Identificacion Preliminar de Los Metabolitos Secundarios de Los - PXr25mA

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
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Trabajo de Investigación I
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“Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de los extractos

FA
acuosos y etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. “noni” y

DE
Cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides totales”

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Autores:
BL
 Chávez Gaona, María Haydée

BI
 Eustaquio Saldarriaga, Carol Lisset
Asesor:
Dr. Q.F. Ruíz Reyes, Segundo Guillermo
Trujillo – Perú
2010
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
DEDICATORIA
A Dios Todopoderoso:
Por enseñarme el camino correcto de la vida, guiándome y fortaleciéndome cada día con su
Santo Espíritu.
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A mis queridos padres:
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Zenner Manuel y Elizabeth María, quienes durante todos estos años confiaron plenamente
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en mí, comprendiendo mis ideales, por su invalorable sacrificio y amor que hacen posible mi
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formación profesional.
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A mis hermanos:
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Ana Lucía y Leonardo que con su cariño y gestos contribuyeron para salir adelante.
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María Haydée
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A nuestros amigos de la Promoción LXX con los que compartimos muchos y gratos
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momentos en nuestros años de estudio. Les deseamos lo mejor chicos…
María y Carol
A Dios, Nuestro Señor:
Por su amor y misericordia infinitos, por haberme permitido culminar mis estudios
satisfactoriamente y por bendecirme siempre.
A mis queridos padres:
Roberto y Juanita por su gran amor y sacrificio durante toda mi vida, por darme todo
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lo que necesito para ser feliz y alcanzar mis metas y sueños, entre ellas la de ser una
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buena profesional. Los quiero mucho papitos…
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A mis hermanitos: BI
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Rocío Elizabeth y Robert Gerardo por ayudarme siempre en lo que pueden, por sus
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bromas y risas, por animarme siempre cuando me siento triste. Gracias hermanos…
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A mis mejores amigos:

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Hela, Roxy, Daysse, Jonathan, Manuel y Sheylla por haber compartido parte de los
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mejores momentos de mi vida, por estar siempre cuando los necesito. Los quiero
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mucho y les deseo lo mejor colegas…

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Carol Lisset
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A nuestros queridos profesores:
Que a lo largo de nuestra carrera nos motivaron a seguir adelante y así lograr
alcanzar el éxito profesional.
María y Carol
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AGRADECIMIENTO
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Un especial agradecimiento a nuestro asesor:
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Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruíz Reyes

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Por su profesionalismo, paciencia y todo el apoyo brindado para la realización de

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este trabajo de investigación

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iii
PRESENTACIÓN
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:
De conformidad con las disposiciones legales y vigentes del reglamento de Grados y
Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de
Trujillo-La Libertad, sometemos a vuestro elevado criterio el presente trabajo de
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investigación intitulado:
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Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de los extractos acuosos y
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etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. “noni” y Cuantificación
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espectrofotométrica de los flavonoides totales
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Sea propicia esta oportunidad para manifestar el más profundo agradecimiento a nuestra
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Alma Mater y toda su plana docente, por su meritoria labor de educadores y por la
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formación profesional que nos han brindado a través de sus enseñanzas.

DE
De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboración de los señores miembros

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del jurado.
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Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva

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calificación del presente informe.

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Trujillo, Marzo del 2010
Chávez Gaona, María Haydée Eustaquio Saldarriaga, Carol Lisset
iv
JURADO DICTAMINADOR
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Prof. Gilmer Zari Gil ……………… PRESIDENTE
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Prof. Segundo Ruíz Reyes ……………… MIEMBRO

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FA
Prof. Francisco Saavedra Suárez ……………… MIEMBRO

DE
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RESUMEN
El presente trabajo de investigación estuvo orientado a la identificación preliminar de
los metabolitos secundarios de los extractos acuosos y etanólicos del fruto y hojas de
Morinda citrifolia L. “noni” y a la cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides
totales. La especie fue recolectada en el Jardín Botánico de Plantas Medicinales “Rosa
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Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
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Nacional de Trujillo. Los metabolitos secundarios encontrados en la identificación
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preliminar fueron: esteroides, quinonas, flavonoides y leucoantocianidinas. En la
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Y
cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides totales expresados como
IA
quercetina, se encontró que el extracto con mayor porcentaje correspondió a la

AC
RM
extracción a reflujo de hoja con 0.191%, seguido de los liofilizados de los extractos
FA
acuoso y etanólico de hoja con 0.114 y 0.115% respectivamente, la extracción Soxhlet

DE
de hoja con 0.007% y el liofilizado del extracto acuoso de fruto con 0.032%. Los
CA
resultados obtenidos de los extractos fueron evaluados mediante el Análisis de Varianza

TE
y Prueba de Duncan.
IO
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Palabras clave: identificación preliminar, extractos, Morinda citrifolia L.,
cuantificación, espectrofotometría.
vi
ABSTRACT
This investigation was aimed at the preliminary identification of secondary metabolites
from aqueous and ethanolic extracts of the fruit and leaves of Morinda citrifolia L.
"noni" and spectrophotometric quantification of total flavonoids. The species was
collected in the Botanical Garden of Medicinal Plants “Rosa Elena de los Ríos
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Martínez” at the Faculty of Pharmacy and Biochemistry, National University of
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Trujillo. The secondary metabolites found in the preliminary identification were:
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steroids, quinones, flavonoids, and leucoanthocyanidins. In the spectrophotometric
BI
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quantification of total flavonoids expressed as quercetin, found that the extract with the
IA
highest percentage corresponded to reflux extraction leaf with 0.191%, followed by the
AC
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lyophilized aqueous and ethanol extracts of leaf with 0.114 and 0.115% respectively,
FA
Soxhlet extraction of leaf with 0.007% and aqueous extract of freeze dried fruit with
DE
0.032%. The results of the extracts were evaluated by Variance Analysis and Duncan
CA
test.
TE
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BL
Keywords: preliminary identification, extracts, Morinda citrifolia L., quantification,

BI
spectrophotometry.
vii
SUMARIO
DEDICATORIA ...............................................................................................................i
AGRADECIMIENTO ................................................................................................... iii
PRESENTACIÓN ..........................................................................................................iv
A
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JURADO DICTAMINADOR......................................................................................... v
UI
Q
RESUMEN ......................................................................................................................vi
O
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Y
ABSTRACT .................................................................................................................. vii
IA
AC
INTRODUCCIÓN ........................................................................................................... 1
RM
FA
MATERIAL Y MÉTODO .............................................................................................. 9

