Cuantificación colorimétrica

de la concentración

CUANTIFICACIÓN COLORIMÉTRICA DE LA CONCENTRACIÓN

Brayan Giraldo Ocampo y Santiago Cortés
Programa de Ingeniería Química
Universidad Nacional de Colombia
Bogotá D.C.
Fecha de entrega: 14 de junio de 2019
bgiraldoo@unal.edu.co y sacortes@unal.edu.co

Resumen: Esta práctica de laboratorio tuvo como objetivo principal determinar la concentración de una
disolución problema de azul de metileno. Para tal fin se utilizó el método de colorimetría mediante cinco
diluciones preparadas a partir de una solución stock y cuya concentración era conocida. A través de la
curva espectral hallada fue posible establecer la longitud de onda que presentaba mayor absorbancia, y se
construyó una curva de calibración empleando las magnitudes de absorbancia obtenidas de las cinco
disoluciones y relacionando estas con su respectiva concentración. Finalmente, la concentración obtenida
de la disolución problema de azul de metileno fue de 8.24 ppm con el espectrofotómetro y de 8.81 ppm
con la calculadora LabQuest, cuyo resultado estuvo dentro de la tendencia grupal y con un margen de
error de solo del 3% y 10%, respectivamente, con lo que se pudo concluir que el método más efectivo para
hallar concentraciones fue con el espectrofotómetro. Para el desarrollo de la práctica se tuvieron en cuenta
conceptos relacionados con la absorbancia, concentración, diluciones, ley Beer-Lambert.

1. Introducción dentro de la colorimetría para determinar

La colorimetría es una técnica que suministra
información cualitativa y cuantitativa sobre
sustancias en disolución. El espectrofotómetro es
un instrumento diseñado para dirigir un haz de
luz paralela monocromática a través de una
muestra líquida y medir la intensidad del haz
luminoso emergente.1
La fracción de luz incidente absorbida por una
solución a una longitud de onda está relacionada
con el paso óptico y con la concentración de la
especie absorbente. Estas dos relaciones están
combinadas en la ley de Lambert-Beer:
𝑃 longitud de ondas de radiación. Para llevar a cabo
𝐴 = 𝐿𝑜𝑔
𝑃0
Donde A será la absorbancia, P la potencia del
haz de salida y P0 la potencia del haz de entrada.
Es así como la Ley de Lambert-Beer se utiliza
cantidades de sustancias en muestras
desconocidas. Al existir una relación directa
entre la concentración de las especies en una
solución coloreada y la absorbancia de la misma,
es posible establecer una curva de calibración a
partir de una serie de soluciones de diferente
concentración de la muestra. 2 El único requisito
que debe cumplir la muestra es que absorba
dentro del intervalo de longitud de onda
seleccionado.
Para optimizar el cálculo de la absorbancia se
construye una curva espectral, donde se muestra
la relación existente entre la energía emitida y la
las mediciones en calorimetría es necesario tomar
como punto de comparación la llamada “curva
espectral codificada” que permite asignar valores
numéricos a la respuesta de estímulos de las
diferentes longitudes de onda. Una vez asignados

