TECNOLÓGICO NACIONAL DE MEXICO //

CAMPUS TEHUACÁN

CARRERA: INGENIERIA BIOQUÍMICA

MATERIA: MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

GRUPO: “Q” (16:00 -17:00)

PROFESORA: M.M. LUZ ROSALIA MEJIA

ARRUEL

UNIDAD 2 - ACTIVIDAD 4 – MÉTODOS Y

TECNICAS DE AISLAMIENTO Y SELECCIÓN

ALUMNO: ORTEGA MORALES ROMEL

17360453

TEHUACÁN, PUE. A 28 DE FEBRERO DEL 2022

 MICROBIOLOGÍA
UNIDAD II
4 ACTIVIDAD
MÉTODOS Y TECNICAS DE AISLAMIENTO Y SELECCIÓN

TEHUACÁN PUE A 14 DE FEBRERO DEL 2022

FECHA DE ENTREGA: 28 DE FEBRERO 2022
HORA: 19:00

ACTIVIDAD

A.- DESPUES DE HABER VISTO Y ANALIZAR LOS SIGUIENTES VIDEOS HACER LAS
SIGUIENTES ACTIVIDADES:

1.- VIDEOS

PREPARACIÓN DE MATERIAL
https://youtu.be/Nw5DkCnVEWw
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS
https://youtu.be/xl264TosO5s
https://youtu.be/miga09gVMyY
VACIAR MEDIOS Y AUTOCLAVE
https://youtu.be/AQc94eN3YCA
AUTOCLAVE MEDIOS DE CULTIVO
https://youtu.be/QP41nXr8lzo
DILUCIONES UFC
https://youtu.be/tkGpcdBH9N0
PRUEBAS BIOQUIMICAS
https://youtu.be/5sqrp5eqNU
https://youtu.be/Gpqxz6pklHk
1.- VER LOS VIDEOS DETENIDAMENTE Y SACAR DUDAS QUE SE EXPLICARAN EN EL LABORATORIO
SOBRE EL TRABAJO DE LAS TECNICAS

PREPARACIÓN DE MATERIAL DE ESTERILIZACIÓN

1ER VIDEO: https://youtu.be/Nw5DkCnVEWw

Todos los recipientes, medios de cultivo y dispositivos de siembra deben estar

estériles. El Material a esterilizar debe de estar perfectamente limpio para reducir la
carga microbiana y de esa manera contribuir a la efectividad del proceso de
esterilización.

PREPARACIÓN DE MATRACES

Matraz con Torunda

Se doblan los lados de la porción de algodón y enrollarlo para formar la torunda e

introducirla con un movimiento giratorio, asegurándose que penetre casi en la
totalidad del cuello del matráz, y que sea fácil su manipulación. También se puede
envolver con una gasa para poder mantener su forma

Matraz con Capuchón

Se dobla el papel kraft a la mitad y marcando un según doblez se abre, llevando las
esquinas formando un triángulo, y se coloca encima del matraz con la torunda. Sólo
así el matraz estará listo para su esterilización.

PREPARACIÓN EN TUBOS
Las torundas de los tubos de ensaye se preparan de la misma manera como en los
matraces, pero a veces para agilizar el proceso nos podemos ayudar con una varilla
y el algodón

PREPARACIÓN DE PIPETAS

Las pipetas se esterilizan envueltas con papel de manera individual o en conjunto

empacadas dentro de cilíndros metálicos, utilizando un filtro de algodón en la
boquilla. Anotando sobre el papel el volumen de la pipeta.

PREPARACIÓN EN CAJAS PETRI

Las Cajas petri se envuelven con papel de manera individual o en conjunto

empacadas dentro de cilíndros metálicos. Los cilindros metálicos contienen una
canastilla en la cual se posicionan las cajas en posición invertida. Se introduce la
canastilla con las cajas y se tapa. Individualmente se empacan con papel envueltas
de manera geométrica.

PREPARACIÓN DE EQUIPO DE FILTRACIÓN

El equipo de filtración debe estar estéril previo a su uso. El matraz se prepara

colocando una torunda de algodón en la boca y en el sistema de conexió del tubo
de vacío. Se evuelve y fija a los alrededores, con un mínimo de cinta

MATERIAL PREPARADO

Sólo así el material estará listo para ser sometido al proceso de esterilización.
Siguiendo los pasos mencionados para la preparación de los recipientes,
dispositivos de siembra, tubos y matraces.
 PREPARACIÓN DE MEDIOS

Video 1: https://youtu.be/xl264TosO5s
Video 2: https://youtu.be/miga09gVMyY

Se tiene que pesar la cantidad necesaria correspondiente al volumen de medio que

se desea elaborar siguiendo las instrucciones del fabricante.