DE
RESULTADOS .............................................................................................................. 19
CA
TE
DISCUSIÓN ................................................................................................................... 26
IO
BL
CONCLUSIONES ......................................................................................................... 34
BI
RECOMENDACIONES ............................................................................................... 35
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................ 36
ANEXOS
I. INTRODUCCIÓN
El reino vegetal posee muchas especies de plantas que contienen sustancias de
valor medicinal que están por descubrir, y gran número de plantas son ensayadas
constantemente respecto a su posible valor farmacológico. En las civilizaciones
primitivas, la población estaba interesada principalmente en las virtudes curativas de las
plantas. Los poderes curativos de ciertas hierbas, raíces y jugos fueron descubiertos
A
indudablemente por accidente.1, 2
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Aún en muchos lugares del mundo la medicina tradicional no ha perdido su
Q
O
arraigo y sigue haciendo contribuciones en la práctica de la medicina actual con
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excelentes resultados. En todos los países y en todos los sistemas de salud, es frecuente
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el uso de las plantas o de sus principios activos en la terapéutica. La identificación del

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valor curativo de las plantas ha provenido generalmente de la información

FA
proporcionada por el uso de la medicina tradicional, que igualmente ha sido la fuente

DE
para la investigación fitoquímica, y en algunos casos, el desarrollo de nuevos fármacos.3

CA
La investigación en el campo de la Fitoterapia y la Medicina Tradicional son

TE
IO
temáticas importantes en el Perú, país de inmensa riqueza en plantas medicinales, tanto

BL
domesticadas como silvestres con potencial farmacológico. Hay muchas otras especies
BI
de plantas domésticas que aún no han salido de la región y que pueden tener un
potencial fitoterapéutico a futuro.4, 5
Un aspecto a mencionar es el problema de la depredación de los productos
naturales de interés fitoterapéutico. En Perú existe una legislación que regula la
exportación de algunas especies de uso medicinal como la uña de gato, la maca, la
sangre de Drago, entre otros. Sin embargo, a pesar que la demanda interna ha crecido
significativamente en los últimos años, no hay una legislación que controla la extracción
indiscriminada de estas especies silvestres para el uso informal.2
En diferentes partes del mundo existen datos sobre el uso de plantas con fines
medicinales. Se conoce que las especies oriundas de la Polinesia son unas de las más
utilizadas. Dentro de este arsenal fitoterapéutico, se destaca la Morinda citrifolia L.,
A
planta que se ha incluido dentro de las 5 especies medicinales más usadas como
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medicina complementaria, junto a Aloe vera, Allium sativum, Panax ginseng y
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Cymbopogon citratus.6, 7
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Morinda citrifolia L., “noni” es una planta perteneciente a la Clase
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Dicotiledóneas, Orden Gentianales, familia de las Rubiáceas y género Morinda. Es un

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árbol pequeño caracterizado por presentar una altura de hasta 8 metros; hojas oblongo
FA
aovadas, grandes y de color verde oscuro con enervaciones gruesas, su superficie es

DE
cerosa que la protege del sol y los vientos salados oceánicos, supera a menudo los 30
CA
cm de largo, con ápice agudo y redondeadas en la base; flores blancas fragantes,

TE
dispuestas en cabezuelas globosas u ovales; corola tubular de aproximadamente 10 mm;

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fruto fétido en sincarpio blanco-cremoso, de forma oval, de 5 a 7 cm de longitud. El

BI
noni es nativo de Asia (franjas costeras de India, Sri Lanka y sudeste del continente),
islas del Océano Pacífico (Polinesia y Hawai) y Australia. Ha sido naturalizado y
cultivado en América tropical. Al no ser una especie muy resistente, se llevan a cabo
cultivos especiales requiriendo para ello suelos arenosos, bien drenados y soleados.7, 8, 9
El “noni” tiene una larga historia de usos medicinales eficaces por los
aborígenes. Los "sanadores" tradicionales polinesios empleaban todas las partes de la
planta: flores, corteza, raíces y especialmente el fruto para tratar problemas de salud que
iban desde aftas hasta reumatismo. Las lombrices intestinales, fiebres e infecciones de la
piel eran algunas de las enfermedades más comunes tratadas con esta panacea
polinésica.10, 11
Las partes más conocidas y consumidas del “noni” son sus hojas y sus frutos.
Empíricamente, las hojas se aplican sobre la piel, después de ablandarlas en una llama,
A
para tratar tumores o infecciones. En la actualidad, las hojas de “noni” son incorporadas
IC
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cada vez más en la industria de productos naturales en sustitución a sus preparaciones
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empíricas. En diversos estudios, se ha demostrado que las hojas poseen propiedades
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antiinflamatorias, astringentes, antisépticas, hipoglucemiantes y anticancerígenas.9
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El fruto maduro de “noni” se encuentra todo el año. Ha sido utilizado durante

AC
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siglos como una fuente de alimento (se consume crudo o cocinado), a pesar de presentar
FA
un sabor y olor desagradables. El uso tradicional del “noni”, es en forma de jugo del
DE
fruto. En los últimos años muchos estudios científicos se encuentran en ejecución con
CA
vistas a demostrar que el jugo del fruto contiene atributos curativos, pero sin limitarse a
TE
compuestos antibacterianos, antiinflamatorios, analgésicos, hipotensivos e inhibidores

