CAMPUS LA VERAPAZ

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

LICENCIATURA EN MEDICINA

BIOQUMICA 2
MANUAL DE LABORATORIO

NOMBRE:

CARNE:
Manual de Laboratorio de BIOQUMICA 2

Material recopilado, revisado y adaptado por:

Licda. Pilar Negreros, 2017

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 INSTRUCCIONES GENERALES

EVALUACION GENERAL DEL LABORATORIO

Prcticas de Laboratorio 15 puntos (1.5 puntos cada laboratorio)
Pre-laboratorio 0.4 puntos cada uno
Examen corto 0.4 puntos cada uno
Reporte 0.7 puntos cada uno
Examen final 3 puntos
Portafolio 2 puntos _____________________
TOTAL 19 puntos netos zona

PRCTICAS DE LABORATORIO
PRE-LABORATORIO
Cada prctica debe contener la siguiente informacin:
Encabezado
Fecha
Nombre y nmero de la prctica
Propiedades fsicas y qumicas de los reactivos a utilizar y de los productos a obtener
Frmula molecular
Toxicidades y formas de desecho de cada reactivo y de los productos a obtener
Diagrama de flujo de la metodologa
Preguntas prelaboratorio

EXAMEN CORTO
Sern realizados al inicio del laboratorio. Se evaluarn aspectos relacionados con la prctica realizada
la semana anterior y la prctica a realizar ese da. El examen corto se har 5 minutos despus de la
hora de inicio del laboratorio. Las personas que lleguen tarde no podrn realizar el examen corto y
despus de 10 minutos de inicio del laboratorio ya no podrn ingresar.

EVALUACION DE REPORTE DE LABORATORIO

Ttulo 05 puntos
Resumen 10 puntos
Antecedentes 10 puntos
Objetivos 05 puntos
Diagrama de Flujo (de lo realizado) 05 puntos
Resultados 20 puntos
Discusin 25 puntos
Conclusiones 10 puntos
Cuestionario (en caso aplique) 05 puntos
Bibliografa 05 puntos__
TOTAL 100 puntos

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PORTAFOLIO DE LABORATORIO
Deber ser un cartapacio tamao carta.
Vaya imprimiendo cada prctica y agrguela al cartapacio para llevarla al laboratorio.
Elabore el pre-laboratorio a mano en hojas y agrguelo despus de la prctica.
Al inicio de cada laboratorio se revisar que lleve la prctica de laboratorio impresa y el pre-
laboratorio. Esto es un prerrequisito para poder realizar la prctica de cada semana.
Adicionalmente lleve hojas en blanco para poder hacer anotaciones de los resultados y
observaciones de cada laboratorio.
Estos resultados y observaciones sern revisados y firmados al finalizar el laboratorio. En su
reporte debe adjuntar estas hojas firmadas.

CRISTALERIA Y MATERIAL DE LABORATORIO

El estudiante deber revisar la cristalera y el material de laboratorio que se le asigne al entregrsele y
reportar cualquier anomala en sta antes de transcurridos 15 minutos, de lo contrario cualquier pieza
rota o con desperfecto le ser cobrada a l. Al finalizar la prctica el estudiante deber entregar la
cristalera y material para su revisin. Adems, deber dejar limpia tanto la cristalera como el equipo
utilizado y su rea de trabajo.

REGLAS GENERALES DEL LABORATORIO

a) Es obligatorio el uso de la bata de manga larga y lentes en el laboratorio.

b) Para cada prctica de laboratorio debe llevar el cartapacio y el material adicional solicitado.
c) Est terminantemente prohibido COMER en el laboratorio.
d) Est terminantemente prohibido el USO DE EQUIPO ELECTRNICO durante el laboratorio.
e) Durante el laboratorio trabajar en parejas o grupos, de acuerdo a lo establecido por su instructor.
El reporte ser entregado en esta pareja o grupo.
f) Al entrar al laboratorio debe entregar su reporte del laboratorio anterior, NO se aceptarn
reportes en ninguna otra ocasin. Las personas que cometan plagio, ya sea de un compaero, un
libro publicado, o la Internet recibirn un O (cero). Si se repite el plagio, se llevar el caso a la
direccin de la carrera.
g) Debe presentarse PUNTUALMENTE al laboratorio. Despus de transcurridos 5 minutos se har el
examen corto. Al finalizar el examen corto podrn ingresar las personas que llegaron tarde y se
cerrar la puerta. Las personas que lleguen despus de eso ya no podrn entrar y no tienen
derecho a realizar la prctica. Las personas que no realicen la prctica no tienen derecho a
entregar informe de laboratorio.
h) El material y equipo que utiliz debe entregarlo limpio y en buen estado. En caso de que algn
equipo, cristalera o instrumento se dae o rompa, avise inmediatamente al encargado de
laboratorio.
i) Si trabaj con material orgnico, debe desecharlo en donde lo indique su instructor de
laboratorio.

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j) Tome en cuenta lo investigado en cada prctica sobre toxicidades y formas de desecho para
manipular cada material en el laboratorio.

NORMAS PARA LA ELABORACIN, ENTREGA Y CALIFICACION DE REPORTES DE LABORATORIO

El informe de laboratorio es el instrumento por el cual se evaluar objetivamente la comprensin de
la prctica. El informe deber ser entregado UNA SEMANA despus de haber realizado la prctica, NO
SE ACEPTAN ENTREGAS TARDE. Solamente se puede presentar informe si se asisti a la prctica, no se
aceptarn informes de personas que no tengan asistencia en la prctica correspondiente.

Para economizar al mximo papel como una actitud responsable con el medio ambiente, el informe
no debe llevar folder ni cartula, el nombre y carn del estudiante debe aparecer al principio de la
primera pgina, e inmediatamente continuar con el contenido del informe. El informe debe contener
como mximo 10 pginas (numeradas), en letra de su eleccin, tamao 12 a espacio sencillo. Debe
ser impreso en ambas caras de la hoja.

