Universidad Católica de Santa María

Escuela Profesional de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Microbiología General

INFORME DE PRÁCTICA

A : M V Z. Eloisa Zúñiga Valencia

Docente de Prácticas.

De : Winivere Palacios Valdivia

Alumno

Asunto : Práctica #6: “Coloración Simple y Gram”

Fecha : 06/08/2020
 PRÁCTICA #6

COLORACIÓN SIMPLE Y GRAM

1. INTRODUCCIÓN:

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en

el laboratorio de microbiología. Hay una gran variedad de tinciones, que se han
ido desarrollando para la correcta observación de bacterias, estas se pueden
dividir en simples o compuestas. La tinción de Gram se considera básica en la
valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico la cual permite
diferenciar o dividir a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram
positivas y bacterias Gram negativas. La utilización de esta técnica es rutinaria
en el laboratorio, pero de gran importancia en los procesos de identificación
bacteriana. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico tienen una
utilidad fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples
patologías de etiología infecciosa. Los alumnos no solo deben familiarizarse con
el proceso de la técnica, sino sobre todo con la lectura o interpretación de la
misma, y los fundamentos en que esta se basa.

2. OBJETIVOS:

2.1. OBJETIVO GENERAL

 Dar a conocer la importancia y la utilidad de esta técnica en los

procesos de identificación bacteriana
2.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Conocer los pasos de cada una de las etapas diversas de la

preparación de una coloración de Gram
 Conocer el fundamento e interpretar la lectura de una coloración
de Gram y como esta ayuda a la identificación de las bacterias en
el laboratorio

3. MARCO TEORICO:

 Coloraciones: Las bacterias son transparentes y es necesario colorearlas. Lo

primero que se realiza es un frotis para observar las bacterias individuales. El
objetivo de hacer un buen frotis es para ver a los microorganismos con
claridad.

Se necesita lamina portaobjetos. Esta tiene que estar limpia y desengrasada (no
debe de contener marcas de nuestros dedos). Colocar una gota de agua destilada
en el centro de la lámina.
 1. Se pasa la lámina por la llama del mechero para desengrasar la
lámina
2. Tomar el fragmento de colonia en el asa de inoculación.
3. Disolver, ir desde la parte central en círculos hacia afuera.
4. Fijar para que el frotis no se desprenda, con el calor del mechero
esto hace que el frotis se deshidrate y se fija al portaobjetos.
5. La parte que interesa es la película más delgada ahí es donde hay
más posibilidad de encontrar bacterias individualizadas.

 Tipos de Coloración:

 Coloraciones Simples: Se caracterizan porque usan un colorante,

evidencian únicamente aspectos morfológicos.

Pasos:

1. Frotis
2. Poner colorante
3. Lavar el exceso de colorante
4. Secar al mechero

 Coloraciones Compuestas: Usan 2 o más colorantes, permiten ver

aspectos tanto morfológicos como también estructurales.

Aspectos Morfológicos:

 Forma: hay microorganismos esféricos como los Cocos,

micrococo, bacilo, cocobacilos.
 Agrupamiento: Pueden ser simples, diplococos, diplobacilos, sin
son tres o más serán estreptococos o estreptobacilos. Pueden estar
agrupados como grumos Straphilococos, Forma emparizada.
 Tamaño: Si se contara con un ocular micrométrico en el
microscopio.

Aspectos Estructurales:
Lo que forma al microorganismo. Tipo de pared celular, si tienen
cápsulas o no, si producen esporas.

 Coloración Gram:
Las más importantes de microbiología, esta coloración me permite dividir a las
bacterias en 2 grandes grupos. Gram positivas y Gram negativas. Esto será en
función al tipo de pared celular que tengan. A las bacterias Gram + su
componente es el péptido glicano, las Gram – se caracterizan porque en el
 espacio periplasmático está el péptido glicano, que se encuentra en bajas
cantidades.

