RE-10-LAB-055 HEMATOLOGIA II v2

GUIAS DE PRÁCTICA BIOQUIMICA
Código de registro: RE-10-LAB-055 Versión 2.0
UNIVERSIDAD DEL VALLE

LABORATORIO DE HEMATOLOGIA II
Práctica No. 1
HEMOTERAPIA TRANSFUSIONAL
1. CONOCIMIENTO TEORICO
Compatibilidad sanguínea, estudio de anticuerpos irregulares, uso de paquete globular y fracciones

sanguíneas, exsanguíneo transfusión, reacciones postransfusionales y tratamiento.
2. COMPETENCIA (S):
• Realiza los diferentes procedimientos anteriormente realizados (determinación de

grupos sanguíneo en tubo, pruebas de compatibilidad, prueba de Coombs, estudio
de anticuerpos irregulares, investigación del antígeno Du)
• Describe reportes e interpretación de los resultados a través de la resolución de
problemas que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
3.- MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS
EQUIPOS y MATERIALES
Ítem DENOMINACIÓN Cantidad Unidad Observaciones
Estufa 1 Equipo
INSUMOS
Tubos de hemolisis 40 Tubos
Micropipetas 20 ul 3 Piezas
Micro pipeta variable 500 ul 3 Piezas
Solución fisiológica estéril 500 ml
Parafilm 1 Sobre
Gradillas para tubos de hemolisis 5 Piezas
Marcadores de vidrio 3 Piezas
Colas de zorro 3 Piezas
Reactivo de grupo sanguíneo 1 Kit
Suero de coombs
Alcohol 200 ml
Algodón 100 gramos
Jeringas 5 Piezas
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO.
▪ Determinación de grupo sanguíneo en tubo
- Dilución al 5% de los eritrocitos en solución fisiológica.

- Colocar una gota de la dilución en tres tubos, añadir una gota de los antisueros respectivos, centrifugar a
1000 r.p.m. durante un minuto y lectura visual
▪ Pruebas de compatibilidad mayor y menor
- En la prueba mayor se utiliza se emplea suero del receptor y glóbulos rojos del donador a una dilución al
5%
- Colocar 100 ul del suero del receptor y 50 ul de la suspensión de glóbulos rojos del donador, centrifugar a
- En la prueba menor se utiliza se emplea suero del donador y glóbulos rojos del receptor a una dilución al
5%
- Colocar 100 ul del suero del donador y 50 ul de la suspensión de glóbulos rojos del receptor, centrifugar a
▪ Estudio de anticuerpos irregulares

- En los tubos de la incompatibilidad se realiza tres lavados de los eritrocitos y luego se incuba de 45 a 60
min a 37º C, se añaden dos gotas del reactivo de Coombs, centrifugar a 1000 r.p.m. durante un minuto y
lectura visual.
▪ Investigación del antígeno Du
- Lavar los eritrocitos.

- Colocar dos gotas de la suspensión de glóbulos rojos, añadir dos gotas del reactivo anti D, esperar de 1 a
2 min, centrifugar a 1000 r.p.m. durante un minuto y lectura visual.
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA.

200 MINUTOS
6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS.
De acuerdo a cada determinación.
7. CUESTIONARIO.
1. ¿En casos se puede presentar incompatibilidad de grupo?

2. ¿En casos se puede presentar incompatibilidad de factor Rh?
3. ¿Cuándo se pueden presentar anticuerpos irregulares?
4. Especifique cuando se pueden utilizar fracciones sanguíneas
5. ¿Qué es plasmaféresis?

Práctica No. 2
PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.
La cuenta de leucocitos constituye una guía muy útil sobre la gravedad de la enfermedad. En distintos tipos de
padecimiento, se observan patrones específicos de la respuesta leucocitaria. Los leucocitos por si mismos tienen poca
utilidad en él diagnostico a menos que los resultados se comparen con el estado clínico del paciente; esta es la única
manera de obtener una interpretación correcta y útil.
2. COMPETENCIA (S):
• Prepara los reactivos de dilución para recuento de leucocitos

• Conoce la utilidad y características de los materiales de vidrio que se utilizan en el recuento de leucocitos
• Realiza la identificación y recuento diferencial de los leucocitos y su utilidad en diagnóstico y la comparación de
estados clínicos.
• Reporta el resultado e interpreta la preparación de reactivos y recuentos de glóbulos blancos a través de la
resolución de problemas
3.- MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS.
1 Microscopio 25 equipo
2 Micro pipetas de 20 ul y 400 ul 5 Pieza
3 Contador celular 5 Pieza
Pipetas dilutoras (de Thoma) o para Pieza
4 glóbulos blancos 25
5 Cámara de Neubauer 25 Pieza
6 Gradillas 5 Pieza
7 Tubos de hemólisis 25 Pieza
8 Tubos con EDTA 25 Pieza
9 Jeringas de 5 ml 25 Pieza
10 Pisetas 5 Pieza
11 Pipetas de vidrio de 5 ml 5 Piezas
12 Propipetas 5 Piezas
INSUMOS
Liquido de dilución para glóbulos blancos
1 (liquido de Turck) 50 ml
2 Algodón 50 gr
3 Alcohol 50 ml
4 Detergente 50 gr
5 Guantes 25 pares
6 Lavandina 1% 100 ml
7 Frascos para lavandina 5 Piezas
8 Curitas 25 Pieza
9 Ligaduras 10 Piezas
10 Agua destilada 100 ml
4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.

