Práctica 1

Preparación y esterilización de material de laboratorio

en el área de bacteriología.

Nombre de la escuela: CBTIS 78

Alumno: González Antonio Manuel Eliab
Docente: QFB. Alma Rosa Hernández Meneses
Fecha de entrega: 9 de octubre de 2020
Práctica 1
Preparación y esterilización de material de laboratorio en el área de
bacteriología.

Objetivo:
Que el alumno identifique los materiales de uso común en el área de bacteriología, así
como también su preparación para la esterilización, el método que se utiliza y el
instrumento en la cual se realiza.

Fundamento:
Esterilización: Esterilización es la acción y efecto de esterilizar. Este verbo refiere a la
acción de destruir los gérmenes patógenos o de hacer estéril e infecundo algo que antes
no lo era. Puede utilizarse la noción de esterilización, por lo tanto, para nombrar al control
del crecimiento microbiano que permite eliminar toda forma de vida, como virus y
esporas. De esta manera, la esterilización se encarga de la destrucción de los
microorganismos que se hallan en un objeto, sustancia o lugar.
Importancia de la esterilización en el área bacteriológica: Permite eliminar la carga
microbiana patógena y no patógena, incluidas las esporas, de productos e instrumentos
que lo requieran como el instrumental médico o los medios de cultivo. Para que sea eficaz
debe realizarse sobre materiales limpios y respetando los parámetros y procedimientos
definidos para cada método, es importante para evitar la contaminación de las muestras y
así alterar el resultado.

Clasificación de los métodos de esterilización:

Físicos.
Son aquellos que ameritan cambios de temperatura a fin de poder erradicar de la
superficie todo tipo de agente negativo que se encuentre en la misma, el más conocido de
estos, es el método al vapor.
Esta consiste en la introducción de los objetos que se desean esterilizar en un envase, el
cual servirá de contención para que el vapor haga su efecto, todo esto por medio del uso
de un recipiente que inyectará el gas caliente a una temperatura elevada, que por lo
general oscila entre los 130 y 150 grados, este no es lo suficientemente elevado para
descomprimir la estructura interna del objeto, pero si resulta eficaz para su esterilización;
éste método se conoce también bajo el nombre de aire caliente.
Químicos.
Estos procesos inmiscuyen el uso de sustancias preparadas y especiales para producirse la
esterilización, las cuales consisten en la introducción del objeto en el líquido, o bien en la
aplicación de este sobre el mismo.
Tal es el caso de la esterilización al frío que se produce por la inmersión del objeto en agua
oxigenada por una cierta cantidad de tiempo, o bien en la aplicación de glutaraldehído
sobre la superficie del objeto, para la eliminación inmediata de bacterias.
Definición de autoclave: Una autoclave es un recipiente metálico de paredes gruesas con
cierre hermético que permite trabajar con vapor de agua a alta presión y alta temperatura
que sirve para esterilizar instrumental (material médico, de laboratorio, etc.) o alimentos.

Material: Autoclave, hisopos, abatelenguas, solución salina, matraz Erlenmeyer, gradilla,

o vaso de precipitado, cajas de Petri, pipetas graduadas de vidrio, papel Kraft o de estraza,
cinta testigo, gasa, tubos de ensayo.

Técnica:
Preparación de material para esterilizar:
1.- Realizar los hisopos con la ayuda de un aplicador de madera y algodón.
2.-Envolverlos con papel de estraza o Kraft y sellar con cinta testigo.
3.-Proceder a realizar la misma operación con los abatelenguas.
4.-En un tubo de ensayo de 13X100 depositar 2 ml de solución salina y taparlo con un
tapón de algodón, para posteriormente sellarlo con un gorrito elaborado con papel de
estraza, el cual deberá fijarse al matraz con la cinta testigo.
5.-Colocar los tubos en una gradilla o vaso de precipitado.
6.-A las pipetas de vidrio se les deberá introducir un pequeño tapón de algodón en su
boquilla y posteriormente forrarlas con papel de estraza y sellarlas con cinta testigo. (se
debe identificar la graduación y la parte por donde se abrirá la pipeta).
7.-A los matraces se les debe preparar con un tapón de algodón y gasa para
posteriormente cubrirlos con un gorro de papel de estraza y sellarlos con cinta testigo.
8.-Las cajas de Petri se envolverán y se sellan con cinta testigo
9.-Depositar todo el material en la canastilla de la autoclave para esterilizar.
Esterilización en autoclave
1.- Verificar que el nivel de agua sea el adecuado.
2.-Acomodar el material en la canastilla e introducirla en la autoclave.
3. Se enciende la autoclave, previo cierre de las llaves de mariposa por parejas. (Dejar
abierta la válvula de vapor).
4.-Cuando el vapor comience a salir por la válvula esta se cierra y la presión junto con la
temperatura comenzaran a subir.
5.- Tomar el tiempo de 15 a 20 minutos al llegar a las 15 libras de presión (15 min. para
medios de cultivo y 20 para cristalería).
6.- Verificar que la autoclave no rebase las condiciones adecuadas.
7.-Cuando se ha llegado al tiempo adecuado, se apaga la autoclave y se abre lentamente
la válvula de vapor, para que este salga lentamente. Nota: Solo se puede abrir hasta que el
manómetro marque cero.