El informe debe ser escrito utilizando adecuadamente el lenguaje, ortografa, redaccin y gramtica.
Las partes que debe incluir son las siguientes:

ANTECEDENTES
Informacin sobre los fundamentos tericos del tema de la prctica. Esta informacin servir de base
para la discusin de resultados. Debe incluir la reaccin general y el mecanismo de reaccin, en el
caso de sntesis. Esta seccin, as como algunas de las respuestas del cuestionario deben referir al
lector a la seccin de bibliografa o escribir las fuentes de informacin de cada prrafo o respuesta en
forma de citas bibliogrficas.

OBJETIVOS
Consisten en frases breves y puntuales en las que se indica los conocimientos especficos que se
pretenden alcanzar en la prctica.

DIAGRAMA DE FLUJO
Son frases breves colocadas en forma de diagrama que tienen por objeto que el lector pueda
visualizar rpidamente el procedimiento a emplearse. Utilice flechas y verbos para indicar la accin,
evite el uso de largas oraciones o prrafos. Debe incluir las modificaciones realizadas en el
procedimiento durante el laboratorio.

RESULTADOS, DATOS Y CLCULOS

Incluya todos aquellos valores que obtiene en la parte experimental. Estos deben colocarse en tablas
numeradas e identificadas. Por clculos se entienden todos aquellos procedimientos matemticos
para obtener los resultados; deben incluir el manejo de cifras. Por resultados se entiende la expresin
mnima a la cual pueden ser reducidos los datos obtenidos de la prctica. En orden de extensin y
segn la naturaleza del experimento realizado, estos pueden ser por ejemplo:
- Una ecuacin
- Grficas
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- Tablas descriptivas (con respectivo ttulo, # de tabla, dimensiones, etc.)
- Estado fsico (olor, color, apariencia) del producto.
- Peso o volumen obtenidos.
- Porcentaje de rendimiento terico.
- Porcentaje de rendimiento experimental.
- Pruebas fsicas realizadas (p.f., p.eb., densidad). Incluya datos tericos para comparar.
- Pruebas qumicas realizadas.
- Observaciones importantes, as como modificaciones hechas durante el procedimiento que
ameriten ser incluidas, pues servirn para la discusin de resultados.

DISCUSION
Consiste en el anlisis e interpretacin de los resultados y de los aspectos metodolgicos de la
prctica. Se basa en antecedentes y sirve a su vez de base para las conclusiones. En esta seccin se
deben comparar los resultados prcticos con los reportados por la literatura (ideales) haciendo las
referencias del caso (importante!). Cualquier divergencia entre stos y los tericos deben ser
discutidos en su mayora en base a reacciones y no solo en base a fuentes de error. Presente
argumentos que puedan ser apoyados por la teora, aun cuando stos permanezcan como
especulaciones, y/o por observaciones realizadas durante la prctica.
La discusin de resultados debe hacerse con respecto al orden en el que se han presentado los
resultados y este orden debe seguirse en la seccin de conclusiones. NO INCLUYA RESULTADOS
NUEVAMENTE, solo explquelos haciendo referencia a ellos.

CONCLUSIONES
Estas tienen por objeto presentar concisamente en palabras y/o ecuaciones la parte final del
razonamiento matemtico o verbal que el experimentador realiza. Las conclusiones deben ser lo ms
concisas posibles y guardar RELACION DIRECTA con los resultados y su discusin. No deben aparecer
conclusiones que no hayan sido previamente razonadas en la seccin anterior.

CUESTIONARIO
Respuestas a las preguntas entregadas con la gua de laboratorio. Hace referencia a preguntas de
post-laboratorio. Deben de ser sustentadas con la fuente de donde obtuvo la misma; ya sea de una
fuente bibliogrfica o de una fuente electrnica.

BIBLIOGRAFIA
Utilizar los lineamientos que proponen las normas APA.

NOTA
Cuide su lenguaje al redactar un reporte, ste debe ser impersonal, es decir, debe escribirlo en
TERCERA PERSONA y VOZ PASIVA.
Trate de ser lo ms concreto posible en sus exposiciones. Evite adornar innecesariamente.

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 PRCTICA No. 1
CASO DE CORRELACIN BIOQUMICA Y PRCTICA MDICA:
HIPOGLUCEMIA SECUNDARIA A LA INTOXICACIN ALCOHLICA
Extrado de: Manual de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica, UNAM.

Se trata de un paciente de 58 aos, alcohlico crnico, cuyos familiares relatan que ha ingerido una gran
cantidad de alcohol en los dos ltimos das con un consumo muy escaso de alimentos. Inici su padecimiento
con nusea, vmito, mareo, sudacin, cefalea, visin borrosa y confusin; present, en una sola ocasin, una
convulsin, por lo que es llevado al servicio de urgencias. A la exploracin se encuentra semiconsciente con
aliento alcohlico e hipotermia. Se procede a un lavado gstrico para remover el alcohol an no absorbido; se
mantienen permeables las vas respiratorias; se instala oxigenoterapia y se le administra solucin glucosada por
va endovenosa.

Los resultados de laboratorio muestran:

Alcohol 300 mg/dl
Glucosa 2.0 mmol/l
Lactato 9.0 mmol/l
pH 7.2

Preguntas que le ayudarn a resolver el caso:

1. Cules son los sntomas de la hipoglucemia?
2. De qu forma el etanol produce acidosis lctica e hipoglucemia?
3. Cmo se encuentra la relacin intracelular de NADH/NAD+?
4. Qu procesos metablicos se favorecen con los niveles altos de NADH?
5. El alcoholismo es la base de muchas deficiencias vitamnicas. Qu implicaciones metablicas tienen estas
deficiencias (complejo B)?

Realice un reporte de solucin del caso de manera individual, incluyendo una seccin de antecedentes con
toda la informacin de base, un anlisis detallado de los datos otorgados, respuestas al cuestionario, discusin
del caso, conclusiones y bibliografa.

