CUANTIFICACIÓN COLORIMÉTRICA DE LA CONCENTRACIÓN DE UNA

DISOLUCIÓN DE AZUL DE METILENO.

COLORIMETRIC QUANTIFICATION OF THE CONCENTRATION OF A
METHYLENE BLUE SOLUTION.
Carlos Alberto Gonzalez Largo1 y Diego Alejandro Bedoya Jiménez1
1. Departamento de ingeniería Química, Facultad de Ingeniería, Universidad Nacional de Colombia,
sede Bogotá, Cra. 30 No. 45-03, Bogotá DC, Colombia.
Laboratorio técnicas básicas en Química.
Autor para correspondencia: algonzalezla@unal.edu.co.

Resumen. Abstract.
Cuando se realizan mediciones de concentración When concentration measurements are made on
en disoluciones, hay varios tipos de métodos solutions. There are several types of methods for
para hallar la cantidad de un soluto en una finding the amount of a solute; in one solution,
cantidad de disolución. Uno de estos métodos, one of these methods was used in the past
fue el utilizado en la pasada práctica de laboratory practice the colorimetric method,
laboratorio, el método colorimétrico que which relates optical properties such as
relaciona propiedades ópticas como: la absorbance and transmittance with concentration
absorbancia y la transmitancia con la of a substance, this method was used to find the
concentración de una sustancia, se trabajó con concentration of methylene blue in a solution of
este método para hallar la concentración de azul water and methylene blue.
de metileno, en una disolución de agua y azul de
metileno. Using a spectrophotometer to measure the
absorbance of methylene blue solutions at
Usando un espectrofotómetro para medir la different concentrations, which were made from
absorbancia de disoluciones de azul de metileno a starting solution, to reach the concentrations
a distintas concentraciones, que fueron hechas a needed using the dilution factor.
partir de una disolución de partida, hasta llegar a
las concentraciones necesitadas usando el factor From the measurements taken, they were
de dilución. recorded in a table and a spectral curve and a
calibration curve were constructed. From which
A partir de las medidas tomadas, se anotaron en the wavelength at which the methylene blue
una tabla, se construyó una curva espectral y una shows the maximum absorbance and the
curva de calibración. A partir de las cuales se absorbance of methylene blue at various
halló la longitud de onda en la cual el azul de concentrations was found.
metileno presenta la absorbancia máxima y la
absorbancia del azul de metileno en distintas Finally, the concentration of methylene blue was
concentraciones. calculated in a solution given by the teacher in
which the absorbance was related to the Beer-
Por último, se calculó la concentración de azul Lambert law.
de metileno en una solución dada por el docente,
en la que se relacionó la absorbancia con la ley le Keywords: concentration, Beer-Lambert law,
Beer-Lambert. absorbance, spectrophotometer, dilution factor,
serial dilution.
Palabras clave: concentración, ley Beer-
Lambert, absorbancia, espectrofotómetro,
dilución seriada, factor de dilución.
Introducción.
El método colorímetro, es un método usado para calcular la concentración de una sustancia que se
encuentra disuelta en otra, usando radiación electromagnética que es “la combinación de campos
magnéticos oscilantes, que se propagan, transportando energía de un lugar a otro”(1). En este
método se usa la luz, en la colorimetría se relaciona la concentración con propiedades ópticas como
la transmitancia1 y la absorbancia2.
La transmitancia se define como la cantidad de radicación o energía que atraviesa un cuerpo en este
caso fue la disolución de azul de metileno y la absorbancia es la medida de la atenuación de una
radiación o energía al atravesar una sustancia o cuerpo, en la práctica fue la disolución de azul de
metileno. (2)
Para medir la absorbancia se utilizó un espectrofotómetro, es un instrumento de análisis y medición,
que analiza la absorbancia de una muestra, atreves de medir la cantidad de luz monocromática
proyectada por el mismo espectrofotómetro absorbida por una muestra; la luz monocromática es
una radiación que solo posee una longitud de onda o un solo color.(3,4)
Para calcular la concentración de una disolución de azul de metileno a partir de la absorbancia, se
usó la ley Beer-Lambert3 que es una relación lineal entre la absorbancia o absorción de luz y la
concentración de una sustancia, propuesta por August Beer en 1852, posteriormente agrego a su ley
la teoría de Lambert que fue anterior a la suya. (4)
A pesar de la utilidad de esta ley y su precisión, posee una serie de limitaciones a la hora de usarla
estas son: pierde precisión, si la concentración de la disolución es mayor a 10-2 M. Incumplimiento
de los postulados de la ley, debido a la interacción de los componentes de la disolución entre sí y
con la luz. Errores al aplicar la ley, debido a las interferencias que generan ciertas sustancias en los
instrumentos de medición. (5)
A partir de los datos que se tomaron de la absorbancia en la disolución, se construyeron dos graficas
que fueron una curva espectral y una de calibración.
La curva espectral es la representación del porcentaje o medida de la transmitancia y la absorbancia
en función de la longitud de onda, en la cual se mantiene constante la concentración de la muestra;
esta curva se utiliza para hallar la longitud de onda en la cual se presenta la absorbancia máxima.(6)
La curva de calibración es una manera de calcular la concentración de una sustancia que esta
disuelta en otra, es una relación proporcional entre la concentración de una sustancia y una señal
analítica en este caso la absorbancia. (7)
Para la realización de la curva espectral y la de calibración, no solo se utilizó la muestra de la
disolución sino que también se usó un blanco de reactivos es decir una disolución preparada con
todos los componentes excepto la sustancia a analizar, en esta caso es agua destilada solamente. Se
usó el blanco para calibrar el espectrofotómetro y detectar posibles impurezas o interferencias.(8)
Para construir la curva de calibración además del blanco de reactivos fue necesario hacer una
dilución seriada, es la disminución progresiva de la concentración de una sustancia, para esto se
utiliza el factor de dilución4 que es el número de veces que una dilución es más diluida que la otra.

