Laura Alejandra Velásquez Bejarano1, Diana Carolina Albarracín Parada2

1
Estudiante de Pregrado, Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia – sede
Bogotá. e-mail: lavelasquezb@unal.edu.co
2
Estudiante de Pregrado, Departamento de Farmacia, Facultad de Ciencias, Universidad Nacional de Colombia – sede
Bogotá. e-mail: dalbarracinp@unal.edu.co

Preparación de disoluciones, Preparation of solutions,

diluciones y determinación de la dilutions and determination of
concentración de una solución de the concentration of a methylene
azul de metileno mediante la blue solution using the
metodología de colorimetría colorimetry methodology

Resumen
En el presente trabajo se revisaron y aplicaron
los conceptos de disolución y dilución con la
preparación de una disolución de NaOH de 0.1
M, diluciones de sulfato de cobre
pentahidratado de alícuotas de 10.00, 15.00 y
20.00 mL y diluciones de azul de metileno a
2.5, 5, 7.5, 10, 20 ppm. También se estudiaron
y emplearon metodologías para determinar la
concentración de una solución problema a
partir de las técnicas de evaporación de un
solvente utilizando una solución salina y
colorimetría para una solución de azul de
metileno. Esta última se llevó a cabo con el uso
del espectrofotómetro que identifica la
absorbancia de las disoluciones. Se desarrolló
una curva espectral que relaciona la longitud de
onda y la absorbancia, obteniendo la longitud
de onda máxima experimental (𝜆𝑚𝑎𝑥 =
662,50 ± 0.02 nm) y una curva de
calibración que relaciona la concentración y la
absorbancia con la cual fue posible calcular la
concentración desconocida realizando una
interpolación y comprobar la relación de
proporcionalidad directa que existe entre la
concentración y la absorbancia (Ley de
Lambert- Beer).
Palabras clave: Disolución, Dilución,
Evaporación, colorimetría, absorbancia,
transmitancia, Ley de Lambert-Beer, curva de
calibración.
Abstract
In the present paper, the concepts of dissolution
and dilution were reviewed and applied with
the preparation of a 0.1 M NaOH solution,
dilutions of copper sulfate of aliquots of 10.00,
15.00 and 20.00 mL and dilutions of methylene
blue at 2.5, 5, 7.5, 10, 20 ppm. Methodologies
were also studied and used to determine the
concentration of a problem solution from the
evaporation technique of a solvent using a
saline solution and colorimetry technique for a
methylene blue solution. The latter was carried
out with the use of the spectrophotometer ,
which identifies the absorbance of the
solutions. A spectral curve that relates the
wavelength and absorbance was developed,
obtaining the maximum experimental
wavelength (λ_max = 662.50 ± 0.02 nm) and a
calibration curve that relates the concentration
and absorbance with which it was possible to
calculate the unknown concentration by
interpolation and checking the relationship of
direct proportionality that exists between the
concentration and the absorbance (Lambert-
Beer Law).
Keywords: Dissolution, dilution, evaporation,
colorimetry, absorbance, transmittance,
Lambert-Beer Law, calibration curve.
Introducción
La proporción en que se encuentran los
componentes (solutos y solvente) de una
solución se conoce como concentración. A
partir de esta, las propiedades de una disolución
pueden variar. Existen diversas formas de
expresar estas proporciones y se conocen como
Unidades de concentración.
Las soluciones pueden ser preparadas mediante
disoluciones o diluciones. Cuando el soluto se
encuentra en estado sólido se conoce como
disolución, mientras que si se encuentra en
estado líquido, el proceso se llama dilución. La
fórmula Ec. (1) que permite calcular una
solución final a partir de una solución inicial es:
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2 (1)
Ahora bien, teniendo las disoluciones puede
requerirse la separación de sus componentes
para conocer su concentración. Durante el
desarrollo de este documento, se expone la
separación por evaporación de una solución de
NaOh, de modo que se podrán calcular distintas
unidades de concentración.
Por otra parte, se presenta el proceso de
dilución para el sulfato de cobre pentahidratado
y para el azul de metileno. El primero se realizó
con el fin de consolidar los conocimientos
sobre el proceso de dilución y el segundo
llevará a cabo un proceso más complejo pues es
un compuesto ampliamente usado:
El azul de metileno (C16H18ClN3S) (Figura 1) es
un colorante orgánico que es un heterociclo
aromático. Inicialmente fue sintetizado para
uso dentro de la industria textil, sin embargo,
pronto comenzó a usarse en la tinción
microscópica [1] y hoy en día, la Organización
Mundial de la Salud lo clasifica como una
medicina esencial, pues ha sido posible
descubrir su efectividad como antiséptico y
cicatrizante interno, e incluso existen estudios
que proponen su uso en enfermedades como el
Alzheimer y el Parkinson. [2]
Figura 1. Estructura del Azul de metileno (C16H18ClN3S)
La colorimetría es una técnica frecuentemente
usada en laboratorios de la industria
bioquímica, de investigación y clínicos. Esta
práctica permite conocer información
cualitativa y cuantitativa de las muestras
haciendo uso del espectrofotómetro,
instrumento que mide la intensidad de la
radiación electromagnética que absorbe la
sustancia estudiada (absorbancia) en diferentes
longitudes de onda.
La fracción de luz que absorbe la solución a
determinada longitud de onda se relaciona con
