El tema de hoy:

REPLICACION DEL ADN

Atziri Elizabeth Aceves Roman
Denisse Romo Barrios
Vania Gabriela Sanabria Lara
Sadami Yashima Rodriguez
Renata Camacho Gómez
Adolfo Meza Avalos
01
 Introducción
¿Qué es la replicacón célular?
Aspecto escencial del metabolismo del ADN
Proceso por el cual mediante una molecula de ADN progenitora, se
sintetiza una nueva, originando dos moleculas de ADN de secuencia
identica a la del ADN original.
*De forma coordinada con la división celular
(fase S)
Replicación en el ciclo
celular
El inicio de la replicación del ADN obliga a la
celuar a emprender una division.
El inicio de la replicacion bloquea una nueva
division hasta que se haya completado la
replicación
No se necesita la separación completa de la
cadena progenitora, si no que hay un
desenrrollamiento gradual de las hebras
para su replicación
Caracteristicas pricipales del proceso

Principios y procesos clave que rigen la

copia precisa y la transmisión de la
información genética durante la
replicación del ADN
Fundamentales para garantizar que la
información genética se duplique de
manera fiable y con alta fidelidad en las
células durante la división celular
 1. Carcater semiconservador
Se plantean 3 mecanismos hipoteticos de replicación en 1953, pero solo el
semiconservador tiene lugar en las células:

Conservadora Dispersante
Reconocimiento Sintesis por fragmentos
enzimatico de ambas combinados con ADN
hebras para copiarlas progenitor, generando
simultaneamente, moleculas hijas con
dejando intacto el ADN framentos nuevos y del
progenitor progenitor
El caracter semiconservador es un
principio clave de la replicación del
ADN

Consiste en que las dos hebras del

ADN progenitor sirven de molde para
la sistesis de sus hebras
complementarias

Importante ya que conserva la

información genética original de una
de la cadenas
 Experimento de Meselson y Stahl
En 1953 los científicos Francis Crick, de Gran Bretaña, y James Watson, de
Estados Unidos, publicaron la famosa estructura de la doble hélice del
ADN la explicación para entender:
la reproducción de los seres vivos
la información hereditaria de padres a hijos
de qué manera puede cambiar esa información por mutaciones y dar
origen a enfermedades hereditarias
cómo participa en la evolución biológica
por qué todos los seres vivos evolucionamos a partir de un ancestro
común

Mathew Meselson y Franklin W. Stahl en el año de 1958 construyeron un

experimento que probó todos los tres modelos al mismo tiempo
 Isótopo pesado
Átomo que se comporta en una manera completamente normal en reacciones
químicas, pero la presencia de uno o mas neutrones adicionales le da al átomo una
masa atómica mas grande.
Provoca que al mezclarlas con otras moleculas las haga mas densas
Este cambio de densidad permite separar las moléculas fisicamente con diferentes
isótopos

Para el experimento se
utilizaron las formas
de nitrogeno 15N y 14N
 Meselson y Stahl ralizaron experimentos de la replicacion de ADN
en bacterias E. coli como sistema de modelo

Pasos del experimento:

Para el experimento, células de la E.coli fueron mezcladas primero con una solución
de sal cloruro de cesio y puestos en un tubo de centrífuga con cuarzo transparente
que permitió que la solución fuese fotografiada mientras daba vueltas. Despues de
algunas horas se establecion un gradiente de densidad en la célula.
las moleculas de un extracto de la célula, incluyendo el ADN, flotaria o se hurdian
dependiendo de su densidad.

densidad Abajo
densidad Arriba
1. Cultivaron la E. coli en un medio nutritivo con el isótopo de
nitrogeno 15N, el cual entra al metabolismo de la célula, las bacterias
toman el nitrogeno y sintetizan nuevas moleculas biologicas, volviendo a
las células más densas, las dejaron crecer varias generaciones...
2. Las bacterias E.coli fueron cambiadas a un medio con un
isótopo más ligero, 14N (isótopo estable, mas abundante en el medio
natural) y al igual que con el primer cultivo se le dejo crecer varias
generaciones, marcando estas nuevas bacterias con 14N

14N
 ¿Por qué fue necesario que se criaran bacterias con nitrogenos
de diferente densidad?