los valores se hace una suma de los mismos y se
obtiene la cuantificación que se representa en una
gráfica donde hay una longitud máxima de
absorbancia. Para hacer las determinaciones
cuantitativas se elige, en general, la longitud de
onda correspondiente a un máximo, pues el error
de medición es mínimo y la sensibilidad máxima.
Una curva de calibración es la representación
gráfica de la relación existente entre la
absorbancia y la concentración de una serie de
disoluciones que se han sometido a un proceso de
dilución seriada, es decir, que se han preparado a
partir de una solución de mayor concentración y
se han hecho diluciones sucesivas a partir de ella
hasta alcanzar la concentración deseada tomando
alícuotas del blanco de reactivo, que
generalmente es agua destilada.3
La Ley Lambert-Beer presenta una serie de
limitaciones que se deben considerar a la hora de
hacer la cuantificación colorimétrica de la
concentración de una sustancia. La primera de
ellas es la concentración de la disolución, dado
que la ley sólo es aplicable a disoluciones
diluidas; en disoluciones muy concentradas hay
una alteración en la capacidad de absorción a una
longitud de onda determinada. La segunda son
las desviaciones instrumentales por el uso de
radiación no monocromática, puesto que la ley
está definida para radiaciones con una sola
longitud de onda. La tercera es la falta de
uniformidad de la muestra o especie absorbente,
o presencia de impurezas. Y, por último,
desviaciones químicas debidas a reacciones del
soluto con el disolvente.4
Al construir una curva de calibración es
imprescindible tener presente las anteriores
limitaciones de la Ley Lambert-Beer, dado que si
no son eliminadas las absorbancias que
sobrepasan los límites de linealidad, es decir, que
Cuantificación colorimétrica
de la concentración
dejan de cumplir la ley, la curva de calibración
no va a tener una verdadera utilidad.7 Ya
construida la gráfica con base en los valores
conocidos de las concentraciones y absorbancias
de las diferentes disoluciones, es posible hallar la
concentración de la disolución problema por
medio de la ecuación de la recta expresada de la
forma matemática y = mx+b, siendo “y” la
absorbancia de la solución y “x” la
concentración.
En la práctica del laboratorio se utilizó una
disolución de azul de metileno como analito, que
es una molécula orgánica de tipo heterocíclico
aromático con fórmula molecular C16H18ClN3S y
masa 319,85 g/mol, además de tener un color
azul oscuro cuando es disuelto en agua o
alcohol.5
Para concluir, el objetivo principal de la práctica
de laboratorio fue determinar la concentración de
una solución de azul de metileno, cuya
concentración era desconocida, a partir del
método conocido como colorimetría. Para ello
fueron empleados los procedimientos expuestos,
se hicieron diluciones seriadas, se halló la curva
espectral, se calcularon las absorbancias de las
diferentes disoluciones, y se construyó una curva
de calibración para determinar, por medio de
interpolación en la gráfica, la concentración de
una disolución problema.
2. Datos, cálculos y resultados
Se necesita calcular cuántos mL se deben tomar
de la solución madre (solución 2) para preparar
cada una de las distintas soluciones con menor
concentración. El cálculo se realizará de la
misma forma que el siguiente ejemplo:
 Cuantificación colorimétrica
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Concentración Volumen Alícuota Concentración Transmitancia

Solución (ppm) (mL) (mL)1 Solución (ppm) Absorbancia (%)
1 100 - - 3 20,0 2,151 0,70%
2 25,0 250 - 4 15,0 1,739 1,80%
3 20,0 10 8 5 10,0 1,164 6,90%
4 15,0 10 6 6 5,00 0,561 27,5%
5 10,0 10 4 7 1,00 0,161 69,0%
6 5,00 10 2 Tabla 2: absorbancia y transmitancia de las
7 1,00 10 0.4 soluciones en el espectofotómetro.
Tabla 1: concentración y alícuotas de las
soluciones. Se realizó la misma medición en la calculadora
LabQuest:
Cálculo de la alícuota a tomar de la solución
2: Concentración
𝑉1 𝐶1 = 𝑉2 𝐶2 Solución (ppm) Absorbancia
1 100 -
2 25,0 -
Por ejemplo, la alícuota (V1) a tomar de la 3 20,0 2.147
solución 2 para preparar la solución 3 es:
4 15,0 1.737
5 10,0 1.163
𝑉1 × 25 = 10 × 20 6 5,00 0.559
7 1,00 0.159
𝑉1 = 8 Tabla 3: absorbancia de las soluciones en
LabQuest.
y del mismo modo con el resto de soluciones. Para calcular la concentración de la solución
problema, se necesita construir una gráfica de
Luego, se realizó la curva espectral usando como
calibración que refleje los resultados obtenidos
referencia la solución 3. Se obtuvo que la
en las mediciones. Según la Ley de Beer-
longitud de onda (lambda) a la que se da la mayor
Lambert, la concentración está relacionada
absorbancia es de 663.3nm.
linealmente con la absorbancia en cierto rango de
concentración. Por ende, se construirá una
gráfica a través de regresión lineal, hasta donde
los valores dejen de ser lineales:

1
Indica la alícuota tomada de la solución 2 para preparar
la nueva solución.
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Interpolación de la absorbancia de la solución

Curva de calibración con problema en la gráfica 1 (espectrofotómetro):
espectofotómetro
2.5
𝑦 = 0.1074𝑥 + 0.0594
Absrobancia (abs)

y = 0.1074x + 0.0594
2 R² = 0.9962 0.962 = 0.1074𝑥 + 0.0594
1.5
1 0.962 − 0.0594
𝑥=
0.5 0.1074
0 𝑥 = 8.404
0 5 10 15 20 25
Concentración (ppm) Se procede del mismo modo con la ecuación de
la gráfica 2 (LabQuest) y se obtiene una
concentración de 9.366ppm.
Gráfica 1: curva de calibración con el
espectofotómetro. Sin embargo, se desea disminuir el intervalo de
modo que los datos se puedan organizar de una
Y del mismo modo con LabQuest: forma más lineal, con un R2 más cercano a 1.
Entonces, dado que la concentración más alta (20
Curva de calibración con ppm de la solución 3) puede generar distorsiones
en la linealidad de la recta y que no es necesaria
LabQuest
para el cálculo de la concentración de la solución
2 problema, se elimina. Esto mismo se hará en la
Absorbancia (abs)

y = 0.0864x + 0.1528 gráfica 2 (LabQuest). Se obtiene entonces:

1.5 R² = 0.9699

1
Curva de calibración con
0.5 espectofotómetro (2)
0 2
0 5 10 15 20 25 y = 0.1137x + 0.0247
Absorbancia (Abs)

Concentración (ppm) 1.5 R² = 0.9989

1
Gráfica 2: curva de calibración con LabQuest.
0.5
Se midió la absorbancia de la solución problema
en el espectrofotómetro, obteniendo un valor de 0
0 5 10 15 20
0.962.
Concentración (ppm)
Con las gráficas hechas y su ecuación
determinada, se puede interpolar el valor de
absorbancia obtenido de la solución problema, Gráfica 3: curva de calibración con el
despejando el valor de la concentración (x). espectofotómetro eliminando un dato.
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Tratamiento estadístico:

Concentración por Concentración

Curva de calibración con Espectrofotómetro por LabQuest
LabQuest (2) Grupo (ppm) (ppm)
2
1 7.71 7.66
y = 0.1008x + 0.0738
Absorbancia (Abs)

1.5 R² = 0.9917
2 7.75 8.43
1
3 8.14 8.21
0.5
4 8.36 -
0
0 5 10 15 20 5 7.11 -
Concentración (ppm)
6 8.24 8.26

Gráfica 4: curva de calibración con e LabQuest 7 8.00 7.45

eliminando un dato.
Sumatoria 55.31 40.01
Interpolación de la absorbancia de la solución
problema en la nueva gráfica Promedio 7.90 8.00
(espectrofotómetro):
Desviación
0.42 0.4226
𝑦 = 0.11374𝑥 + 0.0247 estándar

0.962 = 0.11374𝑥 + 0.0247 S promedio 0.173 0.211346871

0.962 − 0.0247 Dato a

𝑥= 7,89 +/-(0.33) 8,00 +/- (0.45)
0.11374 reportar

𝑥 = 8.24 Intervalo de
(7.56, 8.22) (7.55, 8.45)
confianza
Se despeja de la misma forma en la nueva gráfica
de LabQuest y se obtiene una concentración de Tabla 4.
8.81 ppm. Estos fueron los datos reportados.

