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Informe de Laboratorio I. Alistamiento de material y Esterilización

Facultad de Ciencias, programa de Química Farmacéutica - Microbiología
Laboratorio de microbiología | UEB
14/02/2022-1
Ana María Ortegón, Laura Valentina Rodríguez, Niccolo Gonzalez, Santiago Caro &
Sara Daniela Rodríguez
Resultados.
Durante la práctica del laboratorio se realizó la esterilización de materiales fundamentales
para realizar un cultivo (Caja de Petri, pipeta, hisopos), se reconoció los pasos
fundamentales para la esterilización por calor húmedo, la forma adecuada para empacar los
materiales y como se realizan dos tipos de medios de cultivo, agar nutritivo y caldo verde.

Imagen 1. Empaquetamiento correcto de cajas de Petri.

Imagen 2. Evidencia del indicador antes de la esterilización.

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Imagen 3. Evidencia del indicador después de la esterilización.

Imagen 4. Medios de cultivo

Cálculos.
o Preparación de 340 ml de agar nutritivo
28 𝑔 𝑎𝑔𝑎𝑟
340 𝑚𝑙 𝑎𝑔𝑎𝑟 × = 9,52 𝑔 𝑎𝑔𝑎𝑟 𝑛𝑢𝑡𝑟𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜
1000 𝑚𝑙 𝑎𝑔𝑎𝑟

o Preparación de 240 ml de caldo verde

40 𝑔 𝑐𝑎𝑙𝑑𝑜
240 𝑚𝑙 𝑐𝑎𝑙𝑑𝑜 × = 9,6 𝑔 𝑐𝑎𝑙𝑑𝑜 𝑣𝑒𝑟𝑑𝑒
1000 𝑚𝑙 𝑐𝑎𝑙𝑑𝑜

Análisis de Resultados.
La esterilización en el laboratorio es un procedimiento que elimina toda la suciedad
superficial y visible al ojo humano, sin embargo, su principal objetivo es la eliminación de
todas las formas de vida microbianas como virus, hongos o bacterias (Weber et al., 2007).
Este proceso es usado fundamentalmente antes de cualquier procedimiento que intervenga el
cuerpo humano, para evitar posibles infecciones, asegurar que los productos o estudios que
se realicen cumplan con los más altos estándares de esterilización y no se presenten
complicaciones por infección. En la práctica de laboratorio se usó el método de
esterilización por calor húmedo en autoclave, el cual destruye los microrganismos por la
coagulación de proteínas celulares, además este método cuenta con una ventaja frente a otros
puesto que los materiales húmedos conducen mejor el calor que los secos, ya que el agua
tiene mayor coeficiente de transferencia de calor que el aire (Hernández-Navarrete et al.,
2014). Se realizó un envolvimiento en papel Kraft del materia(Imagen 1) dado que este tiene
una porosidad alta permitiendo el flujo del vapor por todo el material a esterilizar, para que
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las cajas de Petri, pipetas y hisopos quedaran bien envuelto se utilizó cinta de enmascarar y
adicionalmente se colocó una cinta indicadora de carácter químico que varía su color según
la temperatura alcanzada, en este caso la cinta tenía franjas beige (Imagen 2) y cambia a
negro (Imagen 3) después de la esterilización, demostrando que se alcanzó el punto de
temperatura requerido para una correcta esterilización.

Luego de realizar la esterilización a una temperatura de 121 C por 15 minutos se realizó la

limpieza del mesón, usando gasas estériles y alcohol el cual es un agente microbicida y
germicida de nivel intermedio, que, al ser aplicado sobre una superficie contaminada de
microorganismos,logra demostrar la eficacia desinfectante, donde se busca reducir la carga
microbiana de hasta un 99.9% (Gaceta dental, 2013). Se analizo la mejor manera de sentido
de limpieza, concluyendo que era importante hacer el movimiento de adentro hacia afuera de
la superficie puesto que así se evitaba la contaminación con algún contacto físico (bata,
mano, guantes) y era importante no pasar dos veces la gasa sobre la misma superficie.
Posteriormente de haber realizado la desinfección, se debe encender el mecheroBunsen, ya
que este nos brinda un área estéril debido a que el flujo de aire que brinda el mechero ayuda
a que los microorganismos se encuentren en una menor proporción para el riesgo de
contaminantes en el área de trabajo debido a que el calor tiene la capacidad de destruir estos
microorganismos (Peral, M. M., Martínez, M., & Cane, M. R. 2009).

Finalmente, se realizaron los medios de cultivo, los cuales son mezclas específicas de
nutrientes y otras sustancias que permiten el crecimiento de microorganismos como bacterias
y hongos (levaduras y mohos). Los medios de cultivo se utilizan para pruebas de control de
calidad de materias primas no estériles y productos terminados, así como para pruebas de
contaminación microbiana (esterilidad) en aplicaciones como el control de la higiene, la
validación del proceso de esterilización y la determinación de la eficacia de conservantes y
agentes antimicrobianos (Westlab, 2018). Se realizaron los respectivos cálculos para 1L de
solución para el caldo verde brillante y agar nutritivo, obteniendo como resultado 9,6g y
9,52g respectivamente ; estos se pusieron en un matraz y se llevaron hasta punto de
ebullición, con el fin de que se disolvieran por completo (Imagen 4), una vez se encuentren
en una sola fase, se introducen a la esterilización por autoclave y al salir de esta el agar se
colocó en 5 cajas de Petri estériles donde se tomaron muestras microbianas (medio ambiente,
mano sucia, mano limpia, baño sucio y baño limpio). Para tomar estas muestras fue
indispensable el caldo ya que permitía humedecer el hispo donde se tomaban las muestras,
facilitando la recolección.

Conclusiones.
• Si bien no se lograron observar cambios tangibles en los resultados de laboratorio, se
desarrollaron pericia para esterilizar el material de laboratorio por el método de calor
húmedo.
• Se puntualizo en la importancia de la limpieza y desinfección del espacio de trabajo,
así como en el manejo del material de laboratorio antes y después de su esterilización
en la autoclave.
• Fue fundamental el uso del papel kraft y del mechero buncen para evitar la
contaminación después de sacar el material del autoclave.

Bibliografía.

• Hernández-Navarrete, M. J., Celorrio-Pascual, J. M., Moros, C. L., & Bernad, V. M. S.

(2014). Fundamentos de antisepsia, desinfección y esterilización. Enfermedades
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Infecciosas y Microbiología Clínica, 32(10), 681–688.

https://doi.org/10.1016/J.EIMC.2014.04.003
• Weber, D. J., Rutala, W. A., & Sickbert-Bennett, E. E. (2007). Outbreaks associated with
contaminated antiseptics and disinfectants. Antimicrobial Agents and Chemotherapy,
51(12), 4217–4224. https://doi.org/10.1128/AAC.00138-07
• Peral, M. M., Martínez, M., & Cane, M. R. (2009). Esterilización. Universidad San
Pablo Ceu.
• Efectividad y seguridad de los procesos de esterilización en Odontología. Obtenido de
Gaceta Dental. (2013, 8 abril): https://gacetadental.com/2013/04/e fectividad-y-
seguridad-de-los-proc esos-de-esterilizacion-en-odontolo gia-23956/
• Different sterilization methods used in the laboratory Westlab. (2018, 5 febrero).
Westlab.https://www.westlab.com/blog/2018/02/05/different-sterilization-methods-
used-in-the-laboratory