología General. Facultad de
Ciencias Biológicas, Universidad Nacional de San Agustín de Arequipa,
pp.29.
● Sarro en los dientes; qué es, por qué aparece y cómo evitarlo. (2021, 9 de
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https://clinicadentaledo.es/sarro-en-los-dientes-que-es-por-que-aparece-y-com
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● Paredes procariotas. (s/f). Recuperado el 27 de septiembre de 2023, web de
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● Pereira, DV (2022, 15 de octubre). Placa bacteriana. Recuperado el 27 de
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https://www.propdental.es/odontologia/caries-dental/placa-bacteriana/