Esto les permitió distinguir entre el ADN

pre-existente de las células paternales y
ADN recién sintetizado, debido a que todas
las hebras recién sintetizadas contenían
14N y son menos densas. Utilizaron este
arreglo experimental para poner a prueba
los tres posibles modelos de replicación de
ADN.
La centrifugación en gradiente de
densidad permite detectar diferencias
muy pequeñas, como las que hay entre el
ADN con 14N y 15N
 Resultados del experimento
Se analizó el ADN de las primeras cuatro generaciones de E. coli y se
obtubo un patrón de bandas:
 Generaciones del ADN

El AND aislado con

En el modelo semiconservativo, se
15N produce una Se produjeron dos
Tambien se produjo esperaría que cada molécula de ADN
única banda al bandas. Una en la misma
una unica banda, con híbrido diera lugar a una molécula
centrifugarse posición que la banda
una densidad híbrida y una molécula ligera en la
intermedia entre el intermedia, mientras tercera generación, mientras que
ADN con 15N y 14N que la segunda estaba cada molécula de ADN ligero solo
más alto produciría más moléculas ligeras.
 Sintesis simultánea, secuencial y
bidireccional
Importantes caracteristicas
1. la síntesis no comienza al azar, sino en puntos concretos de la molécula,
denominados orígenes de replicación, donde se produce una abertura local de la
doble hélice y comienza una síntesis simunltanea.
 Los sitios ORI son secuencias
específicas ricas A y T y
controlan la replicación de una
unidad de ADN llamada
replicón. La presencia de bases
A:T facilita la separación de
las hebras y la formación de la
burbuja de replicación.
En organismos eucariotes, debido al gran tamaño del ADN, existen
múltiples orígenes de replicación por lo que a la replicación se la considera
multifocal mientras que en las bacterias y virus existe un origen único por
lo que se dice que monofocal.
La separación de las hebras progenitoras que comienza en cada origen,
progresa en ambas direcciones por lo cual se dice la replicaron es
bidireccional.
 Esto plantea un problema: las cadenas tienen que
crecer de forma simultánea a pesar de que son
antiparalelas, es decir, cada cadena tiene el extremo
5’ enfrentado con el extremo 3’ de la otra cadena.
Por ello, una de las cadenas debería sintetizarse en
dirección 3’ → 5’.
Los científicos japoneses
Reiji Okazaki y Tsuneko
Okazaki en la década de
1960, descubrieron que una
de las nuevas cadenas del
ADN se sintetizaba en
forma de fragmentos
cortos que, en su honor, se
denominan “fragmentos de
Okazaki. “
Su longitud suele variar entre 1 000 y 2000 nucleótidos en las
bacterias y entre 100 y 400 nucleótidos en eucariotes. La cadena que
se sintetiza en el sentido que avanza la horquilla de replicación se
denomina hebra adelantada, líder o conductora (leading strand), y se
sintetiza de forma continua por la ADN polimerasa, mientras que la
que se sintetiza en sentido contrario al avance de la horquilla se
denomina hebra rezagada o retrasada (lagging strand), cuya síntesis
se realiza de forma discontinua o en fragmentos, y para disponer de
una cierta longitud de ADN molde para continuar hay que esperar a
que la horquilla de replicación avance
 Enzimología de la replicación

Requerimientos de la reacción de síntesis de DNA

CEBADOR
La síntesis de una nueva hebra de DNA requiere un fragmento de hebra
iniciador denominado cebador, se trata de un oligonucleótido, por lo general
RNA, que debe estar apareado a la hebra progenitora de DNA, de forma
complementaria y antiparalela.

LA REPLICACION NO ES AUTOINICIADORA
SUSTRATO
Se utiliza como sustrato el conjunto de los dNTPs: dATP, dGTP, dCTP, y
dTTP.
Cada uno de ellos queda incorporado en el DNA nuevo la parte dNMP de
la molécula.
COFACTORES
Se requiere un ion metalico divalente como cofactor, asociado a los
dNTPs y a la polimerasa.
MOLDE O PLANTILLA
El orden correcto de incorporación de los dNMPs viene determinado
por su complementariedad de bases con la secuencia de cada hebra
de DNA, que actúa como molde.
 Mecanismo de la replicación
Se inicia la reacción con el emparejamiento de un dNTP complementario al
nucleótido de la hebra molde (DNA) en la posición vecinal al extremo 3' de la
hebra en crecimiento.

Consiste en la union del dNTP seleccionado, que queda como dNMP,

liberandose PPi

Implica la formación de un enlace fosfoéster entre el fosfato a del dNTP que se

incorpora y el 3’-OH libre de la cadena en crecimiento (inicialmente, del
cebador).
 Dirección de la síntesis

La adición de nucleótidos se realiza mediante 5'- trifosfato y sobre un extremo 3'-

OH libre, la hebra crece por su extremo 3'.

La síntesis trancurre en direccion 5'- 3'.