IO
del cáncer.12, 13, 14

BL
BI
Según Jorge Alonso, ha reportado que entre los constituyentes de la hoja de
“noni” se encuentran: monoterpenos, triterpeno, benzenoide, β-sitosterol, iridoides y
flavonoides; en la raíz: morindina, alizarina, rubiadina, ácido rubiclórico, antraquinonas
y selenio; en las flores: antraquinonas y flavonoides y en el fruto: pequeñas cantidades
de aceite esencial, iridoide (ácido asperulosídico) y flavonoide (rutina).7
Entre estos componentes tenemos a los compuestos fenólicos, también llamados
polifenoles. Los compuestos fenólicos son un conjunto heterogéneo de metabolitos
esenciales para el crecimiento y reproducción de las plantas y actúan como agentes
protectores frente a patógenos, siendo secretados como mecanismo de defensa a
condiciones de estrés, tales como infecciones, radiaciones UV, entre otros. Esta síntesis
se da a partir de fenilalanina por la vía del shikimato, comparten la característica de
poseer en su estructura varios grupos bencénicos sustituidos por funciones hidroxílicas.
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Juegan un rol vital en las plantas y regulan el metabolismo y síntesis de la lignina, por
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lo que las plantas presentan un gran número de componentes fenólicos (flavanoles,
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flavonoles, chalconas, flavonas, flavanonas, isoflavonas, taninos, estilbenos,
BI
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curcuminoides, ácidos fenólicos, cumarinas, lignanos).15, 16
IA
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Los compuestos fenólicos son un gran grupo de antioxidantes naturales;

RM
consumo de fuentes importantes, particularmente de frutas, vegetales y cereales

FA
presentan efectos benéficos. La asociación entre una dieta rica en frutas y vegetales está
DE
relacionada a una disminución de riesgo de enfermedades cardiovasculares, y ciertas

CA
formas de cáncer, según evidencias epidemiológicas. Estos fitoquímicos constituyen un

TE
IO
grupo heterogéneo de sustancias que evidencian su rol protector sobre la salud humana.
BL
Diferentes estudios han mostrado que los radicales libres presentes en el organismo
BI
humano causan daño oxidativo a diferentes moléculas, tales como lípidos, proteínas y
ácidos nucleicos y tiene que ver en la iniciación en algunas enfermedades degenerativas.
Estos componentes antioxidantes son capaces de neutralizar radicales libres, y pueden
jugar un rol importante en la modulación de detoxificación enzimática, estimulación del
sistema inmune, disminución de la agregación plaquetaria y modulación del
metabolismo hormonal.15, 16
Un estudio realizado en el Centro de Investigación de Bioquímica y Nutrición de
la Universidad San Martín de Porres, concluyó que entre los frutos promisorios
estudiados poseen actividad antioxidante muy elevada el “camu-camu” y el “tumbo
serrano”; elevada la “guinda”, el “noni” y el “yacón”; moderada la “carambola”, el
“aguaymanto” y el “tomate de árbol” y baja el “tumbo costeño”. Recomendándose el
consumo de los frutos con mayor poder antioxidante, es decir que contienen mayor
cantidad de compuestos fenólicos, como el “camu-camu”, el “tumbo serrano”, el “noni”
A
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y el “yacón”, en una alimentación saludable para una mejor calidad de vida.16
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Otro de los metabolitos secundarios más importantes para salud de hombre, son
O
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los flavonoides, que son uno de los grupos más numerosos y ampliamente distribuidos
Y
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de constituyentes naturales. Se conoce como diez clases de flavonoides, todos contienen

AC
quince átomos de carbonos en su núcleo básico y están arreglados bajo un sistema C6-
RM
C3-C6, en el cual dos anillos aromáticos llamados A y B están unidos por una unidad de
FA
tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso de existir es llamado
DE
anillo C. Cada una de las clase de flavonoides, suele encontrarse bajo la forma de
CA
glicósidos con una o tres unidades de azúcar, generalmente en los carbonos 3 y/o 7,
TE
IO
siendo los azúcares más comunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa; es
BL
frecuente que diferentes azúcares se hallen unidos a una misma aglicona y en diferentes
BI
posiciones lo que hace mayor el número de glicósidos conocidos. Los flavonoides se
hallan presentes en todas las partes de las plantas, algunas clases se encuentran más
ampliamente distribuidas que otras, siendo más comunes las flavonas y flavonoles, y
más restringidas en su ocurrencia las isoflavonas, las chalconas y auronas. 17, 18
Los flavonoides se emplean desde hace mucho tiempo, como colorantes de lana,
y actualmente se usan en la conservación de grasas o jugos de frutas debido a las
propiedades antioxidantes de algunas polihidroxilflavonas, por su notable protección
contra los radicales libres. La acción farmacológica es también extensa y variada, se ha
demostrado que los flavonoides modifican la reacción del cuerpo a los elementos
dañinos como alérgenos, virus y cancerinógenos; son bien conocidas sus actividades
protectoras de la pared vascular o capilar (bioflavonoides del género Citrus: rutina y
A
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derivados) dilatadores de las coronarias (proantocianidinas), espasmolítica,
M
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antihepatotóxica, estrógena y diurética. Así mismo la actividad antimicrobiana de
Q
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flavonoides prenilados y otros fenoles y la acción fungitóxica de la isoflavonas. 17, 18
BI
Y
IA
Es bien sabido que los flavonoides juegan un rol protector en el desarrollo e

AC
inhibición de tumores. El mecanismo de protección antitumoral de flavonoides ocurre a

RM
diferentes niveles del proceso carcinogénico. Se han ensayado extractos del jugo del
FA
fruto de Morinda citrifolia L. como también algunos compuestos puros en una

DE
diversidad de modelos experimentales, tales como la línea celular de tumor ascítico

CA
Sarcoma 180 de ratón, transactivación y activación celular de células epidérmicas de

TE
IO
ratón JB6, carcinoma de Lewis en pulmón de ratón y liberación de citocinas como el

BL
factor necrosante tumoral alfa, interleucinas (IL-10, IL-1α, exceptuando IL-2) e

BI
interferón gamma. La fracción de extracción alcohólica, rica en polisacáridos del jugo
del fruto de “noni”, es una de las que ha demostrado buena acción antitumoral, como así
mismo los compuestos aislados ácido asperulosídico (iridiode) y los glicósidos de
ácidos grasos.19
Los flavonoides presentes en el jugo del fruto de Morinda citrifolia L., poseen
gran capacidad para neutralizar radicales libres responsables de la aparición de
determinadas patologías o del agravamiento de las mismas. En un estudio realizado en
ratas a partir del jugo del fruto de Morinda citrifolia L., administrado por vía oral
durante una semana de tratamiento, determinó un efecto preventivo sobre los primeros
estadíos de formación de células tumorales, lo cual se vincula al efecto antioxidante
demostrado en el test de hidroperóxidos lipídicos.7, 20
A
IC
M
En un estudio realizado en Estados Unidos de América, utilizando como muestra
UI
Q
“nonis” recolectados en Tahití, se lograron aislar dos nuevos lignanos, (+) -3,4,3 ', 4'-
O
BI
tetrahidroxi-9, 7'alpha-epoxylignano alfa-7 , 9'-lactona y (+) -3,3 '-bisdemethyltanegool,
Y
IA
así como siete compuestos conocidos, (-)-pinoresinol, (-) -3,3'-bisdemethylpinoresinol,