CON PIPETAS DILUTORAS.
1. Cargar la muestra hasta la marca 0.5

2. Absorber el diluyente de Turk hasta marca 11, dilución 1/20
3. Agitar hasta lograr mezcla homogénea
En tubo:
Depositar 0.38 ml de solución de Turk en un tubo de ensayo.
Absorber 20 microlitos de la muestra. Limpiar la superficie externa de la puntilla (tip) y depositar en la solución de tal manera
que quede completamente limpia. Dilución 1/20.
1. Cargar la cámara con la mezcla, cuando se emplea pipeta dilutora desechar las tres primeras gotas, cuando se
emplea dilución en tubo, mezclar muy bien para el cargado.
2. Dejar sedimentar 2 a 3 minutos.
3. Leer en microscopio con objetivo de 10 X se efectúa el recuento en los cuadrados grandes de las cuatro esquinas
(1 mm2 cada uno) se incluyen las células que están dentro de estos y las que están en contacto con la primera
línea.
5.- TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA.
100 MINUTOS
Se leen cuatro cuadrantes primarios de la cámara, se emplea una dilución de 1/20 y una profundidad de la cámara = 0.1
mm, obteniéndose un factor de 50 el que debe multiplicarse por la cantidad total de leucocitos leídos en los cuatro
cuadrantes.
INFORME
Se informa la cantidad de leucocitos calculados en mm 3.
7. CUESTIONARIO
1. Indique en qué casos están elevados los leucocitos.

2. En que casos están disminuidos los leucocitos
3. ¿Cuál es la función del líquido diluyente de leucocitos?
4. Después de un accidente, emociones intensas, frío, quemaduras cuantitativamente ¿cómo están los leucocitos?

Práctica No. 3
TINCION Y RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS
El frotis sanguíneo, una vez seco, se somete a un proceso de fijación y posteriormente a una tinción mediante un colorante
adecuado. La tinción hematológica se basa en el de Romanowsky, constituido por una mezcla de eosina y azul de metileno.
La aplicación del método de Romanowsky a la rutina hematológica precisa dos aspectos básicos: a) la fijación de la sangre
extendida sobre el portaobjetos antes de colocar el anticoagulante y b) el empleo junto a la eosina y azul de metileno, de
derivados por oxidación de este último (metiltionina).
Mediante este tipo de colorantes pueden distinguirse los siguientes aspectos morfológicos de las células:
• Hematíes: color rosado o anaranjado Gránulos polinucleares: o Neutrofilos: rosa a lila o

Eosinofilos: anaranjado a pardo o Basofilos: azul oscuro
• Citoplasma de linfocito: azul celeste claro.
• Citoplasma de monolitos: azul grisáceo
• Núcleo celular y resto de cromatina: color púrpura o violeta oscuro
• Plaquetas: púrpura oscuro o violeta con un halo azul claro a su alrededor
2. COMPETENCIA (S):
• Utiliza y realiza las diferentes tinciones hematológicas según el estudio que se requiera realizar.
• realiza correctamente una formula leucocitaria normal y detecta posibles anomalías relacionadas con el campo de
trabajo del profesional.
3.- MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS.
1 Microscopio con objetivo de inmersión 25 equipo
3 Gradillas 5 Pieza
7 Portaobjetos 50 Pieza
8 Varillas de vidrio 5 Pieza
9 Pisetas 5 Pieza
INSUMOS
Algodón 50 gr
Alcohol 50 ml
Detergente 50 gr
Guantes 25 pares
Lavandina 1% 100 ml
Frascos para lavandina 5 Piezas
Curitas 25 Pieza
Ligaduras 10 Piezas
Colorantes de Giemsa, Wright,
Leishman, Wright – Giemsa, panóptico Elegir uno de los
colorantes
Agua destilada 100 ml
Aceite de inmersión 5 ml
Parafilm 10 cm
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO
4.1. TINCION DE GIEMSA

• Frotis sanguíneo
• Cubrir con metanol 5´, dejar secar
• Cubrir con Giemsa diluido (1+ 19) 10.
• Lavar el frotis con abundante agua destilada y dejarlo secar al aire libre
• Observar al microscopio con objetivo X100.
4.2. METODO COLORANTE WRIGHT

• Frotis sanguíneo
• Cubrir con n gotas de colorante 4.
• Añadir n gotas de agua destilada 7´
• Lavar con agua
• Secar y observar con objetivo de inmersión
4.3. METODO COLORACIÓN DE LEISHMAN

• Frotis seco
• Cubrir con n de gotas de colorante 3 ´
• Añadir n de gotas de agua destilada 5-7 ´
• Lavar con agua, hasta color rosado
• Secar y observar con objetivo de inmersión
4.4. FORMULA LEUCOCITARIA

MANUAL.
TÉCNICA
Se visualiza la extensión, se selecciona una zona en la que los hematíes no estén superpuestos y se empieza el recuento
diferencial, se debe seguir un recorrido en forma de greca o festoneado.
Se van contando los distintos tipos de leucocitos y se clasifican morfológicamente en el registrador celular.