REFERENCIAS
Academia Nacional de Medicina. Tratado de medicina interna. 2a. ed. Mxico: Editorial El Manual Moderno;
1994. Captulos: Acidosis lctica e intoxicacin aguda por alcohol etlico.
Devlin TM. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas. 4a. ed. Barcelona: Editorial Revert; 2004.
Harrison. Principios de medicina interna. 15a. ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana Editores; 2001.
Captulos: Acidosis lctica, hipoglucemia, alcohol y alcoholismo, deficiencia y exceso de vitaminas.
Murray KR, Granner DK, Mayes PA, Rodwell VW. Bioqumica de Harper. 16a. ed. Mxico: Editorial El Manual
Moderno; 2004. p. 980-981

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 PRCTICA No. 2
CASO: HIPERCOLESTEROLEMIA Y ATEROSCLEROSIS
Extrado de: Manual de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica, UNAM.

Un hombre de 56 aos acudi al mdico por presentar dolor precordial en reposo que se incrementaba con el
esfuerzo. Se le detect hipercolesterolemia que, al anlisis de los lpidos plasmticos, mostr que la mayora
del colesterol plasmtico elevado se encontraba en la fraccin de lipoprotena de baja densidad (LDL). Se le
realiz una arteriografa coronaria la cual mostr un estrechamiento de las arterias. La evaluacin de la dieta
indic que consuma gran cantidad de alimentos ricos en colesterol, aunque en los ltimos meses haba
seguido una dieta baja en grasas. Fue diagnosticado de aterosclerosis en las arterias coronarias.

El tratamiento consisti en una dieta sin colesterol y en administrar preparados de lovastatina, un inhibidor de
la HMGCoA reductasa. Fue tratado tambin con colestiramina, una resina que capta las sales biliares. La resina
no se absorbe y permanece en la luz intestinal donde se une a las sales y aumenta la cantidad de las mismas
que se excreta con las heces.

Preguntas que le ayudarn a resolver el caso:

1. Cules son algunos alimentos ricos en colesterol?
2. Cul es el destino del colesterol de la dieta?
3. Cul es la funcin de la bilis en la digestin?
4. Qu conexin metablica existe entre el colesterol y las sales biliares?
5. Cmo disminuye la resina de colestiramina la concentracin plasmtica de colesterol?
6. Por qu se le ha llamado al colesterol-LDL: colesterol malo y al colesterol-HDL: colesterol bueno?
7. Cmo puede la hipercolesterolemia producir aterosclerosis, infarto del miocardio, xantomatosis, etctera?
8. Por qu el hecho de disminuir la concentracin plasmtica de colesterol puede ser til para la salud de este
paciente?
9. Qu papel desempea la HMG-CoA reductasa en la biosntesis del colesterol?
10. Cul es la razn del uso de la lovastatina para el tratamiento del paciente?

Anlisis
1. Describir la biosntesis, metabolismo y excrecin del colesterol y de los cidos biliares.
2. Describir la funcin de la bilis y su relacin con el colesterol.
3. Considerar el papel del colesterol en el desarrollo de la aterosclerosis y de la relacin entre
hipercolesterolemia e ingesta diettica de lpidos en esta enfermedad.
4. Comentar los principios del transporte de lpidos en el sistema circulatorio.
5. Describir la composicin, estructura, metabolismo y funcin de los principales tipos de lipoprotenas
plasmticas.
6. Describir los defectos del metabolismo lipdico que tienen relevancia clnica en relacin con la
hipercolesterolemia.

Realice un reporte de solucin del caso de manera individual, incluyendo una seccin de antecedentes con
toda la informacin de base, un anlisis detallado, respuestas al cuestionario, discusin del caso, conclusiones y
bibliografa.