Calculo de la absortividad:

𝐴 = 𝜀𝑙𝑐

0.962= 𝜀 × 1 × 2.57 × 10−5

0.962
𝜀 = 1×2.57×10−5 = 37431.9
 Cuantificación colorimétrica
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Nuevo Concentración grupal 7.95

7.95 8.14
promedio Espectrofotómetro (ppm)

Segunda % de Error 0.6

desviación 0.02753313 0.3335666
estándar Concentración grupal LabQuest 8.14
(ppm)
Tabla 5: promedio y desviación de los datos a
estudiar (después del rechazo de datos). % de Error 1.8

Calculo de desviación estándar: Tabla 6: Datos finales.

2
∑(𝑥𝑖 −𝑥̅ ) 3. Discusión de resultados
𝑆𝑒𝑠𝑝𝑒𝑐𝑡𝑟𝑜𝑓𝑜𝑡ó𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 = √ 𝑛−1 = 0.41
𝑆 0.41 Esta fue una práctica en la que hubo que ser
𝑆𝑥 = = = 0.17 sumamente riguroso, dado que es un
√𝑛 − 1 √7 − 1
procedimiento largo, que involucra numerosas
Rango de aceptación: diluciones y varios instrumentos de medida. Es
necesario hallar la curva espectral del compuesto
𝜇 = 7.89 ± (2.447 × 0.17) = 7.89 ± 0.33 = usado en la solución, determinando la mayor
(7.56, 8.22) longitud de onda que es capaz de absorber dicha
Se procede del mismo modo con los datos del sustancia, y que para el azul de metileno fue de
LabQuest. 663.3nm. Así se podrá calibrar el
espectrofotómetro y analizar el resto de
soluciones, ya que, si esta longitud de onda se
Longitud de onda de máxima 663.3
desconoce se presentarían inconvenientes con la
absortividad (nm)
absorbancia.
Concentración real de la 8.00 Preparar diluciones es un proceso de bastante
disolución (ppm) cuidado, ya que implica enrasar o aforar la
alícuota tomada de la solución. Por esto, se
Absortividad molar del azul de 37431.9 pueden presentar diversos errores personales, por
metileno ejemplo, no llevar el menisco sobre la línea de
afore o usar envases contaminados.
Concentración con 8.24 Las soluciones preparadas, con sus respectivas
Espectrofotómetro (ppm) concentraciones, fueron analizadas a través del
espectrofotómetro y de la calculadora LabQuest,
% de Error 3 configurando ambos instrumentos a la longitud
de onda obtenida previamente, así nos
Concentración con calculadora 8.81 aseguraremos de que el haz de luz disparado por
LabQuest (ppm) el instrumento no supere esta medida. Es
importante tomar un blanco de reactivos, en este
% de Error 10 caso el agua, para calibrar los instrumentos,
tarando la máquina, asumiendo que la
absorbancia del agua es 0.

