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PROCEDIMIENTO:
A)- Determinar el espectro de absorción del rojo fenol:
1- Colocar 2 ml. de la solución diluida de rojo fenol o azul de metileno o de otra solución coloreada en la cubeta
y medir la absorbancia en las siguientes longitudes de onda 415, 445, 460, 490, 520, 535, 550, 580, 610, 640
nm, previamente el equipo calibrado con agua destilada. Luego haga un gráfico de las lecturas de las absorbancia
vs. longitud de onda y determine la longitud de onda de mayor absorción.
TUBO SOL. ROJO FENOL 0,01 mg/ml Agua destilada Absorvancia Concentración
(ml) (------ nm)
B - 5,0
1 1,0 4,0
2 2,0 3,0
3 3,0 2,0
4 4,0 1,0
5 5,0 -
2- Leer las absorbencias de cada tubo en la longitud de onda seleccionada, utilizando el agua destilada
como blanco de reacción. Calibrar antes el espectrofotómetro.
3- Hacer el gráfico absorbancia Vs. Concentración de la solución utilizada y analizar los resultados
4- Determinación del factor de la curva
REACTIVOS:
- Alcohol antiséptico; -Solución de EDTA 10%;
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1 tubos de ensayos para colecta de sangre de tapa roja de aprox. 5
ml y uno de tapa color violeta, 2 tubos de ensayos medianos o grandes de aprox. 10 ml, pipetas pasteur
plásticas, algodón, torniquete, centrífuga, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1- Extraer aproximadamente 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la
aguja y colocar la mitad de la sangre extraída cuidadosamente en el tubo de colecta de sangre de
tapa roja y la otra mitad en el tubo de tapa color violeta que contiene 50 microlitros (µL) de
EDTA, homogenizar.
2- Homogenizar cuidadosamente el tubo con anticoagulante.
3- Dejar el tubo sin anticoagulante en reposo esperar formarse el coagulo después
4- Centrifugar los tubos por 5 minutos, separar el suero y el plasma respectivamente en tubos de
ensayos por separado, anotar las observaciones
REACTIVOS:
- Alcohol antiséptico; -solución patrón de hemoglobina; reactivo de trabajo para determinar
hemoglobina ( Brabkin)
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, tubo de ensayo para colecta de sangre con tapa violeta, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete, pedazo de alambre delgado
de aprox. 15 cm. Hemocentrifuga, espectrofotómetro., 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 3 ml. sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
cuidadosamente en el tubo colector de sangre de tapa violeta conteniendo EDTA, homogenizar.
2- Llenar homogéneamente 2 capilares, limpiar la superficie externa del capilar con papel
higiénico y sellar los capilares con plastilina blanca.
3- Homogenizar la sangre y alícuotar por duplicado 10 microlitros (µL) de sangre total, colocar
en tubos de ensayos limpio y seco separadamente.
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el
tubo colector de sangre tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Separar cuidadosamente el suero
4- Tener cuidado tener todos los reactivos de trabajo a temperatura ambiente
5- Pipetar en una cubeta 2 ml del reactivo de trabajo y 100 µl de suero, mezclar e insertar la cubeta
en el fotómetro, poner el cronómetro en marcha.
6- Al minuto medir la absorbancia, anotar la absorbancia inicial, continua anotando la absorbancia
a los 2 minutos y a los 3 minutos.
7- Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio
8- Calcular la concentración de la enzima en la muestra.
NOTA: Las reacciones enzimáticas se harán en orden, grupo por grupo. No mezclar los reactivos hasta
cuando llegue el turno del grupo
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en un
tubo pequeño limpio y seco, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Después de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero con coagulo
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero y colocar 20 microlitros de suero.
6- Otro tubo marcar como patrón (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solución patrón presente en el kit
7- A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo, agitar bien los tubos y dejar reposando los
tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
8- Calibrar el espectrofotómetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrón).
9- Determinar la concentración de glucosa en las muestras
REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinación deL glucosa
en suero
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja , 2 tubos de ensayos
medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete, Cronómetro, espectrofotómetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4. Después de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero
5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cónico
limpio y seco
6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero para colesterol total y colocar 20
microlitros de suero.
8. Otro tubo marcar como patrón (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solución patrón presente en el kit
9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo (para colesterol total), agitar bien los tubos
y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
10. Calibrar el espectrofotómetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrón).
11. Determinar la concentración de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente
reacción: Absorbancia de la muestra x concentración del patrón
Absorbancia del patrón
12. Repetir el mismo procedimiento en otros tubos desde el item 6 para determinar Colesterol HDL
REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - reactivoS de trabajo presente en el kit para la determinación deL
glucosa en suero
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete,. Cronómetro,
espectrofotómetro, 1 gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 3 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, dejar coagular.
2. Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4. Después de centrifugado tener cuidado de no agitar para no mezclar el suero
5. Separar el suero con cuidado y con ayuda de la pipeta pasteur, colocarlo en otro tubo cónico
limpio y seco
6. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
7. Marcar dos tubos de ensayo con la muestra de suero y colocar 20 microlitros de suero.
8. Otro tubo marcar como patrón (solo el grupo responsable) y colocar 20 microlitros de la
solución patrón presente en el kit
9. A todos los tubos colocar 2 ml de reactivo de trabajo ( para triglicéridos), agitar bien los tubos y
dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 15 minutos.
10. Calibrar el espectrofotómetro a 500 nm con el blanco reactivo (reactivo de trabajo del kit) y leer
absorvancia en los tubos (muestras y patrón).
11. Determinar la concentración de colesterol total en suero en las muestras, mediante la siguiente
reacción: Absorbancia de la muestra x concentración del patrón
Absorbancia del patrón
PROCEDIMIENTO
1. Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla en
el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2. Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3. Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4. Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5. Marcar tubos de ensayo con la muestra y colocar 20 microlitros de suero.
6. En otro tubo rotulado de patrón colocar 20 microlitros de solución patrón de proteínas
7. A los tubos de las muestras y del patrón colocar 2 ml de reactivo de Biuret mezclar
homogéneamente los tubos y dejar reposando los tubos a temperatura ambiente por 10
minutos.
8. Calibrar el espectrofotómetro a 540 nm con el blanco reactivo (Biuret) y leer absorbancia en los
tubos (muestras y curva patrón).
9. Determinar el factor de la curva patrón (concentración en cada duplicado expresadas en g o mg
dividido por la media de las absorbancia) y de esta relación de cada duplicado determinar la
media total (factor de la curva)
10. Determinar la concentración en cada muestra multiplicando
Absorbancia de la muestra x factor de la curva; expresando los valores en g/dl muestra
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocar en el
tubo cónico limpio y seco, reposar para coagular-
2- Remover el coagulo mediante la varilla de alambre
3- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
4- Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
5- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
6- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
7- Colocar 2.0 ml de reactivo A de trabajo
8- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos.
9- Adicione 2.0 ml de reactivo B de trabajo, homogenizar y dejar reposar por 10 minutos
10- Leer absorvancia a 600mn frente al blanco reativo
11- Hacer el mismo procedimiento para el patrón (solo el grupo responsable)
12- Hacer los cálculos como indica el inserto de la práctica (técnica de Biosystems)
13- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrón (solo el grupo responsable)
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 2,5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
en el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
6- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo
7- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra.
8- Leer absorvancia a 30 segundos y a 90 segundos
9- Hacer el mismo procedimiento para patrón (solo el grupo responsable)
10- Reste Absorbancia 2- absorvancia 1
11- Hacer los cálculos como indica el inserto de la práctica (técnica de Biosystems)
12- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrón (solo el grupo responsable)
REACTIVOS:- Alcohol antiséptico; - , patrón de ácido úrico; reactivo de trabajo para ácido úrico.
MATERIALES (por grupo)
2-Jeringas desechables, torniquete, 1- tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, 2 tubos de
ensayos medianos o grandes, pipetas pasteur plásticas, algodón, torniquete. Cronómetro,
espectrofotómetro, 1-gradilla
Otros materiales: 2 beakers de 250 ml, 1 litro de agua destilada, 1- frasco lavador
PROCEDIMIENTO
1- Extraer 2,5 ml sangre de la vena del brazo por medio de la jeringa, quitar la aguja y colocarla
en el tubo de ensayo colector de sangre con tapa roja, reposar para coagular-
2- Centrifugar los tubos por 5 minutos,
3- Después de centrifugado con cuidado separar el suero en otro tubo limpio y seco.
4- Tener cuidado que todos los reactivos de trabajo estén a temperatura ambiente
5- Marcar dos tubos de ensayo como muestra.
6- Colocar 2.0 ml de reactivo de trabajo
7- Adicione 20 microlitros de suero de la muestra.
8- Leer absorbancia a 30 segundos y a 90 segundos
9- Reste medias de las absorbancia 2- media de las absorbancia 1
10- Hacer el mismo procedimiento para el patrón (solo el grupo responsable)
11- Hacer los cálculos como indica el inserto de la práctica (técnica de Biosystems)
12- Hacer el mismo procedimiento para la muestra patrón (solo el grupo responsable)
Definición del ácido úrico, estructura, propiedades, funciones, síntesis en el organismo, metabolismo
Importancia clínica, valores de referencia en hombres, mujeres y niños, alteraciones metabólicas en
valores altos o bajos en el laboratorio. Métodos de cuantificación, fundamento del método utilizado en
el laboratorio.
Profundizar en la Gota: Definición, clasificación, causas, síntomas, diagnostico, tratamiento,
consecuencias.