UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE TECÁMAC

DIVISIÓN QUIMICO BIOLOGÍCAS

PROCESOS FERMENTATIVOS

Practica 4

Esterilización de medios y preparación de caldos y agar de cultivo para la

recuperación de levaduras

Presentan:

Barrera Reyes Enandi Hazel

Delgado Moctezuma Alexa Amayrani

Flores Romero Mitzi Ariana

Rojas Sánchez Juana Yamileth

Prof. Marcos Ignacio Jimenez Zuniga

28 de octubre 2023

4QBT4
 Introducción

La esterilización es un mecanismo por el que se consigue la muerte o eliminación de todos los

microorganismos vivos de una muestra, medio, superficie o material de trabajo. Entre los

microorganismos vivos se incluyen bacterias, hongos, protistas, virus y sus formas de resistencia.

(Silóniz. y otros, 2010)

La esterilización se consigue generalmente por métodos físicos y excepcionalmente por la

aplicación de compuestos químicos. Entre los métodos físicos más comunes está la aplicación de calor

(calor húmedo o calor seco), la filtración o las radiaciones. La esterilización sin embargo también se

puede conseguir mediante la aplicación de algunos productos químicos, como el óxido de etileno,

formaldehído o glutaraldehído.

El método que se utilice para esterilizar depende del tipo de material que se va a esterilizar, la

filtración permite la remoción de todos los microorganismos presentes en un liquido o un gas

reteniéndolos sobre la superficie de un material. Los agentes químicos tienen la capacidad de promover

reacciones químicas capaces de dañar los componentes celulares de los microorganismos. (Gomez &

Linsdey, 2016)

Cuando el material a esterilizar soporta altas temperatura sin sufrir ningún tipo de daño, el calor

puede utilizarse como agente esterilizante. El calor seco destruye a los microorganismos por oxidación

de sus componentes celulares, mientras que el calor húmedo destruye a los microorganismos por

desnaturalización de las proteínas críticas y ácidos nucleicos dentro de la célula. (Facultad Farmacio

Catedra Micro, 2023)

En esta práctica se realizó la esterilización de medios de cultivo, así como los materiales que

se utilizaron para el cultivo. Al mismo tiempo se realizó la esterilización de biorreactor. Esto con el

objetivo de conocer los parámetros de esterilización y diferenciar los tipos de esterilización.

 Objetivos

El alumno conocerá y aprenderá los métodos de esterilización para preparar caldo y agar

para la siembra de levaduras y medios de cultivo en el laboratorio.

El alumno aprenderá la diferencia entre el método de esterilización por calor húmedo y

radiación UV.

El alumno aprenderá a diferenciar las ventajas y desventajas entre cada método de

esterilización.

El alumno aprenderá y analizará la importancia de esterilización por calor húmedo y

radiación UV.
 Materiales y reactivos

Material por grupo

• Balanza analítica
• Autoclave
• Cámara de seguridad bilógica con luz UV
• Agar Sabouraud (medio de cultivo deshidratado)
• Agar de papa y dextrosa (medio de cultivo deshidratado)
• Aguamiel
Material por equipo
• 2 Mecheros
• 1 Piceta con agua destilada
• 1 Perilla
• 1 Parrilla eléctrica con agitación
• 2 Agitadores magnéticos
• 1 Espátula
• 2 Matraz Erlenmeyer de 250 mL
• 1 Probeta de 100 mL
• 4 Pipetas de 20 mL
• 4 Cajas Petri de vidrio
• 8 Tubos de ensayo de vidrio de 16x150 con taparrosca
• 1 Gradilla para tubos de ensayo
Material por alumnos
• Papel Kraft o de estraza
• Maskin-tape
• Plumones indelebles
• Bolsas de Poli papel
• Cinta testigo
• Material para limpieza de área de trabajo
• Encendedor
• Algodón
 Metodologia

Figura 1. Diagrama de flujo de esterilización de medio de cultivo y material de vidrio

Figura 2. Diagrama de flujo esterilizacion con calor húmedo
Figura 3.Esterilización de material y medios de cultivo (u.v.).
Figura 4. Diagrama de flujo vaciado en cajas de Petri.
 Resultados

Esterilización de biorreactor

Tabla 1. Arreglo del biorreactor para su esterilización

Material Función
Sensores • Medir el pH
• Oxigeno disuelto
Filtro de pirinola • Entrada de oxígeno al biorreactor
• Salida del receptáculo para la toma de
muestra
• Salida del condensador de aire
Pinzas de modo y pinzas de prensa francesa Evita que entre humedad al filtro
Manguera con cintillo Evita que entre o salgan fluidos del biorreactor.
Manguera toma de muestra Se pone entre la toma de muestra y el receptáculo
para la toma de muestra.
Dedo frio Se le da media vuelta para evitar press urizar el
sistema.
Soluciones acido base y alcalinidad. Colocar un filtro con sus respectivas pinzas y manguera con

cintilla antes de meter al autoclave.