200 MINUTOS
Consiste en determinar el porcentaje de cada tipo de leucocito, por observación directa al microscopio, contando todos
los encontrados hasta llegar a 100 células contadas.
7. CUESTIONARIO.
1. Indique que otros colorantes se emplean en hematología

2. ¿Cuáles son las causas de una coloración intensa y una coloración rápida no a tiempo?
3. Realice un cuadro en que se especifique la diferencia cuantitativa de los diferentes tipos de leucocitos según
edad.
4. Interprete los resultados que obtuvo en su práctica.

Práctica No. 4
LEUCOGRAMA VALORES RELATIVOS Y ABSOLUTOS
El Leucograma es una prueba de detección básica y constituye la técnica de laboratorio que pide con más frecuencia: Los
datos que proporciona información diagnóstica muy valiosa sobre el sistema hematológico y otros aparatos del cuerpo,
pronóstico, respuesta al tratamiento y recuperación: Consta de una serie de pruebas que determinan el número, variedad,
porcentaje, concentración y calidad de las células sanguíneas.
Se considera la importancia en la relación entre el número de leucocitos y la fórmula diferencial relativa para obtener los
valores absolutos y su significación critica.
2. COMPETENCIA (S):
• Realizar los diferentes procedimientos anteriormente realizados (recuento de glóbulos blancos y recuento
diferencial).
• Describe reportes de resultados e interpretación de los resultados, a través de la resolución de problemas.
3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS.
2 Micro pipetas de 20 ul 5 Pieza
6 Cámara de Neubauer 25 Pieza
7 Gradillas 5 Pieza
11 Pisetas 5 Pieza
INSUMOS
2 Algodón 50 gr
3 Alcohol 50 ml
4 Detergente 50 gr
5 Guantes 25 pares
8 Curitas 25 Pieza
10 Agua destilada 100 ml
11 Leishman, Wright – Giemsa, panóptico Elegir uno de los
colorantes
12 Aceite de inmersión 5 ml
13 Parafilm 10 cm
▪ Recuento de leucocitos
▪ Recuento diferencial

200 minutos
7. CUESTIONARIO.
1. Interpreta los resultados obtenidos considerando la edad y sexo.
2. Observe y califique las características morfológicas de las células sanguíneas si hubiera alguna anormalidad.
3. Relacione los valores de leucocitos obtenidos con la fórmula diferencial.

Práctica No. 5
DETERMINACIÓN DE HEMOGRAMA
La biometría hemática es una prueba de detección básica y constituye la técnica de laboratorio que se pide con más
frecuencia: Los datos que proporciona información diagnóstica muy valiosa sobre el sistema hematológico y otros aparatos
del cuerpo, pronóstico, respuesta al tratamiento y recuperación: Consta de una serie de pruebas que determinan el número,
variedad, porcentaje, concentración y calidad de las células san guineas.
2. COMPETENCIA (S):
• El estudiante realiza los diferentes procedimientos anteriormente realizados (recuento de glóbulos blancos,
hematíes, Hematocrito, hemoglobina, VES y recuento diferencial.)
• Realiza reporte de resultados e interpretación de los resultados relacionados con el campo de trabajo del
profesional.
▪
2 Stat fax 1 equipo
7 Cámara de u 25 Pieza
8 Gradillas 5 Pieza
12 Pisetas 5 Pieza
15 Pipetas de VES
16 Gradillas de VES
17 microhematocritos 50 Piezas
▪
INSUMOS
2 Solución de Drabkin 100 ml
3 Algodón 50 gr
4 Alcohol 50 ml
5 Detergente 50 gr
6 Guantes 25 pares
9 Curitas 25 Pieza
11
Leishman, Wright – Giemsa, panóptico Elegir uno de los
12 colorantes
14 Parafilm 10 cm
15 plastilina 5 piezas
▪
▪ Determinación de hemoglobina
▪ Determinación de hematocrito, velocidad de eritrosedimentación
▪ Cálculo de índices eritrocitarios
▪ Recuento de hematíes
▪ Recuento de leucocitos
▪ Recuento diferencial

200 minutos
6. MEDICION CALCULOS Y GRAFICOS.
7. CUESTIONARIO.
1. Interpreta los resultados obtenidos considerando la edad y sexo.