1
Ecuación de la Transmitancia. 𝑇 = 𝐼/𝐼0
2
Ecuación de la Absorbancia. 𝐴 = log10 𝑇
3
Ecuación de la Ley de Beer-Lambert. 𝐴 = 𝑎𝑏𝑐
4
Formula del factor de dilución. 𝐶𝑓 = 𝐶𝑖/𝑉𝑡
También se usó la formula general para preparar las disoluciones5 para hacer la disolución seriada.
(9,10)
Materiales y métodos.
Construcción de la curva espectral.
Para la curva espectral se utilizó, una disolución de azul de metileno a una concentración de 10
ppm, fue preparada a partir de una disolución con una concentración de 50 ppm y un blanco de
reactivos que es agua destilada sin la sustancia a analizar. Después depositamos el blanco y la
solución en las celdas para llevarlas al espectrofotómetro.
Se encendió el espectrofotómetro, se esperó hasta que la lámpara estuviera lista. Luego se tomó el
blanco de reactivos y se colocó en el compartimiento de muestra, se calibro el espectrofotómetro
con la longitud de onda con la cual se iba a trabajar, finalizada la calibración se procedió a medir la
absorbancia de la disolución y se tomó el dato.
Este procedimiento se repitió varias veces pero manejando distintas longitudes de onda. Las
longitudes de onda que se trabajaron estuvieron entre 550 nm y 700 nm.
Finalizada la toma de datos se construyó la curva espectral y se halló la longitud de onda donde la
disolución presenta mayor absorbancia.
Construcción de la curva de calibración.
Para la construcción de la curva de calibración, lo primero fue, la elaboración de las disoluciones a
las cuales se les iba a medir la absorbancia. Para ello el docente nos asignó las concentraciones a las
cuales deben estar las disoluciones con las se trabajaron.
Para realizar las soluciones de trabajo, se partió de una solución de partida de 50 ppm y se calculó
cuanto volumen de agua y de solución de partida era necesaria para llegar a la concentración de la
disolución de trabajo, para esto se usó la fórmula del factor de dilución y la fórmula general para las
disoluciones.
Luego de preparadas las disoluciones se tomó cada una de estas disoluciones y se trasvasaron en
una celda de muestra del espectrofotómetro.
Para medir la absorbancia de las disoluciones al igual que con la curva espectral primero se calibro
el espectrofotómetro con el blanco de reactivos y luego se midió la absorbancia de cada muestra,
usando la longitud de onda en la cual se presentó mayor absorbancia. Se tomaron los datos y se
realizó la curva.
Calculo de la concentración de la solución problema.
Para el cálculo de la concentración de la disolución problema, se tomó una muestra de la disolución
que había sido previamente preparada por el docente, se realizó el mismo procedimiento
anteriormente expuesto para medir la absorbancia. Para calcular la concentración se tomó la
absorbancia y se relacionó con la ley Beer-Lambert.
Además de la ecuación de la ley fue necesario calcular el coeficiente de absortividad que se sacó a
partir de la ecuación de la pendiente6.