AC
la quercetina, kaempferol, scopoletin, isoscopoletin, y vainillina.21

RM
FA
Un estudio informa que, en la hoja de “noni” se identificaron: cinco glucósidos

DE
flavonoles y un glucósido iridoide. Además, se determinó que todos estos compuestos

CA
tuvieron actividad secuestradora de radicales libres, efecto antioxidante in vitro, en

TE
concentraciones de 30 µM.21
IO
BL
Los antecedentes expuestos estimulan el interés en realizar el estudio

BI
fitoquímico del fruto y la hoja de Morinda citrifolia L. ya que hace posible la
identificación de algunos de los componentes químicos responsables de los efectos
preventivos-terapéuticos y con ello una base científica para su uso apropiado;
contribuyendo a un mejor conocimiento de nuestra medicina tradicional. Además, estas
investigaciones pueden ser extendidas a estudios farmacológicos y también relacionados
a ver la posibilidad de producción industrial en los casos en que los principios activos
hallados lo justifiquen. Por otra parte, la investigación contribuye a contrastar los datos
obtenidos en nuestro estudio, con los realizados en otras realidades.
Debido al origen natural del “noni” y al interés actual de su uso dietético por sus
diferentes beneficios terapéuticos que brindan sus constituyentes fitoquímicos nos
planteamos a continuación el siguiente problema:
¿Cuáles son los posibles metabolitos secundarios presentes en los extractos acuosos y
A
IC
etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. “noni” y cuál es la concentración de
M
UI
flavonoides totales?
Q
O
OBJETIVOS: BI
Y
IA
General:
AC
RM
 Identificar preliminarmente los metabolitos secundarios presentes en los

FA
extractos acuosos y etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L.

DE
“noni”.
CA
TE
Específico:
IO
BL
 Determinar la concentración de flavonoides totales en los extractos acuosos

BI
y etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. “noni”, producidos en
el Jardín Botánico de Plantas Medicinales “Rosa Elena de los Ríos
Martínez” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo.
II. MATERIAL Y MÉTODO
1. MATERIAL
1.1. Material Vegetal
Se utilizó 2 kilogramos de los frutos maduros y 500 gramos de las hojas de
Morinda citrifolia L. “noni” que se recolectaron en el Jardín Botánico de
A
Plantas Medicinales “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad de
IC
M
Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo. La
UI
Q
identificación taxonómica se realizó en el Herbarium Truxillense de la
O
BI
Universidad Nacional de Trujillo, asignado con el código Nº 47061 (Ver
Y
IA
Anexo 1).
AC
RM
1.2. Material de Laboratorio

FA
DE
a. Material de vidrio
CA
De uso común en el Laboratorio de Farmacognosia.

TE
IO
BL
b. Material químico
BI
- Ácido sulfúrico concentrado MERCK
- Agua bidestilada
- Etanol 96º MERCK
- Éter de petróleo MERCK
- Reactivos usados para la identificación preliminar
10
c. Equipos
- Balanza analítica OHAUS MODEL GA 200 SERIAL NO. 2786
- Bomba al Vacío GENERAL ELECTRIC MODEL NO. 0211—V45M-
G218C SER. NO. 1082
A
IC
- Baño maría PRECISTERM S-140
M
UI
- Cocina eléctrica PRACTIKA
Q
O
- Estufa H. W. KESSEL Thelco MOD17
BI
Y
- Espectrofotómetro GENESYS 10 UV THERMO ELECTRON
IA
AC
CORPORATION SERIE NO. 2G2H118002

RM
- Liofilizador LABCONCO SERIAL NO. 090200203D

FA
- Rotaevaporador HEIDOLPH SER. NO. 28224001

DE
- Soxhlet KIMAX
CA
- Soxhlet FISATOM MOD. 22/6 SERIE 695008

TE
IO
BL
BI
11
2. MÉTODO
2.1. Recolección del Material Vegetal
Los frutos y hojas de Morinda citrifolia L. “noni” fueron recolectados en el mes
de Octubre en el Jardín Botánico de Plantas Medicinales “Rosa Elena de los
Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad
Nacional de Trujillo.
A
IC
M
UI
2.2. Preparación de las drogas 27
Q
O
Las drogas recolectadas de la planta se liberaron de la tierra adherida y se
BI
Y
descartaron aquellos frutos y hojas que no poseían condiciones favorables para
IA
el estudio fitoquímico. Se procedió a la limpieza de las drogas hasta que estén

AC
RM
totalmente libres de sustancias extrañas para su posterior tratamiento.

FA
DE
2.2.1. Preparación del fruto

CA
La cantidad total de fruto recolectado fue dividida en dos partes: para la

TE
obtención del extracto crudo y la maceración.

IO
BL
BI
Obtención del extracto crudo: Los frutos fueron cortados en rodajas
delgadas, se eliminaron las semillas, se procedió a licuar y posteriormente
el licuado se filtró al vacío.
El extracto crudo obtenido se llevó a liofilización para su secado.
12
Maceración: Los frutos fueron trozados y colocados en un frasco ámbar de
boca ancha, para luego ser cubiertos por alcohol etílico de 70º por un
periodo de ocho días.
2.2.2. Preparación de las hojas
El procedimiento fue el siguiente:
A
IC
Secado en estufa: Las hojas se llevaron a estufa a una temperatura de 38ºC
M
UI
hasta peso constante.
Q
O
Trituración: Las hojas se redujeron de tamaño mediante trituración en un
BI
Y
mortero de acero inoxidable.
IA
Tamización: El material que se obtuvo de la trituración, se pasó por los

AC
RM
tamices Nº 2, 1.2, 0.7 y 0.3. La muestra de trabajo fue la correspondiente

FA
al tamiz Nº 0.7.
DE
Almacenamiento: La droga tamizada fue almacenada y protegida en un

CA
frasco ámbar de boca ancha.

