UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE

CHIRIQUÍ

FACULTAD DE CIENCIAS
NATURALES Y EXACTAS

ESCUELA DE BIOLOGÍA

LIC. EN MICROBIOLOGÍA

ESCUELA DE QUÍMICA

ASIGNATURA DE BIOQUÍMICA

QM 230

INFORME DE LABORATORIO N°2

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
AMORTIGUADORAS

INTEGRANTES:

CEIDA VILLARREAL, 4-812-2292

ASHLEY ARAUZ, 4-810-491

PROFESORA:

ARIADNA BATISTA

II SEMESTRE DE 2021

FECHA DE ENTREGA

18/11/2021

1
 INFORME DE LABORATORIO 2

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES AMORTIGUADORAS

OBJETIVOS estudiante el concepto de lo que son

➢ Preparar soluciones soluciones buffer, además de ayudar a
amortiguadoras. los estudiantes a familiarizarse con la
➢ Determinar el pH de las resistencia que estas soluciones
soluciones preparadas. poseen en cuanto al pH.
➢ Establecer la relación entre el Así mismo, se puede obtener una
pH y un amortiguador. solución reguladora haciendo
➢ Realizar cálculos teóricos para reaccionar parcialmente por
predecir el pH de una solución (neutralización) un ácido débil con una
amortiguadora. base fuerte. o un ácido fuerte con una
INTRODUCCIÓN base débil. Una vez formada la
Muchas de las reacciones químicas solución reguladora, el pH vario poco
que se producen en solución acuosa por el agregado de pequeñas
necesitan que el pH del sistema se cantidades de ácido fuerte o de una
mantenga constante, para evitar que base fuerte, y pierde su capacidad
ocurran otras reacciones no reguladora por el agregado de agua
deseadas. Las soluciones (disolución). La disolución no cambia
""reguladoras"" o Buffer son capaces el pH de la solución Buffer, pero
de mantener de acidez o basicidad de disminuye considerablemente su
un sistema dentro de un intervalo capacidad reguladora.
reducido de pH, por lo cual tienen En general puede decirse que esta
múltiples aplicaciones, tanto en la práctica tiene como propósito la
industria como en los laboratorios. comprensión de las adiciones de
Esta práctica de laboratorio tiene ácidos y sales a estas soluciones.
como propósito reforzar en el

TABLA 1: AMORTIGUADORES USADOS EN INVESTIGACIONES BIOLÓGICAS.

2
 Ácido o base Pka pKa pKa

Ácido fosfórico 2.1 7.2 12.3

Ácido cítrico 3.1 4.8 5.4

Ácido carbónico 6.4 10.3 -

Glicil glicina 3.1 8.1 -

Ácido Acético 4.8 - -

Tris 8.3 - -
Hepes 7.6 - -

MATERIALES
Tabal 1

Volumétricos 100 mL

Vasos químicos

Balanza

3
 Potenciómetro

Tabla 2.
REACTIVOS

Reactivos Toxicidad Imagen

El hidróxido de sodio es sumamente

Hidróxido de
corrosivo y puede causar
sodio NaOH
quemaduras graves en todo tejido con
el cual entra en contacto.
El polvo causa irritación del tracto
respiratorio. Los síntomas pueden
Acetato de sodio
incluir tos, dolor de garganta,
dificultad para respirar y dolor en el
pecho.
La inhalación de ácido acético puede
irritar el pulmón, causando tos o falta
Ácido acético
de aire.

Generalmente no es muy tóxico en

pequeñas cantidades. Sin embargo,
Carbonato
si una persona ingiere cantidades
grandes, puede presentar síntomas.

El bicarbonato sódico no se considera

tóxico cuando se utiliza en la cocina y
Bicarbonato
la repostería.