2. Observe y califique las características morfológicas de las células sanguíneas si hubiera alguna anormalidad.

Práctica No. 6
AUTOMATIZACIÓN EN LA DETERMINACIÓN DE HEMOGRAMAS
1. CONOCIMEITNO TEORICO.
La biometría hemática es una prueba de detección básica y constituye la técnica de laboratorio que pide se con más
frecuencia: Los datos que proporciona son información diagnostica muy valiosa sobre el sistema hematológico y otros
aparatos del cuerpo, pronostico, respuesta al tratamiento y recuperación: Consta de una serie de pruebas que determinan
el número, variedad, porcentaje, concentración y calidad de las células sanguíneas.
2.- COMPETENCIA (S):
• Realiza diferentes procedimientos anteriormente realizados (recuento de glóbulos blancos, hematíes, Hematocrito,
hemoglobina, VES y recuento diferencial.)
• Realiza un reporte de resultados e interpretación de los resultados. Que se presentan en el campo de trabajo del
profesional.
3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS

• Jeringas
• Tubos con anticoagulante
• Algodón
• Alcohol
INSUMOS
1 Jeringas 50 pieza
2 Tubos con anticoagulante 100 ml
3 Algodón 50 gr
4 Alcohol 50 ml
5 Detergente 50 gr
6 Guantes 25 pares
9 Curitas 25 Pieza
11
Visita a diferentes laboratorios que cuenten con contadores hematológicos automatizados.
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

200 MINUTOS
Procedimiento demostrativo, análisis de datos, fundamentos e interpretación de resultados.

7.- CUESTIONARIO.
1. Describa los fundamentos empleados en la determinación de la serie roja.

2. Describa los fundamentos empleados en la determinación de la serie blanca.
3. Describa los fundamentos empleados en la determinación de la serie trombocítica.
4. ¿Cuáles son los cálculos empleados?
5. ¿Qué factores de error se pueden presentar en el análisis automatizado?

Práctica No. 7
OBSERVACIÓN DE LÁMINAS (LEUCEMIAS AGUDAS Y LEUCEMIAS CRÓNICAS)
La diferenciación entre las células inmaduras que se observan en las láminas obtenidas de pacientes con leucemia es
fundamental para clasificar a que tipo de anemia (leucemia) corresponde para administración terapéutica y la intervención
médica. En cuento a las leucemias crónicas la presencia de células alteradas orientan hacia el diagnóstico y tratamiento
específico.
Las leucemias mieloides son neoplasias malignas del Sistema Hematopoyético.
Como las neoplasias en general, las células leucémicas:
• Proliferan de manera independiente de sus factores de crecimiento ( producidos por las células estomales de su
microambiente)
• Tampoco responden a factores que las inhiben pues están protegidas de la apoptosis.
• Esta autonomía en la reproducción celular se debe a mutaciones en los genes que codifican para: -factores de
crecimiento
- factores de transcripción
- proteínas fosforiladoras( que meten a la célula en ciclo celular)
- factores inhibidores de la apoptosis
- factores inhibidores del ciclo celular
El término LEUCEMIA significa “ aumento de leucocitos neoplásicos en la sangre”, por lo cual es un término inapropiado.
Las LEUCEMIAS son neoplasias clonales que provienen de una sola célula maligna original la cual tiene una gran
capacidad proliferativa, como la CTH ó las CFC:
Las leucemias pueden ser agudas ó crónicas
LEUCEMIAS CRÓNICAS
• En las Leucemias Crónicas, las células neoplásicas maduran terminalmente

• No producen la muerte en las etapas iniciales
• El número de células maduras es normal ó aumentado
Según el predominio de la línea celular hacia la cual maduran pueden distinguirse:
Leucemia Granulocítica Crónica

Leucemia Mielomonocítica Crónica
Policitemia Vera
Trombocitemia esencial
Mielofibrosis crónica idiopática con metaplasia mieloide.
2. COMPETENCIA (S).
• El estudiante reconoce a qué serie corresponden las células inmaduras observadas.

• Determina las manchas de Gumprecht para el diagnóstico de leucemias crónicas.
• Reconoce las células pilosas a través de la resolución de problemas, que se presentan en el campo de trabajo del
profesional.

Colección de láminas de pacientes con
2 diferentes tipos de leucemias 10 piezas
INSUMOS
Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas alteraciones.
5.- TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.

200 minutos
6. MEDICION CALCULOS Y RESULTADOS

De acuerdo a cada determinación
7. CUESTIONARIO.
1. ¿Cómo puede clasificar una Leucemia en base a las células observadas?

2. ¿Qué parámetros son importantes para diferenciar las leucemias crónicas de las agudas?

