Instituto Tecnológico de Jiquilpan

Ing. Bioquímica.

Práctica no.2: Conocimiento del espectrofotómetro

Análisis Instrumental
Maestra:
Marcela Alessandrina Arteaga Herrera

Integrantes:

1.- Gómez Santos Lucy Daniela. 3.-Martínez Reyes Laura Guadalupe.

2.- González Mandujano Ana Lizeth. 4.-Mora Gutiérrez Yenifer

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Martes/15/03/22
Contenido
INTRUCCION: ......................................................................................................... 1
Objetivo: .................................................................................................................. 2
Metodología:............................................................................................................ 2
Cuestionario: ........................................................................................................... 3
Observaciones: ....................................................................................................... 4
Resultados: ............................................................................................................. 5
Conclusiones: .......................................................................................................... 5
Bibliografías:............................................................................................................ 6
INTRUCCION:

La espectroscopia UV-Visible estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV-

Visible de moléculas orgánicas e inorgánicas. La región visible, a la que es sensible
el ojo humano, se localiza entre los 380 y 780nm. U.V lejano → U.V cercano →
Visible 0.6 – 190nm 190 – 380nm 380 – 780nm. La absorción de la radiación
ultravioleta o visible por moléculas, ya sean orgánicas o inorgánicas, generalmente
se produce por la excitación de los electrones de enlace, por lo tanto, la longitud de
onda de los máximos de absorción se puede relacionar con los enlaces de las
especies absorbentes. Los métodos espectroscópicos se basan en la capacidad de
las sustancias de absorber (o emitir) radiación electromagnética. Éstos se pueden
emplear para determinar la concentración de un reactivo o producto durante una
reacción. El aparato detecta la cantidad de luz transmitida o absorbida a través de
la solución en la celda y la compara con la que se transmite o absorbe a través de
una solución de referencia denominada “blanco”. La transmitancia de la muestra se
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define como la relación de la radiación transmitida y la incidente (𝑇 = ). La
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disminución de la intensidad de la radiación depende de la concentración del
absorbente y de la longitud del camino recorrido por el haz. Estas relaciones se
recogen en la Ley de Lambert-Beer, la cual es el fundamento de la
espectrofotometría.

𝐴 = −𝑙𝑜𝑔10𝑇 = 𝜀 𝑏 c

Establece una relación lineal entre la absorbancia (A) y la concentración (c), donde:
 es la constante de proporcionalidad llamada coeficiente de absorción molar,
absortividad molar o coeficiente de extinción (M-1 cm-1). Es la característica de una
sustancia que nos dice cuánta luz absorbe a una longitud de onda determinada. b
es el paso óptico, anchura de la celda que contiene la muestra (cm). c es la
concentración molar de la especie (M) de la cual estamos midiendo la absorbancia.
La ley de Lambert-Beer se cumple para una radiación monocromática que atraviesa
una disolución diluida ( 0.01M), cuando la especie absorbente no participa en un
equilibrio que dependa de su concentración.

Todo espectrofotómetro cuenta con los siguientes elementos:

Fuente de luz → selector de longitud de onda (monocromador) → Celda → detector

→ escala de medida.

• Fuente de luz: un filamento de tungsteno que funciona mediante una fuente de

alimentación estabilizada proporcionando una radiación de intensidad constante el
tiempo suficiente para asegurar una buena reproducibilidad de las lecturas de
absorbancia.

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• Selector de longitud de onda: Se trata de una sencilla red de difracción, que
permite separar la longitud de onda. Tras seleccionar la longitud de onda la
radiación pasa a través de un controlador de luz, que consiste en una abertura en
forma de V que se introduce o saca del haz para controlar la intensidad de luz que
incide en la fotocelda.

• Celda: Que contiene a la solución, generalmente es de un material transparente

que no absorbe la luz. Su longitud y capacidad varía según el equipo y diseño, pero
el paso óptico es en la mayoría de los casos de 1 cm. Las hay de paredes cilíndricas
o planas.