4
 Puede ser nocivo en caso de
ácido cítrico
ingestión. Provoca irritación cutánea,
provoca lesiones oculares graves.
Puede irritar las vías respiratorias.
En caso de inhalación puede
presentar irritación en las mucosas. Al
citrato de sodio
contacto con la piel y ojos puede
causar una leve irritación. La
ingestión de grandes cantidades
puede provocar desórdenes
gastrointestinales.
Toxicidad específica de órganos
blanco (exposición única); irritación
Fosfato dibásico
de sodio de las vías respiratorias, (Categoría
3). Provoca irritación cutánea.
Provoca irritación ocular grave. Puede
irritar las vías respiratorias.

5
 PROCEDIMIENTO

Procedimiento

A- Determine los Amortigua B-Prepare cada solución

gramos a pesar de cada dor de por separado (rotulela, sal,
uno de los componentes fosfato (0.2 ácido).
del amortiguador. M)

c- Mezcle los
componentes y determine
el pH.

Determine
experimental (suelo, yogurt, limón,
mente, el pH naranja, vinagre, leche de
de diversas magnesia).
soluciones
muestras

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RESULTADOS
A. AMORTIGUADOR DE FOSFATO

Fig.1. pH de Fosfato Fig.2. pH de Fosfato ácido de

dibasico. sodio

Fig.3. pH final del amortiguador.

7
NaH2PO4 H2O; PM: 138g/mol

Na2HPO4. 2H2O; PM: 178g/mol

B. Cálculos para el amortiguador de 100 mL.

A. > M= g/PM. L
𝑔
[0 ⋅ 2𝑀] =
138𝑔
( 𝑚𝑜𝑙 ) ( 0.1𝐿)

g: (0.2 M) (138g/mol) (0.1L)

g: 2.76 g

B. > M=g/PM. L

𝑔
[0 ⋅ 2𝑀] =
178𝑔
( 𝑚𝑜𝑙 ) ( 0.1𝐿)

g: (0.2 M) (178g/mol) (0.1L)

g: 3.56 g

Tabla de resultados

NaH2PO4 H2O: pH de 5,16

Na2HPO4. 2H2O: pH de 8.36

𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + log(𝑏𝑎𝑠𝑒/á𝑐𝑖𝑑𝑜)
𝑝𝐻 = 4.8 + log(0.2/0.2)
𝑝𝐻 = 5.8
Amortiguador Buffer es (Sal)(A+B): 7.1

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DISCUSIÓN
Dentro de las reacciones químicas, tenemos soluciones acuosas que necesitan del
pH para que se mantengan y así poder evitar que pasen reacciones no deseadas.
Como parte de las soluciones reguladoras que son capaces de poder mantener la
acidez y la basicidad dentro del sistema para el pH.
Por lo que en la preparación del amortiguador de fosfato dibásico 0,2M es distintos
al PH o el fosfato monobásico, En algunos de los resultados de las muestras
podemos observar cómo se da la diferencia entre el pH calculado y el pH obtenido
por el pH metro, ya que, a partir del error calculado, todo ello provisto por las
falencias en cuanto a la manipulación y preparación de las soluciones buffer lo que
produjo una alteración en su pH teórico o real.

CONCLUSIONES
El pH de las disoluciones ante la adición de un ácido o una base fuerte. Por lo que
es para impedir las variaciones del pH que tiene la capacidad de ver los cambios
cuando agregamos cantidades menores.
Las soluciones en dichas sustancias los cambios del pH que se muestran en se
soluciones amortiguadoras, que por otra parte debemos saber que si se adiciona
agua el cambio del pH va hacer mínimo. Es importante tener en cuenta la clase de
sustancia con la que se está realizando las experiencias ya que dependiendo de la
clasificación en la que se encuentre en ácido o base.
Una de las disoluciones amortiguadora, es una que tiene como capacidad de resistir
los cambios del pH, por lo que al componerse de ácidos y básicos el amortiguador
no debe consumirse del uno al otro en una reacción de neutralización. La acción
reguladora de un tampón se debe a la presencia de un par ácido-base conjugados
débiles, que puede actuar como fuente o sumidero de protones.