TE
IO
BL
2.3. Preparación de los extractos acuosos y etanólicos de las drogas 24,27

BI
De la cantidad total de droga tamizada, la mitad fue destinada para preparar los
siguientes extractos:
 Extracto acuoso: Se preparó por decocción, luego se llevó a liofilización
para obtener el extracto seco.27
13
 Extracto etanólico: Se preparó por extracción continua por Soxhlet, luego
fue llevado a rotaevaporador para eliminar el alcohol y posteriormente, a
liofilización para obtener el extracto seco.27
Para el fruto, el procedimiento fue el siguiente:
 Extracto crudo: Se llevó a liofilización para obtener el extracto seco.
A
IC
 Extracto etanólico: La preparación fue por maceración.27
M
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O
BI
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El proceso de liofilización se realizó en tres etapas:
IA
- Precongelamiento, que preparó los extractos para la sublimación.

AC
RM
- Secado primario, el hielo se sublimó.

FA
- Secado secundario, en el cual la humedad residual ligada al material sólido

DE
fue extraída, dejando los extractos secos, que fueron conservados en bolsas
CA
de polietileno herméticas, para evitar su humectación.

TE
IO
BL
2.4. Identificación preliminar 22,23,24

BI
La identificación preliminar fue realizada para la hoja, extracto etanólico de
fruto, liofilizados de los extractos acuosos de hoja y fruto y el extracto etanólico
de hoja.
Los métodos que se usaron para realizar la identificación preliminar estuvieron
basados en los modelos propuestos por Olga Lock y Migdalia Miranda.
14
Entre ellos tenemos:
 Prueba de la gota: Basado en la separación por solventes de diferente
polaridad y la identificación cualitativa preliminar con reactivos de
coloración y precipitación.22, 23 (Ver Anexo 2)
 Identificación preliminar según Migdalia Miranda: De acuerdo con este
A
IC
método, la muestra fue sometida a la acción extractiva de solventes de
M
UI
polaridad creciente: éter, etanol y agua, modificando el pH del medio con
Q
O
el fin de obtener los metabolitos secundarios de acuerdo a su solubilidad.
BI
Y
Luego de separar las fracciones se realizó la identificación de los
IA
metabolitos secundarios haciendo uso de reactivos de coloración y

AC
RM
precipitación.24 (Ver Anexo 3)

FA
DE
2.5. Extracción y Cuantificación espectrofotométrica de flavonoides totales 25, 26

CA
La extracción y cuantificación de flavonoides fueron realizadas, tanto para la

TE
droga tamizada de hoja, liofilizados de los extractos acuosos de hoja y fruto y

IO
BL
del extracto etanólico de hoja.

BI
2.5.1. Extracción de flavonoides 26
La extracción de los flavonoides totales a partir de la droga tamizada de
hoja fue realizada mediante la extracción continua por Soxhlet. Las
extracciones a partir de los liofilizados fueron realizadas mediante
reflujo.
15
 Extracción Soxhlet: En cada una de las 6 cápsulas de porcelana se
colocaron 15 gramos de muestra, los cuales se humectaron con 30 mL
de etanol al 50%V/V por 24 horas. Las muestras contenidas en los
cartuchos se colocaron en las cámaras de extracción de los equipos.
A
IC
Luego se adicionaron 90 mL de ácido sulfúrico al 10% P/V y 90 mL
M
UI
de etanol al 50%V/V en el balón de 250 mL del Soxhlet. El tiempo de
Q
O
extracción se contó a partir del momento en el cual la mezcla de
BI
Y
solventes en el balón empezó a hervir.
IA
AC
RM
Concluido el tiempo de extracción, cada una de las muestras se enfrió

FA
y se filtró con ayuda de vacío. El residuo se lavó con 135 mL de

DE
etanol al 50%V/V, se evaporó en baño de agua hasta la mitad del

CA
volumen inicial, se enfrió sobre baño de hielo durante 30 minutos y

TE
luego se filtró lavando el precipitado formado con 4 porciones de 20

IO
BL
mL de agua destilada fría (10-15ºC). Se eliminó el filtrado y los

BI
lavados, y los residuos tanto del filtro como del recipiente se
disolvieron con 70 mL de etanol al 96%V/V, calentando previamente
a temperatura de 50ºC; la solución se pasó a una fiola de 100 mL y se
aforó con etanol al 96%V/V. Posteriormente se leyeron las
absorbancias a 258 nm en espectrofotómetro Genesys 10 UV Thermo
Electron Corporation Serie No. 2G2H118002
16
 Extracción a Reflujo: En cada de uno de los 6 balones de 500 mL se
colocaron cantidades de los liofilizados equivalentes a 1.25 gramos de
muestra, luego se adicionaron 50 mL de ácido sulfúrico al 10% P/V y
A
IC
50 mL de etanol al 50%V/V a cada uno de ellos, tratando de
M
UI
homogenizar la muestra y los solventes. Los balones se colocaron
Q
O
durante 2 horas a reflujo.
BI
Y
IA
Cada una de las muestras se enfrió y se filtró con ayuda de vacío. El

AC
RM
residuo se lavó con 75 mL de etanol al 50%V/V, se evaporó en baño

FA
de agua hasta la mitad del volumen inicial, se enfrió sobre baño de

DE
hielo durante 30 minutos y luego se filtró, lavando el precipitado

CA
formado con 4 porciones de 20 mL de agua destilada fría (10-15ºC).

