INFORME DE LABORATORO Nº2

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MANEJO

DEL AUTOCLAVE

ESTUDIANTES
SOTO BUENO ELKIN WALBERTO
RAMIREZ PEÑATES KELLY JOHANA

DOCENTE
LAURA ESTHER ROJAS MARTINEZ

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y EDUCACIÓN

LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIÓN
AMBIENTAL MICROBIOLOGÍA CN503
2020
 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y MANEJO
DEL AUTOCLAVE

OBJETIVOS
• Conocer (analizar) el proceso de esterilización por autoclave y comprender la
importancia de este, en los laboratorios de microbiología.
• Aprender a preparar correctamente los medios de cultivo. (Calcular específicamente,
formas de preparación en medios de cultivo).
• Reconocer la importancia del control de calidad de la fase pre analítica en la
preparación de medios de cultivo.
 Preparación de medios de cultivos en el laboratorio

Figura 1. MEDIOS DE CULTIVO Microbiología. (s. f.). [Imagen]. slide player. https://slideplayer.es/slide/13300038/

pesar la cantidad deseada del mismo y disolverla en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante.

Las sustancias termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los componentes después de que estos hayan sido
previamente esterilizados enel autoclave y enfriados a temperatura ambiente ó a 40-50ºC si se trata de medios con agar.

Antes de su esterilización los medios líquidos se reparten en los recipientes adecuados (tubos, matraces, etc.). Si es un medio sólido y
se ha dedistribuir en tubos ó en matraces será necesario fundir el agar en baño Maria u horno microondas

Una vez fundido y homogenizado, se distribuyeen caliente a los tubos ó matraces (no en placas Petri) se tapa y se esteriliza en el
autoclave.

Una vez finalizada la esterilización los medios se dejaran enfriar a temperatura ambiente

Las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas y en un ambiente aséptico (por ejemplo en la
proximidad de la llama de un mechero Bunsen)
Manejo del autoclave

Figura 2. Autoclave
 Asegurarse que la llave de paso de gas esté cerrada o que la llave termomagnética correspondiente al autoclave
esté en posición de apagado (OFF) en caso de ser un equipo eléctrico.

Controlar que el nivel de agua llegue hasta el falso fondo perforado.

Colocar el material a esterilizar convenientemente acondicionado y distribuido.

Cerrar el autoclave ajustando la tapa a la brida mediante leve presión de las tuercas.

Abrir la llave de paso de gas y encienda la fuente de calor. Para autoclaves eléctricos, encienda la llave.

Cuando se ha alcanzado la presión de trabajo preestablecida, regular la fuente de calor para mantenerla.

Una vez transcurrido el tiempo de esterilización, apagar la fuente de calor y cerrar la llave de paso de gas.

Dejar enfriar completamente el equipo, abrir la tapa y retirar el material estéril.

Respuesta
 Usted necesita preparar 28 cajas del agar EMB. El medio de cultivo dice que
se necesitan 28 g. de agar para preparar un litro. ¿Cuantos gramos tendría que
pesar usted para preparar sus 28 cajas? Justifique su respuesta.
Los gramos necesarios para preparar las 28 cajas son 15,68g.
Se tiene:
- 28g en 1L(1000ml)
- 28 cajas y cada caja de Petri tienen una capacidad de 20 ml
20 ×28=560
Para hallar los gramos se hace una regla de tres
28g 1000ml
g 560ml

28 g ×560 ml
g=
1000 ml
g=15,68 g
  la mayor parte de los medios de cultivos después de su preparación deben ser
sometidos a esterilización en la autoclave. Los medios de cultivo XLD, S. S,
HEKTOEN nunca se esterilizan. ¿Por qué no se esterilizan estos medios?
Estos medios no se pueden auto clavar debido a que el exceso de calentamiento puede
afectar la composición, es decir son sustancias termolábiles, en el caso del agar
HEKTOEN no es necesario esterilizar el medio de cultivo debido al alto efecto
inhibitorio del medio frente a la flora Gram positiva. Los medios de cultivo que
incluyen en su composición sustancias termolábiles, es decir, que se alterarían tras
someterse a un tratamiento con calor, necesitan un procedimiento alternativo para su
esterilización. Generalmente se realiza filtración con membranas de un diámetro de
poro de 0,2 a 0,45 µm. Los virus no se eliminan, pero sí las bacterias y hongos que
pudieran contaminar el medio.
 ¿Cómo verificaría que el medio de cultivo que usted preparo quedo bien
esterilizado y no lo contamino cuando usted envasó el mismo en las cajas de
Petri?

