“AÑO DEL BICENTENARIO DEL PERÚ: 200

AÑOS DE INDEPENDENCIA”.
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA

ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

Curso

Análisis Química Instrumental

Tema

Determinación de vitamina C en bebida gaseosa,

jugo de naranja y ají pimiento

Integrantes

Avalos Chávez Estefany

Benavides Borrero Anderson
Corcuera Urbina Fernando
Sánchez Alfaro Néstor

Profesor

Costilla Sánchez Noe Ildefonso

Trujillo – Perú
2022
 1. Objetivos

 Determinar la concentración de vitamina C en bebida gaseosa, jugo de naranja y

ají pimiento.

2. Fundamento Teórico

2.1 Cromatografía Líquida

Es una técnica de separación y la palabra cromatografía se originó a partir de

croma que significa “color” y grafina que significa “escribir” (A & C SCIENTIFIC,

2017)

Consiste en una fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil actúa de

portador de muestra. La muestra en solución es inyectada en la fase móvil. Los

componentes de la solución emigran de acuerdo con las interacciones no-covalentes de

los compuestos con la columna. Estas interacciones químicas, determinan la separación

de los contenidos en la muestra (Miranda & Martín., S.f.).

2.2 Aplicaciones

Está indicada para la separación de compuestos orgánicos semivolátiles

(Miranda & Martín., S.f.):

 Hidrocarburos Poliaromáticos (PAHs), Aminoácidos: OTA, Ácido Fólico,

Herbicidas, Vitaminas, Acido tenuazonico, Formaldehído…etc.

 Rango de trabajo para muestras líquidas: µg L-1 - mg L-1

 Rango de trabajo para muestras sólidas: µg Kg-1 - µg g-1

 2.3 Componentes de la HPLC

Según A & C SCIENTIFIC (2017), este sistema consta de: bomba, inyector,

columna, detector, grabador, degaseador y un calentador de columna.

Figura 1. Esquema del sistema del (HPLC A & C SCIENTIFIC, 2017)

3. Procedimiento Analítico

3.1 Preparación de muestras

a) Bebida gaseosa Fanta: en un vaso de 100 mL se depositó unos 50 mL de gaseosa y se

colocó en un sonicador por 5 minutos para eliminar el CO2.
b) Jugo de naranja: en un vaso de 100 mL se exprimió unos 30 mL. Un poco se colocó en
un tubo de ensayo de 15 mL y se centrifugó por 3 minutos
c) Ají pimiento: la mitad del ají se licuó juntamente con 100 mL de H 3PO4 0.017 M
en un tubo de ensayo de 15 mL se depositó unos 10 mL y se centrifugó por 3 minutos

3.2 Preparación de reactivos

a) Preparar 500 mL de H3PO4 0.017 M a partir de H3PO4 cc el cual tiene una

concentración molar de 12.0
b) Preparación de fase móvil con KH2PO4 1%(p/v): se pesa 5 g de KH2PO4 y se
transfiere a una fiola de 500 mL donde se afora con agua Tipo I. Esta solución se
le filtra al vacío con papel de filtro de celulosa regerada con una porosidad de
0.45 μm
 c) Preparación del estándar de vitamina C de 1000 ppm: se pesa 0.1000 g de
vitamina C grado QP y se deposita en una fiola de 100 mL donde se diluye con
H3PO4 0.017 M y se le cubre antes con papel de aluminio
d) Preparación de las disoluciones estándar diluidas de vitamina C a partir de la
disolución estándar de 1000 ppm en fiolas de 10.0 mL las cuales están cubiertas
con papel de aluminio. Tanto las soluciones de las muestras y los estándares se
completan con ácido fosfórico 0.017 M. Las soluciones mencionadas pasan a un
vial de 1.5 mL de vidrio de color ámbar, previamente filtradas con filtro jeringa
con filtro de celulosa regenerada de porosidad de 0.20 μm.

