Preparación de varias diluciones a partir de una disolución

stock de azul de metileno con diferentes concentraciones

finales para posteriormente crear una curva de calibración.

Andrés C. Pardo P.
Miguel A. Chávez

Universidad Nacional de Colombia – Sede Bogotá

Colombia

PALABRAS CLAVE: Dilución, disolución, curva de calibración, concentración, absorbancia, longitud de onda.

RESUMEN: Cuando en el laboratorio se trabaja con disoluciones de las cuales se desconocen su concentración, se
vuelve necesario encontrar un método para poder encontrar dicha concentración, un método muy utilizado además de
confiable es la curva de calibración, puesto que con ella se puede encontrar concentraciones desconocidas a partir de
diluciones de la disolución inicial de las cuales ya se conocen sus respectivas concentraciones. En la práctica
experimental se trabajó con una disolución stock de azul de metileno con concentración desconocida, en donde lo
primero que se realizó fue encontrar la longitud de onda en donde existe una mayor absorbancia de dicha disolución
para que con ese dato se pudieran crear varias diluciones y así medirlas con el espectrofotómetro con la longitud de
onda hallada (660 nm) para crear nuestra propia curva de calibrado y poder determinar la concentración de la
disolución stock. Uno de los principales resultados fue encontrar que la coloración y concentración de las diluciones
son directamente proporcionales.