Autoclave y sus partes:

Cuestionario:
1.- ¿Qué es fundamental en el área de microbiología dentro de un laboratorio clínico
para el estudio de microorganismos? R: Es fundamental que todos los recipientes, medios
de cultivo y dispositivos de siembra que se utilizan para el estudio de los microorganismos
estén estériles.
2.- ¿Por qué es importante que el material este estéril protegido? R: Para que una vez
estéril no se contamine.
3.-Qué materiales se esterilizan en el área de bacteriología de acuerdo al video? R:
Todos los matraces, tubo de ensaye, pipetas, cajas Petri, equipo de filtración (matraz
kitazato, embudo con superficie porosa, un vaso y pinzas.),
4. ¿Qué es un indicador de esterilización? R: Para que un producto sea clasificado como
estéril, se debe garantizar que todas las etapas del proceso fueron realizadas de forma
correcta y que el proceso de esterilización es validado. Para el monitoreo del proceso de
esterilización se utilizan indicadores: los indicadores de esterilización son equipos o
reactivos que tienen como objetivo certificar o validar que el proceso se efectuó de forma
adecuada.
5.- Define cinta testigo y a ¿qué método de esterilización pertenece? R: La cinta testigo es
adecuada para procesos de esterilización por vapor y contiene un indicador tipo uno
conforme al EN ISO 11140-1. La cinta testigo se adhiere a la envoltura del paquete. El
indicador sólo provee información acerca del impacto del vapor con la superficie del
paquete o contenedor. Como es un hecho que las circunstancias de esterilización dentro
del paquete y dentro de dispositivos huecos pueden ser completamente distintas
dependiendo del proceso de esterilización, remoción de aire y calidad del vapor, el uso de
un indicador de proceso no reemplaza el monitoreo de la esterilización.
De acuerdo a la NOM ISO1140 parte 1 esta pertenece a la clase 1 o indicadores externos o
de proceso.
6.- Define hisopo: Es un material que se ocupa se usa en una laboratorio, uno de sus usos
en el área de bacteriología es proteger la boquilla de los matraces y/o tubos de ensaye
entre otros.
 Bibliografía:
https://definicion.de/esterilizacion/

https://quercuslab.es/blog/esterilizacion-del-material-de-laboratorio/

https://www.clasificacionde.org/tipos-de-esterilizacion/

http://www.sterileservice.com.mx/files/INDICADORES.pdf

https://www.youtube.com/watch?v=Nw5DkCnVEWw&feature=youtu.be
Práctica 2
Conocimiento y clasificación de los medios de cultivo
bacteriológicos

Nombre de la escuela: CBTIS 78

Alumno: González Antonio Manuel Eliab
Docente: QFB. Alma Rosa Hernández Meneses
Práctica 2
Conocimiento y clasificación de los medios de cultivo
bacteriológicos

Objetivo:
Que el alumno conozca ¿qué es un medio de cultivo bacteriológico y cómo se clasifican?

Fundamento:
Medios de cultivo: Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los
que crece y se multiplican los microorganismos en el laboratorio, contiene los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento
de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas, con el fin
de identificarlas y realizar estudios complementarios.