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CUESTIONARIO
I Parte- Preparación de solución y conceptos teóricos
1. ¿Cuál es el pH de una mezcla de 5mL de acetato de sodio 0.1 M y 4 mL de
ácido acético molar?
R/. 𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + log(𝑏𝑎𝑠𝑒/á𝑐𝑖𝑑𝑜)
𝑝𝐻 = 4.8 + log(0.1/0.1)
𝑝𝐻 = 4.8

2. Cuál es el cambio que ocurre en el pH al agregar a la mezcla anterior 1.0 mL de

HCI 0.1M
R/. 𝑝𝐻 = 𝑝𝑘
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘 − 0.1
𝑝𝐻 = 4.8 − 0.1
𝑝𝐻 = 4.7
3. Realice cálculos para obtener el pH teórico (X) de las soluciones dadas, en el
procedimiento 1.
R/.
X ML DE HAC 92 76 7
(100 ML -XML) DE ACETATO 8 24 93
DE SODIO
pH TEÓRICO 3.6 𝑋1 𝑋2
𝑋1 :
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + log(𝑏𝑎𝑠𝑒/á𝑐𝑖𝑑𝑜)
24 ∗ 10 − 3 ∗ 0.2
𝑝𝐻 = 4.8 + log( )
76 ∗ 10 − 3 ∗ 0.2
𝑝𝐻 = 4.30
𝑋2 :
𝑝𝐻 = 𝑝𝑘𝑎 + log(𝑏𝑎𝑠𝑒/á𝑐𝑖𝑑𝑜)
93 ∗ 10 − 3 ∗ 0.2
𝑝𝐻 = 4.8 + log( )
7 ∗ 10 − 3 ∗ 0.2
𝑝𝐻 = 5.92

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4. Proponer una aplicación de la solución preparada para regular pH
La aplicación para una solución para regular el pH usaremos la Ecuación de
Henderson - Hasselbach o Ecuación Buffer.
Que consideremos un ácido monoprótico débil: HA, de constante Ka, con una
concentración Ca, y una sal de su base conjugada NaA de concentración Cb.
Dado que la especie química A está presente en la solución como el anión A -
Y como el ácido HA.
II Parte- Componentes y mediciones con el pH metro
Apóyese además de la clase con los siguientes videos
https://www.youtube.com/watch?v=aH6Lydh5MAU
https://www.youtube.com/watch?v=NPTrxvt146A
1. Indiqué, ¿cuál es la importancia de la calibración del pH metro?
La calibración del medidor de pH asegura mediciones fehacientes, para saber si
la disolución que se pretende medir es ácida, o alcalina.
2. ¿Qué soluciones amortiguadoras emplearía principalmente al calibrar y
trabajar el amortiguador de ácido acético?
Mantener el pH constante es vital para el correcto desarrollo de las reacciones
químicas y bioquímicas que tienen lugar tanto en los seres vivos como, a nivel
experimental, en el laboratorio. Los amortiguadores (también llamados
disoluciones amortiguadoras, sistemas tampón o buffers) son aquellas
disoluciones cuya concentración de protones apenas varía al añadir ácidos o
bases fuerte. Un ácido débil y una sal del mismo ácido con una base fuerte ácido
acético y acetato sódico

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Cambio de pH tras añadir ácido/base Cambio de pH tras añadir ácido/base
al agua a una disolución amortiguadora

3. ¿Con qué solución amortiguadora debe empezara colocar para hacer la

calibración del pH metro? ¿por qué?
La calibración es una de las encargadas de mantener las lecturas precisas y de
confianza. Por eso, el acostumbrase a calibrar un electrodo de pH de manera
frecuente es el mejor hábito para conseguir siempre resultados óptimos.

4. ¿Qué ocurre durante la medición, a nivel de la membrana del pH metro?

