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UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA

ASIGNATURA: BIOQUÍMICA-LABORATORIO- SEMESTRE III


Prof. Carmiña Vargas Z

PRACTIVA 1. TALLER TEORICO PRÁCTICO DE BIOSEGURIDAD

SEMINARIO TALLER BIOSEGURIDAD: SALUD OCUPACIONAL Y SEGURIDAD

Definición de salud ocupacional y seguridad


Antecedentes históricos
Objetivos.
Falla de seguridad en el laboratorio,
Accidentes de trabajo o enfermedades profesionales: Causas
Antecedentes Históricos de la salud ocupacional y seguridad en lugares de trabajo y en
laboratorio,
Qué periodos de la historia de la bioseguridad se distinguen
Marco Legal en Colombia, acuerdos o leyes sobre la seguridad en los trabajos
Agentes de riesgos: Definición, causas, clasificación
Hablar de cada uno de los agentes de riesgos de seguridad en el laboratorio o del trabajo
Químicos: definición, clasificación, vías de absorción, forma de actuación.
Biológicos: definición, clasificación, vías de absorción, forma de actuación
Físicos: definición, clasificación, vías de absorción, forma de actuación
Ergonómicos: definición, clasificación, forma de actuación, consecuencias de mal
elaboración o uso.
Sicosociales: definición, clasificación, vías de absorción, forma de actuación

Normas generales de seguridad en el laboratorio: según la Organización Mundial de la


salud.
PRACTICA 2. ESPECTROFOTOMETRIA
REACTIVOS:
- Solución rojo fenol o azul de metileno o de otra solución coloreada, agua destilada.
MATERIALES (por grupo): 7 tubos de ensayos de aprox. 15ml, pipetas pasteur plásticas,
espectrofotómetro, 1-gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO:
A)- Determinar el espectro de absorción del rojo fenol:
1- Colocar 2 ml. de la solución diluida de rojo fenol o azul de metileno o de otra solución coloreada en la cubeta
y medir la absorbancia en las siguientes longitudes de onda 415, 445, 460, 490, 520, 535, 550, 580, 610, 640
nm, previamente el equipo calibrado con agua destilada. Luego haga un gráfico de las lecturas de las absorbancia
vs. longitud de onda y determine la longitud de onda de mayor absorción.

También se puede realizar directamente en el espectrofotómetro que contiene esa opción

B) Construcción de una curva patrón:


1- Seguir el protocolo abajo utilizando la solución de rojo fenol o de azul de metileno uo otra solución

TUBO SOL. ROJO FENOL 0,01 mg/ml Agua destilada Absorvancia Concentración
(ml) (------ nm)
B - 5,0
1 1,0 4,0
2 2,0 3,0
3 3,0 2,0
4 4,0 1,0
5 5,0 -

2- Leer las absorbencias de cada tubo en la longitud de onda seleccionada, utilizando el agua destilada
como blanco de reacción. Calibrar antes el espectrofotómetro.
3- Hacer el gráfico absorbancia Vs. Concentración de la solución utilizada y analizar los resultados
4- Determinación del factor de la curva

C) Determinación de la concentración de una solución problema o muestra


1- A una solución problema o muestra dada por la profesora determine la absorbancia en la longitud de
onda seleccionada y determine la concentración de la muestra empleando el factor de la curva:

Absorbancia de la muestra X factor de la curva = concentración de la solución problema o muestra.

GUIA DEL SEMINARIO INVESTIGATIVO

-Definición de espectrofotometría, radiación electromagnética, espectro electromagnético, clases de


espectrofotometría, definición, características, usos, funciones de cada una. Espectrofotómetro, definición,
Componentes de un espectrotómetro (fotocolorímetro), definición, funciones y usos de cada componente,
definición de absorbancia y transmitancia, Ley de Lamber Beer, en que se basaba Lamber y Beer.
Determinación de un espectro de absorción, determinación de una curva patrón, determinación de la
concentración de una solución problema.
Procedimiento para realizar una curva patrón, interpretación de la misma,
¿Cómo se determina una concentración de una solución desconocida?
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PRACTICA 3. EXTRACCION DE SANGRE VENOSA Y SEPARACIÓN DE SUERO Y PLASMA