INTRODUCCIÓN. luz que es absorbida por la solución en diferentes

Las disoluciones tienen propiedades intensivas que
hacen característico cada líquido, por ejemplo su color,
este vendría siendo el pilar de los métodos de coloración
(colorimetría) por lo cual es posible conocer la cantidad
de soluto en una disolución por comparación de su color,
por medio de análisis visual se podría intuir cual
disolución es más concentrada, pero hay unas
características que se escapan a este análisis y es
necesario valerse de equipos como el espectrofotómetro
para llegar a hacer un esquema y recolección de datos
de cada una de las disoluciones para obtener datos
más precisos y exactos.
En esta práctica se examinó la absorbancia de azul de
metileno en diferentes concentraciones, para
posteriormente establecer una curva de calibración.
Para medir la absorbancia del azul de metileno, se
utiliza un espectrofotómetro, que mide la cantidad de
longitudes de onda. La cantidad de luz absorbida
depende de la concentración del azul de metileno en
la solución, así como de la longitud de onda de la luz
utilizada. Utilizando la Ley de Lambert-Beer, que
establece que la absorbancia es proporcional a la
concentración de la sustancia [Brown, T. (2009).
Química, la ciencia central (11a edición). Editorial
Pearson Prentice Hall] se pudo por ende, calcular la
concentración de la sustancia en la disolución
desconocida.
PROCEDIMIENTO.
Para llevar a cabo la práctica experimental se utilizaron
los siguientes instrumentos de laboratorio los cuales
reportan las respectivas incertidumbres por parte del
fabricante:
1
 ➢ 1 Balón aforado Brand de 10 ± 0,025 mL
➢ 2 vasos de precipitados de 100 mL
➢ 1 Bureta Brand de 25 ± 0,075 mL
➢ 1 Pipeta aforada LMS de 10 ± 0,02 mL
➢ 1 Pipeta aforada Brand de 5 ± 0,025 mL
➢ 6 Tubos de ensayo
➢ 1 Pinza doble o pinza mariposa
➢ 2 Pipetas pasteur
➢ 1 espectrofotómetro
- Construcción de la curva espectral
Para hallar la longitud de onda de máxima absorción
para el azul de metileno se usó una lista de longitudes
de onda iniciando en 350 nm, aumentando en 50 nm
cada vez que se cambiaba al siguiente punto a medir
(400, 450, 500, 550, 600), de 600 nm en adelante se
usaba en cada medición 10 nm adicionales (610, 620,
630, 640, 650, así hasta 700 nm). El punto de máxima
absorbancia se dio a una longitud de onda de 660 nm
cuando se encontró que la absorbancia era de 2,150.
Ver los datos obtenidos en la tabla número 1 (ver en los
anexos).
- Volumen inicial de la dilución desconocido
Por medio de la ecuación de dilución ( C1 x V1 = C2 x V2)
se estableció qué cantidad de solución stock se
necesitan para las 6 alícuotas de azul de metileno que
iban a ser luego diluidas con agua destilada, para su
posterior medida de absorbancia en el
espectrofotómetro. Por medio de un despeje de la
ecuación ya mencionada hallamos V1. Los datos
obtenidos se tabularon en la tabla número 2 (ver en los
anexos).
- Preparación de las diluciones.
Para las diluciones se utilizó el balón aforado de 10 mL,
en donde se agregó la cantidad de disolución stock del
azul de metileno que se calculó con la fórmula de
dilución (6 volúmenes iniciales se calcularon), y se
llevaba a volumen hasta el afore con agua destilada,
esta dilución se depositó en un tubo de ensayo y así se
hizo con cada uno de los 6 volúmenes iniciales de
disolución stock o también llamadas alícuotas.
- Curva de Calibración
La curva de calibración se realizó en Excel con la
obtención de las absorbancias que se reportó cuando se
midió cada alícuota en el espectrofotómetro, en el eje de
abscisas se ubican las concentraciones y en el eje de
ordenadas las absorbancias. Esta se obtuvo para poder
obtener la ecuación de la recta, y así obtener luego la
concentración de la disolución problema despejando
dicha ecuación.
Imagen 1. Curva de calibración para el azul de metileno
medido a 660 nm en el espectrofotómetro
RESULTADOS.
A través de la práctica experimental se determinan,
luego del análisis de datos, que se tienen 3 resultados
principales:
El primero, es que una longitud de onda de 660 nm es
recomendable para la cuantificación de la absorbancia
para el azul de metileno, puesto que su absorbancia en
esta onda es la mayor. Además, si no se conoce dicha
longitud de onda, un método que nos asegura llegar a
hallarla es la creación de una curva espectral con la
medición del analito a diferentes longitudes con
intervalos definidos (la repetición de la medición reduce
el error)
El segundo resultado importante, que nos da la
experimentación, es tener la certeza de asegurar que
existe una linealidad proporcional entre la concentración
del analito y su coloración, este análisis se puede
determinar visualmente (cualitativamente) o por medio
de cálculos, gracias a la ecuación de la recta
(cuantitativamente) que en nuestro experimento fue
𝑦 = 0, 1564𝑥 + 0, 0375. Gracias a esta ecuación se
pudo determinar la concentración de la muestra
problema con la absorbancia obtenida de esta a través
del espectrofotómetro (0.861); dándonos como resultado
5.26 mg/L en concentración.
Como tercer resultado principal, se pudo determinar la
absortividad molar (ɛ) del azul de metileno, despejando
la ecuación de Lambert-Beer con los datos obtenidos
hasta ese momento, con la ayuda de unos cálculos
algebraicos podemos dividir la absorbancia entre la
longitud y la concentración con la finalidad de pasar la
absortividad molar hacia un lado de la ecuación: ɛ =
A/l*c, al despejar esta ecuación obtenemos una
absortividad molar de 0.1636 mol * L
DISCUSIÓN.
Luego de la experimentación llevada a cabo y su
posterior análisis de los resultados podemos determinar
que la espectrofotometría es una tecnica analitica de
gran utilidad para hallar absorbancias (gracias a su gran
precisión), con estas absorbancias se puede crear una
curva de calibración con las concentraciones conocidas
2
de varias diluciones y así obtener una ecuación de recta
que nos permita hallar la concentración de una muestra
problema despejando dicha ecuación (siempre y cuando
la absorbancia de la muestra problema haya caído
dentro de la recta, de lo contrario, se tendría que hacer
una dilución para dicha finalidad, y tener en cuenta ese
factor de dilución para los cálculos de la concentración
de la muestra problema).
Uno de los resultados a resaltar es la obtención de un
R2 bastante cercano a uno, lo que nos indica que hubo
una gran precisión a la hora de llevar a cabo los cálculos
y el procedimiento experimental, concluimos que se
debe a que los errores personales y metodológicos
fueron muy bajos. Además comparando la bibliografía
existente que habla sobre la ley de Lambert-Beer, la cual
dice que la concentración del analito es directamente
proporcional a la absorbancia, se puede afirmar que en
efecto (gracias a la curva de calibración obtenida) hay
una proporcionalidad directa, a medida que la
concentración analizada es mayor, su absorbancia a la
vez, es mayor; se observa una.
Con base a la información consultada sobre la longitud
de onda en donde se presenta la mayor absorbancia
para el azul de metileno, la bibliografía reporta que se da
a una longitud de onda de 664 nm, que comparada a la
hallada en la práctica experimental (660 nm) a través de
la prueba en diferentes longitud de onda, presenta un
error relativo de 0.6, este valor nos indica que nuestra
medición fue tanto exacta como precisa
3. Palomeque F., L.A.; Farías C., D.M. (2006). Guías para el
trabajo en el laboratorio de química general para ingeniería
química. Notas de Clase, Facultad de Ciencias – Universidad
Nacional de Colombia. Colombia.
4. Mendham, J. (2006). Vogels textbook of quantitative
chemical analysis. Pearson Education. India.
5. Thomas, O., & Burgess, C. (Eds.). (2007). UV-visible
spectrophotometry of water and wastewater (Vol. 27). Elsevier.
6. World Health Organization. (2013). WHO model list of
essential medicines: 18th list, April 2013.
7. Brown, T. L., LeMay H. E., Bursten B. E., Murphy C. J.
(2009). Química la Ciencia Central. 11a edición. Pearson
Prentice Hall, México.
8. Cenens, J., & Schoonheydt, R. A. (1988). Visible
spectroscopy of methylene blue on hectorite, laponite B, and
barasym in aqueous suspension. Clays and Clay Minerals,
36(3), 214-224.
9. Manghelli, J., Brown, L., Tadros, H. B., & Munfakh, N. A.
(2015). A Reminder of Methylene Blue's Effectiveness in
Treating Vasoplegic Syndrome after On-Pump Cardiac Surgery.
Texas Heart Institute Journal, 42(5), 491-494.
10. M. D. Reiboras, Química. La ciencia básica, 2005
Thompson editorial pág 121-145.

