UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y ALIMENTARIAS

Ingeniería de Alimentos – Medellín
Análisis Instrumental – Actividad en casa No. 2.

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Fluorescencia – Atómica – Polarimetría – Refractómetria

L.3.1. Principios de Análisis Instrumental - 15A.4 “…la fluorescencia rara vez

es consecuencia de la absorción de radiación ultravioleta de longitud de onda
menor a 250 nm, porque tal radiación es suficientemente energética como para
desactivar los estados excitados por pre disociación o disociación. Por ejemplo,
una radiación de 200 nm corresponde a alrededor de 140 kcal/mol. La mayor parte
de las moléculas tienen por lo menos algunos enlaces que se pueden romper con
energías de esta magnitud. Rara vez se observa fluorescencia debida a
transiciones σ* -> σ. En cambio, la Fluorescencia se asocia con las transiciones
menos energéticos ¶* -> ¶ y ¶* ->n. Por lo que se refiere a la mayoría de los
compuestos fluorescentes, la radiación se produce por una transición ¶* ->n o ¶* -
> ¶ dependiendo de cuál de ellas es la menos energética…”

L.3.2. Fundamentos de Química Analítica - 28C.2 Los resultados cuantitativos

en la espectrometría de emisión atómica normalmente se basan en el método de
los estándares externos, que consiste en: calibración de instrumentos y
procedimientos cuando no hay efectos de interferencia de los componentes
de la matriz en la disolución del analito (véase la sección 8D.2). Por muchas
razones preferimos las curvas de calibración que son lineales o que al menos
siguen una relación predecible. A altas concentraciones, la principal causa de la
no linealidad cuando se utilizan transiciones de resonancia, que consiste en:
_____________________________, es la autoabsorción, que consiste en:
cuando una radiación procedente de la llama atraviesa zonas exteriores más
frías, sufre absorción de energía por parte de los átomos de la misma
especie que origina a radiación.

En la emisión de flama, la autoabsorción se observa normalmente en disoluciones

con concentraciones entre 10 y 100 mg/mL. Por lo general, en los plasmas la
autoabsorción no se presenta hasta que las concentraciones son mayores. Esto
es debido a que la longitud de la trayectoria óptica es menor para la absorción en
el plasma que en la flama. A bajas concentraciones, la ionización del analito puede
causar la no linealidad en las curvas de calibración cuando se utilizan líneas
atómicas. Con las fuentes de ICP y DCP, las altas concentraciones de electrones
en el plasma tienden a actuar como un amortiguador ante los cambios en el grado
de ionización del analito con la concentración. Cuando las líneas de emisión iónica
son utilizadas con el ICP, las no linealidades causadas por la ionización posterior
son pocas porque eliminar un segundo electrón es más difícil que remover el
primer electrón. Los cambios en las características del atomizador, como la
velocidad de flujo, temperaturas y eficiencia, con la concentración del analito
pueden ser otra causa de la no linealidad. Las curvas de calibración de la emisión
de flama son a menudo lineales alrededor de dos o tres decenas en la
concentración, mientras las de ICP y DCP son lineales de cuatro a cinco decenas
en concentración.

Q.3.1. Polarimetría. La Polarimetría sirve para el análisis de sustancias

ópticamente activas, específicamente para la determinación de los isómeros
ópticos d (+) y l (-), que son imágenes especulares entre sí, como en la Figura
No. 1. Especular viene de “espejo” o imagen que se refleja, lo que significa que
uno de los enantiomeros es objeto y el otro enantiomero es la imagen reflejada
de este en el espejo, o viceversa. Es decir, que cuando te miras en el espejo
eres + o – y tu imagen es – o +. ¿La imagen en el espejo sos vos o es otro?
Ayúdate del par enantiomérico del ácido Láctico, para responder esta pregunta.

Q.3.2. Refractómetria. En una escena de magia, el mago presenta una cubeta

de cristal llena de agua. Luego presenta una hermosa pieza de diamante que
ilumina con una linterna para que el público observe como brilla, como la luz se
descompone en iridiscentes colores, que inundan el recinto. Cubre la cubeta con
un tercipelo negro e introduce el diamante en la cubeta, retira el terciopelo,
mientras la gente asombrada, observa que el diamante ha desaparecido. ¿Qué
crees que ocurrió?