Tabla 1
Tabla de la preparación de las disoluciones.
Disolución ppm de Vit C μl de estándar
Estándar 1 2.0 20.0
Estándar 2 4.0 40.0
Estándar 3 8.0 80.0
Estándar 4 16.0 160.0
Estándar 5 32.0 320.0
Fanta 200 μl
Naranja 200 μl
Pimiento 200 μl

4. Cálculos y Resultados

4.1 Condiciones Cromatográficas

- Equipo: HPLC 1100 de Agilent

- Columna: C-18, DI: 4.6 mm; longitud 150 mm, poro 5 μm
- Detector: UV/Vis con arreglo de diodos
- Inyección: 20 μL
- Flujo: 0.9 mL/min
- Modo isocrático
- Tiempo de cromatografía: 6 min
- Tiempo de lavado: 3 min
Solución
(a) Tiempo de retención promedio

Tabla 2
Datos obtenidos del tiempo de retención .

Tiempo de retencion
Estandar Tr (min)
1 3.278
2 3.242
3 3.218
4 3.198
5 3.194

 Calculo de tiempo de retención promedio

3.278+3.242+3.218+3.198+3.194
T r=
5

T r=3.226 min

(b) Numero de platos teóricos y altura de plato teórico

Tabla 3
Datos obtenidos del tiempo de retención y el ancho.
Numero de platos
Estandar Tr (min) W (min)
1 3.278 0.1359
2 3.242 0.1342
3 3.218 0.1310
4 3.198 0.1329
5 3.194 0.1320
  Calculamos el numero de platos teóricos

 Estandar 1

N 1=16 x ( 0.1359
3.278
)
N 1=9308.91

 Estandar 2

N 2=16 x ( 0.1342
3.242
)
N 2=9337.72

 Estandar 3

N 3=16 x ( 0.1310
3.218
)
N 3=9 654.94

 Estandar 4

N 4 =16 x ( 0.1329
3.198
)
N 4 =9 264.61

 Estandar 5

N 5=16 x ( 0.1320
3.194
)
 N 5=9367.89

 Calculamos la altura teórico de cada plato

 Estandar 1

H 1= ( 1509308.91
000 um
)
H 1=16.114 um

 Estandar 2

H 2= ( 1509337.72
000 um
)
H 2=16.064 um

 Estandar 3

H 3= ( 150000
9654.94 )
um

H 3=15.536 um

 Estandar 4

H 4= ( 1509264.61
000 um
)
H 4 =16.191um

 Estandar 5

H 5= ( 150000
9367.89 )
um
 H 5=16.012 um

(c) Curva de calibración

Tabla 3
Datos obtenidos del area y las ppm de vitamina C
Estandar Arrea ppm Vit. C
1 65.34476 2
2 132.59221 4
3 276.53821 8
4 557.03680 16
5 1139.04358 32

1200.00

f(x) = 35.8206627284946 x − 10.0651058333333

R² = 0.999922689340513
1000.00

800.00

600.00
Area

400.00

200.00

0.00
0 5 10 15 20 25 30 35
ppm Vit. C

Gráfica 1
Curva de calibración entre el Área Vs. ppm de vitamina C

Ecuación de calibración
A=35.821C−10.065

A +10.065
C=
35.821
 (d) Contenido de vitamina C en las muestras

 Naranja ( A = 356.98099 )

356.98099+ 10.065
C=
35.821

C=10.25 ppm
 Fanta ( A = 56.30889 )

56.30889+ 10.065
C=
35.821

C=1.91 ppm

 Pimienta ( A = 211.86256 )

211.86256+10.065
C=
35.821

C=6.20 ppm

5. Conclusiones

La concentración de vitamina C en la naranja es de 10.25 ppm

La concentración de vitamina C en la fanta es de 1.91 ppm

La concentración de vitamina C en la naranja es de 6.20 ppm

 6. Referencias Bibliográficas

A & C SCIENTIFIC. (2017). La cromatografía Líquida.

http://www.acssac.com/2017/06/06/novel-technologies/

Miranda A. & Martín O. (s.f.). Cromatografía Líquida (HPLC).

https://www.ucm.es/data/cont/docs/650-2013-12-02-gases%20l

%C3%ADquidos.pdf