TE
Se eliminó el filtrado y los lavados, y los residuos tanto del filtro

IO
BL
como del recipiente se disolvieron con 70 mL de etanol al 96%V/V,

BI
calentando previamente a temperatura de 50ºC; la solución se pasó a
una fiola de 100 mL y se aforó con etanol al 96%V/V. Posteriormente
se leyeron las absorbancias a 258 nm en espectrofotómetro Genesys
10 UV Thermo Electron Corporation Serie No. 2G2H118002
17
2.5.2. Cuantificación espectrofotométrica de flavonoides 25, 26
Se utilizó el método espectrofotométrico para cuantificar flavonoides
totales expresados como quercetina, descrito por Kostennikova Z.,
adaptado en la cátedra de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y
Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.
A
IC
Como patrón se empleó 0.04 gramos de quercetina, los cuales se
M
UI
disolvieron con etanol al 96%V/V hasta completar un volumen de 50
Q
O
mL; de esta solución se tomó 1 mL, se colocó en una fiola de 100 mL y
BI
Y
se aforó con etanol al 50%V/V. El blanco fue una solución de etanol al
IA
50%V/V.
AC
RM
La expresión matemática empleada para el cálculo fue la siguiente:

FA
DE
AM × Pp × 5
X= × 100
Ap
CA
TE
IO
Donde:
BL
X: contenido de flavonoides totales expresados como quercetina (%)

BI
AM: absorbancia de la solución muestra (nm)
PP: peso de la sustancia patrón (g)
AP: absorbancia de la solución patrón (nm)
18
2.5.3. Evaluación estadística 28
Para los resultados de la cuantificación de flavonoides se utilizó análisis
de varianza considerando un diseño experimental completamente basal y
asumiendo homogeneidad muestral entre los grupos.

2
(𝑍𝛼⁄2 + 𝑍𝛽 ) 𝜎𝛿2
𝑛=
𝛿2
A
IC
𝑛=6
M
UI
95% confianza y 80% potencia de prueba
Q
O
BI
Y
Como en ANOVA se demostró que hubo significancia estadística entre
IA
los grupos, se procedió a realizar la prueba de Duncan.

AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
19
III. RESULTADOS
Los resultados obtenidos en la identificación preliminar de los metabolitos secundarios
de los extractos acuosos y etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. “noni”,
según marcha fitoquímica preliminar propuesta por Olga Lock (Prueba de la Gota) y
A
tamizaje fitoquímico de Migdalia Miranda, se presentan en las Tablas 1, 2 y 3.
IC
M
UI
Q
Los resultados con respecto a la cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides
O
totales se exponen en las Tablas 4, 5 y 6 y Gráfica 1. BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
20
Tabla 1: Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de la especie Morinda citrifolia L. “noni” en las hojas y liofilizados de sus extractos
acuoso y etanólico, según Prueba de la Gota
Liofilizado de Liofilizado de
Metabolitos
A
Extracto Ensayos Hoja extracto extracto
IC
Secundarios
M
acuoso de hoja etanólico de hoja
UI
Liebermann -
Q
Esteroides - + +
O
Etéreo Burchard
BI
Quinonas libres + + +
Y
Bornträger
IA
Liebermann-Burchard Esteroides - + +
AC
Shinoda Flavonoides + + +
RM
Metanólico Gelatina Taninos - - -
FA
Dragendorff Alcaloides - - -
DE
Mayer CA Alcaloides - - -
Dragendorff Alcaloides - - -
TE
Acuoso/Ácido
Mayer Alcaloides - - -
O
LI
Shinoda Flavonoides + + +
B
BI
Rosenheim Leucoantocianidina + - -
Acuoso
Espuma Saponinas - - -
Gelatina Taninos - - -
21
Leyenda: (+) Identificación Positiva

(-) Identificación Negativa
Tabla 2: Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de la especie Morinda citrifolia L. “noni” en liofilizado de extracto acuoso del fruto
y en su extracto etanólico, según Prueba de la Gota
A
IC
Liofilizado de extracto Extracto etanólico de
Extracto Ensayos Metabolitos Secundarios
M
acuoso de fruto fruto
UI
Q
Liebermann-Burchard Esteroides + +
O
Etéreo
BI
Bornträger Quinonas libres + +
Y
IA
Liebermann-Burchard Esteroides + +
AC
Shinoda Flavonoides - -
RM
Metanólico Gelatina Taninos - -
FA
Dragendorff Alcaloides - -
DE
Mayer CA Alcaloides - -
Dragendorff Alcaloides - -
TE
Acuoso/Ácido
Mayer Alcaloides - -
O
LI
Shinoda Flavonoides - -
B
BI
Rosenheim Leucoantocianidina - -
Acuoso
Espuma Saponinas - -
Gelatina Taninos - -
22

Tabla 3: Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de la especie Morinda citrifolia L. “noni” en las hojas, según tamizaje fitoquimico
de Migadlia Miranda
A
IC
M
Extracto Ensayos Metabolitos Secundarios Hoja
UI
Q
Baljet Lactonas y Cumarinas -
O
BI
Dragendorff -
Y
Etéreo Mayer Alcaloides -
IA
Wagner -
AC
Liebermann-Burchard Triterpenos - Esteroides -
RM
Catequinas +
Resinas -
FA
Baljet Lactonas -
DE
Liebermann-Burchard CA Triterpenos – Esteroides -
Espuma Saponinas -
Tricloruro Férrico Fenoles y Taninos -
TE
Etanólico Bornträger Quinonas +

O
LI
Shinoda Flavonoides +
B
Kedde Cardenólidos -
BI
Antocianidina +
Dragendorff -
Mayer Alcaloides -
Wagner -
23
Tabla 3: Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de la especie Morinda citrifolia L. “noni” en las hojas, según tamizaje fitoquimico
de Migadlia Miranda
A
IC
M
UI
Extracto Ensayos Metabolitos Secundarios Hoja
Q
O
Dragendorff +
BI
Mayer Alcaloides +
Y
Wagner +
IA
Tricloruro Férrico Taninos -
AC
Acuoso Shinoda Flavonoides +
RM
Espuma Saponinas -
FA
Mucílagos -
Principios Amargos -
DE
CA
TE

O

B LI
BI
24
Tabla 4: Cuantificación promedio espectrofotométrica de los flavonoides totales de
la especie Morinda citrifolia L. “noni” en hoja
Absorbancia Contenido promedio de

promedio de la flavonoides totales
Muestras solución muestra a expresados como
258nm quercetina (%)
Extracción a 1.4934 0.1909

Reflujo de Hoja
A
IC
M
Extracción
UI
0.0546 0.0070
Continua
Q
Soxhlet de Hoja
O
BI
Y
IA
AC
RM

FA
la especie Morinda citrifolia L. “noni” en liofilizados de los extractos

DE
acuoso y etanólico de hoja

CA
TE

IO

BL

BI
Liofilizado de
0.8886 0.1136
Extracto Acuoso
de Hoja
Liofilizado de
Extracto 0.8970 0.1147
Etanólico de
Hoja
xxv
la especie Morinda citrifolia L. “noni” en liofilizado de extracto acuoso de
fruto