REACTIVOS:
- Alcohol antiséptico; -Solución de EDTA 10%;
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1 tubos de ensayos para colecta de sangre de tapa roja de aprox. 5
ml y uno de tapa color violeta, 2 tubos de ensayos medianos o grandes de aprox. 10 ml, pipetas pasteur
plásticas, algodón, torniquete, centrífuga, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO

1- Extraer aproximadamente 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la
aguja y colocar la mitad de la sangre extraída cuidadosamente en el tubo de colecta de sangre de
tapa roja y la otra mitad en el tubo de tapa color violeta que contiene 50 microlitros (µL) de
EDTA, homogenizar.
2- Homogenizar cuidadosamente el tubo con anticoagulante.
3- Dejar el tubo sin anticoagulante en reposo esperar formarse el coagulo después
4- Centrifugar los tubos por 5 minutos, separar el suero y el plasma respectivamente en tubos de
ensayos por separado, anotar las observaciones

GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO


¿Qué es la sangre?, funciones, constitución, composición química, estructura, funciones de cada
componente
Factores de coagulación, mecanismo de coagulación, vía intríseca y vía extrínseca
Tiempo de coagulación,
Anticoagulantes, definición, clases, funciones, usos, los anticoagulantes más usados para
determinaciones bioquímicas en plasma.
Diferencia entre suero y plasma
Mecanismo de extracción de sangre venosa. Qué otros tipos de extracciones de sangre hay?
Cuidados que se deben tener durante la extracción de sangre.
Procedimiento para obtener el suero y el plasma de una muestra de sangre
Problemas relacionados con la extracción de la sangre en pacientes especializados.
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PRACTICA 4. DETERMINACION DEL HEMATÓCRITO Y HEMOGLOBINA

REACTIVOS:
- Alcohol antiséptico; -solución patrón de hemoglobina; reactivo de trabajo para determinar
hemoglobina ( Brabkin)
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, tubo de ensayo para colecta de sangre con tapa violeta, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete, pedazo de alambre delgado
de aprox. 15 cm. Hemocentrifuga, espectrofotómetro., 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO
1- Extraer 3 ml. sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
cuidadosamente en el tubo colector de sangre de tapa violeta conteniendo EDTA, homogenizar.
2- Llenar homogéneamente 2 capilares, limpiar la superficie externa del capilar con papel
higiénico y sellar los capilares con plastilina blanca.
3- Homogenizar la sangre y alícuotar por duplicado 10 microlitros (µL) de sangre total, colocar
en tubos de ensayos limpio y seco separadamente.

DETERMINACIÓN DEL HEMATÓCRITO


1- Centrifugar los capilares en la hemocentrifuga manteniendo el equilibrio.
2- Medir la longitud del plasma y de los glóbulos rojos
3- Calcular el % del hematócrito.
DETERMINACION DE LA HEMOGLOBINA
1- Añadir a las alícuotas (10µL) de sangre total 2,5 ml de reactivo de trabajo, homogenizar bien y
reposar por 5 minutos.
2- Leer absorbancia en todos los tubos a 540nm, calibrando el equipo con el blanco reactivo
(reactivo de color).
3- Calcular la concentración de hemoglobina en todas las muestras, multiplicando la abosrvancia
de las muestras por 36,8%. Discuta todos los resultados.

GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO


¿Que es la hemoglobina?, estructura, funciones, propiedades fisicoquímicas, mecanismo de acción, clases de
hemoglobina, Importancia clínica de la determinación de hemoglobina, valores normales según la edad y sexo.
Métodos utilizados para determinación de hemoglobina.
Fundamento del método a ser utilizado en el laboratorio
¿Qué es el hematocrito?, importancia clínica de la determinación del hematocrito y de la hemoglobina,
procedimiento de determinación, qué contiene el reactivo de trabajo para la determinación de hemoglobina,
fundamento del procedimiento, valores normales de los valores de hemoglobina en hombres, mujeres y niños.
Valores normales del hematocrito en hombres, mujeres y niños. Enfermedades relacionadas con las alteraciones
tanto altos como bajos de los valores de hemoglobina, así como del hematocrito, hablar de cada alteración o
enfermedad.
Con respecto a la anemia: Definición, clasificación, causa de cada clase, síntomas, diagnóstico y tratamiento,
consecuencias, profundizar en la anemia por deficiencia de hierro (ferropriva).
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PRACTICA 5. DETERMINACION DE ENZIMAS EN SUERO