la concentración de la especie absorbente de la
forma que postula la Ley de Lambert-Beer Ec.
(2):
𝐴 = 𝜀×𝑐×1 (2)
Donde A corresponde a la Absorbancia, la cual
es adimensional, 1 es el paso óptico de la
solución en centímetros, c la concentración de
la especie absorbente en mol/L y 𝜺 el
coeficiente de absorción molar o absortividad
molar en M-1cm-1. De ahí que se diga que la
concentración mantiene una relación
directamente proporcional con la absorbancia.
La energía que no es absorbida por las
moléculas se conoce como transmitancia (T) Ec
(3).
𝐴 = − log10 𝑇 (3)
En ese orden de ideas, durante este laboratorio
se desarrolló un análisis colorimétrico del azul
de metileno para 6 diluciones de concentración
conocida y se realizó inicialmente una curva
espectral [3] con el espectrofotómetro [4],
obteniendo de este modo el valor de la longitud
de onda para el que se obtiene la mayor
absorbancia posible. Luego se realizó la curva
de calibración con el objetivo de conocer la
concentración de la solución problema y de
comprobar la relación de la Ley de Lambert-
Beer.
Finalmente, aplicando los conceptos de
diluciones, se realizó un ejemplo de aplicación
terapéutica donde se solicita la preparación de
un tratamiento de administración intravenosa
de 250 ml de solución de azul de metileno (1,5
mg/Kg de peso del paciente) en solución salina
(NaCl 0,9% m/v) para un paciente de 75 años
de edad, 63 kg de masa corporal y que padece
síndrome vasoplégico, después de una cirugía
por enfermedad de arteria coronaria a partir de
un litro de agua estéril y libre de pirógenos de
uso clínico, una solución estéril y libre de
pirógenos (de uso farmacológico) de azul de
metileno de 5000ppm y una solución de NaCl
del 9% m/v.
Materiales y métodos
1. Preparación de 100 mL de disolución de
hidróxido de sodio 0.1 M.
Reactivos
Cristales de NaOH
Agua destilada
Métodos
Para preparar la disolución acuosa de NaOH
0.1 M inicialmente se calculó la cantidad
necesaria de NaOH para la preparación de la
disolución acuosa 0.1 M, esta cantidad fue
pesada en la balanza analítica con
incertidumbre de ± 0.0002 g sobre un vidrio de
reloj y luego transferida a un vaso de
precipitado de 250 mL con ayuda de un frasco
lavador. Se agregaron aproximadamente 20 mL
de agua destilada y se procedió a disolver el
soluto utilizando un agitador de vidrio;
posteriormente, se transfirió el soluto disuelto a
un matraz aforado de 100 mL con
incertidumbre de ± 0.1 mL (20°C). Se completó
a volumen con agua destilada utilizando un
gotero cuando la solución se encontraba cerca
de la línea de afore, se tapó el matraz y se
homogenizo la solución agitándola
vigorosamente, finalmente se transfirió la
disolución a una botella rotulada.
2. Separación de los componentes de una
disolución.
Reactivos
Agua destilada (Densidad: 0.99886 g/mL a
17°C)
Disolución salina de concentración
desconocida (Masa Molar: 58.443 g)
Métodos
Con el fin de conocer la concentración de una
solución salina se realizó la separación de sus
componentes por medio de una evaporación.
En un vaso de precipitado de 250 mL se
adicionaron aproximadamente 180 mL de agua
común (1/3 del volumen) y se dispuso sobre la
plancha de calentamiento de marca heidolph
MR Hei-Standard a 200°C. Se tomaron 10.00
mL de disolución salina con la pipeta aforada
de 10 mL con incertidumbre de ±0.02 mL de
marca Brand y se colocaron sobre un vidrio de
reloj para ser pesados en la balanza analítica
con incertidumbre de ± 0.0002 g.
Posteriormente, el vidrio de reloj fue
posicionado sobre la boca del vaso de
precipitado para ser calentado con el vapor del
agua que se estaba generando. Después de que
ocurrió la evaporación del solvente el residuo
en el vidrio de reloj fue pesado en la balanza
analítica y dispuesto de manera adecuada en los
contenedores respectivos. La densidad de la
solución fue calculada con un picnómetro
marca LMS Germany 10 mL (20°C) utilizando
agua destilada de densidad conocida y la
balanza analítica. Finalmente fueron
desarrollados los cálculos necesarios para
determinar la concentración de la disolución
salina en distintas unidades.
3. Preparación de diluciones.
Reactivos
Sulfato de cobre pentahidratado CuSO4 5H2O
(Masa Molar: 249.68 g)
Agua destilada (Masa Molar: 18.015 g)
Métodos
Para preparar las diluciones a partir de una
solución patrón de CuSO4 5H2O, fue pesada en
la balanza analítica con incertidumbre de ±
0.0002 g sobre un vidrio de reloj una cantidad
de soluto menor a 1,0 g y seguidamente,
trasladado a un vaso de precipitados de 100 mL
con ayuda del frasco lavador. A continuación se
agregaron aproximadamente 20 mL de agua
destilada para disolver el soluto utilizando un
agitador de vidrio. Posteriormente, la
disolución fue llevada a un matraz aforado de
100 mL con incertidumbre de ± 0.1 mL, se
adicionó agua destilada hasta completar a
volumen y después se transfirió a un vaso de
precipitados de 100 mL, se calculó su
concentración y fue rotulado con disolución de
partida. De esta última, se tomó una alícuota de
5.000 mL utilizando una pipeta aforada de 5
mL con incertidumbre de ±0.015 mL de marca
Brand para elaborar la primera dilución. Este
volumen fue trasladado al matraz de 100 mL y
llevado a la línea de afore con agua destilada.
Luego fue transferido a un vaso rotulado.
Finalmente fue realizado el cálculo de la
concentración de la dilución. De igual manera,
se realizó este procedimiento para preparar las
diluciones de las alícuotas de 10.00, 15.00 y