3.1. Video Fluorescencia: https://www.youtube.com/watch?v=zNgyHy5f_oI&t=74s

a. Objetivo Determinación del contenido en quinina de un agua tónica

mediante fluorescencia molecular
b. Muestra quinina de un agua tónica Analito quinina matriz_______________
c. Una interacción radiación – sustancia no energética es la reflexión, refracción,
dispersión , mientras una energética es la absorción, emisión
(luminiscencia) .
d. De qué material es la cubeta empleada para analizar la muestra cuarzo
e. El agua tónica es transparente y cuando se coloca en el portamuestra del
equipo emite luz de color azul.
f. Cuál es la long de onda de excitación 322 nm Cual la de emisión del analito. De
dónde se seleccionan estas long de onda 453 nm.
g. Qué métodos se emplean para cuantificar método de adiciones patrón y
___________.
3.2. Quimioluminiscencia: https://www.youtube.com/watch?v=ZALMJMUl7vk&t=74s
a. En las reacciones Químicas la energía se puede desprender como exotérmica y
endotérmica .
b. La quimioluminiscencia trata de las reacciones en las que se desprende energía en
forma de luz.
c. En la bioluminiscencia las bacterias, moluscos, plantas tienen unas proteínas que
convierten la energía en luz.
d. Estas proteínas son las luciferinas . Todas emplean oxígeno molecular.
e. En la quimioluminiscencia la molécula excitada emite luz como las luciérnagas y el
_____________. Pero hay moléculas excitadas que transfieren la luz a otras
sustancias para que emitan la luz como el luminol
f. El Rendimiento Cuántico del Luminol y del LCPO es < 1 % mientras las luciérnagas
tienen un Rendimiento Cuántico de >40 %.

3.3. Video Espectrofotometría Atómica: https://www.youtube.com/watch?

v=W3G5_HsLpoo
a. Muestra
R/ Cobre en aguas residuales.

b. Técnica
R/ Espectrofotometría de absorción atómica de llama.

c. ¿Con qué muestra se utiliza atomizador de llama y con cuál atomizador de

Horno de Grafito y por qué?
R/ El atomizador de llama se utilizó para la muestra de cobre ya que la llama los atomiza,
dejando libre el cobre y para aguas potable se usa horno de grafito para conseguir límites
de detección más bajos (ppm)

d. ¿Qué se grafica en la curva de calibración?

R/ Concentración Vs Absorbancia

e. ¿Qué r se necesita?
R/ Mínimo 0,999

3.4. Video Polarimetría: https://www.youtube.com/watch?v=RU2-mSJBqcQ

a. Concentración de la solución stock y los estándares
R/ 0,1 g/mL Concentración inicial. 0,05 g/ mL y 0,8 g/Ml a partir de la inicial

b. Ecuación de la curva de calibración

R/ y= 50,371x + 0,0048
 c. Cuál es el objetivo de la curva de calibración y cómo se logra
R/ La ecuación de la recta se usa para sustancias desconocidas a diferentes
concentraciones y con esta ecuación la puedo hacer equiparable a la ecuación del
polarímetro que es: œ= [œ] C.L; entonces œ en este caso seria y y [œ] es la concentración
de la sustancia desconocida.

3.5. Video Refractómetria: https://www.youtube.com/watch?v=3qw_Xk-q1Mk

a. Objetivo de la practica
R/ Calcular el índice de madurez en un cítrico.

b. ¿Qué son los °Brix y cómo se relaciona con el índice de refracción?

R/ Los grados brix nos sirven para identificar la cantidad de solidos disueltos en un líquido se
usa especialmente para medir la azúcar disuelta, el índice de refracción se basa en un
principio físico que es la refracción de la luz, este suele ofrecer valores en grados brix ya que
este tipo de unidad determina la cantidad de azúcar presente en una sustancia.