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 PRCTICA No. 3
MEDICIN DE CUERPOS CETNICOS Y OTROS ELEMENTOS, POR TIRA
REACTIVA EN ORINA
Los lpidos y los carbohidratos son las dos fuentes principales de energa que utiliza la clula para la
mayora de reacciones bioqumicas. En estado de reposo el msculo y el hgado utilizan bsicamente lpidos
como fuente de energa, el cerebro y los glbulos rojos utilizan slo carbohidratos. En cambio cuando se hace
ejercicio aerbico el msculo utiliza inicialmente lpidos como fuente de energa y conforme avanza el ejercicio
y las clulas entran en hipoxia relativa consumen nicamente glucosa en anaerobiosis con produccin de
lactato. El producto final de la oxidacin de los cidos grasos es el acetil CoA, esta molcula continua su
oxidacin en el ciclo de Krebs, pero cuando hay exceso de oxidacin de cidos grasos (lipolisis aumentada por
deficiencia de insulina y exceso de glucagn, como sucede en las diabetes mellitus tipo 1 descompensada),
tambin hay exceso de molculas de acetil-CoA que no entran en el ciclo de Krebs, sino que se transforman en
cuerpos cetnicos (cetonemia). En este laboratorio se medirn los cuerpos cetnicos presentes en la orina de
pacientes desconocidos utilizando el mtodo ms sencillo de urianlisis: la tira reactiva.
Se conoce como urianlisis al examen que se hace a la orina, tomando en cuenta ciertas propiedades
fsicas, solutos, clulas, cristales, organismos o partculas. Debido a que el anlisis de orina es fcil de hacer, de
bajo costo y productivo, este se recomienda como parte de exmenes de rutina en todos los pacientes y debe
repetirse segn sea necesario.
El anlisis de orina debe realizarse en tres etapas: haciendo un examen macroscpico, usando tiras
reactivas y realizando observaciones microscpicas, haciendo un anlisis citodiagnstico ms especfico. Es
importante asegurar la integridad de la muestra desde el momento de tomarla hasta el final del anlisis.
Tambin debe asegurarse trazabilidad de la muestra, es decir, que se pueda asegurar que la muestra tomada a
determinado paciente sea, de hecho, de ese paciente sin probabilidad de error.
Los cuerpos cetnicos, son compuestos qumicos producidos por cetognesis en la mitocondria
heptica. Su funcin es suministrar energa al corazn y cerebro en ciertas situaciones excepcionales. En la
diabetes tipo 1, una excesiva cantidad de cuerpos cetnicos pueden ser acumulados en sangre, produciendo
cetoacidosis diabtica.
El lugar primario de formacin de los cuerpos cetnicos es el hgado y, en menos proporcin, tambin
el rin. El proceso tiene lugar en la matriz mitocondrial y ocurre en diferentes pasos: a. La primera reaccin es
la condensacin de dos molculas de acetil CoA para formar acetoacetil CoA, gracias a la accin de la enzima -
cetotiolasa. b. La molcula de Acetoacetil CoA se condensa con otra molcula de acetil CoA para formar -
hidroxi--metilglutaril CoA (HMG CoA), por accin de la enzima HMG-CoA sintasa. c. Finalmente, la HMG-CoA
liasa rompe el HMG CoA en una molcula de acetoacetato y una acetil CoA.
Una parte del acetoacetato se reduce a -hidroxibutirato en la propia mitocondria, lo que consume un
equivalente de ATP (una molcula de NADH); esta reaccin es catalizada por la -hidroxibutirato
deshidrogenasa que se encuentra estrechamente asociada a la membrana mitocondrial interna.
En condiciones normales, una mnima proporcin de acetoacetato sufre una lenta descarboxilacin
espontnea, no enzimtica, a acetona.
Los compuestos qumicos son el acetoacetato (AcAc), acetona y cido - hidroxibutrico (HBA) (tambin
conocido como D(-)-3-hidroxibutirato), son productos catablicos de los cidos grasos libres. El incremento de
la oxidacin de los cidos grasos es una caracterstica del ayuno prolongado, dando lugar a la produccin
heptica de cuerpos cetnicos, aunque en estos caso no es clnicamente significativa, como sucede en el caso
de los diabticos tipo 1 descompensados, donde la sntesis de cuerpos cetnicos es tan grande que produce un
cuadro clnico de cetoacidosis diabtico que puede tener resultados catastrficos. Las determinaciones de
cuerpos cetnicos en orina y sangre se usan frecuentemente en el control de pacientes con diabetes mellitus,
10
tanto para diagnosis como para el control de la cetoacidosis diabtica. Las mediciones de cuerpos cetnicos se
realizan rutinariamente en los mbitos hospitalarios y en laboratorios privados.
Los cuerpos cetnicos normalmente se encuentran presentes en orina y en sangre, pero en
concentraciones muy bajas (por ejemplo, en suero, las cetonas totales estn a menos de 0.5 mmol/L). Las
concentraciones aumentadas de cetonas en pacientes diagnosticados con diabetes mellitus o en pacientes sin
diagnstico previo pero con hiperglucemia, sugiere cetoacidosis diabtica, la cual debe considerarse como
emergencia mdica. Este aumento de concentracin puede deberse a una mayor produccin de cuerpos
cetnicos a partir de triglicridos, o a la menor utilizacin heptica de los cuerpos cetnicos que se producen
normalmente, como resultado de deficiencia absoluta o relativa de insulina
Los cuerpos cetnicos normalmente se encuentran presentes en orina y en sangre, pero en
concentraciones muy bajas (por ejemplo, en suero, las cetonas totales estn a menos de 0.5 mmol/L). Las
concentraciones aumentadas de cetonas en pacientes diagnosticados con diabetes mellitus o en pacientes sin
diagnstico previo pero con hiperglucemia, sugiere cetoacidosis diabtica, la cual debe considerarse como
emergencia mdica. Este aumento de concentracin puede deberse a una mayor produccin de cuerpos
cetnicos a partir de triglicridos, o a la menor utilizacin heptica de los cuerpos cetnicos que se producen
normalmente, como resultado de deficiencia absoluta o relativa de insulina.

PRELABORATORIO
1. Investigue sobre la tcnica correcta para tomar una muestra de orina.
2. Qu significa prueba de tamizaje?
3. Investigue sobre los valores normales de los siguientes parmetros en orina:
Gravedad especfica pH
Nitrilos Protena
Glucosa Cetonas
Urobilingeno Bilirrubina
Leucocitos Eritrocitos (Sangre o hemoglobina)

MATERIALES Y REACTIVOS

Reactivos
Una muestra de orina por mesa (proporcionada por los estudiantes, no vayan al bao antes del laboratorio)
Tiras reactivas para prueba de orina
Acetona

Cristalera
Beaker de 250 ml.
Probeta de 10 ml.

Materiales
Bolsa roja para desechos orgnicos
Guantes de ltex

PROCEDIMIENTO
1. Escuche a la presentacin que dar su instructor sobre el uso de tiras reactivas.
2. Observe las caractersticas fsicas de la muestra de orina obtenida para cada mesa y antelas en su
cuaderno.
3. Prepare un trozo de servilleta en su lugar para recibir la tira reactiva.
11
4. Tome una tira del recipiente de tiras, cuidando de volver a cerrar el recipiente de manera hermtica y
SIN tocar las reas reactivas de la tira con los dedos.
5. Insertar la tira medidora de orina durante treinta segundos, cuidando que cada regin reactiva est
sumergida SIN doblar la tira.
6. Retire la tira y djela escurrir sobre la pared del recipiente de la muestra.
7. Coloque la tira sobre la toalla que prepar y djela en reposo por uno o dos minutos.
8. Compare los resultados con la escala que aparece en el frasco de la tira reactiva

IMPORTANTE: Cualquier cambio de color posterior a los dos minutos NO debe tomarse en cuenta.

9. En la seccin de resultados de su reporte realice un cuadro, colocar los parmetros que se evalan en la
tira de orina, con sus valores normales y experimentales

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 PRCTICA No. 4
Cetosis por Inanicin
Extrado de: Manual de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica, UNAM.