20.00 mL, usando además una pipeta aforada
de 10 mL con incertidumbre de ±0.02 mL de
marca Brand.
4. Curva espectral de una muestra diluida de
azul de metileno.
4.1. Preparación de Diluciones acuosas de
azul de metileno a partir de disolución
patrón de 54.00 ± 0.40 ppm.
Reactivos
Disolución acuosa de azul de metileno 54.00 ±
0.40 ppm
Agua destilada
Métodos
La preparación de las diluciones se realizó a
partir de una disolución patrón de azul de
metileno 54.00 ± 0.40 ppm. Inicialmente se
realizó el cálculo de los valores teóricos de los
volúmenes necesarios de la disolución de
partida para elaborar las diluciones a las
concentraciones teóricas correspondientes
(2.5, 5, 7.5, 10, 20 ppm). La solución de partida
se encontraba contenida en un vaso de
precipitados de 100 mL. Con ayuda de la bureta
graduada de 25 mL con incertidumbre de ±
0.075 mL, el volumen calculado para la
dilución de 2.5 ppm fue dispensado dentro del
matraz aforado de 50 mL con incertidumbre de
± 0.09 mL. Por último, se adicionó agua
destilada hasta la línea de afore, se homogenizó
la dilución para ser transferida a vasos plásticos
y se realizó el cálculo de la concentración real
de la dilución. De igual manera, fue realizado
este procedimiento para preparar las
concentraciones de 5, 7.5, 10, 20 ppm.
4.2. Construcción de la curva espectral de
una muestra diluida de azul de
metileno.
Reactivos
Dilución acuosa de azul de metileno de 7,500 ±
0,099 ppm
Agua destilada
Métodos
Se seleccionó la dilución de 7,500 ± 0,099 ppm
elaborada a partir del patrón de azul de metileno
para generar la curva espectral. Se adicionó una
muestra de la dilución en la celda de
espectrofotometría y se insertó en un
espectrofotómetro SpectroVis Plus de marca
Vernier previamente calibrado con el blanco
(agua destilada). Se obtuvieron los datos de la
absorbancia en cada una de las longitudes de
onda en el rango visible del espectro
electromagnético. Con estos datos se realizó la
curva espectral del azul de metileno donde se
determinó la longitud de onda máxima.
5. Construcción de la curva de calibración
para el azul de metileno, partiendo de una
solución de patrón de concentración 50
ppm.
Reactivos
Disolución acuosa de azul de metileno 54.00 ±
0.40 ppm
Diluciones acuosas de azul de metileno de
distintas concentraciones (elaboradas en el
procedimiento 4.1.)
Agua destilada
Métodos
De cada una de las diluciones elaboradas a
partir de la solución patrón de azul de metileno,
se adicionó una muestra a la celda de
espectrofotometría y fueron insertadas una a
una en el espectrofotómetro SpectroVis Plus de
marca Vernier previamente calibrado con el
blanco (agua destilada). Se generó el dato de la
absorbancia para cada una de las
concentraciones empleadas en la longitud de
onda máxima obtenida de la curva espectral.
Con estos datos se realizó la curva de
calibración del azul de metileno abordando
todo el rango de concentraciones para
determinar la zona de desviación y la zona
lineal. Finalmente, se graficó la curva de
calibración con el rango que presentó
comportamiento lineal y se obtuvo la ecuación
matemática por regresión lineal y el coeficiente
de correlación de los datos utilizando el
programa EXCEL.
6. Determinación de la concentración de la
solución problema de azul de metileno
Reactivos
Disolución acuosa de azul de metileno de
concentración desconocida
Métodos
Adicionando una muestra de la disolución
acuosa de azul de metileno de concentración
desconocida en la celda de espectrofotometría
e insertándola en el espectrofotómetro,
previamente calibrado con el blanco (agua
destilada), se obtuvo la absorbancia generada
en la longitud de onda máxima obtenida de la
curva espectral de esta disolución. Finalmente,
este dato fue reemplazado en la ecuación
matemática generada por regresión lineal de la
curva de calibración para determinar el valor de
su concentración.
7. Anexo: Ejemplo de aplicación terapéutica
El procedimiento para encontrar las cantidades
teóricas de los volúmenes para elaborar los 250
mL de disolución terapéutica se realizó
calculando inicialmente la cantidad de mg de
azul de metileno necesarios según la masa
corporal del paciente. Luego se calculó la
concentración que tendría esta cantidad de azul
de metileno diluida en el volumen de la
disolución terapéutica y finalmente, el volumen
requerido de las disoluciones de partida de azul
de metileno y de solución salina que deberían
ser aforados con agua destilada en un matraz de
250 mL.
Resultados y discusión
1. Preparación de 100 mL de disolución de
NaOH (hidróxido de sodio) 0,1 M.
En la Tabla 1 Se muestran las cantidades
utilizadas de cada compuesto en la elaboración
de los 100 mL de la disolución acuosa de NaOH
0.1 M. Durante el procedimiento de pesar el
soluto (NaOH) se observó que a medida que
transcurría el tiempo y el soluto estaba en
contacto con el aire, este absorbía humedad y
pequeños fragmentos se adherían al vidrio de
reloj. Además, al pesar el NaOH se presentaron
complicaciones para lograr obtener la cantidad
necesaria calculada (0.4 g) puesto que el soluto
se encontraba en forma de cristales solidos que
no podían ser divididos y la masa necesaria era
relativamente pequeña.
Tabla 1. Datos para preparación de 100 mL de solución
NaOH 0.1 M.
Masa vidrio de reloj vacío (g) 34.7230 ± 0.0002
Masa vidrio de reloj con NaOH (g) 35.1233 ± 0.0002
Masa de NaOH (g) 0.4003 ± 0.0003
Volumen de solvente (L) 0.1000 ± 0.0001