LABORATORIO DE HEMATOLOGIA I
Práctica No. 8
DETERMINACIÓN DE CELULAS L.E
Las células L.E (Células de Hargraves) son polimorfonucelares que han fagocitado material nuclear alterado proveniente
de la destrucción del núcleo de otros leucocitos por el llamado factor LE (factor nuclear). Este factor (Ig G anti –ADN) se
fija a la superficie del núcleo y determina alteraciones de la cromatina. El material nuclear alterado (cuerpo hematoxilinico)
recubierto de anticuerpos y complemento es fagocitado rápidamente por los polimorfo nucleares neutro filos.
2. COMPETENCIA (S):
• Realiza del procedimiento para la identificación de células L.E a través de la resolución de problemas
• Identifica de células L.E en placas coloreadas, que han fagocitado material nuclear alterado proveniente de la
destrucción del núcleo de otros leucocitos por el llamado factor LE a través de la resolución de problemas en el
campo de trabajo.
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.
2 Centrifugadora 1 equipo
3 Embudos 5 Pieza
6 Pipetas pasteur 25 Pieza
7 Cámara de u 25 Pieza
8 Gradillas 5 Pieza
10 Pipetas volumétricas de 10 ml 5 Pieza
12 Pisetas 5 Pieza
14 Reloj 5 Piezas
▪
INSUMOS

1 Algodón 50 gr
2 Alcohol 50 ml
3 Detergente 50 gr
6 Parafilm 10 cm
7 plastilina 5 piezas
▪
4. TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.
1. Extraer 10 ml de sangre y dejar coagular en un tubo de ensayo durante 2 horas a 37° C.

2. Separar el suero del coagulo.
3. Depositar el coagulo sobre un tamiz de malla fina
4. Aplastar el coagulo contra el tamiz, recogiendo el producto en otro tubo.
5. Centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos
6. Eliminar el sobrenadante y recoger con una pipeta Pasteur los leucocitos situados en la interfase suero/hematíes.
7. Centrifugar por 5 minutos a 2000 r.p.m.
8. Sacar con una pipeta Pasteur los leucocitos situados en la parte superior de la muestra.
9. Efectuar el frotis con este material.
10. Teñir con colorantes hematológicos y observar mediante el objetivo de inmersión.

200 minutos
6.MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS.
Observación e identificación de las células
7. CUESTIONARIO.
1. Indique aparte de la prueba realizada en la práctica cuales son las otras técnicas para detectar células L.E.
2. ¿En qué consiste la prueba de anticuerpos antinucleares?
3. Indique cuales son las alteraciones que se producen en sangre en pacientes con células L.E.

Práctica No. 9
RECUENTO DE PLAQUETAS
Las plaquetas son las células más pequeñas de la sangre. Estas células son anucleadas, redondas u ovaladas, planas y
con forma de disco. La actividad de las plaquetas es necesaria para la coagulación de la sangre, integridad vascular y
vasoconstricción y su adherencia y agregación es indispensable para que se forme un tapón que ocluye la roturas en los
vasos pequeños: EL desarrollo de la plaqueta se realiza principalmente en la medula ósea; su vida media es de
aproximadamente 7.5 días. Normalmente, 66 % de las plaquetas se localiza en la circulación de la sangre y 33 % se
localiza en el bazo.
2. COMPETENCIA (S)
• Prepara los reactivos de dilución para recuento de plaquetas en la coagulación de la sangre y esto permite la
realización de procesos de análisis de casos clínicos.
• Aprende a aplica correctamente las técnicas de recuento de plaquetas (método directo e indirecto).
• Reporta el resultado e interpreta, situaciones que se presentan en el campo de trabajo del profesional.
RECUENTO DE PLAQUETAS EN CAMARA Y FROTIS SANGUÍNEO
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.
2 Cámara de Neubauer 5 equipo
Pipetas de toma para eritrocitos y Piezas
6 Tubo aspirador con boquilla 25 Pieza
7 Cámara húmeda o placa Petri 25 Pieza
8 Gradillas 5 Pieza
12 Pisetas 5 Pieza
INSUMOS
1 Algodón 50 gr
2 Alcohol 50 ml
3 Detergente 50 gr
6 Gasa 10 cm
7 Papel de filtro 50 cm
Líquido de dilución solución de oxalato
8 50 ml
amónico 1%
MUESTRA
Sangre entera anticoagulada o capilar recién extraída.
1. Cargar la muestra hasta la marca 0.5

2. Absorber el diluyente de oxalato de amonio al 1 % hasta marca 11, dilución 1/20.
3. Agitar hasta lograr mezcla homogénea dejar en reposo durante 15 minutos
4. Mezclar nuevamente y desechar las tres primeras gotas, llenar la cámara de Neubauer y dejar sedimentar durante
15 minutos en cámara húmeda.
5. Observar al microscopio con objetivo de 40 X, se observan las plaquetas como puntos negros rodeados de un
halo claro refringente.
6. Contar en el cuadrante central (mismo lugar que recuento de glóbulos rojos)