Una mujer de 27 aos llega al servicio de urgencias mdicas despus de haber sufrido un desmayo. Al
interrogarla, relata que lleva 15 das a dieta de agua, t y verduras cocidas para bajar de peso, sin ningn
control mdico. Se detect aliento con olor a manzana, cetonuria, cetonemia, cidos grasos libres elevados,
triacilgliceroles elevados, hipoglucemia y presin arterial baja; su peso al iniciar la dieta era de 78 kg y su
estatura de 1.59 m. Se diagnostica cetoacidosis por inanicin y obesidad exgena. El estudio de su dieta
mostr que gran parte de su ingesta calrica era en forma de carbohidratos (galletas, chocolates, pasteles,
refrescos, dulces, etctera).
El tratamiento consisti en administrar parenteralmente solucin glucosada y continuar con una dieta
normocalrica.

Preguntas que le ayudarn a resolver el caso:

1. En esta mujer de 27 aos: corresponde el peso a su talla? Determinar su ndice de masa corporal,
grado de obesidad y el porcentaje de sobrepeso.
2. Cmo es posible que se formen grandes almacenes de energa en forma de grasas, si la dieta contiene
predominantemente carbohidratos?
3. Cules son las interrelaciones metablicas de los principales tejidos (hgado, tejido adiposo, cerebro,
msculo, etctera) en la obesidad?
4. Cules son las interrelaciones metablicas de los principales tejidos en el estado de ayuno temprano y
en la inanicin?
5. Cul es el papel de los cuerpos cetnicos en el metabolismo?
6. Qu rgimen diettico recomendara a esta persona para bajar de peso?

Conceptos y reas de aprendizaje

1. Describir las principales rutas de biosntesis, catabolismo y almacenamiento de lpidos.
2. Conocer la estructura y funcin de los triacilgliceroles, cidos grasos y cuerpos cetnicos.
3. Establecer las bases bioqumicas de la cetosis y obesidad producidas por anomalas en el metabolismo
de los lpidos.
4. Describir las alteraciones del equilibrio cido-base que se producen en la cetosis.
5. Conocer las interrelaciones metablicas de los principales tejidos corporales en los estados de buena
nutricin, de ayuno temprano, de inanicin, de renutricin, de homeostasis calrica, etctera.

Realice un reporte de solucin del caso de manera individual, incluyendo una seccin de antecedentes con
toda la informacin de base, un anlisis detallado, respuestas al cuestionario, discusin del caso, conclusiones y
bibliografa.

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15
 PRCTICA No. 5
Oclusin intestinal, Acidosis metablica
Extrado de: Manual de Prcticas de Laboratorio de Bioqumica, UNAM.

Se trata de un paciente masculino de 35 aos de edad quien acude al servicio de urgencias de un hospital por
presentar dolor abdominal intenso acompaado de vmitos frecuentes y abundantes de contenido intestinal.
El paciente presenta un cuadro de deshidratacin importante. A la exploracin fsica se obtuvieron los
siguientes datos:
Tensin arterial (TA): 80/50 mmHg
Frecuencia cardiaca (Fc): 120/min
Frecuencia respiratoria (Fr): 32/min
Temperatura (T): 36o C

Los estudios de laboratorio mostraron lo siguiente:

Electrolitos sricos: Na + = 128 mEq/l K + = 2.8 mEq/l Cl = 100 mEq/l
Gasometra arterial: CO2 t = 12
pH = 7.29
pCO 2 = 24 mmHg
pO 2 = 95 mmHg
HCO 3 - = 11.2 mmol/l
EB (exceso de base) = 20
Qumica sangunea: Glucosa = 5.2 mmol/l (95 mg/dl) BUN = 15 mmol/l

El tratamiento consisti, primero, en el restablecimiento del balance de lquidos con solucin salina a 0.9%,
electrlitos (reposicin de K+) y ciruga.

Preguntas de bioqumica que le ayudarn a resolver el caso:

1. Evaluar el estado cido-base del paciente; tomar en cuenta los valores de pH y presin parcial de bixido de
carbono (pCO2), el valor de bicarbonato plasmtico (HCO3), etctera.
2. Es normal el estado cido-base del paciente? Qu tipo de desequilibrio presenta? Cul podra ser la causa
de ese desequilibrio?
3. Qu relacin existe entre el metabolismo de los electrolitos y el agua y entre los trastornos cido-base y los
electrolitos?
4. Qu tipos de alteraciones de lquidos y electrolitos corporales existen?
5. Calcule la osmolaridad srica (tome en cuenta la concentracin de las sustancias que mayormente
contribuyen a establecerla).
6. Cules son los signos de deshidratacin?
7. Qu teraputica recomendara a este paciente para equilibrar sus lquidos y electrolitos?

Conceptos y reas de aprendizaje

1. Propiedades fisicoqumicas del agua.
2. Concepto de pH.
3. Explicar el significado de las variaciones de los valores normales de pH y de la composicin electroltica de la
sangre.
4. Sistemas amortiguadores del plasma, lquido intersticial y clulas. La aplicacin de la ecuacin de Henderson
y Hasselbalch al clculo del pH y de la concentracin de bixido de carbono y bicarbonato.
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5. Equilibrio cido-base y su mantenimiento.
6. Equilibrio hidroelectroltico y su mantenimiento

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 PRCTICA No. 6
TITULACIN DEL CIDO GLUTMICO
Realizado por: Inga. Lisbeth Carranza de Mndez
Revisado y modificado por: Licda. Pilar Negreros

PRE-LABORATORIO
1. Investigue el significado del punto isoelctrico.
2. Haga un listado de alimentos que se cultiven en Guatemala y qu aminocidos contienen, escrbalo en
forma de tabla.