ANEXOS.

CONCLUSIONES.
Tras realizar la práctica y analizar los resultados Tabla 1. Datos obtenidos para la curva espectral de azul
obtenidos, se puede concluir y demostrar que… de metileno calculada en el espectrofotómetro.

- Las concentraciones son directamente proporcionales

a la coloración de la disolución Longitud de onda (nm) Absorbancia (± 0,001)
- El espectrofotometro como herramienta analitica es de
gran ayuda para llevar a cabo métodos colorimétricos 350 0.138
gracias a su gran precisión
400 0.073
- La longitud de onda donde hay mayor absorción para
una disolución de azul de metileno es de 660 nm 450 0.052
- La medición indirecta es una gran herramienta para
hallar valores desconocidos, como fue despejar el 500 0.119
volumen final con la formula C1 x V1 = C2 x V2
550 0.317
- Diluir es una manera de bajar el nivel de concentración
en una disolución 600 1.356
- La absortividad molar es inversamente proporcional a
la concentración del analito 650 1.923

660 2,150
REFERENCIAS.
700 0,199
1. Atkins, R.C. Journal of Chemical Education 1975, 52, 550.

2. Palomeque F., L.A.; Molina C., M.F. (2012). Guías para el

trabajo en el laboratorio de técnicas básicas. Programa
Especial de Admisión y Movilidad Académica sedes Orinoquía,
Amazonía y Caribe. Facultad de Ciencias – Universidad
Nacional de Colombia. Colombia.
3
Tabla 2. Datos de volumen inicial de la disolución stock
halladas mediante el despeje de la ecuación de
dilución.

Concentración Volumen de Absorbanc

del patrón disolución stock ia
(mg/L) (mL)

0,5 0,33 0.136

1 0.66 0.198

3 2 0.525

5 3.33 0.804

7 4,67 1.164

10 6.67 1.580

- Preguntas post-laboratorio

Discuta la fórmula empleada para hallar la

concentración de las diluciones preparadas.
Consulte el significado del término “factor de
dilución”.
El factor de dilución es un valor que indica cuántas
veces se ha diluido una solución original al mezclarla
con una cantidad determinada de solvente. En otras
palabras , es una relación entre la cantidad de solución
original y la cantidad final de disolución diluida.
El factor de dilución se calcula dividiendo la cantidad de
solvente que se agrega a la solución original un total de
100 ml de solvente, el factor de dilución seria 10/100, es
decir ,0.1.

Discuta la importancia de calibrar el equipo antes de

realizar las medidas:

Calibrar el equipo antes de realizar mediciones es

esencial para garantizar que los resultados obtenidos
sean precisos y confiables. La calibración es el proceso
de ajustar un instrumento de medición para que su
salida sea consistente y se corresponda con los valores
de referencia conocidos.

Investigue qué sustancias pueden actuar como

interferentes en la colorimetría.

La colorimetría es una técnica analitica que se utiliza

para medir la concentración de una sustancia en una
muestra a través de la absorción o transmisión de luz,
sin embargo existen algunas sustancias que pueden
interferir en la medida de la absorbancia como:
● sustancias que absorben luz a la misma
longitud de onda.
● sustancias que activen con el reactivo utilizado.
● sustancias que forman complejo, es decir que
hacen parte de la experimentación.
● sustancias que cambian el ph de la de la
muestra.
Entre las sustancias que interfieren se encuentran los
pigmentos, sales inorganicas
4