• Detector: A éste llega la radiación tras pasar por un filtro y por la muestra. Se trata
de un fototubo de medida o transductor que recibe la señal de radiación
electromagnética y la convierte en una señal eléctrica de magnitud proporcional a
la intensidad de la radiación recibida. Este va acoplado a un sistema amplificador
que produzca o genere una señal eléctrica mucho mayor a la señal recibida.. Se
basa en el efecto fotoeléctrico de los metales que al irradiarlos generan electrones.
• Escala de medida: La señal eléctrica del detector una vez amplificada se registra
bien en una escala analógica o en una pantalla digital que proporcionan los valores
de Transmitancia y/o Absorbancia.

Objetivo:
Reconocimiento y funcionamiento de equipo.

Metodología:

1.- Dibujar el equipo

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2. Evite el uso de agentes limpiadores que sean abrasivos, corrosivos o que
produzcan coloración de las superficies. Por ningún motivo las limpie con un
escobillón.

3.- Enjuague las celdas cuando menos tres veces con pequeñas porciones de la
disolución de prueba antes de tomar la lectura. Evite usar solamente agua destilada,
ya que esto produce un efecto de dilución sobre la muestra a medir.

4.- Cuando introduzca la celda en el compartimento de muestras, limpie el tercio

inferior de la celda con papel especial para lente (nunca use servilletas, pañuelos o
la bata), y asegúrese que las paredes no muestren fibrillas adheridas o manchas.

5.- Evite producir rayaduras en las superficies de las celdas, colóquelas dentro del
porta celdas con la línea indicadora alineada con su respectiva guía.

6.- Mantenga cerrada la tapa del compartimento de muestras mientras realiza

las mediciones, ya que esto restringe la entrada de luz parásita.

7.- Al finalizar todas las mediciones, enjuague con el disolvente puro. Si las celdas
están muy sucias o si presentan depósitos difíciles de remover, use una mezcla de
ácido clorhídrico 3 Ny alcohol etílico absoluto 1:1. Aplique un último enjuague con
etanol o metanol grado espectroscópico y deje secar al aire.

Cuestionario:

CUESTIONARIO DE ESPECTROFOTOMETRÍA

1.- Definir que es la espectroscopía y cuál es su fundamento.

Es la rama de la física y la química que estudia la interacción entre la materia y la

luz o cualquier radiación electromagnética, como las ondas de radio.

2.- Definir que es la espectrofotometría y en que se basa.

Es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto

en solución se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal dela concentración.

3.- Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromática

a través de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida o transmitida
por la muestra.

Espectrofotómetro.

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4.- Que es un fotocolorímetro y de que consta.

Es un instrumento usado en la química para determinar la concentración de

sustancias disueltas en líquidos o sólidos mientras sean transparentes a la luz
visible, ultravioleta o infrarroja, midiendo y comparando sus colores, consta de un
sistema lumínico para iluminar las muestras y se mide con un sistema electrónico la
cantidad de luz que pasa.

5.- Defina transmitancia.

Se define como la cantidad de energía que atraviesa un cuerpo en determinada

cantidad de tiempo

6.- A que se le llama absorbancia.

Es cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslúcido, una parte de esta luz es
absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo.

7.- Mencione los principales componentes de un espectrofotómetro

Fuente luminosa, sistema monocromador, celdas o cubetas, muestra, sistema

lector.

8.- Mencione los tipos de lámparas utilizadas en espectrofotometría

Lampara de wolframio también llamado tungsteno lampara de arco de xenón y

lampara de deuterio que es utilizada en los laboratorios atómicos, lámparas de
vapores de mercurio

9.- Mencione el tipo de lámpara que produce un espectro continuo en la región

ultravioleta entre 220-360 nm.

deuterio.