Una vez pesado se procede a echar el medio deshidratado en el matraz y añadir el

volumen de agua destilada requerido

MEDIOS LÍQUIDOS: Se agitan hasta completar su disolución

MEDIOS SÓLIDOS (Agar): Calentar hasta que el agar se funda.

El calentamiento del medio puede realizarse con ayuda de un termoagitador

magnético o un trípode y un mechero bunsen, una vez calentado y fundido el agar,
colocar un algodón graso y cubrir con papel aluminio.

Se lleva a la autoclave para esterilizar.

Una vez autoclavado se procede al reparto de placas estériles, esperando a que se

enfríe el medio, siempre medio de la llama se ira virtiendo el medio.

Pasado un tiempo se solidifican las placas de manera que se han enfriado.

VIDEO 2: https://youtu.be/miga09gVMyY

MEDIOS DE CULTIVO NATURALES

Son aquellos que contienen células vivas, como los embriones de pollo o los medios
con bacterias para bacteriófagos.

MEDIOS DE CULTIVO ARTIFICIALES (SINTÉTICOS)

Los medios de cultivo artificiales son aquellos que son preparados en el laboratorio.y
se pueden preparar a partir de sus componentes individuales siguiendo las
especificaciones de su fabricante. Se pueden adquirir comercialmente como medios
deshidratados.

Se pesa el volumen de medio correspondiente, el Ph en los medios deshidratados

ya viene ajustado.

En medio sóligo, el agar se añade en siempre en último lugar

Los medios líquidos se reparten en tubos o matraces con ayuda de probetas o

pipetas, los tubos o pipetas se cubrem con algodón graso y se recubren con algodón
graso y se recubren con papel aluminio para su esterilización en el autoclave.
VACIAR MEDIOS Y AUTOCLAVE
VIDEO:https://youtu.be/AQc94eN3YCA

AUTOCLAVE

Para esterilizar los medios de cultivo, generalmente se usa la autoclave: un sistema

cerrado a volumen constante, dónde se forma vapor de agua, el cual se somete a
una presión elevada, 1 atm. Lo que hace que el agua alcance 200°C Causando la
desnaturalización de enzimas, lo que conlleva a la muerte de microorganismos y a
la destrucción de esporas.

Se esteriliza a 121°C durante 20 Minutos

Los autoclaves poseen un Manómetro y un Termostato, así como una Válvula de

seguridad y un sistema de desconexión rápido.

Consta de un timer específico para determinar el tiempo de esterilizaión

Cuándo el medio sólido se prepara en frascos con tapón de rosca, hay que dejarlo
abierto aproximadamente ¼ de vuelta para permitir la entrada del vapor.

No abrir la autoclave si el manómetro no está a 0.

VACIAR MEDIOS
Después de esterilizar, si el medio va a ser vertido en cajas de Petri, hay que dejar
enfriar los medios, dejar los frascos en un baño a 50°C aprox.

El llenado y vaciado hay que realizarlo en condiciones asépticas, o en cabinas de

flujo laminar, o cerca de la llama de un mechero,

La cabina de flujo laminar, retiene con filtros

EPA eliminado el 99.9 % de las partículas del
aire contaminado de 0,03 micras de diámetro.
Fuerzan el aire a través de los filtros EPA,
creando una cortina vertical u horizontal de aire
estéril.

Los tubos con medio líquido se dejan enfriar en

una gradilla

Los tubos con agar, se dejan solidificar a temperatura ambiente en la posición

requerida, horizontal o inclinada, una vez solidificada, las placas se conservan en
posición invertida

Se llena a ¾ partes del recipiente de placa y posteriormente identificar con una

etiqueta, o rótulo y se almacena
para no confundirlo, se forma una
consistencia gelatinosa el cual
nos indica que está listo el medio
de cultivo para ser refrigerado y
para su posterior uso.
 DILUCIONES UFC

VIDEO: https://www.youtube.com/watch?v=QP41nXr8lzo

Técnica de Conteo en placa para las unidades formadoras de colonia por medio de
un método de conteo:

El método de conteo se basa en la

suposición de que un microorganismo viable
da lugar al desarrollo a una colonia y que del
número total de colonias que se desarrollan
sobre el medio de cultivo sólido, es
proporcional al número de microorganismos
viables presentes en la muestra, a fin de
disponer de un número adecuado de
muestras para el recuento.

