Duplicación del ADN

Profesor: Marcos Campolongo

Materia: Bases biológicas y antropológicas de la vida

Módulo: Biología celular

Fundación Barceló – Facultad de Medicina

 Dogma de la biología molecular

FUNCIONES DEL ADN

1) ALMACENAMIENTO DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA

2) EXPRESIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
3) TRANSMISIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
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 Dogma de la biología molecular

FUNCIONES DEL ADN

1) ALMACENAMIENTO DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA

2) EXPRESIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
3) TRANSMISIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
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 Transmisión de la información genética
El ciclo celular es el nombre con el que se conoce el proceso mediante
el cual las células se duplican y dan lugar a dos nuevas células.
El ciclo celular tiene distintas fases, que se llaman G1, S, G2 y M.
Durante en la fase S la célula sintetiza una copia de todo su ADN.
Una vez que se dispone del ADN duplicado y hay una dotación extra
completa del material genético, la célula entra en la fase G2, cuando
condensa y organiza el material genético y se prepara para la división
celular.

El siguiente paso es la fase M, cuando tiene

lugar la mitosis, durante la cual la célula
reparte las dos copias de su material
genético entre sus dos células hijas.

Después de haber completado la fase M, se

obtienen dos células hijas idénticas
genéticamente a la célula madre.

Eventualmente, el ciclo celular empieza de

nuevo para cada una de las células hijas.

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 Transmisión de la información genética
Las células de un animal que reproduce sexualmente son de dos tipos: células germinales y células
somáticas. Las células germinales transmiten información genética de padres a hijos; las células somáticas
forman el cuerpo del organismo.

mutación aquí se transmite

a la descendencia

mutación aquí genera

nuevas células mutantes

Los cambios genéticos ocasionales mejoran la supervivencia a largo plazo de una especie a través de la
evolución, sin embargo la supervivencia del individuo exige un alto grado de estabilidad genética.
Sólo rara vez fallan los procesos de mantenimiento del ADN de la célula, lo que resulta en un cambio
permanente en el ADN.
Tal cambio se llama una mutación, y puede destruir un organismo si ocurre en una posición vital en la
secuencia de ADN.
 El Ácido Desoxiribonucleico
ADN
- Polímero de nucleótidos
- Dos cadenas antiparalelas formando una doble hélice, entrelazada y sumamente larga

NUCLEÓTIDOS EL ADN
Los 4 nucleótidos:
- Adenina
- Timina
- Guanina
- Citosina

Conformados por
- Grupo fosfato
- Pentosa de 5 C
- Base nitrogenada

Los 4 nucleótidos difieren únicamente en su base

nitrogenada
 Estructura de la molécula de ADN
ADN grupo fosfato
- Polímero de nucleótidos
pentosa 5C
- Dos cadenas antiparalelas formando una doble hélice, entrelazada y sumamente larga
base
nitrogenada

5’
3’

3’
5’
Niveles de Enrollamiento del ADN

La porción de la molécula de ADN

que se duplica debe encontrarse
completamente descompactada

Cromatina

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 Duplicación del ADN
Puntos más importantes:

- Secuencial: El ADN se duplica una sola vez durante el ciclo celular.

-La replicación del ADN es semiconservativa. Cada cadena de la doble hélice funciona como
molde para la síntesis de una nueva cadena complementaria, de manera tal que cada molécula
de ADN hija tiene una cadena de ADN madre y una recién sintetizada.

-Multifocal: En eucariotas la duplicación comienza a partir de varios puntos de inicio.

-Bidireccional: A partir de cada punto de iniciación, el ADN se duplica en ambas direcciones.

-Enzimas llamadas ADN polimerasas producen el ADN nuevo, estas requieren de un molde y
de un cebador (iniciador), y sintetizan ADN en dirección 5' a 3'.

-La replicación requiere de otras enzimas además de ADN polimerasa, como la ADN primasa,
la ADN helicasa, la ADN ligasa y la topoisomerasa, entre otras..

-La ADN polimerasa tiene la capacidad de corregir los errores que comete

-Durante la replicación del ADN, una de las cadenas nuevas (la cadena líder) se produce como
un fragmento continuo. La otra (la cadena rezagada) se hace en pequeños fragmentos.
 Duplicación del ADN
Waston y Crick propusieron un modelo de replicación mediante el cuál ambas cadenas se separan y sirven
como molde para la generación de cadenas nuevas por complementariedad
CADENA A ORGINAL

CADENA A

CADENA B NUEVA

CADENA A NUEVA

CADENA B

CADENA B ORGINAL

Se considera a la replicación del ADN como semiconservativa,

dado que las dos moléculas generadas, están constituidas por
una cadena nueva y una de la molécula que les dio origen.
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 Iniciación dela la
Inicio de replicación
replicación
La replicación siempre comienza en lugares específicos del ADN, que se
llaman orígenes de replicación y se reconocen por su secuencia.