10.- Defina que es un fotón

R: partícula mínima de energía luminosa o de otra energía electromagnética que se

produce, se transmite y se absorbe, la luz es energía que se transmite por medio de
fotones en forma de ondas electromagnéticas.

Observaciones:

En la práctica realizada se observó el funcionamiento del fotómetro, desde como

prenderlo hasta tres de sus funciones. También visualizamos que el fotómetro
actualizado cambia solo de lentes y nos necesario cambiarlos manualmente como
el que anteriormente se utilizaba. Ambos son precisos en sus resultados solo que

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uno es más complejo que otro, pero los cumplen su finalidad medir la longitud de
onda.

Resultados:

Al espectrofotómetro le conectamos a la red de energía mediante su parte posterior

que debe ser de 110 voltios, también en la parte posterior tiene una opción para
encendido y apagado.

Luego vemos un posicionador de muestras, el cual tiene la capacidad para poner 5

de ellas y también tenemos celdas de cuarzo transparente, siendo estas las que
pondremos dentro de dicho posicionador, es a través de esta celda por donde pasan
los rayos de luz (tener en cuenta de poner la parte transparente por dónde pasa la
luz) de aproximadamente 2 mm de ancho por 7.5 de largo. El espectrofotómetro
tiene una función de auto almacenamiento, si no guardamos los resultados.
También existen celdas de boluretano (ósea pasta), pero estas tienen más
restricción, ellas van de 340 a 800nm, a diferencia de las celdas de cuarzo que van
de 360 a 1100 nm Algo importante a recordar es que el espectrofotómetro fue
diseñado con los principios de Lambert y Beer, que son los últimos modelos de la
física cuánticas ora y USB, así como también lo tiene en la parte frontal

Conclusiones:

Gómez Santos Lucy Daniela:

En conclusión, nos dimos cuenta de la importancia de la precisión en las muestras

en tanto a ajustar de acuerdo al blanco, así como lo importante de saber el manejo
correcto de todas las funciones para tener mejores resultados.

González Mandujano Ana Lizeth:

Gracias a esta práctica y a la teoría vista en clase aprendimos el uso y manejo

correcto del espectrofotómetro ya que es de suma importancia dentro de esta
materia ya que a lo largo de ella este va a ser un equipo que vamos a estar utilizando
con mucha frecuencia.

Martínez Reyes Laura Guadalupe:

Para concluir, considero que el uso del espectrofotómetro es fundamental dentro de

esta y otras asignaturas por lo que se deben conocer bien los pasos a utilizar dicho
equipo, pues puede averiarse por mal uso o manejo de este.

Mora Gutiérrez Yenifer:

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Concluimos que para usar el espectrofotómetro en pruebas de laboratorio primero
debemos calibrar nuestro equipo, luego que vemos nuestro factor, enceramos el
equipo utilizando una cubeta con agua que introducimos en ella, para después
proceder a colocar nuestra muestra en otra cubeta para meter en el
espectrofotómetro y obtener nuestro resultado.

También conocimos dos leyes muy importantes las cuales son la ley de Lambert y
la ley de Beer, la primera nos decía que la concentración del soluto está en relación
al espesor del medio y la segunda, que la absorbancia viene a tener relación directa
con la concentración del
colorante.
Y, por último, para la obtención del espectro de absorción utilizamos el
espectrofotómetro y allí vamos a determinar el pico de absorción de una
sustancia, es decir cuál será su mayor absorbancia, en donde encontramos una
proporción, es decir a mayor absorbancia, habrá menor tramitación; y a menor
absorbancia habrá mayor tramitación.

Bibliografías:

https://www.inta.es/ExoMarsRaman/es/instrumento-rls/

https://www.celyontecnica.es/noticias/2015-05-21/48/medicion-de-radiacion-
dispersa-con-una-sola-mano

https://shopdelta.eu/atenuacion-de-la-fibra-optica_l6_aid811.html