REACTIVOS:
- Alcohol antiséptico; - reactivo de trabajo presente en el kit para la determinación de la enzima

MATERIALES (por grupo)


2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete, cronómetro,
espectrofotómetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO

1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el
tubo colector de sangre tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Separar cuidadosamente el suero
4- Tener cuidado tener todos los reactivos de trabajo a temperatura ambiente
5- Pipetar en una cubeta 2 ml del reactivo de trabajo y 100 µl de suero, mezclar e insertar la cubeta
en el fotómetro, poner el cronómetro en marcha.
6- Al minuto medir la absorbancia, anotar la absorbancia inicial, continua anotando la absorbancia
a los 2 minutos y a los 3 minutos.
7- Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio
8- Calcular la concentración de la enzima en la muestra.

NOTA: Las reacciones enzimáticas se harán en orden, grupo por grupo. No mezclar los reactivos hasta
cuando llegue el turno del grupo

GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO

Enzimas: definición, estructura, funciones, factores que influyen en su acción, clasificación,


enzimas de importancia clínica, funciones y uso.
¿Cómo se expresa la concentración de una enzima?.
¿Qué es la aspartato aminotransferasa y la alanin-aminotransferrasa?, funciones de cada una.
¿Cómo se determina en suero?. Valores normales en hombres, mujeres y niños. Enfermedades o
alteraciones metabólicas que se encuentran implicadas estas enzimas, como influye la
concentración sérica en estas alteraciones. Hablar de cada alteración o enfermedad.
Profundizar en la Cirrosis hepática: definición, clasificación, causa, diagnostico, síntomas,
tratamiento, consecuencias.
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PRACTICA 6. DETERMINACION DE GLUCOSA EN SUERO

REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - reactivo de trabajo presente en el kit para la determinación de la


glucosa en suero

MATERIALES (por grupo)


2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete, Cronómetro,
espectrofotómetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO

1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en un
tubo pequeño limpio y seco, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Después de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero con coagulo
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero y colocar 20 microlitros de suero.
6- Otro tubo marcar como patrón (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solución patrón presente en el kit
7- A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo, agitar bien los tubos y dejar reposando los
tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
8- Calibrar el espectrofotómetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrón).
9- Determinar la concentración de glucosa en las muestras

GUIA PARA EL SEMINARIO INVESTIGATIVO


¿Qué son los carbohidratos?, clasificación ¿Qué es la glucosa?, estructura, característica
fisicoquímicas, funciones, reacciones metabólicas implicadas
Importancia de la determinación de glucosa en sangre.
Métodos utilizados para la determinación cualitativa y cuantitativa de glucosa en materiales biológicos,
fundamento de cada método
Fundamento del método utilizado en la práctica.
Valores normales de referencia en hombres, mujeres y niños.
¿Qué es la curva de tolerancia a la glucosa?, que se puede diagnosticar con esta prueba, importancia
que tiene.
Implicaciones metabólicas relacionadas con concentraciones altas y baja de la glicemia. Hablar de esas
alteraciones o enfermedades.
Profundizar en la Diabetes Mellitus: Definición, clasificación, causa, diagnostico, síntomas,
tratamiento, consecuencias
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PRACTICA 7. DETERMINACION DE COLESTEROL

REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinación deL glucosa
en suero
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja , 2 tubos de ensayos
medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete, Cronómetro, espectrofotómetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO
1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4. Después de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero
5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cónico
limpio y seco
6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero para colesterol total y colocar 20
microlitros de suero.
8. Otro tubo marcar como patrón (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solución patrón presente en el kit
9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo (para colesterol total), agitar bien los tubos
y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
10. Calibrar el espectrofotómetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrón).
11. Determinar la concentración de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente
reacción: Absorbancia de la muestra x concentración del patrón
Absorbancia del patrón
12. Repetir el mismo procedimiento en otros tubos desde el item 6 para determinar Colesterol HDL