Figura 1A. Botella con solución de NaOH 0.1 M
rotulada.
Tabla 2A. Cálculo del solvente evaporado.
Masa vidrio de reloj vacío
(g)
Volumen de disolución en
el vidrio de reloj (mL)
Masa vidrio de reloj con
disolución (g)
Masa de disolución (g)
Masa picnómetro vacío (g)
Masa picnómetro con
disolución (g)
Masa de disolución (g)
Masa picnómetro con
agua destilada (g)
Masa de agua destilada
(g)
Densidad de la disolución
(g/mL)
Masa vidrio de reloj +
residuo sólido (soluto) (g)
Masa del soluto (g)
Masa del solvente (g)
Moles del soluto (mol)
Masa del solvente (kg)
Moles del solvente (mol)
Moles totales (mol)
Masa del soluto (mg)
Masa de disolución (kg)
La densidad de la disolución salina se
calculó utilizando Ec. (4):
𝑚𝑆𝑙𝑛 𝑆𝑎𝑙𝑖𝑛𝑎 × 𝜌𝐻2𝑂
𝜌𝑆𝑙𝑛 𝑆𝑎𝑙𝑖𝑛𝑎 =
𝑚𝐻2𝑂 (4)
2. Separación de los componentes de una
disolución.
En la Tabla 2A Se exponen las cantidades
medidas y deducidas que fueron utilizadas para
calcular y expresar en distintas unidades la
concentración de la disolución problema (Tabla
2B).
En los valores que son resultado de operaciones
matemáticas (medidas no directas) se observa
cómo varío la propagación del error en las
incertidumbres para cada magnitud a medida
que estos hicieron parte de la ejecución de los
34.7230 ± 0.0002 cálculos.
Tabla 2B. Concentración de la solución problema.
10.00 ± 0.02
Concentración de la disolución problema
43.2840 ± 0.0002
Molaridad (M) 2.059 ± 0.004
8.5610 ± 0.0003 Molalidad (m) 2.7991 ± 0.0007
18.8718 ± 0.0002 Porcentaje peso a peso
14.059 ± 0.004
(%p/p)
29.2741 ± 0.0002
Porcentaje peso a volumen
12.04 ± 0.02
(%p/v)
10.4023 ± 0.0003
Fracción molar del soluto
(4.8006 ± 0.0012)x10−2
28.9400 ± 0.0002 (Xsoluto)
Fracción molar del
0.95200 ± 0.00006
10.0682 ± 0.0003 disolvente (Xdisolvente)
Partes por millón (mg/kg)
(1.4059 ± 0.0004)x105
1.03201 ± 0.00043 (ppm)
35.9266 ± 0.0003
La concentración en partes por millón de la
1.2036 ± 0.0003 disolución salina se calculó utilizando Ec. (5):
7.3574 ± 0.0004 𝑚𝑔 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
(2.0594 ± 0.0005)x10−2
𝑝𝑝𝑚 = (5)
𝑘𝑔 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
(7.3574 ± 0.0004)x10−3
0.40840 ± 0.00002
0.42899 ± 0.00002
1203.6 ± 0.3
(8.5610 ± 0.0003)x10−3
 Figura 3A. Disolución de partida de CuSO4 5H2O.

