Universidad Nacional Autónoma

de México
Facultad de Estudios Superior
Cuautitlán.
Química Industrial.

Laboratorio de química Analítica lll

Grupo: 2501A
Periodo: 2021-2

Reporte práctica Vl.

PRACTICA 6: ESPECTROFOTOMETRÍA DE
ABSORCIÓN MOLECULAR

Profesor:

Miriam Aide Castillo Rodríguez

Alumno:

Mondragón Gonzáles Brandon.

Pérez Trejo Jorge Adrián.
Salazar Pérez Felipe de Jesús.
Zúñiga Vázquez María Elizabeth.
INTRODUCCIÓN.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de
energía interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos,
entre ellos el de la fotosíntesis en plantas y bacterias. La Mecánica Cuántica nos
dice que la luz está compuesta de fotones cada uno de los cuáles tiene una energía:
Efotón = h⋅ν = h⋅c/λ ,
Donde c es la velocidad de la luz, ν es su frecuencia, λ su longitud de onda y h= 6.6
10 -34 J⋅s es la constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia química
absorbe luz de longitud de onda λ, esto significa que las moléculas de esa sustancia
absorben fotones de esa longitud de onda.

Los espectros de absorción se miden mediante un instrumento denominado

espectrómetro. Los instrumentos que vamos a usar en esta práctica constan de una
fuente de luz “blanca” caracterizada por un espectro de emisión continuo en un
intervalo amplio de longitudes de onda (en nuestro caso 325 nm-900 nm) y de un
monocromador que actúa como filtro óptico transmitiendo un haz de luz de longitud
de onda fija λ e intensidad I0. Este haz de luz penetra en la cubeta de análisis donde
se encuentra la muestra. Un detector sensible a la luz mide la intensidad del haz a la
salida
UV-Vis de un haz

Espectrofotómetro UV-Vis de doble haz.

En los instrumentos de doble haz la luz proveniente de la fuente es dividida en dos
haces después de salir del monocromador mediante un sistema de espejos
divisores (Figura 4B). Esta división produce dos haces de luz, uno de ellos se dirige
a la celda de referencia, que contiene el blanco, y el otro haz se dirige hacia la celda
de muestra. Los dos haces de luz después de atravesar la celda de referencia y la
de muestra llegan a detectores separados para obtener la señal correspondiente.
Los sistemas de doble haz tienen la ventaja de que cualquier variación en la
intensidad de la fuente, la eficiencia de la red, la reflectividad de los espejos, la
fotosensibilidad del detector, etc., afecta simultáneamente a los dos haces. En
consecuencia, la relación de energía de los dos haces permanece siempre
constante.
OBJETIVOS.
● Conocer los fundamentos, partes básicas y el manejo general de un
espectrofotómetro de absorción molecular
● Reproducir el espectro de absorción molecular de un analito e identificar la
información que de ahí se obtiene
● Identificar las diferencias y similitudes que existen entre los resultados de los
diferentes espectrofotómetros.

PARTE EXPERIMENTAL.
Equipos e instrumentos:

Espectrofotómetro UV-Vis, 365 (Perkin Elmer).

Espectrofotómetro Visible (Genesys, Bausch&Lomb, Thermo, etc)
Espectrofotómetro de absorción atómica, SpectrAA-200 (Varian, Australia).

Preparación de Soluciones
a) Solución de cobre 0.01M en agua
b) Solución 0.03M de EDTA
Preparar la siguiente curva de calibración:

RESULTADOS EXPERIMENTALES.

Absorción Molecular (Espectrofotómetro de Luz Visible)

1. Barrido para determinar longitud de onda óptima. Se obtienen los siguientes

resultados para determinar la longitud de onda óptima para la solución de cobre.

Tabla 1.- Resultados obtenidos para el espectro de absorción molecular para el

cobre.
2. Medición de la curva de calibración en espectrofotómetro de luz visible (Genesys,
Bausch&Lamb, Thermo, etc).

Tabla 2. Resultados obtenidos para las lecturas de curva de calibración de cobre por
espectrofotometría de luz visible

3. Medición de la curva de calibración en espectrofotómetro UV-Vis (Perkin Elmer

365). Tabla 3. Resultados obtenidos para las lecturas de curva de calibración de
cobre por espectrofotometría UV-Vis.
ANÁLISIS DE RESULTADOS.

La espectrofotometría UV-visible se basa en que las moléculas absorben las

radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende
de forma lineal de la concentración, a continuación, la gráfica de los espectros de
absorción, A=f(ለ).

Gráfica I. de absorción de complejo CuY en medio acuoso para Absorción Molecular

(Espectrofotómetro de Luz Visible)-

La siguiente técnica analítica nos permitió determinar la concentración del

compuesto en solución.

Sabiendo que el volumen de aforo fue 10 mL y la composición de los sistemas fue de 1 en

1 ml de solución cobre, calculamos la concentración molar y en ppm.
Ejemplo]
Tabla 2. Resultados obtenidos para las lecturas de curva de calibración de cobre por
espectrofotometría de luz visible.

La recta de calibración (curva de calibración) obtenida será nuestra referencia para

transformar la medida de A de cualquier muestra desconocida en un valor de
concentración para el analito. Podemos hacerlo gráficamente (interpolando el valor
de A medido en la gráfica) o bien despejando el valor de X que le corresponde a la
medida Y (A), en la ecuación de la recta de calibración obtenida.
Ahora procedemos a graficar los siguientes sistemas [M] y [pm]

Gráfico II. Absorbancia vs concentración [M]

Gráfico II. Absorbancia vs concentración [ppm]

Una vez obtenida la regresión lineal para cada caso, podemos cuantificar los
problemas para cada sistema.

