el “Año de la unidad, la paz y el desarrollo”.

Con

Profesor: Julio Ivan Cruz Colque

Alumna: Tania Rosmery Perez Aroni
Código: 212165
Grupo: C

ABANCAY-2022
 ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES Y PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVOS.

I. INTRODUCCIÓN

La esterilización implica la destrucción de todos los microorganismos,

incluyendo los esporos. La desinfección supone la destrucción de los
microorganismos vegetativos que pueden causar enfermedades o en el contexto de
las industrias de alimentos, los que pueden producir alteraciones. La desinfección
no mata necesariamente a los esporos.

Microbiología General el curso de microbiología de alimentos es necesario

puesto que nos muestra mayor información sobre las características generales de
los microorganismos, su estructura, metabolismo e importancia industrial. En el
presente informe aprenderemos a usar adecuadamente los diferentes métodos de
esterilización de materiales de laboratorio, teniendo en cuanta que para cada
material de laboratorio existe una distinta manera de esterilizarlo, también
conoceremos nuevos equipos de laboratorio de microbiología y su uso correcto.
Teniendo como objetivos; Que al término de la práctica el alumno deberá saber el
manejo de los equipos y materiales de laboratorio de microbiología de los alimentos,
así como también deberá saber el uso de las técnicas de esterilización de los
materiales.
La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo
que asegura la ausencia absoluta de cualquier forma viviente. Una esterilización
deficiente o manipulación incorrecta de materiales y medios de cultivo conlleva a
contaminaciones, resultados erróneos o pérdida del material biológico. Por ello, se
requieren buenas prácticas de laboratorio para su adecuado manejo. La
esterilización por calor seco o húmedo son los métodos que se utilizan con mayor
frecuencia en el Laboratorio de Microbiología. El calor seco destruye a los
microorganismos por oxidación, por ejemplo, al exponerlos directamente a la flama
de un mechero o en horno a 150-180°C durante 2 horas. Estos métodos se aplican
en la esterilización de asas de inoculación y para todo tipo de material de vidrio y
quirúrgico.
 Los procesos con calor húmedo afectan la estabilidad de estructuras
celulares y proteínas; se aplican para esterilizar medios de cultivo, soluciones
termoestables, materiales de vidrio y cultivos bacterianos que se desechan.

El equipo de uso común es la autoclave, que utiliza vapor de agua a presión

(15 lb/in2); con esta presión el material alcanza una temperatura de 121 °C y si se
mantiene durante 15 minutos se asegurará la inactivación de endosporas, que son
las estructuras bacterianas más resistentes al calor.

II. OBJETIVO.

Que el alumno conozca los principios generales de las técnicas de

esterilización de materiales de vidrio y medios de cultivo de uso común en
microbiología y el efecto de las condiciones de asepsia en el control de la
contaminación microbiana.
LUGAR:

 Práctica de laboratorio

SEMANA DE EJECUCIÓN

 La práctica de realizar en la cuarta semana clases.

MATERIAL Y EQUIPOS

 10 tubos de cultivo de 16 X150 mm con tapón

 9 cajas Petri de vidrio
 3 pipetas de 1 ml
 3 pipetas de 5 ml
 3 pipetas de 10 ml
 2 pipetas Pasteur
 3 matraz Erlenmeyer de 250 ml
 2 probetas de 100 ml
 2 Vasos precipitados de 250 ml
 2 Vasos precipitados de 100 ml
 2 Matraz aforado de 500 ml
 Parrilla de calentamiento con agitación
 Autoclave
 Potenciómetro con los amortiguadores
 Estufa de convección
 2 Mecheros
 Incubadora
 Algodón
 Papel estraza
 Picetas con agua destilada
 Picetas con alcohol

REACTIVOS

 Peptona de caseína
 NaCl (Cloruro de Sodio)
  Extracto de carne
 Extracto de papa
 Agar
 Glucosa
 HCl (ácido clorhídrico)
 NaOH (hidróxido de sodio)

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Procedimiento explicación

El profesor explicara por qué es importante la esterilización de los materiales y los

medios de cultivo para identificación de microorganismo en la actividad agrícola.
Mostrará a los alumnos la manera de cómo envolver los materiales de vidriería
para la esterilización el uso de la autoclave.

Limpieza y esterilización del material

 Los alumnos lavan en forma respectiva el material de vidrio con jabón

neutro posteriormente enjuagar con abundante agua corriente.
 Escurrir el exceso de agua y enjuagar el material con agua destilada. Dejar
escurrir el material sobre una toalla o papel de envolver.

Preparación de los medios de cultivo

Agar nutritivo (AN) para bacterias.