Figura 2. Montaje de evaporación de un solvente.

3. Preparación de diluciones.
Figura 3B. Diluciones de CuSO4 5H2O.
En la Tabla 3A Se presentan los valores
correspondientes a la solución acuosa de
Tabla 3B. Volúmenes y concentraciones de diluciones
CuSO4 5H2O, la cual se preparó para ser usada de CuSO4 5H2O.
como patrón de referencia en la elaboración de
Concentración Volumen Volumen Concentración
las diluciones que se muestran en la Tabla 3B. Inicial ±𝟎. 𝟎𝟎𝟒 Inicial Dilución ±𝟎. 𝟏 Dilución
(𝐱𝟏𝟎−𝟐 M) (mL) (mL) (𝐱𝟏𝟎−𝟑 M)
Con el fin de llevar a volumen cada una de las
diluciones, se purgo el matraz con el propósito 20.00 7.538
3.769 100.0
± 0.03 ± 0.016
de asegurar que en este se encontrara
únicamente la solución a trabajar, 15.00 5.654
3.769 100.0
± 0.02 ± 0.011
disminuyendo así la probabilidad de que
existieran restos que contaminaran la muestra. 10.00 3.679
3.769 100.0
± 0.02 ± 0.009
Mientras se agregaba gota a gota el solvente, se
observó de forma paralela al matraz para 5.000 1.884
3.769 100.0
± 0.015 ± 0.006
constatar que el menisco coincidiera con la
línea de afore de manera adecuada.
Las concentraciones de las diluciones de
Tabla 3A. Disolución patrón de CuSO4 5H2O. CuSO4 5H2O se calcularon utilizando Ec. (6):
Masa vidrio de reloj vacío (g) 34.7230 ± 0.0002 𝑀𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑉𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙
𝑀𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 = (6)
Masa vidrio de reloj con 𝑉𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
35.6640 ± 0.0002
CuSO4 5H2O (g)
Masa de CuSO4 5H2O (g) 0.9410 ± 0.0003
Volumen de solvente (L) 0.1000 ± 0.0001
Moles de CuSO4 5H2O (mol) (3.769 ± 0.001)x10−3
4. Curva espectral de una muestra diluida de Las concentraciones de las diluciones de azul
azul de metileno. de metileno se calcularon utilizando Ec. (8):

4.1. Preparación de Diluciones acuosas de 𝑝𝑝𝑚𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 𝑉𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙

azul de metileno a partir de disolución 𝑝𝑝𝑚𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 = (8)
𝑉𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
patrón de 54.00 ± 0.40 ppm.
En la Tabla 4A se muestran los datos
relacionados con las concentraciones y
volúmenes de las diluciones que fueron
elaboradas a partir de la solución patrón,
proceso en el cual se presentó dificultad para
adicionar la cantidad de soluto requerida dado
Figura 4. Diluciones acuosas de azul de metileno (de
que la manipulación del mecanismo de llave de izquierda a derecha respectivamente: (54.00±0.40) ppm,
la bureta no permitía suministrar (20.00 ± 0.17) ppm, (15.00 ± 0.14) ppm, (10.00 ± 0.11)
adecuadamente la cantidad exacta, por lo tanto, ppm, (7,500 ± 0.099) ppm, (5.000 ± 0.090) ppm, (2,500
en el volumen inicial se presentaron errores de ± 0.083) ppm, 0 ppm).
tipo sistemático y personal. Asimismo, la
lectura del volumen en la bureta se obstaculizó 4.2. Construcción de la curva espectral de
a causa de la manera en que se formó el una muestra diluida de azul de
menisco en el azul de metileno, pues se podían metileno.
observar distintas coloraciones dentro del
mismo y no se lograba percibir realmente A continuación, en la Tabla 4B Se observan los
dónde se encontraba su borde. valores obtenidos del espectrofotómetro para la
absorbancia correspondiente a cada longitud de
Tabla 4A. Volúmenes y concentraciones de diluciones onda de la disolución acuosa de azul de
de azul de metileno. metileno. La muestra debía absorber luz en el
Volumen Volumen
rango de longitudes de onda de la zona visible
Concentración Concentración
Inicial (ppm)
inicial Dilución
Dilución (ppm)
del espectro electromagnético y además no
(mL) (mL)
debía ser excesivamente concentrada. Es
54.00 ± 0.40 0 50.00 posible notar que la máxima absorbancia del
± 0.09 0
azul de metileno se generó en 𝜆 = 662,50
54.00 ± 0.40 2.315 50.00 ±0.02 nm, la cual se determinó como la
± 0.075 ± 0.09 2,500 ± 0.083
longitud de onda máxima o longitud de onda de
54.00 ± 0.40 4.620 50.00 trabajo 𝜆𝑚𝑎𝑥 = 662,50 ± 0.02 nm para el
± 0.075 ± 0.09 5.000 ± 0.090
analito.
54.00 ± 0.40 6.944 50.00
± 0.075 ± 0.09 7,500 ± 0.099
54.00 ± 0.40 9.259 50.00
± 0.075 ± 0.09 10.00 ± 0.11
54.00 ± 0.40 13.889 50.00
± 0.075 ± 0.09 15.00 ± 0.14
54.00 ± 0.40 18.518 50.00
± 0.075 ± 0.09 20.00 ± 0.17

