UNIVERSIDAD LATINA DE PANAMA

FACULTAD DE CIENCIAS DR. WILLIAM C. GORGAS

CARRERA DE TECNOLOGIA MEDICA
GUIA DE LABORATORIO DE QUIMICA CLINICA I No.1

Profesora: Lic. Julissa De León Vergara.

Uso del Espectrofotómetro

Objetivos:
1. Aprender para qué sirve y cómo se utiliza un espectrofotómetro.
2. Identificar las diferentes partes que lo componen.

Introducción:
Los espectrofotómetros son equipos ópticos que permiten evaluar la luz que es absorbida,
transmitida o reflejada por un material –sólido o líquido- para cada longitud de onda.
Estos equipos se componen de un sistema de iluminación, un monocromador y un
detector. 

a. Sistema de iluminación
El sistema de iluminación suele disponer de una fuente de hidrógeno o deuterio para la
zona del espectro ultravioleta y una de tungsteno para la zona del espectro visible. En el
caso de los espectrofotómetros UV-VIS cubren un rango de 200nm a 900nm, que incluye
la zona ultravioleta, visible y algunas regiones del infrarrojo.
b. Monocromador
Por su parte, el monocromador permite separar el espectro de iluminación y proporcionar
un haz de energía a una longitud de onda concreta. Por lo que, si la longitud de onda es
crítica o afecta a las medidas que se realizan, es fundamental calibrar esta parte del
equipo, o lo que es lo mismo, realizar una calibración en longitud de onda, que
comprobará la diferencia entre la longitud de onda que mide el equipo y la del patrón de
referencia empleado.
 c. Detector
Finalmente, el detector se encarga de transformar la señal que recibe (fotones) y
convertirla en señal eléctrica. De modo que, en función de la intensidad de esta señal,
puede ser registrada por un sistema que proporciona los valores numéricos de
transmitancia y absorbancia.
La calibración del detector, también llamada de escala de absorbancia y transmitancia, es
fundamental para conocer la desviación del equipo en los valores de estas magnitudes a
cada longitud de onda. La exactitud de estos valores es crítica, puesto que permiten
comparar espectros de diferentes materiales o disoluciones con diferentes
concentraciones. En concreto, la calibración en absorbancia se realiza a todas las
longitudes de onda necesaria. Para calibrar esta escala, suelen realizarse medidas de
diferentes valores de absorbancia para cada longitud de onda. Posteriormente se evalúa la
diferencia entre el valor medido por el equipo y el valor certificado de los patrones
empleados.
¿Qué es la transmitancia?

La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y

transmitida al pasar por la muestra.
¿Qué es la absorbancia?

Diferencia entre la luz emitida por la fuente (lo) y la luz que llega al fotodetector
(ls).

Ley de Lambert-Beer:

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su

concentración.
Espectrofotómetro
Definiciones clave:

1. Patrón: es una preparación que contiene una concentración conocida de un

elemento o sustancia específica.
2. Muestra: parte representativa de la materia o espécimen objeto de análisis.
3. Blanco: es la solución en la cual están todos los componentes menos el que
desencadena la reacción coloreada.
4. Curva de calibración: se obtiene la curva de calibración midiendo la
absorbancia de una serie de soluciones de concentraciones conocidas de una
misma sustancia.
 Quiz de Laboratorio No. 1
Integrantes del grupo:
___________________________________________
____________________________________________
____________________________________________
Fecha: _____________
Calificación: _________________
Observaciones: ___________________

Indicaciones Generales:
1. Investigar cómo se ajusta un espectrofotómetro convencional antes de ser
utilizado.
2. El siguiente inserto es para la determinación de glucosa. Esquematice y explique de
forma clara cómo se realiza el paso a paso de esta prueba, desde el ajuste del
espectrofotómetro hasta la realización de los cálculos de concentración. Tiene
libertad de utilizar dibujos, palabras, colores, etc.