Proteínas especializadas reconocen el origen, se unen a este sitio y abren el ADN. que
avanza la replicación.

A partir del origen de replicación de separan las dos hebras de ADN formándose
la burbuja de replicación, que contiene dos horquillas de replicación

Este desenrrollamiento la realizan las enzimas HELICASAS

Conforme se abre el ADN, se forman dos estructuras en forma de Y

llamadas horquillas de replicación, en conjunto conforman lo que se
llama burbuja de replicación.

Las horquillas de replicación se

mueven en direcciones opuestas a
medida que avanza la replicación
(replicación bidereccional)
 Inicio de la replicación
Múltiples sitios de inicio de la replicación (eucariotas, duplicación multifocal)
El problema de la Supertorsión

La tensión torsional que se produce

al abrir el ADN molde es aliviada
por la enzima Topoisomerasa

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 Proteínas específicas impiden apareamiento de las
cadenas de ADN
Las proteínas de unión a cadena simple (ssDNA) poseen funciones claves en el mantenimiento,
empaquetamiento y organización del genoma al proteger y estabilizar las hebras de ADN simple cadena en
los momentos en que estas quedan expuestas por acción de otras enzimas.
Además, evitan la reasociación de las cadenas.
Las telomerasas replican los telómeros de los
cromosomas

Los telómeros son secuencias repetitivas de ADN no

codificante del cromosoma que protegen de cualquier daño.
Cada vez que una célula se divide, los telómeros se acortan.
Con el tiempo, los telómeros se vuelven tan cortos que la
célula ya no puede dividirse.

MOLDE DE ARN

Las telomerasas difieren de todas las polimerasas en que

utilizan un molde interno en vez de uno externo, lo cual
impone limitaciones estéricas específicas para la elongación
del iniciador y la catálisis.

Actualmente, se propone la existencia de un sitio enzimático

de interacción con la cadena de ADN original, que contiene
el molde de ARN y alínea el extremo 3' del la cadena orignal
para su elongación en el centro catalítico.
 ADN Polimerasa
Las ADN polimerasas son responsables de la síntesis de ADN: añaden nucleótidos uno por
uno a la cadena creciente de ADN, e incorporan solo aquellos que sean complementarios al
molde.
Estas son algunas características clave de las ADN polimerasas:
Existen distintos tipos ADN polimerasas que cumplen distintos roles
durante la duplicación del ADN.
Siempre necesitan un molde.
No pueden comenzar una cadena de ADN desde cero, sino que requieren
de una cadena preexistente o segmento corto de nucleótidos
llamado cebador (o “primer” en inglés).

Eventualmente, el primer (fragmento de ARN) es editado y reemplazado por

una polimerasa específica (exonucleasa 5’  3’)
 Los primers son fundamentales para la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR)
En una reacción de PCR, la región de ADN que será copiada, o
amplificada, se determina por los cebadores que el o la
investigadora elija.

Los primers para PCR son pedazos cortos de ADN de cadena

sencilla, generalmente de unos 20 nucleótidos de longitud.

En cada reacción de PCR se utilizan dos primers que están

diseñados para flanquear la región blanco (la región que debe
ser copiada). complementariedad de bases.

Durante una PCR, un ciclo que se repite 25-35, generalmente tarda 2-4 horas, según la longitud de la región de ADN que
se copia.

Si la reacción es eficiente, puede producir miles de millones

de copias a partir de una o unas cuantas copias de la región
blanco.

Eso es porque no solo se usa el ADN original como molde en

cada ciclo. En realidad, el nuevo ADN que se produce en una
ronda puede servir como molde en la siguiente ronda de
síntesis de ADN.

Hay muchas copias de los primers y muchas moléculas de polimerasa flotando en la reacción, por lo que el número de
moléculas de ADN casi puede duplicarse en cada ciclo.
 Duplicación del ADN: las cadenas nuevas crecen por el
extremo 3’
La ADN polimerasa cataliza la reacción de unión fosfodiester de dos
nucleótidos

Solo pueden agregar nucleótidos al extremo 3' de la cadena de ADN.