MATERIAL Y EQUIPO
Reactivos
- Agua destilada
- cido clorhdrico 1 M
- Hidrxido de sodio 1 M
- Solucin de Glutamato monosdico 1 M
Cristalera
- 1 Bureta de 50 ml.
- 1 Beaker de 400 ml.
- 2 Pipetas volumtricas de 10 ml.
- 2 Erlenmeyer de 250 ml.
Materiales
- Juego de pinzas de bureta
- 1 potencimetro
- 1 Soporte universal
- Marcador
- Cinta adhesiva

PROCEDIMIENTO

- Coloque 250 ml. de solucin de Glutamato monosdico 1M en un beaker de 400 ml.

- Determine el valor de pH de la solucin preparada
- Tome dos alcuotas de 10ml. cada una, de la solucin y colquelas en 2 Erlenmeyer de 250 ml. separados.
- Al primer Erlenmeyer adicione el volumen de NaOH 1M necesario hasta que la solucin alcance pH 11.
Anote el volumen agregado. Rotlelo como 1.
- Al segundo Erlenmeyer adicione un volumen de agua destilada de pH 7, aproximadamente a igual
volumen de NaOH adicionado en el Erlenmeyer 1. Anote el valor de pH de la solucin.
- Coloque en una bureta una solucin de HCl 1M
- Titule las dos soluciones con el HCl, anotando los cambios de pH con respecto al volumen de HCl agregado.
- Agregue HCl hasta que ya no haya cambio de pH.
- Construya una grfica de titulacin del cido glutmico con HCl con los datos obtenidos. (pH vrs. volumen
de HCl)
- Escriba la reaccin de ionizacin del cido glutmico.

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19
 PRCTICA No. 7
IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS Y PROTENAS
Los aminocidos son molculas qumicas que poseen propiedades especficas de acuerdo a su
estructura. Estructuralmente, los aminocidos por sus grupos R (radicales) pueden ser neutros, cidos o
bsicos. Esta propiedad caracterstica de los compuestos anfteros permite que los aminocidos jueguen
papeles importantes dentro del metabolismo del ser humano. Una de ellas es su polimerizacin para la
formacin de protenas, quienes gracias a las estructuras variantes de los aminocidos, tienen formas
tridimensionales especficas. En el mundo de las protenas, la funcin de cada una de ellas depende
enteramente de esta estructura tridimensional especfica.
Los aminocidos son compuestos orgnicos que tiene la caracterstica de poseer tanto grupos cidos
(grupo carboxilo, -COOH) como grupos bsicos (grupo amonio, -NH3+). En el organismo, los aminocidos
forman parte de las protenas, todos ellos en su forma -aminocido.
Los aminocidos como tales son un requerimiento diettico de gran importancia del ser humano, ya
que se utilizan en la sntesis y mantenimiento de protenas en el organismo. La mayor fuente de aminocidos
en la dieta son las protenas mismas, sin importar su fuente. Sin embargo, hay una serie de aminocidos que no
pueden sintetizarse en el organismo y que por lo tanto es necesario obtener a travs de la dieta. Estos
aminocidos son conocidos como aminocidos esenciales.
El requerimiento diettico del ser humano es a travs de aminocidos esenciales, y su principal fuente
son las protenas, tanto de fuente animal como vegetal. La calidad de una protena se determina por medio del
contenido de aminocidos esenciales que contenga. Para los infantes, los aminocidos esenciales deberan
formar un 43% del total de aminocidos ingeridos, mientras que para los nios de 10 a 12 aos, deberan
formar un 36% y para los adultos, solamente el 10%. Es importante ingerir protenas de alta calidad no
solamente como parte de una dieta sana regular, sino de manera especial durante los perodos fisiolgicos de
alto estrs, tales como fiebre, quemaduras, trauma quirrgico, fracturas y otros estados similares. Por otro
lado, es necesario restringir la fuente proteica en casos de enfermedad aguda del hgado y enfermedades
renales avanzadas.
Los pptidos y las protenas se forman a partir de la polimerizacin de L-- aminocidos a travs de la
formacin de enlaces peptdicos. El enlace peptdico es la unin del grupo carboxilo de un aminocido con el
grupo amino del siguiente aminocido.
En la presente prctica se pretende establecer los principales mtodos cualitativos de identificacin de
aminocidos y protenas. Para lograrlo, se determinar si existe la presencia de aminocidos y/o protenas en
cantidades detectables en una serie de artculos alimenticios y caseros.

PRELABORATORIO
1. Aminocidos:
- Investigue el mecanismo de la reaccin de la nirhidrina
- Qu color espera obtener en una prueba positiva de aminocidos?
2. Protenas
- Investigue el mecanismo de la reaccin de Biuret: qu contiene el reactivo y cmo reacciona con las
protenas?
- Qu color espera obtener en una prueba positiva de protenas?
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3. Diferencie un mtodo cualitativo de un cuantitativo.
4. Describa claramente los cuatro niveles de organizacin de una protena (utilice diagramas para su
explicacin)

MATERIALES Y REACTIVOS
Reactivos
Soluciones de varios artculos o sustancias caseras, (proporcionadas por el estudiante)
Solucin de Nirhidrina, 0.35% (p/v) en etanol
Reactivo de Biuret
Cristalera
Tubos de ensayo
Pipetas o goteros
Materiales
Gradilla para tubos de ensayo

PROCEDIMIENTO
A. Colocar 2 juegos de 12 tubos de ensayo en una gradilla y numerarlos claramente (son 24 tubos, dos para
cada sustancia.
B. Colocar en cada tubo 1 ml de las muestras que se indican (proporcionadas por el estudiante)
1. Agua
2. Clara de huevo diluida
3. Yema de huevo diluida
4. Sustituto de azcar
5. Extracto de papa
6. Maicena
7. Caldo de Espinaca
8. Jugo de carne
9. Carne + pia
10. Bebida carbonatada
11. Jugo de fruta
12. Gelatina en polvo diluida (sin sabor).