● Concentración M.
Para F problema.
De la regresión: y=42.2x+0.0368
Se obtiene que: C problema=(0.299-0.0368)/42.2
C. problema= 6.2132x10-3

Para Problema 1
.De la regresión: y=42.2x+0.0368
Se obtiene que: C problema=(0.165-0.0368)/42.2
C. problema= 3.03x10-3

Para Problema 2
.De la regresión: y=42.2x+0.0368
Se obtiene que: C problema=(0.237-0.0368)/42.2
C. problema= 4.7440x10-3

● Concentración ppm.
Para F problema.
De la regresión: y=0.0007x+0.0368
Se obtiene que: C problema=(0.299-0.0368)/0.0007
C. problema= 374.57
 Para problema 1.
De la regresión: y=0.0007x+0.0368
Se obtiene que: C problema=(0.165-.0368)/0.0007
C. problema= 183.14

Para problema 2.
De la regresión: y=0.0007x+0.0368
Se obtiene que: C problema=(0.237-0.0368)/0.0007
C. problema= 286

Tabla 3. Resultados obtenidos para las lecturas de curva de calibración de cobre por
espectrofotometría UV-Vis

Ahora procedemos a graficar los siguientes sistemas [M] y [pm]

Gráfico III. Absorbancia vs concentración [M]

Gráfico III. Absorbancia vs concentración [ppm]

Una vez obtenida la regresión lineal para cada caso, podemos cuantificar los
problemas para cada sistema.

● Concentración M.
Para F problema.
De la regresión: y=40.68x+0.043
Se obtiene que: C problema=(0.2753-0.043)/40.68
C. problema= 5.7104x10-3
 Para Problema 1
.De la regresión: y=40.68x+0.043
Se obtiene que: C problema=(0.1649-0.043)/40.68
C. problema= 2.9965x10-3

Para Problema 2
.De la regresión: y=40.68x+0.043
Se obtiene que: C problema=(0.2308-0.043)/40.68
C. problema= 4.6165x10-3

● Concentración ppm.
Para F problema.
De la regresión: y=0.0006x+0.043
Se obtiene que: C problema=(0.2753-0.043)/0.0006
C. problema= 367.16

Para problema 1.
De la regresión: y=0.0006x+0.043
Se obtiene que: C problema=(0.1649-0.043)/0.0006
C. problema= 203.166

Para problema 2.
De la regresión: y=0.0006x+0.043
Se obtiene que: C problema=(0.2308-0.043)/0.0006
C. problema= 313

Tabla 4.- Resultados obtenidos para las lecturas de curva de calibración de cobre
por espectrofotometría de luz visible

Tabla 5.- Resultados obtenidos para las lecturas de curva de calibración de cobre
por espectrofotometría UV.-Vis.
La espectrofotometría de absorción se da tanto a nivel atómico cómo molecular,
ambas poseen el mismo principio físico químico pero los espectros son muy
diferentes, debido a que se relacionan de manera directa con la especie química del
analito al momento de obtener el espectro. Ambos equipos, espectrofotómetro de
absorción molecular y de absorción atómica poseen en general los mismos
componentes, pero hay diferencias, sobretodo en la parte donde la muestra se pone
en contacto con la fuente de radiación, pero también en cuanto a su aplicación y en
el tratamiento de la muestra antes de ser analizada.

CONCLUSIONES.
● Se estudió el montaje y manejo de un espectrofotómetro de absorción
molecular.
● Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de
energía interna.
● La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución.
● Gracias a un espectrofotómetro de absorción molecular se puede determinar
la cantidad de concentración en una solución de algún compuesto utilizando
las fórmulas ya mencionadas;, ayudar en la determinación de estructuras
moleculares; la identificación de unidades estructurales específicas, ya que
estas tienen distintos tipos de absorbancia (grupos funcionales o isomerías);
determinar constantes de disociación de indicadores ácido-base;
estandarización de colores de diversos materiales, como plásticos y pinturas.
● Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber
y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de
las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante
dieléctrica).
● La diferencia principal entre las técnicas fue la fuente de radiación emitida.
● El fundamento de la espectroscopia se debe a la capacidad de las moléculas
para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV
visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede
absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura
atómica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica,
constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un valioso
instrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas.
BIBLIOGRAFÍA
● Skoog/ West, Química Analítica, editorial Mc Graw Hill, pag. 451-453
● Willard H., Métodos Instrumentales de Análisis, Editorial Grupo Editorial
Iberoamérica., pag. 115, 166,167
● Díaz, A. (s. f.). Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas. Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular. Recuperado 18 de junio de 2021, de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMET
RIA.pdf
● PRÁCTICA 4. ESPECTROFOTOMETRÍA. (s. f.). FUNDAMENTOS DE
QUÍMICA. Recuperado 18 de junio de 2021, de
http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica%20clinica/apuntes%
20de%20espectrofotometria.pdf
● ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA Y VISIBLE. (s. f.). e. Recuperado
18 de junio de 2021, de
http://www.anmat.gob.ar/webanmat/mercosur/ACTA01-14/AGREGADO_XVI/
2-14/uni_XIV/Anexo_4__Espectrofotometria_UV_V2.pdf.