GUIA DE ESTUDIO Y PARA EL INFORME


¿Qué es el colesterol?, característica, funciones, transporte en la sangre, que son las lipoproteínas, qué
es el colesterol HDL?, reacciones metabólicas implicadas del colesterol en el organismo
Importancia de la determinación de la concentración del colesterol total y HDL en sangre.
Métodos utilizados para la determinación cualitativa y cuantitativa del colesterol en materiales
biológicos. Fundamento del método utilizado en la práctica. Valores normales de colesterol total y de
HDL en hombres, mujeres y niños. ¿Que se puede diagnosticar con esta prueba, importancia que tiene.
Implicaciones metabólicas relacionadas con concentraciones altas y baja de colesterol, hablar de esas
alteraciones o enfermedades.
Profundizar en la Aterosclerosis: Definición, clasificación, causas, diagnostico, síntomas,
consecuencias, tratamiento
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PRACTICA 8. DETERMINACION DE TRIGLICÉRIDOS

REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinación deL
glucosa en suero
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete,. Cronómetro,
espectrofotómetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO
1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, dejar coagular.
2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4. Después de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero
5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cónico
limpio y seco
6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero y colocar 20 microlitros de suero.
8. Otro tubo marcar como patrón (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solución patrón presente en el kit
9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo ( para triglicéridos), agitar bien los tubos y
dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
10. Calibrar el espectrofotómetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrón).
11. Determinar la concentración de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente
reacción: Absorbancia de la muestra x concentración del patrón
Absorbancia del patrón

GUIA DE ESTUDIO Y PARA EL INFORME


¿Qué son los lípidos?, clasificación, funciones, clasificación
¿Qué son los triglicéridos?, característica, funciones, estructura, reacciones metabólicas implicadas
Importancia de la determinación de la concentración de triglicéridos en sangre.
Métodos utilizados para la determinación cualitativa y cuantitativa de triglicéridos en materiales
biológicos. Fundamento del método utilizado en la práctica. Valores normales de referencia en
hombres, mujeres y niños. ¿Que se puede diagnosticar con esta prueba, importancia que tiene.
Implicaciones metabólicas relacionadas con concentraciones altas y baja de triglicéridos. Hablar de
esas alteraciones o enfermedades.
Profundizar en las Lipoproteinemias: Definición, clasificación, causas, síntomas, diagnósticos,
tratamiento, consecuencias
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PRACTICA 9. DETERMINACION DE PROTEÍNAS TOTALES EN SUERO

REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - reactivo de Biuret, patrón de proteína.


MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete. Cronómetro,
espectrofotómetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3. Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5. Marcar tubos de ensayo con la muestra y colocar 20 microlitros de suero.
6. En otro tubo rotulado de patrón colocar 20 microlitros de solución patrón de proteínas
7. A los tubos de las muestras y del patrón colocar 2 ml de reactivo de Biuret mezclar
homogéneamente los tubos y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 10
minutos.
8. Calibrar el espectrofotómetro a 540 nm con el blanco reactivo (Biuret) y leer absorbancia en los
tubos (muestras y curva patrón).
9. Determinar el factor de la curva patrón (concentración en cada duplicado expresadas en g o mg
dividido por la media de las absorbancia) y de esta relación de cada duplicado determinar la
media total (factor de la curva)
10. Determinar la concentración en cada muestra multiplicando
Absorbancia de la muestra x factor de la curva; expresando los valores en g/dl muestra

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¿Qué son las proteínas?, propiedades, características, funciones, estructura, constitución, clasificación,
proteínas que se encuentran en el organismos, clasificación de las proteínas plasmáticas, funciones que
ejercen
Métodos que se utilizan para cuantificar las proteínas, fundamento de cada método, cual es el mas
usado, importancia de determinar la concentración de proteínas en el suero o plasma, valores normales
en hombres, mujeres y niños. Que alteraciones metabólicas están relacionados con valores altos o
bajos de las concentraciones de proteínas en suero o plasma.
Profundizar en la Desnutrición: Definición, clasificación, causas, diagnóstico, síntomas, tratamiento,
consecuencias.
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PRACTICA 10. DETERMINACION DE ÚREA EN SUERO

REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - , patrón de Urea, reactivos de trabajo para Urea A y B.