Clasificación
Pueden clasificarse según su:
 Consistencia
 Origen
 Composición
 Utilización
 Consistencia
Líquidos: contienen nutrientes a los cuales se les adicionan
sustancias con la capacidad de mantener estables un pH,
entre ellos podemos encontrar el caldo nutritivo y caldo
peptona.
Caldo nutritivo

Sólidos: se obtienen agregando agar (sustancia de tipo polisacárido que se obtiene de

algas marinas) a un medio liquido determinado. Al tener un
medio sólido, nos facilita obtener colonias bacterianas
aisladas. Agar común
Semisólidos: similares a los medios sólidos, la única diferencia
es que a estos se les disminuye la cantidad de agar, lo que
permite conservar cepas bacterianas y la observación y registro
de bacterias móviles.

Agar SIM

Origen
Según su origen los medios de cultivo se dividen en medios sintéticos y
medios naturales.
 Los medios sintéticos o químicamente definidos son medios compuestos
por productos químicos conocidos y se utilizan para realizar estudios metabólicos,
por ejemplo: agar blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de metileno, etc.
 Los medios naturales o químicamente no definidos son aquellos medios
que se preparan a partir de sustancias naturales animales o vegetales, por
ejemplo: suero, leche, papa, etc.

Composición y utilización
Según su utilización y su composición los medios de cultivo se pueden
clasificar en:
 Simples
 Enriquecidos
 Selectivos
 Diferenciales
 Enriquecimiento

Medios Simples
Poseen los requisitos nutricionales para permitir el desarrollo bacteriano general,
ejemplos: agar nutritivo, caldo nutritivo, entre otros.
Medios enriquecidos
Son medios simples o comunes, a los que se le añaden ciertos elementos como sangre,
suero, líquido ascítico, huevo, glucosa, vitaminas, etc. lo que permite el aporte de factores
de crecimiento o sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento en
bacterias exigentes nutricionalmente, entre algunos ejemplos: agar sangre, medio de
Löwenstein-Jensen, enriquecido con huevo para facilitar el crecimiento de
Mycobacterium; agar desoxicolato-lactosa (DLA), enriquecido con lactosa y desoxicolato.

Medios selectivos
Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos químicos nocivos para
algunas bacterias cuyo crecimiento no es de interés o también mediante una
alteración de las condiciones físicas del medio, entre algunos ejemplos
tenemos:
 El agar Mac Conkey que contiene cristal violeta.
 Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya que este posee antibióticos como
la vancomicina colistina y nistatina.
 Caldo lactosado bilis verde brillante en donde la bilis inhibe el crecimiento de
bacterias gran positivas.
 Löwenstein-Jensen con verde de malaquita es selectivo para Mycobacterium.

Medios diferenciales
A estos medios se le adiciona sustancias para que solo crezcan ciertas
bacterias y estas, al actuar sobre alguna de las sustancias adicionadas,
permiten observar macroscópicamente ciertas propiedades de crecimiento
que ayudan a diferenciar sus colonas de otras especies diferentes, entre
algunos ejemplos encontramos:
 Agar eosina azul de metileno (EMB), diferencia E. coli (color verde metálico
brillante) de colonias de Enterobacter aerogenes (color rosado, consistencia
mucosa y crecimiento abundante).
 Agar sangre, diferencia variedades de Streptococcus pyogenes en Streptococcus
betahemolíticos de Streptococcus alfa hemolítico y gama hemolítica.
  Agar Salmonella-Shigella tiene lactosa y un indicador de pH que permite
diferenciar las colonias de bacterias fermentadoras de este disacárido.

Medios de enriquecimiento
Son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de las
bacterias cuando la muestra obtenida es muy pobre, por ejemplo:
 Caldo tioglicolate, favorece el crecimiento de las bacterias anaeróbicas.
 Caldo tetrationato, favorece crecimiento de bacterias microaerófilas.
 Los caldos bilis y de Muller-Kauffman, favorecen el crecimiento del género
Salmonella.
 Caldo o agua peptonada, se utiliza para el crecimenot de Vibrio Cholerade.
 Bibliografía
https://edulabc.com.mx/medios-de-cultivo/
https://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo
https://es.wikibooks.org/wiki/Microbiolog%C3%ADa/
Medios_de_cultivo#:~:text=%2D%20Ejemplo%3A%20Agua%20peptonada
%2C%20Caldo,no%20permiten%20los%20medios%20l%C3%ADquidos.