Una Muestra diluída de 1:10 a 1:1000,000

1. Ordenar las placas de menor a mayor dilución

2. Seleccionar aquellas placas que se encuentran en un rango de 25 a 250
UFC.
3. Multiplicar el número total por el inverso de la dilucipon y por la cantidad de
muestra usad (1ml)

UFC = 40 x 1 ml x 10^-5 = 4x10^-4

4. El número obtenido se redondea a dos cifras sign. Y se expresa de forma

exponencial, cuando el tercer dígito es 2 o > se omite.
 PRUEBAS BIOQUIMICAS

VIDEO 1: https://www.youtube.com/watch?v=tkGpcdBH9N0

VIDEO 2: https://youtu.be/5sqrp5eqNU

La prueba bioquímica se realiza para Id. De Bacterias Gram (-) en

microtubos en una galería api 20E. para la identificación de entero
bacterias y bacterias relacionadas, la galería consta de 20 tubos, con el
correspondiente medio deshidratado, en cada tubo se realizará una
prueba bioquímica determinada, en cada tubo se diferencia, el tubo y la
cúpula.

Antes de inocular, se añade agua a los alveolos de la base de la galería, retirando

el exceso de agua. Es primordial partir de un cultivo puro de la bacteria, en solución
salina y se inoculará cada tubo con esa suspensión.

Todos los tubos se llenan hasta la base de la cúpula pero en algunas excepciones
no

Se tapa la galería para evitar una evaporación y se incuba en una estufa

a 37°c durante 27 horas.

Se procede a dar lectura de resultados.

 PRUEBAS BIOQUÍMICAS:

ONPG : Se investiga la presencia de B-Galactosidasa, el Medio

contiene ONPG que es incoloro, el color amarillo indica una reacción
positiva. (+)

ADH / LDC / ODC / URE: Arginina dihidrolasa, Lisina descarboxilasa,

Ornitina descarboxilasa y ureasa, si la bacteria presenta esas enzimas,
degradará los diferentes sustratos generando una subida de PH, que
hará el indicador de PH Rojo Fenol, vire a Rojo Fenol.

CIT: Se investiga la Capacidad de la bacteria de crecer con citrato como

única fuente de carbono, el uso de citrato origina una subida de Ph, que
hace que el indicador azul bromotimol, vire a color, azul(+). La prueba
negativa se detectará por un color verde pálido o amarillo}
H2S: Si la bacteria realiza resp. Anaerobia, se generará un precipitado negro, la no
aparición del resultado negro se dará como resultado negativo (-)

GEL: Se estudia si la bacteria puede redilizar la gelatina, en tal caso, la degradación

de ella libera el pigmento negro, en caso negativo (-) no difundirá.

GLU, MAN, INO, SOR, RHA, SAC, MEL, AMY, ARA: Uso de azucares si la bacteria
usa diversos azucares, se acidificará el medio, de tal forma que el indicador de ph
azul de bromotimol, virará a amarillo, el color azul o verde indicará una reacción
negativa.

OTRAS PRUEBAS: Requieren un revelado, de forma que una vez incubada la

galería, es necesario añadir ciertos reactivos, estas son:

TDA: Triptófano DesAminasa

IND: Indol

UVP: Fermentación de tipo Butinel Glicólica

Reducción de Nitratos: NIT 1 Y NIT 2, se identifica si la bacteria posee la bacteria

nitrato oxidasa y así producir Nitritos.
REFERENCIAS

 PREPARACIÓN DE MATERIAL, Obtenido de: https://youtu.be/Nw5DkCnVEWw

 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVOS, Obtenido de: https://youtu.be/xl264TosO5s

https://youtu.be/miga09gVMyY

 VACIAR MEDIOS Y AUTOCLAVE, Obtenido de:https://youtu.be/AQc94eN3YCA

 DILUCIONES UFC, Obtenido de: https://youtu.be/tkGpcdBH9N0

 PRUEBAS BIOQUIMICAS, Obtenido de: https://youtu.be/5sqrp5eqNU ,

https://youtu.be/Gpqxz6pklHk