200 minutos
MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS.
CALCULOS
El número de plaquetas se expresa por milímetro cúbico de sangre total. El resultado final se calcula teniendo en cuenta
el área contada, la profundidad de la cámara y la dilución realizada.
N°plq/mm3 = N°.plq contadas x 100 x 10
RECUENTO DE PLAQUETAS EN CAMARA
PROCEDIMIENTO (TUBO)
1. Colocar 0,38 ml del diluyente en el tubo de plástico
2. Añadir 0.02 ml de sangre
3. Mezclar por lo menos 5 minutos, mejor en agitador mecánico.
4. Dejar en reposo 15 minutos.
5. Cargar la cámara previo mezclado en el agitador; dejar en reposo en cámara húmeda de 15 a 20 minutos.
6. Observar al microscopio con ocular 10X y objetivo de 40 X
7. Contar las plaquetas que se encuentran en el cuadrante central abarcando 5 cuadrantes.
MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS.
Multiplicar la cantidad de plaquetas obtenidas por 1000, así se obtiene en mm 3.
METODO INDIRECTO
PROCEDIMIENTO.-
1. Realizar el frotis sanguíneo
2. Realizar la coloración de Wright – Giemsa.
3. Realizar el recuento de plaquetas, contando al mismo tiempo él número de hematíes con objetivo de inmersión. 4.
Cálculo del número de plaquetas, se realiza de la siguiente manera
N° de plaquetas en 10 campos x N° de hematíes (paciente)

N° de plaquetas mm3 =
N° de hematíes en 10 campos
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
El recuento de plaquetas a partir del frotis teñidos constituye un método muy simple para obtener una apreciación
aproximada del número de plaquetas, pero no para cocerlo con exactitud.
VALORES DE REFERENCIA
150.000 – 400.000 mm3

6. CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se encuentra el número de plaquetas después de la perdida aguda y significativa de sangre, en policitemia
vera, en convalecencia de infecciones agudas y en la esplenomegalia?
2. ¿Qué puede producir un exceso de plaquetas?
3. Una trombocitemia puede ser debida a diferentes factores indique cuales
4. Indique la utilidad del recuento de plaquetas.
5. Averigüe a partir de que cifras se considera rangos de pánico o alarma en el recuento de plaquetas.

Práctica No. 10
DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE COAGULACION METODO

DE LEE –WHITE
El tiempo de coagulación es el tiempo que requiere la sangre venosa en coagular, en ausencia de factores tisulares. Mide
la vía intrínseca.
Factores de la Coagulación
Factores de la Coagulación
Factor Nombre Factor Duración de la Vida Media

I Fibrinógeno 4 a 5 días
II Protrombina 3 días
III Tromboplastina Tisular
IV Calcio
V Proacelerina, F. Labil 1 día
VII Proconvertina, F. Estable 4 a 6 horas
VIII F. Antihemofílico A 12 a 18 horas
vW Factor von Willebrand 12 a 18 horas
IX F. Antihemofílico B, F. Christmas 18 a 24 horas
X Factor Stuart 1 a 2 horas
XI Precursor de la tromboplastina plasmática 2 a 3 horas
XII Factor Hagemann, F. de contacto 2 horas
XIII F. Estabilizante de la fibrina 5 días
Fisiología de la Coagulación
2. COMPETENCIA (S)
• Prepara el material necesario para la obtención de sangre por punción venosa y capilar.
• Realiza la punción venosa según técnicas establecidas, a través de la resolución de problemas que se presentan
en el campo de trabajo del profesional.
• Aplica las normas de bioseguridad durante la permanencia en el laboratorio.
• Describe la realización del tiempo de coagulación, a través de problemas que permiten la construcción de
conocimientos significativos.
1 Tubos de hemolisis 25 Unidades
2 Baño Maria a 37°C 1 equipo
3 Cronómetro 5 Pieza
4 Gradillas 5 Pieza
6 Agujas estériles y adaptador para agujas 25 Piezas
7 Pisetas 5 Pieza
INSUMOS
1 Algodón 50 gr
2 Alcohol 50 ml
3 Detergente 50 gr
5 Marcador de vidrio 5 piezas
6 Torniquete 5 cm
7 Esparadrapo 5 piezas
1. Recolectar 3 ml de sangre venosa.

2. Cronometrar el tiempo una vez que la sangre entre en la jeringa.
3. Saque la aguja y vierta la sangre por las paredes depositando 1 ml en cada tubo
4. Colocar las muestras en baño termorregulado a 37 °C
5. Después de 4 minutos, incline el primer tubo a 45° cada 30 segundos hasta que se forme el coagulo, anotar el
tiempo transcurrido.
6. Continuar con el segundo tubo y tercer tubo de igual manera.
5.- TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA
200 MINUTOS
6.- MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS

Se obtiene directamente de cada tubo al momento que se forme el coagulo.
INTERPRETACIÓN
El tiempo de coagulación corresponde al promedio de dos o tres lecturas.
VALORES DE REFERENCIA: 6 a 10 minutos

7.- CUESTIONARIO
1. Clásicamente cual es el fenómeno de la coagulación
2. El agente anticoagulante activo, como la trombina. ¿A partir de que elemento se forma?
3. ¿Qué factores infieren en la realización del tiempo de coagulación?

