MANUAL DE CODIGO: EBD/280322-01

PROCEDIMIENTOS REVISION: 1

LABORATORIO DE ANALISIS CLINICOS

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Y BACTERIOLOGICOS HERLI

ESPERMATOBIOSCOPIA DIRECTA

PROPOSITO: Evaluar la calidad y cantidad de espermatozoides contenidos en una muestra de semen.

METODO: Microscopía, Tinción de Eosina – Nigrosina.
MUESTRA: Semen recién emitido.
ESTABILIDAD: La muestra debe ser procesada inmediatamente después de ser obtenida.
MATERIALES Y REACTIVOS: Vaso recolector, Tubos de ensayo de 12X75 mm, Portaobjetos, Gradilla, Guantes, Eosina –
Nigrosina, Camara de Neubauer, Pipetas automáticas, Tira de pH, aceite de inmersión.
EQUIPO: Microscopio, baño maría o estufa de cultivo, cronómetro.

CONCEPTOS Y PRINCIPIO BASICOS: El objetivo del análisis de semen básico es evaluar los parámetros descriptivos de
eyaculados obtenidos mediante masturbación. Las cualidades que se evalúan son el aspecto visual, olor, licuefacción,
viscosidad, volumen, concentración espermática y número total de espermatozoides, movilidad y vitalidad espermática.
Además, también se realiza el recuento diferencial según la morfología espermática, la estimación de la
aglutinación/agregación, y la evaluación de la presencia de detritus y otros tipos celulares en semen.

TECNICA

1. Solicitar al paciente que obtenga una muestra de semen por masturbación y anotar la hora en que se emite
la muestra.
2. Evaluar el aspecto de la muestra (opacidad, transparencia)
3. Evaluar el color de la muestra.
4. Medir el volumen de la muestra.
5. Determinar el pH con la ayuda de tiras para pH.
6. Registrar el tiempo entre la obtención de la muestra y la licuefacción de la misma.
7. Medir la viscosidad (medir la longitud del filamento).

Ilustración 1.- Parámetros físico químicos del análisis seminal.

8. Montar una preparación en un portaobjetos para observar movimiento y clasificar en porcentaje:

Movilidad tipo A o de grado 3 (+++): Grupo de espermatozoides con movilidad progresiva, rápida y
rectilínea.
Movilidad tipo B o de grado 2 (++): Espermatozoides se mueven de forma progresiva pero lenta.
Movilidad tipo C o de grado 1 (+): La movilidad de los espermatozoides es lenta y sin desplazamiento. No
se observa progresión, sino que se mueven sobre la misma posición (in situ).
Movilidad tipo D o de grado 0: Se trata del grupo de espermatozoides estáticos o inmóviles, tanto vivos
como muertos.

Ilustración 2.- Movilidad espermática.

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9. Determinar el porcentaje de formas normales.

Ilustración 3.- Morfología espermática.

10. Determinar la viabilidad de la muestra a través de la tinción de eosina – nigrosina.

Ilustración 4.- Tinción Eosina-Nigrosina, Izquierda: espermatozoide vivo, Derecha: Espermatozoide muerto.

11. Reportar aglutinación espermática.

Ilustración 5.- Grados de aglutinación espermática.

12. Determinar la concentración de espermatozoides por mililitro contándolos en cámara de Neubauer:

a) Realizar una dilución del semen 1:20 con diluyente para esperma.
b) Montar la dilución en la cámara de Neubauer.
c) Observar al microscopio con objetivo de 40X
d) Contar la cuadrícula de en medio (25 cuadrados)
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Ilustración 6.- Camara de neubauer, cuadricula para recuento de espermatozoides.

Se cuenta en filas hasta llegar a un número total de 200 espermatozoides, suponiendo que la cuenta se alcanzó
en la cuarta fila, terminar de contar la fila. La cuenta se realiza por duplicado y para ser validada la diferencia entre ambas
cuentas debe coincidir con la siguiente tabla:

Ilustración 7.- Diferencias aceptables entre recuentos de espermatozoides.

13. Dividir la suma de ambas cuentas, entre el número de filas contadas.

14. Expresar el conteo en millones/mL o # de espermatozoides x 106 / mL.
15. Calcular con el dato anterior el total de espermatozoides por eyaculado.
Conteo de espermatozoides / mL. X Volumen
16. Realizar la observación de células no espermáticas presentes en la muestra remitida al laboratorio.

NOMENCLATURA DE ALGUNAS VARIABLES DEL SEMEN SEGÚN LA OMS

Normozoospermia: Eyaculado normal según los valores de referencia.
Azoospermia: Ausencia de espermatozoides en el eyaculado.
Oligozoospermia: Concentración de espermatozoides menor al valor de referencia.
Astenozoospermia: Motilidad inferior al valor de referencia.
Necrozoospermia: Disminución de las formas vivas según el valor de referencia.
Aspermia: Ausencia del eyaculado.

VALORES DE REFERENCIA
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Ilustración 8.- Valores de referencia.

RESPONSABLE: Profesional en Laboratorio Clínico o Técnico Laboratorista Clínico.