Los volúmenes teóricos de la disolución patrón

de azul de metileno se calcularon utilizando Ec.
(7):
Figura 4B. Celda con muestra de dilución de azul de
𝑝𝑝𝑚𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑉𝐷𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
𝑉𝑡 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = metileno en espectrofotómetro.
𝑝𝑝𝑚𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 (7)
Tabla 4A. Datos para construcción de la curva espectral
del azul de metileno. CURVA ESPECTRAL AZUL DE METILENO
(7,500 ± 0,099 ppm)
𝝀 (±𝟎. 𝟎𝟐𝐧𝐦) 𝐀𝐛𝐬𝐨𝐫𝐛𝐚𝐧𝐜𝐢𝐚 (±𝟎. 𝟎𝟎𝟐)
1,200
380,40 0,030 Banda de
1,050 Máxima

Absorbancia (±0,002nm)
400,60 0,020 Absorción
0,900
450,60 0,034 0,750
500,70 0,072 0,600
550,60 0,159 0,450
600,80 0,574 0,300

610,40 0,676 0,150

0,000
620,10 0,693
350,00 470,00 590,00 710,00 830,00
630,50 0,715 Longitud de onda (±0,02nm)
640,20 0,826
650,60 0,998 Figura 4C. Curva espectral del azul de metileno.
660,30 1,095
662,50 1,100
5. Construcción de la curva de calibración
670,00 1,013 para el azul de metileno, partiendo de una
680,50 0,606 solución de patrón de concentración 50
690,30 0,266 ppm.
700,00 0,120 En la Tabla 5 se exponen los datos obtenidos de
750,50 0,027 absorbancia en la longitud de onda máxima que
se determinó anteriormente de la curva
espectral (𝜆𝑚𝑎𝑥 = 662,50 ± 0.02 nm) para
En la Figura 4C se presenta la curva espectral cada una de las diluciones acuosas de azul de
para el azul de metileno elaborada con los datos metileno que fueron preparadas a partir de la
que resultaron de evaluar la muestra en el solución patrón (Tabla 4A). Las celdas fueron
espectrofotómetro (Tabla 4B). En ella se purgadas previo a la adición de las
evidenció la banda de máxima absorción que se disoluciones, después de introducir la celda al
encuentra señalada en la gráfica; dentro de esta espectrofotómetro se esperó cerca de 30
se encontró la longitud de onda que segundos a que el valor de la absorbancia cesara
proporcionó la mayor sensibilidad posible o de fluctuar y se estabilizara.
longitud máxima, la cual coincide con el valor
señalado previamente en la Tabla 4B. Este En la Figura 5A se presenta la curva de
valor de longitud máxima fue usado para la calibración para el azul de metileno elaborada
elaboración y análisis de la curva espectral del con los datos que resultaron de evaluar cada una
analito. de las muestras de las diluciones a diferentes
concentraciones en el espectrofotómetro (Tabla
5). En ella se evidencia que la zona de
desviación donde deja de presentar el
comportamiento lineal está alrededor de la
concentración de 15 ppm. Se realizó entonces
la segunda gráfica que se muestra en la Figura
5B donde se generó la curva de calibración
únicamente con el rango de concentraciones
que siguen un comportamiento lineal.
Tabla 5A. Datos para construcción de curva de ZONA LINEAL CURVA DE CALIBRACIÓN
calibración del azul de metileno.
AZUL DE METILENO (λmax= 662,50 ±
Concentración (ppm) 𝐀𝐛𝐬𝐨𝐫𝐛𝐚𝐧𝐜𝐢𝐚 (±𝟎. 𝟎𝟎𝟐) 0,02 nm)
0 0,019 1,800
2,500 ± 0.083 0,361 1,600
1,400