 Tipos de polimerasas
La catálisis de la reacción de síntesis de DNA la efectúan en cada caso
distintas enzimas, bajo la denominación común de DNA polimerasas
( DNApol).
 DNA polimerasas procarióticas: actividades
polimerasa y exonucleasas
Varias de las DNA polimerasas presentan una o dos actividades
exonucleasa (además de su actividad enzimática como polimerasa)
La actividad 3'-exonucleasa permite hidrolizar el nucleotido situado en el
extremo 3' de la hebra de DNA.

Esta eliminación tiene es de forma inmediata, cuando el nucleótido

recién incorporado por la actividad polimerasa a la cadena en
crecimiento es errónea.
NO EMPAREJA CORRECTAMENTE CON EL DE LA HEBRA MOLDE DE
DNA.
La polimerasa es capaz de reconocer el error, detener la adición de
mas nucleótidos y liberar ese ultimo dNMP mal incorporado.

Las DNA polimerasas corrigen sus propios errores, en sentido 3' 5'
Esta actividad 3'- exonucleasa se denomina también actividad
correctora de pruebas.
 DNA polimerasas eucariotica actividades
polimerasa y exonucleasas
La DNApol a posee dos actividades enzimáticas independientes:

°Polimerasa (de DNA): Se encarga de la elongación inicial de ese

cebador.
°primasa (polimerasa de RNA): Se encarga de formar un RNA cebador
necesario para iniciar la replicación

Esta tarea se cede luego a las DNApol d y e, responsables de la mayor

parte de la elongación de ambas hebras
La DNApol b no interviene en la replicación, sino que está implicada en
la reparación de errores o daños en el DNA.

El DNA mitocondrial lo sintetiza DNApol v.

Actividad exonucleasa de las DNA polimerasa
eucarióticas

Poseen actividad 3'-exonucleasa: responsable de la capacidad de

corrección de errores cometidos al incorporar los nucleótidos a la hebra
que esta sintetizando.

°La función de eliminación de cebadores la desempeñan dos nucleasas

independientes

°Las polimerasas s y E se encargan de rellenar el hueco con DNA

 Velocidad de replicación
Para que su replicación completa se lleve a cabo en un tiempo razonable
el proceso de síntesis debe ser muy rápido.

En procariotas, la velocidad alcanza 1.000 nucleótidos por segundo

.
En eucariotas la consecución de una alta velocidad sólo es posible
gracias a un mecanismo, el cual la molécula de DNA polimerasa se
mantiene unida a la cadena de DNA molde, a la vez que asociada por su
centro activo al extremo 3’-OH de la hebra creciente.
Así puede incorporar numerosos nucleótidos sucesivamente, con una
reducción del tiempo necesario para la adición de cada uno
ETAPAS EN EL PROCESO DE REPLICACIÓN

Ocurre en la matriz nuclear, se replica una vez

por ciclo durante la fase S.
Objetivo: generar dos células hijas exactamente
iguales.
 Replicón

Unidad funcional del proceso de replicación, región de DNA que se

replica a partir de cada origen.

ORIGEN SE REPLICA MEDIANTE

DOS HORQUILLAS
En celulas eucariotas los origenes de replicación
son multiples y de manera simultánea, mientras
que en las procariotas tiene un origen de
replicación único
 Iniciación

Replicador Origen
Zona que determina la Punto donde comienza
apertura inicial de la la síntesis sobre el
doble hebra molde de la molécula
abierta
 Proteínas necesarias

Helicasas
Se unen al DNA cuando se abre el origen, actúa propagando la
separación de sus dos hebras hidrolizado los puentes de hidrógeno.
se crean dos horquillas de replicación que avanzan en sentidos
opuestos
 Proteínas de unión a hebra sencillas

Evitan el reapareamiento de las hebras

Hebras de
Nucleótidos
molde

SSB/RPA
single stand binding proteins
Topoisomerasas
Alteran el estado de
superenrollamiento del
DNA sin modificar su
estructura.
Intervienen en los
procesos de
recombinación.
Construyen un mecanismo
de modificación topológica
de la molécula de DNA.
Topoisomerasas tipo I: enciden de
manera transitoria un enlace
fosfodiéster, dejan pasar la otra por la
brecha abierta y vuelven a ligar la
primera hebra.
EL NUMERO DE ENLACE AUMENTA O
DISMINUYE UNA UNIDAD.
Topoisomerasas tipo II: cortan de
manera transitoria dos hebras de DNA,
permiten el paso de otra doble hebra,
intacta, por la brecha abierta y finalizan
resellando los cortes.
EL NUMERO DE ENLACE AUMENTA O
DISMINUYE EN DOS UNIDADES.
Primasa

El inicio de las hebras nuevas requiere un cebador.