C. Al primer juego de tubos, agregar en cada tubo 5 gotas de Nirhidrina.

D. Agitar por unos momentos y dejar reposar por unos minutos.
E. Anotar cualquier cambio de color. Para la intensidad del color puede utilizar una escala de una cruz (+) a
cuatro cruces (++++), siendo desde un cambio de color leve hasta un cambio dramtico
F. Al segundo juego de tubos, agregar en cada tubo 5 gotas del reactivo de Biuret.
G. Agitar por unos momentos y dejar reposar durante unos minutos.
H. Anotar en su cuaderno cualquier cambio de color.

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 PRCTICA No. 8
TIPOS PRINCIPALES DE PROTENAS LCTEAS
Realizado por: Inga. Lisbeth Carranza de Mndez
Revisado y modificado por: Licda. Pilar Negreros

PRE-LABORATORIO
Investigue la composicin de la leche y la forma de separar sus componentes.

MATERIAL Y EQUIPO
Reactivos
- Leche (alumno)
- cido clorhdrico concentrado
- Hidrxido de Sodio 6M
- Sulfato de magnesio en solucin concentrada
- ter
- Acetona
Cristalera
- 2 probetas de 50 ml.
- 2 beaker de 50 ml.
- 2 matraces de 250 ml.
- 1 varilla de agitacin
- 2 embudos de separacin
- 1 vidrio de reloj
Materiales
- 1 esptula
- 1 potencimetro
- 1 balanza
- 1 plancha de calentamiento
- 1 soporte
- 1 termmetro de 0-150 oC

PROCEDIMIENTO

I. Procedimiento A
- Tome una muestra de leche de 50 ml. de leche
- Pese la muestra y colquela en un beaker
- Anote el valor de pH de la muestra
- Acidifique la leche con HCl concentrado gota a gota hasta alcanzar un pH de 4.6
- Anote las observaciones
- Separe el precipitado del filtrado usando un embudo y papel filtro
- Identifique el recipiente en donde se recoge el suero y gurdelo para su uso posterior
- Transfiera el precipitado a un beaker y agregue 10 ml. de ter
- Agite la muestra para mezclar ambas fases

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- Repita el procedimiento con dos alcuotas de ter de 10 ml. cada una
- Al slido residual agrguele 15 ml. de acetona y homogenice la mezcla. Decante sobre el papel filtro.
Deseche el filtrado y repita el procedimiento con 15 ml. ms de acetona.
- Transfiera el precipitado a un vidrio de reloj y deje secar al ambiente
- Pese el slido seco
- Al filtrado reservado mida el pH y agrguele NaOH 6 M gota a gota hasta obtener un pH de 8
- Agregue una solucin saturada de sulfato de magnesio hasta observar el precipitado coagulado.
- Separe el precipitado y pselo cuando est seco.

II. Procedimiento B
- Tome una alcuota de 50 ml. de leche y colquela en un beaker.
- Ebullir durante 30 minutos.
- Acidifique con HCl hasta un valor de pH 4. Observe la formacin de un precipitado.
- Separe las fases por decantacin. Y realice los pasos del 8 al 13 de la parte del procedimiento A.

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 PRCTICA No. 9
EXTRACCIN DE ADN, la molcula de la vida
PRELABORATORIO

a. Haga un esquema de la estructura de las siguientes molculas, sealando y nombrando sus

componentes:
Un nucletido
ADN
ARNm
ARNt

b. Realice el laboratorio virtual sobre extraccin de ADN que se encuentra en el siguiente link:
http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/
Cul es la funcin de cada una de las soluciones que utiliza durante el proceso de la
extraccin?

Antecedentes
El cido nucleico ADN (cido desoxirribonucleico) es el material gentico de todos los organismos vivos; en
organismos eucariotas el ADN est contenido en el ncleo, mientras que en procariotas se encuentra en una
regin del citoplasma llamada nucleoide.

Uno de los grandes descubrimientos del siglo XX fue realizado por James Watson y Francis Crick en 1953; ellos
descifraron que el ADN tiene una estructura de doble hlice constituida por nucletidos de cuatro tipos: A
(adenina), G (guanina), T (timina), C (citosina); adems propusieron que las dos hebras que constituyen la doble
hlice se complementan exactamente, de tal manera que los nicos pares de nucletidos posibles son A-T G-
C.

1. Materiales
Cuchillo
2 cucharitas desechables
taza de uno de los siguientes tejidos: arvejas frescas, espinaca fresca, cebolla fresca, fresas.
Sal
Jabn lquido
Suavizador de carne
Palillo de dientes
2 sobres de gasa
3 hules
6 beaker de 500ml
6 estufa
2 licuadora
6 mortero
6 Beaker de 100 ml
3 tubos de ensayo
Etanol al 95% (fro)
1 bolsa de desechos

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Procedimiento

Parte I: Extraccin de ADN (Esta parte del procedimiento se trabajar por filas)
1. Disuelva una cucharadita rasa de sal en 200 ml de agua tibia (o bien 3 cucharaditas para espinacas y
arvejas). Explique, Para qu utilizar la sal?

2. Coloque la totalidad del tejido elegido en la licuadora (puede utilizar un procesador de alimentos o bien un
mortero) y cbralo con el agua salada preparada en el paso 1 (aproximadamente 150 ml).
3. Lice o procese a alta velocidad por 15 SEGUNDOS nicamente. Si utiliza un mortero, macere hasta que
desintegre el tejido y obtenga una mezcla homognea. La consistencia debe ser de una sopa ligera pero
consistente.
4. Vierta el macerado en un beaker de 100ml, filtrndolo a travs de un trozo de gasa sujetado con una banda
de hule.
5. Agregue 3 cucharaditas llenas de jabn lquido a su filtrado y revuelva suavemente con un palillo de
dientes, tratando de no hacer muchas burbujas. Djelo reposar por 5 a 10 minutos. Explique para qu
utiliza el jabn lquido en este paso.

6. Vierta una porcin de la mezcla en tres tubos de ensayo, llenndolos hasta un tercio del volumen total del
tubo.
7. Con un palillo de dientes agregue una pizca de suavizador de carne y revuelva suavemente. Sea cuidadoso
ya que si revuelve muy fuerte o rpido romper las hebras de ADN. Puede sustituir el suavizador de carne
por jugo de pia o lquido para limpiar lentes de contacto. Explique para qu se utiliza el suavizador de
carne en este paso.