A
Liofilizado de
IC
0.2498 0.0319
Extracto Acuoso
M
de Fruto
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
Gráfica 1: Análisis de Varianza para el promedio de absorbancias obtenidas de los

RM
diferentes extractos
FA
DE
CA
1.6000
ABSORBANCIAS PROMEDIO A 258
1.4934
1.4000
TE
1.2000
IO
1.0000
0.8886 0.8970
BL
0.8000
nm
0.6000
BI
Promedio
0.4000
0.2000 0.2498
0.0000 0.0546
LH LHH HR HS LF
MUESTRAS
LEYENDA
LH: Liofilizado de extracto acuoso de hoja
LHH: Liofilizado de extracto etanólico de hoja
HR: Extracción a Reflujo de hoja
HS: Extracción continua Soxhlet de hoja
LF: Liofilizado de extracto acuoso de fruto
xxvi
IV. DISCUSIÓN
Teniendo en cuenta los objetivos fijados para la realización del presente trabajo
de investigación, se procedió a la obtención de los extractos: etéreo, metanólico,
acuoso-ácido y acuoso de las drogas, según Olga Lock (Prueba de la Gota). Para la hoja,
se trabajó con la muestra tamizada y los liofilizados de sus extractos acuoso y etanólico;
A
en el caso del fruto, con el extracto etanólico y el liofilizado de su extracto acuoso.
IC
M
Según el tamizaje fitoquímico de Migdalia Miranda, se realizaron los extractos: etéreo,
UI
Q
etanólico y acuoso para la muestra tamizada de hoja. Para la identificación preliminar de
O
BI
los metabolitos secundarios se utilizaron solventes de polaridad creciente (éter, metanol,
Y
etanol, agua ácida y agua).22,23,24
IA
AC
RM
Como podemos apreciar en las Tablas 1, 2 y 3 dentro de los metabolitos

FA
secundarios encontrados en la identificación preliminar, discutimos la presencia de:

DE
CA
Los Esteroides considerados como derivados de los Triterpenoides, poseen un

TE
IO
esqueleto tetracílico característico, el cual fusiona tres anillos de seis miembros y uno de
BL
cinco miembros. Este núcleo de 17 átomos de carbono se denomina gonano

BI
(ciclopentano perhidro fenantreno). Este núcleo esteroide es alterado por transferencia
de un átomo de oxígeno del carbono 12 al carbono 11 dentro de la molécula policíclica,
para utilizarlo como intermediario de la producción de cortisona.2,18,27
En la naturaleza, ningún esteroide posee el núcleo simple del gonano. El
esteroide más simple que se conoce, presenta 18 átomos de carbono, que corresponde al
xxvii
núcleo de estrano, alrededor del cual se hayan las hormonas que caracterizan al sexo
femenino.27
La identificación de esteroides se realizó en los extractos etéreo y metanólico de
la hoja y en los liofilizados de sus extractos acuoso y etanólico, según Olga Lock y en
los extractos etéreo y etanólico, según Migdalia Miranda; siendo negativa en éstos, ya
que fueron obtenidos por maceración en comparación con la extracción a reflujo
realizada en la muestra tamizada según Prueba de la Gota; a esa porción posiblemente
A
estos metabolitos existen, pero no hay la sensibilidad para desarrollo del color. Para los
IC
M
liofilizados de los extractos, la reacción fue positiva y ésta se puede deber a que existe
UI
Q
una mayor cantidad de muestra. La reacción también fue positiva para el liofilizado de
O
extracto acuoso de fruto y su extracto etanólico. BI
Y
IA
AC
La reacción de Liebermann-Burchard es típica de los esteroides que contienen

RM
dos dobles enlaces conjugados, en un mismo anillo, en dos anillos adyacentes o un

FA
doble en un anillo adyacente con un grupo hidroxilo. La reacción debe realizarse en

DE
medio absolutamente anhidro, ya que, al existir moléculas de agua, éstas reaccionan con
CA
el anhídrido acético, anulando de esta manera la reacción con el núcleo esteroidal o

TE
IO
triterpenoide.29
BL
BI
Los flavonoides son metabolitos secundarios de una gran distribución en el reino
vegetal y pueden estar presentes en todas las partes de las plantas. En éstas se
encuentran fundamentalmente en forma de glicósidos, esto les infiere una alta
solubilidad en agua y disolventes polares, lo cual se incrementa por la alta polaridad de
sus estructuras.27
xxviii
Los flavonoides han sido empleados para la reducción de la fragilidad capilar,
protección frente a estados tóxicos agudos, en terapéutica estrogénica e inflamatoria por
su acción similar a la cortisona. Además son usados como antioxidantes, antivirales,
antidiarreicos, antihelmínticos y citostáticos.1,2,17,18
La variación estructural de los flavonoides es inmensa, tanto por la naturaleza
del azúcar como para la posición del enlace glicosídico.27
A
IC
M
Las estructuras de los diversos tipos de flavonoides, dependen de la naturaleza
UI
Q
del oxígeno heterocíclico, pues este deriva del pirano, del pirilo, o de la 𝛾-pirona. La
O
BI
ciclización se acomete entre el tercer carbono de la cadena y un grupo OH del anillo A
Y
IA
en posición orto a esta cadena, lo cual conlleva a la formación de la estructura del

AC
cromeno o cromona.27
RM
FA
La identificación de flavonoides fue positiva en los extractos metanólico y