La primasa produce cadenas cortas de RNA, complementarias de cada
una de las hebras desemparejadas en el origen.

Procariotas Eucariotas

La actividad primasa reside en una de las

Es una proteína independiente que forma
subunidades de DNA polimerasa a1, esta
parte de un complejo proteico denominado
proteína con dos actividades se llama
primosoma
DNApol a/prim.
Este conjunto de proteínas recibe el nombre de riplosoma o complejo de
replicación, participando de forma directa o indirecta en la síntesis simultánea
de ambas hebras.
 Elongación

Es el proceso en quela ADN polimerasa añade nucleótidos uno por uno complementarios
a la cadera molde.

La síntesis es diferente en cada una de las

PCNA
hebras, en la cadena líder se síntetiza en
forma continua, en cadena retrasada se
realiza de manera discontinua.
Asimetría en la replicacion de ambas
hebras
 Asimetría en la replicacion de ambas
hebras

Al estar creando la horquilla antiparalela, en

la hebra adelantada (3’ a 5’) se creara la
horquilla complementaria en “sentido
contrario” (5’ a 3’). Y viceversa.
La ADN polimerasa solo es capaz de replicar
el ADN en dirección 5’ a 3’
En la hebra retrasada deben introducirse mas
primasas para marcar el nuevo punto de
inicio para la polimerasa.
 Fragmentos de Okazaki

Los fragmentos de Okazaki son fragmentos cortos de ADN

que se sintetizan de manera discontinua durante la
replicación del ADN en la cadena rezagada.
 “MADURACIÓN”
(Fragmentos de OKazaki)

La maduración requiere la eliminación de

los cebadores, la elongación del
fragmento adyacente para rellenar con
DNA el hueco dejado por cada RNA
cebador y la unión o empalme de los
extremos resultantes para dar una hebra
continua.
 LIGASAS
La ADN polimerasa elimina
los cebadores de ARN y los
sustituye por ADN. La
enzima ADN ligasa sella las
brechas que permanecen
después de reemplazar los
cebadores.
Forman el enlace
fosfoéster que falta entre
el grupo OH del extremo
3’ de un fragmento de
Okazaki y el fosfato del
extremo 5’ del siguiente,
asegurando así que la
hebra retardada sea una
cadena continua.
 Terminación

Final de la elongacion
Replicacion de los telomeros
Replicacion de los
telomeros
Los telómeros son
regiones situadas en los
extremos de los
cromosomas lineales de
la mayoría de eucariotas.
Son los extremos de los
cromosomas.
Replicacion de los telomeros
En cada ronda de replicacion, las hebras nuevas
son mas cortas que su molde, por lo que la
longitud el cromosoma en sus telomeros se va
acortando
Durante la fase S del ciclo celular la enzima
TELOMERASA alarga los telomeros, compensando
asi la perdida anterior
 TELOMERASA

Es una enzima clave en el mantenimiento de los extremos

de los cromosomas (telomeros).

Función principal: Mantener la longitud de los telómeros

en las extremidades de los cromosomas. Los telómeros
protegen los extremos de los cromosomas de la
degradación y la fusión, evitando así la pérdida de
información genética esencial durante la replicación celular.
 TELOMERASA

Estructura:
Proteína TERT (Reverse
Transcriptase Telomerase)
Fragmento de ARN que sirve
como molde para la síntesis
de ADN telomerico
 TELOMERASA

Proceso de alargamiento de telomeros:

Cuando una célula se divide, sus telómeros tienden a
acortarse debido a la incapacidad de la ADN polimerasa
para replicar completamente los extremos de los
cromosomas. La telomerasa contrarresta este
acortamiento al agregar secuencias de ADN repetitivas a
los telómeros utilizando el ARN molde como guía.
 TELOMERASA

Relacion con el envejecimiento:

La disminución de la actividad de la
telomerasa con el tiempo se ha
asociado con el proceso de
envejecimiento y el desarrollo de
enfermedades relacionadas con la
edad.
 Replicación mitocondrial

La replicación del cromosoma mitocondrial tiene un proceso

muy diferente al del genoma nuclear en eucariotas y
procariotas.

La síntesis se da por medio de la DNA-pol y

 Replicación mitocondrial
En el cromosoma mitocondrial (circular) hay una base pesada
(H) y otra ligera (L). Además, presenta un asa de
desdoblamiento (región de control y ADN no codificante)

La replicación mitocondrial se lleva a cabo en todo el ciclo

celular
Inicia la replicación de las hebras en distintos momentos
(no simultánea)
Origen bifocal (orígenes distintos entre hebras)
Continua (no se forman fragmentos de Okazaki)