Absorbancia (±0,002)
5.000 ± 0.090 0,690
1,200
7,500 ± 0.099 0,991
1,000
10.00 ± 0.11 1,251 0,800 y = 0,1067x + 0,1077
15.00 ± 0.14 1,601 0,600 R² = 0,9796
20.00 ± 0.17 1,761 0,400
0,200
54.00 ± 0.40 2,102
0,000
0,00 3,00 6,00 9,00 12,00 15,00 18,00
Concentración (ppm)
CURVA CALIBRACIÓN AZUL DE METILENO
(λmax= 662,50 ± 0,02 nm)
Figura 5B. Zona lineal de la curva de calibración del
2,400
azul de metileno.
2,100
Absorbancia (±0,002)

1,800 Adicionalmente, se calculó la pendiente de la

1,500 gráfica de la zona lineal de la curva de
1,200 calibración (Figura 5B), esta hace referencia al
0,900 valor de la absortividad molar del azul de
0,600 metileno, la cual se encuentra incluida en la
0,300 ecuación de Lambert-Beer Ec. (1) como la
0,000 constante de proporcionalidad entre la
0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 absortividad y la concentración de la muestra.
Concentración (ppm) Este valor se muestra en la Tabla 5B.

Figura 5A. Curva de calibración del azul de metileno.
En la gráfica de la zona lineal de la curva de
calibración del azul de metileno (Figura 5B) se
calculó la ecuación de la recta por el método de
regresión lineal utilizando el programa
EXCEL, y de igual manera el valor del
coeficiente de correlación de los datos. El valor
del coeficiente de correlación 𝑅 2 al tener un
valor que tiende a ser cercano a 1 demostró que
las variables de concentración y absorbancia
tienen una fuerte relación lineal directamente
proporcional. Sin embargo, la distancia que se
encuentra alejado el valor de 𝑅 2 de 1 pudo
deberse a algunos errores sistemáticos y
principalmente a errores personales a la hora de
realizar los procesos y métodos de la medición
de la absorbancia con el espectrofotómetro.
Tabla 5B. Absortividad molar del azul de metileno
calculada experimentalmente.
Absortividad molar del azul de metileno
0.1067
(𝒄𝒎−𝟏 𝒑𝒑𝒎−𝟏 )
Absortividad molar del azul de metileno
34128
(𝒄𝒎−𝟏 𝑴−𝟏 )
La absortividad molar en 𝑐𝑚−1 𝑀−1 se calculó
utilizando la Ec. (9):
319850 𝑚𝑔
𝜀(𝑀) = 𝜀(𝑝𝑝𝑚) × ( ) (9)
1 𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑒𝑡𝑖𝑙𝑒𝑛𝑜
La absortividad molar del azul de metileno se
encontró reportada en la bibliografía como
36000 cm−1 M −1 [3], con base en lo cual fue
realizada la comparación estadística del valor
experimental que resultó de la curva de
calibración con respecto al valor teórico. Para
este propósito se calcularon los errores
absoluto, relativo y relativo porcentual como se
evidencia en la Tabla 5C.
Tabla 5C. Exactitud del valor experimental de la
absortividad molar del azul de metileno.
Error absoluto (𝒄𝒎−𝟏 𝑴−𝟏 ) 1872
Error relativo 0.052
Error relativo porcentual (%) 5.2
De la Tabla 5C se pudo discutir acerca de la
exactitud del dato de absortividad molar, para
el cual el error absoluto presenta un valor
bastante alto. Sin embargo, el error relativo
porcentual muestra una mejor aproximación del
verdadero nivel de exactitud respecto al valor
teórico. De este valor se puede deducir que el
valor medido no se encuentra muy alejado del
valor real y por lo tanto, en términos
estadísticos presenta una exactitud alta.
6. Determinación de la concentración de la
solución problema de azul de metileno
En la Tabla 6 se expone el valor de la
concentración de la solución problema de azul
de metileno que se dedujo a partir de la
regresión lineal de la curva de calibración.
Tabla 6. Concentración de solución problema de azul de
metileno.
Absorbancia solución
1.318
problema (±𝟎. 𝟎𝟎𝟐)
Concentración solución problema
11.34
(±𝟎. 𝟏𝟔 ppm)
La concentración de la solución problema se
calculó utilizando Ec. (10):
𝑋 − 0.1077
𝑌= (10)
0.1067
Dónde: Y es la concentración en ppm
y X la absorbancia.
La incertidumbre en la concentración de la
solución problema se desarrolló como un
promedio de las incertidumbres de las
diluciones que fueron preparadas para generar
la zona lineal en la curva calibración.
7. Anexo: Ejemplo de aplicación terapéutica
En la Tabla 7A se presentan los resultados de
los cálculos necesarios para encontrar los
volúmenes teóricos requeridos de la solución
de azul de metileno y de la solución salina, que
contienen los solutos identificados que
conformarían la disolución terapéutica.
Tabla 7A. Datos para calcular teóricamente los
volúmenes para generar disolución terapéutica.
Masa corporal del paciente (kg) 63
Volumen requerido de la disolución terapéutica
0.25
(L)
Azul de metileno necesario según la masa