Práctica No. 11
DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE SANGRÍA Y RETRACCIÓN

DE COAGULO
1. CONOCIMIENTO TEÓRICO REQUERIDO.
El tiempo de sangrado es una prueba que sirve para evaluar la integridad de los vasos, plaquetas y la formación del
coágulo. Posee baja sensibilidad y especificidad debido a que se ve afectado por múltiples factores desde una mala técnica
de realización del examen, uso de antiplaquetarios o enfermedad concomitante de la hemostasia primaria (Enfermedad de
von Willebrand, enfermedad de Glanzmann, síndrome de Bernard-Soulier). Debido a estos factores, el tiempo de sangría
no es predictor de hemorragias durante una cirugía, por lo cual ha ido disminuyendo su utilidad entre los exámenes
preoperatorios.
2. COMPETENCIA (S).
• Observa en que tiempo intervienen con su capacidad constrictora los pequeños vasos, así mismo la oportuna
intervención de la calidad y número de plaquetas para formar el tapón hemostático.
TIEMPO DE SANGRIA
3.- MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS
1 Lancetas 25 Unidades
2 Tubos de hemolisis 25 equipo
4 Gradillas 5 Pieza
INSUMOS
1 Algodón 50 gr
2 Alcohol 50 ml
3 Detergente 50 gr
5 Papel filtro 50 cm
MÉTODO DE DUKE
a) Limpiar el detrito epitelial con algodón y alcohol, previo masaje.

b) Realizada la punción con lanceta descartable, inmediatamente poner en marcha el cronómetro
c) limpiar con papel filtro cada 30 segundos hasta que se detenga el sangrad
d) Marcar el tiempo.
5.- TIEMPO DE DURACION DE LA PRÁCTICA.

100 minutos
7. CUESTIONARIO.
1. ¿Cuál seria el tiempo de sangría después de la ingesta de aspirina?

2. Menciona casos en los que se encuentran aumentado el tiempo de sangría.
3. ¿Qué es el tiempo de sangría?
4. ¿Qué se mide con el tiempo de sangría?
5. ¿Cómo es el tiempo de sangría en los casos de Hemofilia A y B, hipoprotrombinemia hereditaria?
RETRACCION DEL COAGULO
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO

En la retracción de coagulo evaluar indirectamente los factores de coagulación y determinar el porcentaje de suero
formado.
2. COMPETENCIAS
• Observa y evalua la cantidad y calidad de plaquetas en una muestra sanguínea
3.- MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
1 Baño Maria 1 Equipo
2 Tubos de vidrio de fondo reedondo 25 piezas
Alambre de 1mm de diámetro, con 10
3 2 metros
vueltas en los últimos 5 cm
4.- TECNICAS O PROCEDIMIENTOS
1. Colocar en un tubo de vidrio, 5ml de la muestra

2. introducir el alambre con espiral hasta el fondo.
3. Dejar en baño Maria a 37 °C durante 3 horas
4. Al cabo de la misma observar el tipo de coagulo formado, anotar
5. Extraer el coagulo y medir el volumen de suero existente, anotar si no se observa un coagulo visible.

100 minutos
▪ Obtener la relación porcentual del suero obtenido respecto a la muestra.

▪ Este valor expresa el porcentaje de retracción que debe informarse aproximadamente entre 48 a 68 % (promedio
55 %)
▪ Informar también el coagulo formado:
1. Normal 3. Fibrinógeno bajo

2. Trombocitopenia 4. Fibrinólisis aumentada
7.- CUESTIONARIO
• ¿Qué utilidad clínica tiene la realización de retracción del coágulo?

• ¿Qué factores interfieren en la realización de la retracción del coágulo?

Práctica No. 12
DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA O QUICK PROCEDIMIENTO MANUAL
Es un proceso de coagulación en condiciones especiales, en la cual, la sangre hecha in coagulables por adición de citrato,
se recalcifica y se le añade un exceso de trombo platina tisular, por lo que la coagulación observada posteriormente,
depende de la presencia de los activadores representados en los factores, I. IV, V, VII y X.
La protrombina se sintetiza en el hígado y la vitamina K es indispensable para el proceso: El síndrome hemorrágico del
recién nacido, con frecuencia obedece a carencia del vitamina K lo que impide su síntesis.
Igual ocurre por déficit de absorción en ictericia obstructiva prolongada, diarrea crónica, insuficiencia hepática, cirrosis,
intoxicación por fósforo y en el caso de dicumarol y algunos anticoagulantes por antagonismo químico con la vitamina. Hay
déficit de protrombina y por consiguiente aumento del tiempo, en la parahemofilia por falta del factor V o proacelerina, en
la disminución del factor X y en los casos de factores inhibidores de la coagulación, espontáneos o artificiales.
El tiempo de protrombina se expresa en unidades de tiempo. (segundos) y se da como resultado el valor en segundos del
tiempo de protrombina del paciente en relación con un control conocido normal.
En los tratamientos con anticoagulantes la concentración de protrombina baja a niveles del 30 % que equivale a 35 0 40
segundos, presentándose manifestaciones hemorrágicas, cuando los niveles sobrepasan dicha concentración.
2. COMPETENCIA (S).
• Prepara el material necesario para la obtención de sangre por punción venosa.

