MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN

MATERIAL

-Medios de cultivo: SIM, caldo nutritivo, agar sangre, agar nutritivo, etc.

-Cajas petri

- Tubos de ensaye

- Pipetas

-Matraz Erlermeyer

-Asas y aguja de siembra

-Autoclave u olla de presión

-Horno de esterilización

-Papel revolución

-Algodón y gasas

COMPETENCIA ESPECÍFICA: Conocer los diferentes métodos de esterilización

utilizados en bacteriología, así como su procedimiento, ventajas y desventajas.
 Competencias Instrumentales: Capacidad de organizar y planificar
 Competencias interpersonales: Trabajo en equipo; Habilidad para el trabajo
en laboratorio ; Apreciar el conocimiento y los hábitos del trabajo, cultivar la
precisión y la curiosidad; así como, el entusiasmo y el interés por la
microbiológica
 Competencias sistémicas: Capacidad de aplicar los conocimientos de la
microbiología en la práctica; Habilidades de investigación

INTRODUCCIÓN
Existen varios métodos de esterilización, cada uno con una ventaja particular para
el material utilizado; los métodos existentes son: calor seco u horno de aire caliente,
calor húmedo “autoclave”, calor directo “flama”, ebullición, productos químicos entre
otros.

a) Calor húmedo “autoclave”

b) Calor seco “horno de aire caliente”
c) Calor directo “flama”

PROCEDIMIENTO:

a) TECNICA DE ESTERILIZACION DE CALOR HUMEDO.

Se utiliza principalmente el autoclave, es útil para medios de cultivo.

AUTOCLAVE
1.- Lavar y/o preparar el material a esterilizar de manera adecuada.
2.- Depositar de manera segura el material a esterilizar en la cubeta del autoclave.
3.- Vaciar el agua destilada en el autoclave hasta donde indica la marca del nivel.
4.- Cerrar la tapa cuidando de apretar los pernos como lo indique el instructor.
5.- Encender y girar el reóstato (botón) en la posición “alto”.
6.- Cuando el agua contenida dentro del autoclave hierve, el vapor elimina el aire
del autoclave, el escape del vapor por la espitia (que estará abierta) es irregular. Un
chorro continuo indica la eliminación completa del aire, con lo que se procede a
cerrar la espitia, la temperatura y la presión suben enseguida.
7.- Cuando se ha obtenido la temperatura deseada de 120°C a 121°C que
corresponde a Kg. de presión, girar el botón en la posición de “medio” lo cual nos
permite conservar la temperatura y la presión deseada por un tiempo determinado
de 120°C -121°C por 15 minutos a 1 Kg. de presión.
8.- Trascurridos los 15 minutos se coloca el reóstato en la posición de “OFF”
(apagado), el manómetro indicará un descenso en la presión.
9.- Cuando la presión es nula, se abre la espitia de escape de vapor, penetrando el
aire al aparato. Solamente entonces puede abrirse la tapadera y retirar los objetos
húmedos ya esterilizados.

b) TECNICA DE ESTERILIZACION CON CALOR SECO

1.- El material de vidrio debe encontrarse limpio y libre de sales.

2.- Se procede a tapar el material ya sea con sus tapaderas ó fabricarlas con
algodón ó gasa.
3.- Envolver en papel y llevarlo al horno (evitando el contacto con las paredes del
horno), las extremidades de los objetos que llevan algodón ó papel deben colocarse
hacia arriba.
4.- Encender y controlar la calidad de la flama si el calentamiento es con gas.
5.- Para tubos de vidrio, pipetas (por separado) y cristalería en general, utilizar
170°C por espacio de 1 hora. (Otros textos 150°C por 2 horas)
6.- Transcurrido el tiempo de esterilización se apaga el horno y se deja enfriar para
sacar el material.

c) TÉCNICA DE ESTERILIZACIÓN CON CALOR DIRECTO

Se utiliza para asas bacteriológicas y agujas de inoculación.
1.- Estas se deben esterilizar antes y después de llevar acabo la siembra de
cualquier tipo de bacteria.
2.- Poner el asa o aguja directamente en la parte azul de la flama durante algunos
segundos.
3.- Cuando el metal se torna de color rojo, se retira y se enfría en las paredes
inferiores del recipiente de cultivo.

PRUEBA DE ESTERILIDAD DE MATERIALES

1.- Colocar los tubos con agar inclinado y/o las cajas de petri en forma invertida en
una estufa de incubación ajustada a 30°C durante 24 - 48 horas.
2.- Revisar los tubos y cajas de petri para detectar la presencia de contaminantes,
por la aparición de turbidez, nata superficial y/o depósito de material en el fondo de
los tubos con medio líquido, así como la formación de colonias microbianas en la
superficie de medios sólidos.
3.- Si no hay contaminación de los medios, se abrirá una de las cajas de petri de
cada medio durante un minuto en el laboratorio o zonas accesorias al mismo y se
etiquetará como al “aire”.
4.- La otra caja de cada medio de cultivo se mantiene durante 30 segundos cerca
del mechero y se etiquetará “en área aséptica”.
5.- La tercer caja se conservará sin abrir y se etiqueta como “control”.

Diagramas

CUESTIONARIO
1.- ¿Qué se entiende por esterilización?
Es un método que se utiliza en microbiología y en otras ciencias que se
encarga de matar o desactivar todos los microorganismos vivos que se
encuentren en un material de laboratorio.

2.- ¿Cuál es la importancia de la esterilización de todo el material usado en

bacteriología?
La importancia es en bacteriología es que con todo el material esterilizado
este ya no llega a una contaminación tanto de la muestra o cultivo que se
tenga si no del material también es para llegar a que no se contamine.

3.- ¿Qué métodos se usan para esterilizar los medios de cultivo? ¿Por qué no se
utilizan las otras técnicas conocidas?

4.- ¿Cuál es el fundamento teórico de la esterilización en autoclave?

El calor húmedo es un método térmico de esterilización y mata
microorganismos por la coagulación de proteínas (desnaturalización), lo
que es causado por la rotura de los puentes de hidrógeno que son los que
mantienen a las proteínas en su forma tridimensional, las proteínas por lo
tanto regresan a su estructura secundaria, se coagulan y se convierten en
proteínas no funcionales. El calor húmedo puede penetrar más rápidamente
que el calor seco porque las moléculas de agua conducen mejor el calor
que las moléculas de aire. Por ello el calor húmedo puede ser usado a
temperaturas más bajas y menor tiempo de exposición que el calor seco.

5.- ¿Por qué el asa bacteriológica se debe esterilizar siempre antes y después de
usarse?
Para que no contamine otras muestras bacterianas diferentes o iguales.

6.- Mencione otras técnicas de esterilización.

Pasteurización, incineración y la ebullición

CONCLUSIONES: Es importante que se lleve a cabo la esterilización de

materiales que se van a utilizar cada vez que se lleve a cabo un proceso
microbiano ya que al no hacerlo este puede llevar más contaminación a
muestras. Se necesita hacer una limpieza de cada uno de los materiales
utilizados antes y después. La esterilización es necesaria para algunos
materiales de laboratorio.

FUENTES CONSULTADAS:

Sánchez, N. (sin fecha). Microbiología general. Recuperado de

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/1HistoriaMicrobiologia_26628.pdf