5
Formula general para las disoluciones. 𝐶 𝑖 ∗ 𝑉𝑖 = 𝐶𝑓 ∗ 𝑉𝑓
6
Ecuación de la pendiente. 𝑚 = 𝑦2 − 𝑦1 / 𝑥2 − 𝑥3
Discusión y Resultados.
Tabla 1. Datos de la absorbancia de una disolución de azul de metileno a 10 ppm.

Longitud
Absorbancia
de Onda
(U.A)
(nm)
550 0,038
600 0,166
630 0,219
660 0,361
680 0,239
700 0,043

En la Tabla 1 se presentan los datos obtenidos de absorbancia de una disolución de azul de metileno
a concentración constante. En los resultados se midió la cantidad de absorbancia que presenta una
disolución de azul de metileno a diferentes longitudes de onda.
La Figura 1 es la representación gráfica de los datos de la Tabla 1, observamos en la Figura 1 no
crece de manera lineal, sino que forma una curva y que la máxima absorbancia es el pico de esta
curva, luego decrece a medida de que aumenta la longitud de onda.
Tanto en la Tabla 1 como en la Figura 1, la longitud de onda en la cual se reportó el valor más alto
de absorbancia fue a 660 nm. Estos valores de absorbancia del azul de metileno fueron de
importancia, debido a que se tenía que hallar la longitud de onda en la cual se presentaba la máxima
absorbancia, para trabajar las mediciones de absorbancia en la Tabla 2, Tabla 3, Figura 2 y Figura 3
0,4
0,361
0,35

0,3
Absorbancia (U.A)

0,239
0,25 0,219

0,2 0,166

0,15

0,1
0,038 0,043
0,05

0
530 550 570 590 610 630 650 670 690 710
Longitud de onda (nm)

Figura 1. Curva espectral de la absorbancia del azul de metileno.

Tabla 2. Absorbancia de disoluciones de azul de metileno a distintas concentraciones.

Absorbancia
Concentración (ppm)
(U.A.)
15 0,517
10 0,358
8 0,282
5 0,183
3 0,129
0 (Blanco de reactivos) 0
7,1 (disolución problema) 0,228

En la Tabla 2 se presentan los resultados de la absorbancia de disoluciones de azul de metileno a

distintas concentraciones, pero se trabajó con la misma longitud de onda en la cual se presenta
absorbancia máxima que es a 660 nm. Estos datos se utilizaron para la construcción de la Figura 2.
En la Figura 2 se representa por medio de una gráfica los datos obtenidos en la Tabla 2. En esta se
observa que hay una relación lineal entre absorbancia y la concentración de la sustancia, debido a
que entre mayor concentración se presenta una mayor absorbancia en la disolución.
En esta grafica también está la ecuación de la recta con la que se halló la concentración de la
disolución problema, la concentración de la disolución problema también tiene su punto en la
Figura 2 pero no está en la recta, esto se debe a una variación en los cálculos de la ley Beer-Lambert
con respecto a la concentración, pero esta variación es mínima.
El crecimiento lineal se puede explicar, de la siguiente manera, entre más cantidad de sustancia
halla en una solución, mayor cantidad de luz va a retener debido a que los átomos de una sustancia
se excitan o reaccionan en contacto con los fotones.