Fig.1: Bacterias Gram Negativas y Bacterias

Gram Positivas
El colorante que usa es el cristal violeta, este se une a la molécula de péptido
glicano, como esta externamente lo pinta. Esta coloración es importante para el
uso de antibióticos el grupo de penicilinas que atacan a la pared Gram + estos
secuestran las enzimas que componen a la pared péptido glicano. La coloración
Gram es importante para saber que antibiótico actuará mejor.

 Pasos de coloración Gram: El colorante principal es el Cristal Violeta

1. Hacer frotis
2. Echo colorante, cristal violeta se deja 1 min
3. Lavar solo con chorro de agua
4. Se coloca fijador, lugol se deja 1min
5. Se lava
6. Se coloca el decolorante Alcohol acetona se usa durante 5 a 10
segundos.
7. Se lava inmediatamente.
8. Se coloca el contracolorante safranina, durante 1 min.
9. Se lava nuevamente.
10. Lo dejamos secar
 Fig.2: Pasos para una tinción Gram.

 ¿Qué es lo que sucede en las bacterias en la coloración Gram?

Las bacterias son transparentes, en el frotis todas las bacterias serán de la misma
especie. Cuando echamos el cristal violeta las bacterias se van a colorear. Si se
coloca el fijador seguirá del mismo color. Cuando echamos el decolorante la
bacteria va a conservar su color cristal violeta si es Gram +, si es Gram – se
volverá transparente, si demoramos mucho ambas pueden despintarse, es por eso
que este es el paso crítico. Se coloca el contracolorante la safranina, serán de
color rojo las Gram – y las Gram + serán azul violeta.

Fig.3: Bacterias Gram Negativas y Bacterias

Gram Positivas teñidas.

4. MATERIALES Y TÉCNICAS:

I. EQUIPO:
 Microscopio binocular de luz incorporada de 10 o 15 x y objetivo
y aceite de inmersión

II. MATERIALES:
 Placas con medios de cultivo desarrollados (de la practica
anterior)
 Laminas porta y cubreobjetos limpias y desengrasadas
 Bacterias de colorantes y reactivos específicos
 Asas de platino
 Agua destilada
 Mechero de gas propano
 Aceite de inmersión

III. PROCEDIMIENTOS:

1. Preparación del frotis:

a) Tomar una lámina portaobjetos limpia y desengrasada
 b) Colocar con asas una gota de agua destilada en el centro
c) Agregar un fragmento de colonia y disolverlo en el agua
d) Secar al aire libre, mechero o con papel la lámina
preparada

2. Coloración del frotis:

a) Agregar cristal violeta al frotis (colorante) por 2.5 min.
b) Eliminar colorante y lavar con agua de caño la lamina
c) Agregar el lugol (mordiente) por 2.5 min.
d) Eliminar lugol y lavar con alcohol acetona (decolorante)
por 5-10 seg.
e) Agregar safranina (contra colorante) por 15-30 segundos
f) Eliminar safranina y lavar con agua de caño
g) Secar al aire libre, mechero o con papel secante la lamina

3. Observación microscópica:
a) Colocar una gota de aceite de inmersión sobre la lámina
coloreada
b) Observar con objetivo y aceite de inmersión
c) Lectura e interpretación microscópica
d) Las bacterias que aparecen de un color morado o violeta
son denominadas Gram positivas
e) Las bacterias que aparecen de un color rosado son
denominadas Gram negativas

5. MÉTODOS:

Para esta práctica usamos un simulador donde coloreamos nuestra muestra con
la técnica de coloración Gram. Siguiendo todos los pasos de manera ordenada y
con el tiempo de cada colorante correcto obtuvimos este resultado. Donde se
puede observar las bacterias Gram – de color rojo y las Gram + de color azul
violeta.
6. RESULTADOS:

 Aprendimos los tipos de coloración y sus funciones principales. Los pasos

que tenemos que seguir para una correcta elaboración.
 También aprendimos sobre la coloración Gram y su gran importancia en el
curso de microbiología, para identificar bacterias Gram + y Gram -. Sobre
los pasos que tenemos que seguir para una correcta elaboración para así no
cometer errores en el futuro.
 El simulador de tinción Gram nos sirvió para aplicar el conocimiento dado
de las cátedras de microbiología, el cual fue muy didáctico y preciso.