Con la curva de calibración construida, se obtuvo
la concentración de la solución problema, que fue
de 8.24 ppm con el espectrofotómetro, con un
porcentaje de error del 3%, y un error absoluto de
0.24. Por el otro método, usando la calculadora
LabQuest, se obtuvo una concentración del 8.81,
con un porcentaje de error del 10.13% y un error
absoluto de 0.8. A partir de estos resultados se
puede afirmar que el método más exacto es el
espectrofotómetro dado su menor porcentaje de
error.
El promedio del grupo con el espectrofotómetro
fue de 7.90, con un porcentaje de error de 1.25%,
y un error absoluto de 0.1, sin rechazar datos.
Después del tratamiento estadístico, fueron
rechazados dos datos, calculando un nuevo
promedio de 7.95, disminuyendo su porcentaje
de error a 0.625% y un error absoluto de 0.05,
con lo que su exactitud aumenta.
El promedio del grupo con la calculadora
LabQuest fue de 8.00 ppm, es decir, el valor real,
por ende, tuvo un error de 0. Sin embargo, cabe
resaltar que fueron reportados menos datos que
con el espectrofotómetro, lo que lo hace una
medida menos precisa y se hace necesario
rechazar datos. Con el tratamiento estadístico, se
rechazó un dato, y se obtuvo un nuevo promedio
que fue de 8.14 ppm, dando como porcentaje de
error de 1.75% y un error absoluto de 0.14, lo que
demuestra que al final termina siendo un método
menos exacto.
Preguntas propuestas
El factor de dilución (FD) es un número que
indica las veces que debe diluirse una solución
para obtener una de menor concentración. La
solución puede tener disuelto ya sea un soluto
sólido, líquido o gaseoso. Por lo tanto, su
concentración depende del número de partículas
del soluto y del volumen total V.
Cuantificación colorimétrica
de la concentración
El factor de dilución permite determinar qué tan
diluido se encuentra el último vaso respecto al
primero. Así, en lugar de las simples propiedades
organolépticas, con el FD puede repetirse el
experimento a partir de la misma botella de
granadina (solución madre); para que de esta
manera se asegure que las concentraciones de los
nuevos vasos sean iguales.
Es frecuente encontrar una dilución expresada,
por ejemplo, de la forma siguiente: 1/5, 1/10,
1/100, etc. ¿Qué significa esto? Simplemente
indica que para obtener una solución con la
concentración deseada, se debe diluir la solución
madre las veces que indica el denominador de la
fracción nombrada.
Si, por ejemplo, se usa la dilución 1/5, se debe
diluir 5 veces la solución inicial para obtener una
solución con esta concentración. Por lo tanto, el
número 5 es el factor de dilución. Este traduce del
siguiente modo: la solución 1/5 es cinco veces
más diluida que la madre.
¿Cómo preparar dicha solución? Si se toma 1mL
de la solución madre, este volumen debe
quintuplicarse, para que así, la concentración del
soluto se diluya por un factor de 1/5. Entonces, si
se va a diluir con agua (como en el ejemplo de la
granadina), a 1mL de esta solución debe
añadírsele 4 mL de agua (1+4=5mL de volumen
final VF).
Con respecto a las concentraciones que se
pudieron usar, en nuestro caso, se usaron todas, y
solo se eliminó un valor para hacerla incluso más
lineal. Probablemente, después de 20 ppm la
gráfica dejaba de ser lineal rápidamente.
Es importante calibrar el equipo donde se trabajó
para establecer un blanco de reactivos. En este
caso, lo hicimos con el agua, ya que asumimos
que su absorbancia es de 0 y por ende su
transmitancia es el 100%, así, toda la luz que

emita el aparato será recogida de nuevo por él,
estableciendo un patrón de referencia y un 0 real
para el resto de soluciones.
Las sustancias que pueden generar interferencia
en un proceso como este son aquellas que
generen precipitados o turbidez.
4. Conclusiones
 Se logró determinar la concentración de
una disolución de azul de metileno por
medio del método de colorimetría,
obteniendo un valor individual y grupal
muy preciso y algo exacto.
 La colorimetría permitió conocer la
concentración de la disolución problema
que fue de 8.24 ppm con el
espectrofotómetro y de 8.84 ppm con la
calculadora LabQuest, y con porcentajes
de error del 3% y del 10%,
respectivamente.
 Los datos grupales muestran una
tendencia similar a la individual, dado
que después del pertinente tratamiento
estadístico se obtuvo una concentración
de 7.95 ppm con el espectrofotómetro y
de 8.14 ppm con la calculadora LabQuest,
con lo que se obtienen márgenes de error
del 0.63% y 1.75% respectivamente. Tras
comparar los dos métodos se llega a
concluir que el más exacto es el del
espectrofotómetro dado que presenta un
error mucho más bajo que la calculadora
LabQuest.
 Se evidenció la ley de Beer-Lambert,
reconociéndose que las soluciones más
concentradas presentaban una mayor
coloración y una alta concentración,
haciéndose más tenues a medida que su
concentración disminuía. Esto nos hace
confirmar que la sustancia (sus
moléculas) están absorbiendo luz, y entre
Cuantificación colorimétrica
de la concentración
más moléculas tenga, más luz será capaz
de absorber. Por esto, se verá de una
coloración más intensa y, por tener mayor
cantidad de moléculas, será más
concentrada, como experimentalmente se
comprobó.
5. Bibliografía:
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Jiménez, G. Introducción a la técnica de análisis
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