0,517
0,5

0,4 0,358
Absorbancia (U,A)

0,282
0,3

0,2 0,183 y = 0,034x + 0,0126

0,129 R² = 0,9974

0,1

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
Concentración (ppm)

Figura 2. Curva de calibración de la concentración de azul de metileno (ppm) frente a la

absorbancia.
Tabla 3. Concentración (en ppm) de la disolución problema obtenida por los distintos grupos de
trabajo.
Grupo de Concentración
trabajo muestra (ppm)
1 6,0
2 6,3
3 6,3
4 6,7
5 7,2
6 7,6
7 6,2
8 7,1
9 6,1
10 6,7
11 6,9
12 8,0
13 6,9
14 7,0
∑ 95
Promedio 6,8
Desviación 0,70
estándar
En la Tabla 3 se presentan los resultados que fueron obtenidos por los diferentes grupos, para la
concentración de una disolución problema de azul de metileno. Estos datos fueron el resultado de
relacionar la absorbancia con la ley Beer-Lambert.
En la Figura 3 es una representación gráfica de los datos obtenidos en Tabla 3, se observó que los
resultados obtenidos por los diferentes grupos de trabajo, los valores obtenidos son cercanos entre
sí, estos valores oscilan entre 7 ppm y 8 ppm.
Para hallar los valores que se consignaron en la Tabla 3 y la Figura 3 se usó la ley Beer-Lambert
que es la ecuación de la recta de la Figura 2.
Los datos relativamente cercanos de la Figura 3 se deben a que los grupos de trabajo usaron los
mismos equipos para medir la absorbancia y el mismo método para la medición de la colorimetría.

9
8
Concentración (ppm)

Promedio
7
6
5
4
3
2
1
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Grupos Muestras
Figura 3. Resultados de concentración (en ppm) de la disolución problema obtenidos por los
grupos de trabajo.

Conclusiones.
Se obtuvo que la longitud de onda donde el azul de metileno presenta máxima absorbancia es a
660nm, este dato concuerda con el dado por el docente. Se comprobó el cumplimento de la ley de
Beer-Lambert en las mediciones de absorbancia en disoluciones de distinta concentración, debido a
que se obtuvo una gráfica lineal. Para la disolución problema se obtuvo un resultado medio de 6.8
ppm.

Agradecimientos.
Los autores agradecen al laboratorio de química general de la Universidad Nacional de Colombia
por el espacio y los instrumentos, al docente de la materia de laboratorio técnicas básicas en
química el señor Nelson Jair Castellanos, a la asistente del docente Carolina Villamil por su asesoría
en los cálculos, proceso experimental y elaboración del informe. Y al encargado del laboratorio por
la asesoría y el préstamo de los instrumentos.

Bibliografía.
(1) Gandia, S.; Melía, J. La teledetección de fenomenos en el seguimiento de fenomenos
naturales. Recursos renovables: Agricultura, 1st ed.; Universidad de Valencia, Ed.;
Valencia, 1992.
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16, 2017).
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(4) Naylor, J. Caído del cielo, 3ra ed.; Akal, Ed.; The Press Syndicate: Madrid, 2005.
(5) Olsen, E. Métodos ópticos de análisis, 1ra ed.; Reverté S.A, Ed.; McGraw-Hill Inc:
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(6) G, G.; H, D. Química Organica Experimental; S.A, R., Ed.; McGraw-Hill Inc:
Barcelona, 2007.
(7) Padial, J. Curva de calibración https://curiosoando.com (accessed Mar 17, 2017).
(8) Harris, D. Análisis químico cuantitativo, 6ta ed.; Revertré S.A, Ed.; W. H. Freeman
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(9) Wikipedia. Dilición en serie https://es.wikipedia.org (accessed Mar 17, 2017).
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