El pH-metro se realiza la medida del pH por un método potenciométrico. Este
método se basa en el hecho de que entre dos disoluciones con distinta [H+] se
establece una diferencia de potencial. Esta diferencia de potencial determina
que cuando las dos disoluciones se ponen en contacto se produzca un flujo de
H+, o, en otras palabras, una corriente eléctrica. En la práctica, la medida del pH
es relativa, ya que no se determina directamente la concentración de H+, sino
que se compara el pH de una muestra con el de una disolución patrón de pH
conocido. Para ello se utiliza un electrodo de pH. Cuando el electrodo entra en
contacto con la disolución se establece un potencial a través de la membrana de
vidrio que recubre el electrodo. Este potencial varía según el pH. Para determinar
el valor del pH se necesita un electrodo de referencia, cuyo potencial no varía.
El electrodo de referencia puede ser externo o puede estar integrado en el
electrodo de pH.

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5. interfiere la T en la determinación del pH?
La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura.
Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reacción debido
a la temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad catalítica debida
a la desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece rápidamente
hasta anularse. Las sustancias que favorecen la forma T y disminuyen la
actividad enzimática son los moduladores negativos. Si estos moduladores
actúan en lugares distintos del centro activo del enzima se llaman inhibidores
alostéricos.
6. Indique los pasos a seguir para preparar un amortiguador.
▪ Seleccionar una receta de la base de datos
▪ Recalcular las cantidades de las recetas conforme al volumen de solución
tampón necesario
▪ Pesares compuestos en el recipiente
▪ Disolver los compuestos en un disolvente adecuado (normalmente, agua)
▪ Comprobar y ajustar el valor del pH mediante un pH metro
▪ Llenar la solución hasta el volumen necesario
▪ Transferir a una botella de almacenamiento y etiquetar
▪ Documentar los resultados

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BIBLIOGRAFÍA
González J. (S.F). Cursos de Biomoléculas: pH Metro. Recuperado el 9 de
septiembre del 2021 del URL:
http://www.ehu.eus/biomoleculas/ph/medida.htm
Toledo, M. (2021). Preparación de soluciones tampón: soluciones, cálculo y
resolución de problemas frecuentes.
https://www.mt.com/mx/es/home/applications/Laboratory_weighing/buffer-
preparation.html#overviewaf
Pablo. (S.F). Zwei Ingeniería: Calibración de un Potenciometro para pH.
Recuperado 4 de noviembre del 2021 del URL: https://zwei-
ingenieria.com.ar/calibracion-de-ph.php
Medido-pH (2021). Hannainst.es: Instrumentos de medida y análisis. Recuperado 4
de noviembre del 2021 del URL: https://www.hannainst.es/blog/1541/Que-
tipo-de-soluci%C3%B3n-de-calibracion-debo-usar
El equipo de marketing. (2016). Caracteristicas de un pHmetro y diferencias con las
tiras colorimétricas. Recuperado 4 de noviembre del 2021 del URL:
https://www.oz-peru.com/caracteristicas-phmetro-diferencias-las-tiras-
colorimetricas/
Medidor de pH. (2019). Medidordeph.comblog: Como afecta la temperatura en las
mediciones de Ph medidordepH.com. Recuperado 4 de noviembre del 2021
del URL: https://medidordeph.com/blog/2019/11/como-afecta-la-
temperatura-en-las-mediciones-de-ph/
J. González M. (2016) Disoluciones Amortiguadoras: Recuperado 4 de noviembre
del 2021 del URL: http://www.ehu.eus/biomoleculas/buffers/buffer.htm

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 ANEXOS

Fig.1. Solución de NaH2PO4 H2O; Fig.2. añadiendo 50 mL de agua

PM y solución Na2HPO4. 2H2O a cada solución.

pH:
- Leche magnesia: 9.39
- Leche de vaca: 6.7
- Jugo: 4.32
- Suelo: 6.69
- Leche: 7.02 neutra
- Agua de mar: 7.02 neutra
- Jugo de limón: 2.97
- Vinagre de manzana: 2.99

Fig.4. pH de la Naranja
Fig.3. pH de la leche

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