se incuban en estufa de cultivo, la temperatura y tiempo de incubación para esta prueba

se corresponden con las condiciones usadas durante el ensayo. Se realiza este ensayo
sobre el 1% de las placas o tubo del comienzo y 1% de las placas o tubos del final de
verter o distribuir los medios o diluyentes.
 ¿Qué es un cultivo mixto y que son cultivos axénicos?
cultivo axénico
Se denomina cultivo axénico o puro al que contiene solo un tipo de microorganismos.
Los cultivos puros se inician a partir de las colonias aisladas, de manera que todos los
individuos del mismo tengan la misma composición genética. Los cultivos puros son
esenciales para poder estudiar las características de los microorganismos y para poder
identificarlos con seguridad.
cultivo mixto
se encuentran presentes desde un inicio más de una especie/raza de
microbio.
 ¿Cuál crees que sea el paso más delicado en la preparación de medios de
cultivo y por qué?
El paso más delicado es el de la esterilización, aquí se eliminará todo tipo de vida
microbiana que pueda afectar la preparación del cultivo, y si este paso no se realiza de
la forma correcta puede afectar todo el proceso de preparación de medios de cultivos.

Análisis de resultados
Como se puede observar en la figura1, la preparación de medios de cultivo lleva una
serie de pasos que se tienen que llevar a cabo para un excelente resultados, cada uno de
estos pasos deben ser desarrollados con todo los medios de asepsia y de cuidado para
que no se estropeen y para ello entra como parte fundamental el autoclave (figura 2),
en este se cumple el proceso de esterilización uno de los procesos más importantes, es
en el autoclave, el mecanismo de funcionamiento de la autoclave consiste en someter a
vapor de agua con sobrepresión el material a esterilizar, hasta alcanzar temperaturas
adecuadas que eliminen microrganismos y sus formas de resistencia. Una temperatura
de 100°C elimina cualquier microorganismo excepto las esporas
 Conclusión
Es de vital importancia conocer las técnicas y métodos más usados, en el ámbito
microbiológico para la obtención y el desarrollo de microorganismos, esto a partir de
los medios de cultivo que son un gran número de macro y micro nutrientes, los cuales
proporcionan condiciones que propician el crecimiento y la diversidad metabólica
microbiana, con fines de estudios en cuanto a la multiplicación, identificación entre
otros.
Así mismo conocer los tipos de medios de cultivo y constituyentes que se utilizan en
la preparación, como el Agar, Extractos, peptonas entre otros.
También es importante tener conocimiento sobre la empleabilidad del autoclave en el
proceso de esterilización, el cual consiste en generar presión y elevadas temperaturas,
dentro de estos podemos introducir medios de cultivos para que alcancen temperaturas
optimas de esterilidad, así mismo su utilización para la eliminación de muestras que
generen riesgos propios o al medio ambiente.
 Bibliografía

Cuevas, B. L. (2016). Microbiología clínica (1.a ed.). Editorial Síntesis, S.A. recuperado
de https://www.sintesis.com/data/indices/9788490773185.pdf

Bqca. QM Alicia I. Cuesta. (2005). Aseguramiento de calidad MEDIOS DE CULTIVO

Y REACTIVOS. Consultora Internacional de la FAO.
http://www.fao.org/tempref/GI/Reserved/FTP_FaoRlc/old/prior/comagric/codex
/rla3013/pdf/aseg3.pdf

U. (2014, 11 marzo). Ingeniería Bioquímica. CULTIVO AXENICO (PURO).

REUPERADO DE http://bioquimicamicro.blogspot.com/2014/03/cultivo-
axenicopuro-introduccion.html#:%7E:text=Un%20cultivo%20ax%C3%A9nico
%20consiste%20en,Existen%20cultivos%20mixtos.

Procedimiento para el uso de autoclave. (2015, 20 marzo). COMITÉ INTERNO DE

SEGURIDAD, SALUD OCUPACIONAL Y CALIDAD, P-PROBIEN No
002/2015, probien. https://probien.conicet.gov.ar/wp-
content/uploads/sites/56/2017/06/002-Procedimiento-autoclave-PROBIEN.pdf