Reporte de práctica 2:

Preparación y esterilización de materiales y medios de cultivo

Objetivo.

Conocer los principios de la preparación y esterilización de diversos materiales y medios de

cultivo de uso común en microbiología; así como el efecto de las condiciones de asepsia en el
control de la contaminación microbiana en el laboratorio.

Introducción.
La esterilización es un método de eliminación total de todo tipo de organismo que asegura la
ausencia absoluta de cualquier forma viviente. Una esterilización deficiente o manipulación
incorrecta de materiales y medios de cultivo conlleva a contaminaciones, resultados erróneos o
perdida del material biológico.

La esterilización por calor seco o húmedo son los métodos que se utilizan con mayor frecuencia
en el laboratorio. El calor seco destruye a los microorganismos por oxidación, al exponerlos
directamente a la flama de un mechero o en horno a 150-180°C durante 2 horas. Estos métodos
se aplican en la esterilización de asas de inoculación y para todo tipo de material de vidrio y
quirúrgico. Los procesos con calor húmedo afectan la estabilidad de estructuras celulares y
proteínas; se aplican para esterilizar medios de cultivo, soluciones termoestables, materiales de
vidrio y cultivos bacterianos que se desechan. El equipo que se usa es la autoclave, que utiliza
vapor de agua a presión (15 lb/in), con esta presión el material alcanza una temperatura de 121
°C y si se mantiene de este modo durante 15 minutos lo cual asegurará la inactivación de
endosporas, que son las estructuras bacterianas más resistentes al calor.

Uno de los sistemas mas importantes para la identificación de microorganismo es observar su

crecimiento en sustancias preparadas en el laboratorio. El material por el cual crecen los
microorganismo es el medio de cultivo y el crecimiento de los microorganismo es el cultivo. Para
que las bacterias crezcan en un medio de cultivo preparado, se deben reunir ciertas condiciones
como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxigeno así como un grado de acidez o
alcalinidad. Para esto el Agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de
medios de cultivo. En ellos se encuentran materiales de enriquecimiento como hidratos de
carbono, suero, sangre, bilis, etc. La adición de estos es por dos motivos fundamentales, el
primero incrementar el valor nutritivo del medio y detectar reacciones de fermentación de los
microorganismos que ayuden para su posterior identificación.

1. ¿Qué características de un material o sustancia se requieren conocer para elegir

el método adecuado de esterilización?
2. ¿Qué diferencias observó en los resultados obtenidos en tubos y en cajas de Petri?
Explique.

3. Describa el tipo de contaminantes microbianos que se encuentran con mayor

frecuencia en las cajas de Petri. ¿Cómo explican estos resultados?

4. ¿Cuáles son las tres principales recomendaciones de uso correcto de la

autoclave?

 Para que la esterilizacion sea eficaz, la temperatura y el tiempo seleccionados deben

estar presentes en todo el liquido.

 Los recipientes con cierre hermético deben ser introducidos en el autoclave sin
cerrar totalmente el tapón, para facilitar la entrada del vapor durante el proceso. Al
vaciar el autoclave después de la esterilización procederemos a cerrar totalmente
estos recipientes.

 Los recipientes vacíos precisan de un tiempo de esterilización mayor que los

recipientes con líquido en su interior.

Referencias.

[1].- Sánchez, M, Chaverri, L. (2011) Manual de practicas del modulo II. 1ª edición. México:Dgeti.
p.14-21.

[2].- Volke, T, Prado, L, Shirai, K, Ramirez, F, Aquiahuatl, M & Salazar, M. (2012). Manual de
prácticas de laboratorio: Microbiología general [Internet]. México: Casa Abierta al Tiempo. [citado
9 Mar 2017].
Disponible: http://www.izt.uam.mx/ceu/publicaciones/MMBG/files/manual_microbiologia_general