corporal del paciente (mg)
94.5
Concentración de azul de metileno requerida en
disolución terapéutica (ppm)
378
La concentración de azul de metileno requerida
en la disolución terapéutica se calculó
utilizando Ec. (11):
𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑒𝑡𝑖𝑙𝑒𝑛𝑜
𝑝𝑝𝑚 = (11)
𝐿 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 𝑡𝑒𝑟𝑎𝑝𝑒𝑢𝑡𝑖𝑐𝑎
Finalmente, se calcularon los volúmenes
teóricos necesarios de las soluciones de partida.
Con estos valores se podría generar la solución
terapéutica la cual contendría las
concentraciones determinadas de cada uno de
los solutos. Los volúmenes se observan en la
Tabla 7B.
Tabla 7B. Volúmenes teóricos requeridos de azul de
metileno y solución salina para generar disolución
terapéutica. (Estos volúmenes se deben aforar juntos en
un matraz de 250 mL)
Volumen de solución de azul de metileno 5000
18.9
ppm (mL)
Volumen de solución salina 9%m/v (mL) 25
Los volúmenes teóricos de las disoluciones de
partida se calcularon utilizando la Ec. (12):
𝐶𝑆𝑙𝑛 𝑡𝑒𝑟𝑎𝑝𝑒𝑢𝑡𝑖𝑐𝑎 𝑉𝑆𝑙𝑛 𝑡𝑒𝑟𝑎𝑝𝑒𝑢𝑡𝑖𝑐𝑎
𝑉𝑡 𝑆𝑙𝑛 𝑑𝑒 𝑝𝑎𝑟𝑡𝑖𝑑𝑎 = (12)
𝐶𝑆𝑙𝑛 𝑑𝑒 𝑝𝑎𝑟𝑡𝑖𝑑𝑎
Conclusiones
En de la curva de calibración del azul de
metileno, el coeficiente de correlación R2 de la
ecuación de la recta en la zona lineal, presentó
un valor de 0.9796, el cual, en general,
representó una alta correlación. Sin embargo,
en este tipo de aplicaciones es esperado un
coeficiente con un valor más cercano a 1, que
muestre una fuerte relación lineal entre los
datos, para asegurar un cálculo por regresión
lineal de algún valor desconocido con la mayor
exactitud posible. La falla en este dato fue
causado principalmente por errores personales
a la hora de realizar los procesos y métodos
relacionados con esta práctica; asimismo, se
atribuyó a estas mismas circunstancias el error
presentado en la absortividad molar calculada
para el azul de metileno dentro de estos mismos
parámetros.
Debido a que el eje de las concentraciones (eje
X) de la gráfica de la zona lineal de la curva de
calibración no presentó una incertidumbre
general, la incertidumbre del valor de la
concentración, se calculó como el promedio de
las incertidumbres de las concentraciones de las
diluciones utilizadas para elaborar la curva de
calibración. Las diferentes incertidumbres de
estas concentraciones fueron resultado del uso
correcto de las fórmulas de propagación de
errores con base en los volúmenes y
concentración de la solución patrón conocida y
sus respectivas incertidumbres.
Tanto la evaporación de un solvente como la
metodología de colorimetría realizada por
espectrofotometría, constituyen técnicas
adecuadas para conocer la concentración de
una solución problema, sin embargo, hay que
tener en cuenta que no se puede utilizar el
mismo tipo de soluciones para los dos procesos;
inicialmente para la técnica de evaporación se
deben usar soluciones donde el solvente,
teniendo en cuenta su temperatura de
ebullición, pueda evaporarse sin desintegrar el
soluto, como es el caso de la solución salina que
se usó en la práctica descrita en este informe.
En el caso de la colorimetría por
espectrofotometría es necesario conocer el
rango de longitudes de onda en donde el soluto
genera absorbancia, y verificar que la
absorbancia de la solución problema se
encuentre dentro del rango de interpolación de
la curva de calibración generada con las
diluciones.
Debido a que no se realizó un análisis
estadístico de los datos experimentales de
volúmenes o concentraciones de las diluciones
y disoluciones elaboradas, las cifras
significativas y las correspondientes
incertidumbres, resultado de las propagaciones
de errores, reflejan la confiabilidad de los datos
medidos.
Referencias
[1] Oz, M., Lorke, D. E., Hasan, M., &
Petroianu, G. A. Cellular and molecular
actions of Methylene Blue in the nervous
system. 2010. Recuperado el 7 de Octubre del
2019 de
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.100
2/med.20177
[2] Corral, A. Una tinción contra el Alzheimer.
2008. Consultado el 7 de Octubre del 2019
[3] “Asselum” Curva espectral
http://www.uco.es/ Assesors Luminotécnics (1
de octubre, 2019)
[4] Robert, D., Simoni-Robert, L., Vaughan,
M., Tabor, H. “Probably the mot important
instrument ever developed towards the
advancement of bioscience” 2003.
[5] D’Alessio, A., Guido, O., Bandín, N.
Determinación espectrofotométrica de
Microcantidades de Boro en Agua. 1980
https://inis.iaea.org/