 Parámetros de esterilización del biorreactor

El autoclave debe tener agua destilada esterilizada ya que si se coloca agua del grifo ya

que si no se perderá eficiencia térmica

Independientemente del modo de operación, el autoclave debe cumplir con la meseta de

temperatura mínima de 121 ° C con un tiempo de residencia mínimo de 20 minutos para garantizar

la efectividad del ciclo de esterilización1.

Hay 3 tipos de pruebas y 3 métodos de esterilización:

Ciclo de prueba estándar: La inyección de vapor se calienta a 121 °C durante un mínimo

de 20 minutos.

Prevacío: Se agrega prevacío para aumentar la eliminación de aire y mejorar la penetración

del vapor dentro del recipiente y los tubos.

Prevacío y presión pulsados: El prevacío es seguido por pulsos de presión de vapor para

eliminar el aire restante y proporcionar la máxima penetración de vapor en el recipiente y los tubos.

Los componentes de todos los medios líquidos, así como todos los componentes del

biorreactor, deben prepararse mediante un proceso eficaz y reproducible1.

El proceso de esterilización puede tardar de 2 a 3 horas en alcanzar la temperatura de

esterilización (121 °C), dependiendo de la conducción de vapor y el tamaño del fermentador. Una

vez que se ha alcanzado la temperatura correcta, se requieren otros 20-60 minutos para el proceso

de muerte real, seguido de enfriamiento durante una hora.

 Parámetros de esterilización de medios de cultivo

Al preparar el medio de cultivo, el sobrante de los componentes no se regresará a su

envase original para preservar el contenido de este.

Los parámetros para esterilizar el medio de cultivo dependen del tipo de medio y de los

microorganismos que se cultivarán en él. Los métodos más comunes de esterilización son el calor

(seco o húmedo), la filtración (para sustancias termolábiles y aire), la radiación y la aplicación de

gas óxido de etileno (para jeringas y cajas de plástico)1. La temperatura, la presión y la duración

de la esterilización dependen del tipo de medio y del método de esterilización utilizado.

En el método más común de esterilización es el autoclave a 121 °C durante 15-20 minutos2.

Al utilizar indicadores biológicos, debe verificar el tipo de microorganismo, el tipo de proceso de

esterilización, el número de lote, la fecha de vencimiento, el medio de cultivo utilizado y las

condiciones de incubación del indicador después de aplicar el proceso de esterilización

 Discusión de resultados

La esterilización por calor húmedo es un método comúnmente utilizado para eliminar

microorganismos, incluyendo esporas, de varios materiales. Sin embargo, el uso de papel aluminio

y papel Kraft para preparar el material para este proceso puede presentar ciertos inconvenientes.

El papel aluminio es impermeable al agua, lo que impide que el vapor tenga acceso al material y,

por lo tanto, no se logra la esterilización, mientras que el papel Kraft puede usarse como empaque

primario o secundario (interno o externo), y se recomienda que sea de al menos 60 g/m21. Sin

embargo, su uso se ha ido descartando debido a la irregularidad e inconsistencia en su presentación.

(Velázquez Martí, 2018)

La esterilización UV, o ultravioleta, funciona mediante la emisión de luz UV-C, que tiene

una longitud de onda corta y es capaz de penetrar en las células de los microorganismos y alterar

su ADN, impidiendo su reproducción y efectividad.

El aluminio y el papel Kraft no se utilizan para cubrir los instrumentos durante la

esterilización UV por varias razones: Barrera a la luz UV: El aluminio actúa como una barrera

contra la luz, lo que significa que bloquearía la luz UV y evitaría que llegue a los instrumentos que

se están esterilizando. Riesgo de incendio: El aluminio es un eficiente conductor del calor y puede

calentarse rápidamente. Si se expone a una fuente de calor intensa, como la luz UV-C utilizada en

la esterilización, existe el riesgo de que el aluminio se caliente demasiado y provoque un incendio.