Se preparan 120 ml del cultivo, se pesan 5 gr de peptona de caseína, 8 gr de

NaCl, 3 gr extracto de carne y 15 gr de agar. Se colocan 120 ml de agua destilada
en un matraz Erlenmeyer con agitación y se van agregando los reactivos según el
orden, posteriormente se ajusta el pH de 6.5-7.0 y se poner calentar hasta
ebullición durante un minuto evitando el desorden. Vaciar 5 mL de medio en cuatro
tubos con tapón de rosca. Enjuagar de inmediato la pipeta para evitar que se
solidifique el agar.

Papa dextrosa agar (PDA) para hongos.

Se preparan 120 ml del medio, se pesan 20 gr de glucosa, 4 gr de extracto de papa,
agar, 15 gr se disuelven todos los reactivos según el orden en un matraz Erlenmeyer
de 250 ml, ajustar el pH del medio a 5.6. Colocar un agitador magnético y calentar
hasta ebullición, cuidando que no se proyecte o derrame. Vaciar 5 mL de medio en
cuatro tubos sin rosca que se taparán con tapón de algodón y gasa.

Procedimiento de esterilización de material y medios de cultivo

Esterilización del material

 Se envuelve las cajas Petri y pipetas con papel estraza, como se explicó al
inicio de la práctica, se colocan en un horno a 150ºC previamente calentado
durante 2 horas.
 Pasando el tiempo de esterilización deben sacarlas y dejar enfriar y abrir los
paquetes únicamente en área aséptica (cerca del mechero).
Esterilización de medios de cultivo

Para los medios de cultivos se debe tomar las siguientes indicaciones:

 Revisar que el agua en la autoclave esté limpia y el nivel coincida con la
marca en el tubo indicador.
 Conectarla y poner la perilla de control en calentamiento máximo. Con el uso
de guantes de asbesto, acomodar los medios y materiales en la canasta de
la autoclave y colocarla dentro.
 Cerrar la tapa, apretar las manijas de dos en dos en posición encontrada y
esperar a que salga el vapor por el orificio de purga, después cerrarlo con la
válvula.
 Dejar que el equipo se caliente hasta alcanzar los 121°C o 15 lbs /in2 de
presión y mantener estas condiciones durante 15 minutos. Revisar
continuamente el manómetro y regular el control de temperatura a valor
medio o mínimo
 Apagar la autoclave y dejar que la presión baje al valor de cero. Quitar la
válvula y con la ayuda de guantes de asbesto, abrir cuidadosamente la
 tapa, desde la parte trasera para evitar que el vapor caliente cause
quemaduras.

Preparación de las cajas Petri y tubos de cultivo

 Cerrar los tubos con tapón de rosca, los que contienen agar se colocarán
en una superficie inclinada para que el medio solidifique a una distancia
aproximada de 1 2 cm de la boca del tubo.
 Enfriar los medios de cultivo de los matraces hasta una temperatura
aproximada de 45-50°C, que coincide con la posibilidad de sostener el
matraz en la palma de la mano sin quemarse.
 Limpiar la mesa con solución de alcohol al 70% (v/v), encender mecheros y
colocarlos a una distancia de 50 cm. Verter entre 20 y 25 mL de cada uno de
los medios en tres cajas Petri en esta zona aséptica. Dejar que los medios
solidifiquen.

EVALUACIÓN Y RESULTADOS

Evaluación de esterilidad de materiales

 Abrir una caja Petri de AN y PDA, así como un tubo de AN y PDA durante 1
minuto en zonas no asépticas (patio, aulas, comedor) y etiquetarlas.
 Abrir una caja Petri de AN y PDA, así como un tubo de AN y PDA durante 1
minuto en zonas asépticas (cerca del mechero) y etiquetarlas.
 Colocar los tubos y las cajas Petri en una incubadora ajustada a 30ºC durante
24-48 horas. Las cajas Petri se colocarán con la tapa hacia abajo.
 Revisar los tubos y cajas Petri para detectar la presencia de contaminantes,
por la aparición de turbidez, nata superficial y/o depósito de material en el
fondo de los tubos con medio líquido, así como la formación de colonias
microbianas en la superficie de los medios sólidos.
Resultado
 Reportar el crecimiento en forma cualitativa
 Describir la morfología de las colonias
  Discutir los resultados con base en la efectividad de la esterilización
ymanejo de los materiales.


ANEXOS
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
REFERENCIAS

 Manual de Bioseguridad en el Laboratorio (2005). Organización Mundial

51
 dela Salud. 3ª. Edición. Ginebra. Suiza
 Pelczar, M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. (2000). Microbiología. 6ª ed.
McGraw Hill. México.
 Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003). Microbiología. 5ª ed.
McGrawHill. España.

52