• Realiza la punción venosa según técnicas establecidas.
• Aplica las normas de bioseguridad durante la permanencia en el laboratorio.
• Realiza la determinación del tiempo de protrombina
• Utiliza anticoagulante específico y en cantidades establecidas (relación anticoagulante y sangre).
1 Tubos de ensayo 25 equipo
2 Centrifugadora 1 equipo
5 Baño Maria 1 equipo
6 Pipetas pasteur de plástico 25 Pieza
7 Tubos de plástico 25 Pieza
8 Gradillas 5 Pieza
11 Pipetas de 1 ml 5 Pieza
12 Tromboplastina cálcica
13 Citrato de sodio al 3,8 %, 100 ml
INSUMOS
1 Algodón 50 gr
2 Alcohol 50 ml
3 Detergente 50 gr
5 Colas de zorro 5 ml
6 Para film 10 cm
FUNDAMENTO
El plasma citratado en presencia de tromboplastina cálcica se coagula a una velocidad dependiente de las actividades de
la protrombina (factor II), los factores V, VII, X y el fibrinógeno. Mide la vía extrínseca de la coagulación.
MUESTRA
Sangre con citrato de sodio como anticoagulante en proporción de 9:1 (sangre- anticoagulante).
PROCEDIMIENTO
1. Centrifugar la muestra para obtener el plasma 10 minutos a 3.000 r.p.m

2. Separar el plasma con la ayuda de la pipeta plástica de pasteur
3. Incubar los tubos con 200 ul de tromboplastina y plasma durante 2 minutos a 37 °C 4. Añadir vigorosamente 100
ul de plasma al tubo de tromboplastina
5. Empezar a cronometrar simultáneamente a la
adición de plasma.
6. Observar el tiempo de formación del coagulo.
LECTURA
Se obtiene directamente de cada tubo al momento que se forme él coagulo de fibrina.

200 minutos
El resultado final es el tiempo que marca el cronometro una vez que se detuvo al mismo tiempo que se formó el coagulo.
INFORME
Se informa en segundos y décimas, % de actividad e INR
ISI (potencia)
Tiempo de la muestra
INR:
Tiempo del control normal
ISI: índice de sensibilidad Internacional de cada lote.

7.- CUESTIONARIO.
1. Indique las 3 aplicaciones importantes del T.P. menciones algunas limitaciones para realizar el T.P.
2. ¿Cómo afectaría una ingesta de vegetales verdes al tiempo de T.P.?
3. El alcoholismo y la ingesta excesiva de alcohol como afectaría en el T.P.
4. Indique los rangos terapéuticos que logran con el T.P recomendables en la relación normal internación

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GUIAS DE PRÁCTICA BIOQUIMICA

Código de registro: RE-10-LAB-055 Versión 2.0

UNIVERSIDAD DEL VALLE

Compatibilidad sanguínea, estudio de anticuerpos irregulares, uso de paquete globular y fracciones

• Realiza los diferentes procedimientos anteriormente realizados (determinación de

3.- MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS

▪ Determinación de grupo sanguíneo en tubo

- Dilución al 5% de los eritrocitos en solución fisiológica.

▪ Pruebas de compatibilidad mayor y menor

▪ Estudio de anticuerpos irregulares

▪ Investigación del antígeno Du

- Lavar los eritrocitos.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA.

6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS.

De acuerdo a cada determinación.

1. ¿En casos se puede presentar incompatibilidad de grupo?

UNIVERSIDAD DEL VALLE

PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y RECUENTO DE GLÓBULOS BLANCOS

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.

• Prepara los reactivos de dilución para recuento de leucocitos

3.- MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS.

4.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO.

1. Cargar la muestra hasta la marca 0.5

6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS.

1. Indique en qué casos están elevados los leucocitos.

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TINCION Y RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.

• Hematíes: color rosado o anaranjado Gránulos polinucleares: o Neutrofilos: rosa a lila o

3.- MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS.

4.1. TINCION DE GIEMSA

4.2. METODO COLORANTE WRIGHT

4.3. METODO COLORACIÓN DE LEISHMAN

4.4. FORMULA LEUCOCITARIA

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA.

1. Indique que otros colorantes se emplean en hematología

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LEUCOGRAMA VALORES RELATIVOS Y ABSOLUTOS

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.

3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA.

De acuerdo a cada determinación.

UNIVERSIDAD DEL VALLE

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.

3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS.

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA.

De acuerdo a cada determinación.

1. Interpreta los resultados obtenidos considerando la edad y sexo.

UNIVERSIDAD DEL VALLE

AUTOMATIZACIÓN EN LA DETERMINACIÓN DE HEMOGRAMAS

2.- COMPETENCIA (S):

3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS.

Procedimiento demostrativo, análisis de datos, fundamentos e interpretación de resultados.

1. Describa los fundamentos empleados en la determinación de la serie roja.

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OBSERVACIÓN DE LÁMINAS (LEUCEMIAS AGUDAS Y LEUCEMIAS CRÓNICAS)

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO.

Las leucemias mieloides son neoplasias malignas del Sistema Hematopoyético.

Como las neoplasias en general, las células leucémicas:

• En las Leucemias Crónicas, las células neoplásicas maduran terminalmente

Leucemia Granulocítica Crónica