MATERIALES (por grupo)


2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete. Cronómetro,
espectrofotómetro, 1-gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO
1- Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el
tubo cónico limpio y seco, reposar para coagular-
2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4- Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
5- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
6- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
7- Colocar 2.0 ml de reactivo A de trabajo
8- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos.
9- Adicione 2.0 ml de reactivo B de trabajo, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos
10- Leer absorvancia a 600mn frente al blanco reativo
11- Hacer el mismo procedimiento para el patrón (solo el grupo responsable)
12- Hacer los cálculos como indica el inserto de la práctica (técnica de Biosystems)
13- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrón (solo el grupo responsable)

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Definición de la úrea, estructura, propiedades, funciones, síntesis en el organismo, metabolismo


Importancia clínica, valores de referencia en hombres, mujeres y niños,
Alteraciones metabólicas en la síntesis de la urea.
Alteraciones metabólica relacionados con los valores altos o bajos en suero.
Métodos de cuantificación, fundamento del método utilizado en el laboratorio.
Deficiencias de las enzimas del ciclo de la úrea: Ornitina transcarbamoilasa, argininosuccinato sintetasa
y liasa, deficiencia de arginasa.
Definición, causa, síntomas, diagnostico, tratamiento, consecuencias de cada deficiencia de estas
enzimas.
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PRACTICA 11. DETERMINACION DE CREATININA EN SUERO Y ORINA

REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - , patrón de creatinina; reactivo de trabajo para creatinina

MATERIALES (por grupo)


2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete. Cronómetro,
espectrofotómetro, 1-gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO
1- Extraer 2,5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
en el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
6- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo
7- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra.
8- Leer absorvancia a 30 segundos y a 90 segundos
9- Hacer el mismo procedimiento para patrón (solo el grupo responsable)
10- Reste Absorbancia 2- absorvancia 1
11- Hacer los cálculos como indica el inserto de la práctica (técnica de Biosystems)
12- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrón (solo el grupo responsable)

GUIA DE ESTUDIO PARA PREPARACION DEL SEMINARIO Y PARA EL QUIS

Definición de creatinina, estructura, propiedades, funciones, síntesis en el organismo, metabolismo


Importancia clínica, valores de referencia en hombres, mujeres y niños, alteraciones metabólicas en
valores altos o bajos en el laboratorio. Métodos de cuantificación, fundamento del método utilizado en
el laboratorio.
Investigar sobre la función renal: Que es el riñón, estructura macroscópica y microscópica, función,
enfermedades relacionada con la excreción de la creatinina, como se diagnostica, causas, tratamiento,
consecuencias.
Profundizar en la insuficiencia renal.
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ASIGNATURA: BIOQUÍMICA -LABORATORIO- SEMESTRE III

PRACTICA 12. DETERMINACION DE ACIDO URICO EN SUERO

REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - , patrón de ácido úrico; reactivo de trabajo para ácido úrico.
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete. Cronómetro,
espectrofotómetro, 1-gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador

PROCEDIMIENTO
1- Extraer 2,5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
en el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
6- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo
7- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra.
8- Leer absorbancia a 30 segundos y a 90 segundos
9- Reste medias de las absorbancia 2- media de las absorbancia 1
10- Hacer el mismo procedimiento para el patrón (solo el grupo responsable)
11- Hacer los cálculos como indica el inserto de la práctica (técnica de Biosystems)
12- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrón (solo el grupo responsable)

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Definición del ácido úrico, estructura, propiedades, funciones, síntesis en el organismo, metabolismo
Importancia clínica, valores de referencia en hombres, mujeres y niños, alteraciones metabólicas en
valores altos o bajos en el laboratorio. Métodos de cuantificación, fundamento del método utilizado en
el laboratorio.
Profundizar en la Gota: Definición, clasificación, causas, síntomas, diagnostico, tratamiento,
consecuencias.

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