Desprendimiento de partículas: En el caso del papel aluminio, a altas temperaturas puede

desprender partículas de aluminio en el instrumental. (Caja Costarricense de Seguro Social,

Gerencia División Médica. Dirección General de Gestión de Regional y Red de Servicios de Salud.

Sección de Enfermería, 2005)

 Conclusión

La diferencia entre la esterilización por calor húmedo y la esterilización por radiación UV:

El calor húmedo mata los microorganismos por desnaturalización de las estructuras proteicas. La

luz UV-C tiene una longitud de onda corta y es capaz de penetrar en las células de los

microorganismos y alterar su ADN, impidiendo su reproducción y efectividad.

La esterilización con calor húmedo destruye de bacterias y esporas en corto tiempo, no deja

residuos tóxicos. Sin embargo, no permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el

agua, es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos (cromado o niquelado).

Al utilizar Rayos UV como método de esterilización, es un proceso en frío que funciona

sin la necesidad de añadir ningún producto químico durante todo el proceso de desinfección, pero

tiene escasa penetración, no ionizante, acción enzimática reparadora que revierte el daño.

En conclusión, ambos métodos son vitales para mantener un ambiente estéril en una

variedad de contextos. La elección del método depende del tipo de material que se va a esterilizar

y del entorno en el que se va a utilizar.

 Cuestionario

1 . ¿Cuál es la finalidad de utilizar agua purificada en el enjuagado del material?

El agua purificada se utiliza para enjuagar el material después de la limpieza para eliminar

cualquier residuo de detergente o suciedad que pueda interferir con la esterilización y podría ser

una fuente de contaminación.

2.¿Por qué utilizamos el papel Kraft o estraza para envolver el material?

El papel Kraft o estraza se utiliza para envolver el material antes de la esterilización porque

es un material que permite el paso del agente esterilizante (como el vapor en una autoclave) pero

impide el paso de microorganismos una vez que el material ha sido esterilizado.

4. Explicar por qué utilizamos un tapón de algodón en las pipetas, en matraces y tubos de

ensaye

Los tapones de algodón se utilizan en pipetas, matraces y tubos de ensayo para permitir el

intercambio de gases (como el oxígeno) mientras impiden la entrada de microorganismos,

protegiendo así la esterilidad del contenido.

5. Qué explicación darías si después de la esterilización, los tubo o matraces se nota un leve

crecimiento o turbidez después de la esterilización.

Si después de la esterilización se observa un leve crecimiento o turbidez, esto podría indicar

que la esterilización no fue completamente exitosa y que algunos microorganismos sobrevivieron

al proceso.
6. ¿Es recomendable sembrar Saccharomyces cerevisiae en este tipo de medios de cultivo y

en agua miel?

Saccharomyces cerevisiae es una levadura que se utiliza comúnmente en la fermentación y

puede crecer en muchos tipos de medios de cultivo, incluyendo agua miel. Sin embargo, su

crecimiento óptimo dependerá de las condiciones específicas del medio.

7. Anota 10 productos que se puedan esterilizar por calor húmedo y radiación Ultra violeta

Algunos productos que se pueden esterilizar por calor húmedo y radiación ultravioleta

incluyen: instrumentos quirúrgicos, material de vidrio (como tubos de ensayo y matraces),

soluciones acuosas, ropa quirúrgica, guantes quirúrgicos, gasas, vendajes, suturas quirúrgicas,

catéteres y equipos de laboratorio.

 Referencias

Caja Costarricense de Seguro Social, Gerencia División Médica. Dirección General de Gestión de

Regional y Red de Servicios de Salud. Sección de Enfermería. (Mayo de 2005). Manual

institucional de normas técnicas y procedimientos de la Central de Esterilización y suministro de

material y equipo. http://hdl.handle.net/20.500.11764/2483

Facultad Farmacio Catedra Micro. (27 de Octubre de 2023). Laboratorio de Microbiologia. Metodos de

esterilizacion.

http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_M%C

Gomez, M., & Linsdey, P. (2016). Validacion del proceso de esterilizacion por calor humedo para medios

de cultivo en autoclave.

Silóniz., Siloniz, B. P.-U., Torralba, B., & Vázquez., C. (2010). Metodología de esterilización en el

laboratorio microbiológico. Reduca (Biología). Serie Microbiología., 3(5).

Velázquez Martí, B. (2018). Aprovechamiento de la biomasa para su uso energetico.