8. Incline el tubo y agregue lentamente por el lado del tubo el mismo volumen de etanol al 95% tratando de
formar una capa sobre la mezcla. El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota por encima de la
mezcla. Deje reposar, luego observe en donde est el alcohol y busque grumos o fibras blanquecinas; stas
son el ADN que sube hacia el alcohol.
Compare su extraccin de ADN con la de sus compaeros que utilizaron otros tejidos y anote las
diferencias observadas.
Indique tres aplicaciones que puede tener una extraccin de ADN.

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 PRCTICA No. 10
SNTESIS DE PROTENAS
El ADN tiene el mensaje para la sntesis de protenas escrito en un lenguaje de cuatro letras (las cuatro bases
nitrogenadas), el cual se transcribe usando el mismo lenguaje, al sintetizar el ARNm a partir de la secuencia de
bases en el ADN, a este proceso de la conoce como Transcripcin. Luego el ARN sale del ncleo y se dirige al
ribosoma para construir la protena correspondiente con la secuencia del ARNm. Al proceso de pasar la
informacin del ARNm a una protena se le denomina Traduccin, porque se pasa de un lenguaje de cuatro
letras a otro lenguaje con 20 letras (los 20 aminocidos).

La equivalencia entre los dos lenguajes se presenta en el cuadro 1. Tres bases continuas (un triplete) se conoce
como codn y se traduce como la correspondencia con un aminocido determinado. El codn que indica el
inicio de la sntesis de una protena se conoce como codn de iniciacin y es AUG, que como pueden ver en el
cuadro 1 corresponde para el aminocido Metionina. Para indicar que ya se termin de sintetizar la protena se
tienen tres codones que se conocen como codones de terminacin y puede ser UAA, UAG y UGA. Se encontr
que algunos aminocidos pueden ser codificados por ms de un codn, o sea que son codones sinnimos.

Cuadro 1. Posibles combinaciones de bases nitrogenadas formando un codn y el aminocido que traducen.

Primera Segunda letra Tercera

letra U C A G letra
Fenilalanina Serina Tirosina Cisteina U
Fenilalanina Serina Tirosina Cisteina C
U
Leucina Serina Stop Stop A
Leucina Serina Stop Triptofano G
Leucina Prolina Histidina Arginina U
Leucina Prolina Histidina Arginina C
C
Leucina Prolina Glutamina Arginina A
Leucina Prolina Glutamina Arginina G
Isoleucina Treonina Asparagina Serina U
Isoleucina Treonina Asparagina Serina C
A
Isoleucina Treonina Lisina Arginina A
Metionina (inicio) Treonina Lisina Arginina G
Valina Alanina Aspartato Glicina U
Valina Alanina Aspartato Glicina C
G
Valina Alanina Glutamato Glicina A
Valina Alanina Glutamato Glicina G

Materiales
Hojas de papel de reuso
Marcadores gruesos de 4 colores (negro, rojo, verde y morado)
Un rollo de maskintape
Tijeras
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Procedimiento
1. Se le asignar una de las cuatro cadenas de ADN del cuadro 2 para que usted construya la molcula. Corte
las hojas de papel que sean necesarias en 16 pedazos cada una y escriba una base nitrogenada en cada
cuadro de papel con color negro para hacer la secuencia de ADN. Pegue las bases en una tira de masking
tape para tener su molcula de ADN completa.
2. Segn la regla de complementariedad de bases de Watson y Crick, escriba las bases nitrogenadas del
ARNm correspondiente a cada base nitrogenada del ADN en cuadros de papel con color rojo, esta ser su
molcula de ARNm. Recuerde que en el ARNm la Timina es sustituida por Uracilo.
3. Busque en su molcula de ARNm el codn de iniciacin y el codn de terminacin para saber cul es su
ARNm que ser utilizado en la sntesis de la protena. Elimine las bases nitrogenadas que no utilizar.
Pegue las bases en una tira de masking tape para tener su molcula de ARNm final.
4. De la misma manera construya las molculas de ARNt que corresponden a los codones en el ARNm.
Recuerde que hay tres bases nitrogenadas en cada molcula de ARNt (por lo que sus cuadros de papel
deben ser ms grandes y cada uno contener las tres bases nitrogenadas del anticodn escritas en color
verde).
5. Busque en el cuadro 1. el aminocido que corresponde a cada codn del ARNm y escrbalo en otro cuadro
grande con color morado.
6. Por ltimo una los aminocidos con un maskin tape para construir su molcula de protena.
7. Anote la secuencia de ADN, la molcula de ARNm correspondiente, las molculas de ARNt
correspondientes y la secuencia de aminocidos en su protena resultante.
8. Debe tomar nota de todas las molculas, correspondientes a todos los genes asignados a los dems
grupos.
9. Haga un reporte de laboratorio segn las reglas para los reportes. En la seccin de resultados presente las
molculas de ADN, ARNm, ARNt Y PROTENAS, para los cuatro tipos de hemoglobina y haga las siguientes
comparaciones.
a. Entre alfa y beta
b. Entre alfa y mioglobina
c. Entre beta y mioglobina

Cuadro 2. Porciones de la secuencia de ADN para codificar las diferentes clases de Hemoglobina en el ser
humano.
PROTEINA SECUENCIA DE ADN
Hemoglobina
GTGGTACCACGACAGAGGACGGCTGTTCTGGATTCAGTT
alfa
Hemoglobina
GTGGTACCACGTAGACTGAGGACTCCTCTTCATCCGGCA
beta
Hemoglobina
GCGGTACCCAGTAAAGTGTCTCCTCCTGTTCACTTGATA
gamma

Mioglobina AGGGTACAGGACGGTGGGTCTTCATTGGTGTATTTACGG

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