La Cadena Nueva crece por el extremo 3´

La replicación es BIDIRECCIONAL

La adición de nucleótidos requiere energía.

La energía necesaria para la unión es obtenida a partir

de la hidrólisis de nucleótidos trifosfatados (doble
función de los nucleótidos)
 La ADN Polimerasa puede autocorregirse

• La ADN polimerasa puede introducir mal un nucleótido (1/10000)

• Sin embargo la tasa de mutación es 1/mil millones=> hay reparación
• Algunas ADN polimerasas tienen actividad de exonucleasa en sentido 3´ 5´

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 La ADN Polimerasa puede autocorregirse
Solo pueden agregar nucleótidos al extremo 3' de la cadena de ADN, y sólo la adición del nucleótido
correcto le permite seguir avanzando.

Pueden corregir, o revisar su trabajo, eliminando la gran mayoría de nucleótidos "equivocados" que se
agregan accidentalmente a la cadena.
El extremo 3'-OH no apareado del primer
bloquea el alargamiento adicional de la ADN
polimerasa en la cadena nueva

Actividad exonucleasa 3 'a 5' unida de la ADN

Un C se aparea transitoriamente polimerasa elimina la unión química para
con un A y es incorporado por la liberar a la C del extremo 3’-OH
ADN polimerasa en la cadena
nueva

La ADN polimerasa reanuda el proceso de

adición de nucleótidos al extremo 3'-OH de
pares de bases en la nueva cadena.
 La bidireccionalidad supone un problema
Las ADN polimerasas solo pueden hacer ADN en dirección 5' a 3', esto plantea un problema durante la replicación.

Una doble hélice de ADN siempre es antiparalela; una cadena corre en dirección 5' a 3', mientras que la otra corre de 3' a 5'.

Esto hace necesario que las dos cadenas nuevas, que también son antiparalelas a sus moldes, se produzcan de formas
ligeramente diferentes.

Las cadenas que quedan por detrás del origen de replicación son copiadas a través de la generación de múltiples
fragmentos, que crecen por el extremo 3´ y se denominan fragmentos de okazaki

La cadena continua puede extenderse a partir de un solo primer, mientras que la cadena rezagada necesita un primer nuevo
para cada uno de los fragmentos cortos de Okazaki.
Fragmento de Okazaki

Fragmento de Okazaki
 Cadena continua y cadena retrasada

Los fragmentos de Okazaki tienen que unirse: es necesario enlazar el extremo 3' de un fragmento con el 5‘
del siguiente
22 fragmento. Dicha labor de sellado y unión de los sucesivos fragmentos la realiza la Ligasa.
 Resumen de la duplicación del ADN: mecanismos
principales

La helicasa abre el ADN en la horquilla de replicación.

Las proteínas de unión a cadenas sencillas cubren el ADN alrededor de la horquilla de replicación para evitar que el
ADN se vuelva a enrollar.
La topoisomerasa trabaja por delante de la horquilla de replicación para evitar el superenrollamiento.
La primasa sintetiza primers de ARN complementarios a la cadena de ADN.
La ADN polimerasa III extiende los cebadores, agregando sobre el extremo 3', para hacer la mayor parte del ADN
nuevo.
Los cebadores de ARN se eliminan y son sustituidos por ADN polimerasa I.
La ADN ligasa sella las brechas entre fragmentos de ADN en las cadenas retrasadas o discontinuas.
 Resumen de la duplicación del ADN: Proteínas
implicadas
Principales proteínas implicadas:
- ADN polimerasas
Polimerización de dNTPs para formar una nueva cadena de DNA
Autocorrección de errores
Funciones conservadas en todos los organismos
DNA polimerasa I: actividad exonucleasa 5’  3’ que elimina los cebadores de RNA
DNA polimerasa III: síntesis de la cadena nueva (autocorrección con actividad exonucleasa
3’  5’)

- Topoisomerasa
Introduce superenrollamientos negativos y mantiene el DNA en su conformación topológica
correcta. Elimina tensiones.
- Helicasa
Rompe puentes de hidrógeno, separando las dos cadenas de DNA
- Proteínas de unión al ssDNA (SSBs)
Evitan la resociación de las dos cadenas de ssDNA y la formación de dsDNA
Estabilizan el DNA monocatenario
- RNA primasa
Síntesis de los cebadores de RNA (RNA polimerasa)
Ligasa
Enzima que une los diversos fragmentos de Okazaki entre sí