DE
acuoso de la hoja y en los liofilizados de sus extractos acuoso y etanólico, según Olga
CA
Lock y en los extractos etanólico y acuoso, según Migdalia Miranda, dando una
TE
IO
coloración roja. En el caso del fruto, la reacción se consideró como negativa, ya que el
BL
color final fue verde, ésta se puede deber a factores que influyen en la concentración de
BI
fitoconstituyentes de la planta como: época, clima, edad, suelo; aunque según
bibliografía, algunas veces las coloraciones azul o verde son consideradas positivas.29
En la reacción de Shinoda, el magnesio metálico es oxidado por el ácido
clorhídrico concentrado, dando como productos al hidrógeno molecular, que es
eliminado en forma de gas y el cloruro de magnesio, que es el que forma complejos con
xxix
los flavonoides dando coloraciones características. El magnesio divalente, actúa sobre el
grupo carbonilo de dos flavonas, produciendo una coloración roja, este aumento de
intensidad es debido a que el magnesio divalente intensifica la coloración por estar
doblemente coordinado29.
Las Quinonas comprenden un grupo de productos muy distribuidos en la
naturaleza y de estructuras relacionadas, en la mayoría de los casos, con pigmentos
A
naturales. Son más comunes en vegetales, aunque algunas estructuras se han obtenido
IC
M
de hongos, líquenes, insectos, o de animales marinos. Por lo general, en dependencia del
UI
Q
grado de conjugación de la estructura presentan colores tales como el amarillo, rojo o
O
BI
carmelita, aunque también algunos intermedios. Cuando las estructuras se presentan en
Y
formas de sales o con sustituciones hidroxílicas, los colores pueden ser púrpura, azul o
IA
AC
verde.27
RM
FA
Dentro de este grupo tenemos a las antraquinonas y naftoquinonas. Las

DE
antraquinonas se encuentran fundamentalmente en vegetales. Sus coloraciones varían

CA
del amarillo al rojo, siendo de las quinonas las más distribuidas en la naturaleza. Se
TE
IO
presentan en forma de glicósidos, la unión de los azúcares por hidroxilos ocurren en las
BL
posiciones 1 ó 2 del núcleo base estructural. Las mejores fuentes de obtención de las
BI
naftoquinonas corresponden a los vegetales. Usualmente la pigmentación más común en
ellas es la amarilla. El uso más generalizado es como pigmentos coloreados (lawsona).
En la naturaleza no aparecen formando glicósidos.27
La identificación de quinonas fue positiva, dando una coloración rojiza en la fase
acuosa en el extracto etéreo de la hoja, en los liofilizados de sus extractos acuoso y
xxx
etanólico y para el fruto, en el liofilizado de su extracto acuoso y extracto etanólico, lo
que nos indica la presencia de antraquinonas y naftoquinonas, según Prueba de la Gota
y en el extracto etanólico, según Migdalia Miranda.
La reacción de Bornträger, produce una coloración roja cuando el hidróxido de
sodio reacciona con uno de los grupos hidroxilo, tanto de las antraquinonas como de las
naftoquinonas ya que la coloración depende de la cantidad de electrones deslocalizados
A
en movimiento29.
IC
M
UI
Q
Las antocianinas designan tanto a las antocianinas propiamente dichas como a
O
las antocianidinas, es decir, tanto al glicósido como al aglicón. BI
Y
El término leucoantocianina se refiere a sustancias capaces de convertirse en
IA
AC
antocianinas por calentamiento con un ácido mineral; pueden ser monoméricas, como
RM
las leucoantocianinas, o también poliméricas, como en el caso de los taninos.27

FA
DE
La identificación de leucoantocianidinas fue positiva en el extracto acuoso de

CA
droga tamizada según Prueba de la Gota, dando una coloración roja en la fase acuosa y
TE
IO
en el extracto etanólico, según Migdalia Miranda la aparición de color rojo a marrón en

BL
la fase amílica corresponde a la presencia de antocianidinas. A pH bajo, las

BI
antocianidinas en solución presentan un color rojo.
En la reacción de Rosenheim, el ácido clorhídrico produce una deshidratación
del grupo hidroxilo de la posición 3 de la leucoantocianidina y catequina, que es
favorecida por la temperatura (100ºC), además se produce la ruptura del anillo
heterocíclico. La deslocalización de 12 e- 𝜋 y 2 e- n, por todo el metabolito, produce la
xxxi
coloración roja de la leucoantocianidina y marrón de la catequina. El alcohol amílico, es
el solvente que extrae la antocianidina y la catequina deshidratada observándose la
coloración respectiva en dicha fase orgánica.29
En el caso de extracción de alcaloides con soluciones acuosas es necesario un
pH ácido, buscando con esto la conversión de los alcaloides en sus respectivas sales,
solubles en agua. En el caso de los alcaloides cuaternarios y/o amino-óxidos libres,
A
éstos se encontraron en el extracto acuoso de hoja, según Migdalia Miranda.24
IC
M
UI
Q
Dentro de las reacciones de identificación de alcaloides con reactivos generales,
O
BI
se encuentran las reacciones de precipitación. Éstas se basan en un intercambio, que
Y
normalmente el anión voluminoso del reactivo en acción reemplaza a los aniones
IA
AC
pequeños de las sales de los alcaloides.29

RM
FA
Luego de realizada la identificación preliminar de los metabolitos secundarios de

DE
Morinda citrifolia L. “noni”, procedimos a la extracción y cuantificación de los

CA
flavonoides totales en hoja, liofilizados de sus extractos acuoso y etanólico y para el

TE
IO
fruto, en liofilizado de su extracto acuoso.25, 26

BL
BI
Observando los resultados referente a las hojas de “noni” en las Tablas 4 y 5, la
extracción que obtuvo mayor concentración fue el extracto obtenido mediante reflujo,
con un promedio de 1.49, luego con promedios de 0.89 y 0.90, los liofilizados del
decocto al 10% y extracto etanólico, respectivamente. Obteniéndose la menor
concentración con la extracción obtenida utilizando el equipo Soxhlet (0.05).
xxxii
Tenemos que mencionar que el promedio obtenido en los liofilizados fue casi
similar, por lo tanto podemos deducir que, el uso adecuado puede ser tanto como un
decocto o un extracto etanólico, que son las dos maneras utilizadas por la población
empíricamente.9,19
Según la literatura revisada, y además utilizando la lógica, la concentración más
alta de flavonoides se debió presentar en la extracción continua por Soxhlet, debido a
A
que este procedimiento permite que el solvente se encuentre en contacto permanente
IC
M
con la droga. Pero, para obtener resultados óptimos, necesitamos que no haya presencia
UI
Q
de sesgos.27
O
BI
Y
En el Gráfico 1, los resultados encontrados mediante el método estadístico de
IA
AC
ANOVA, presentaron significancia estadística, es decir los tratamientos utilizados

RM
fueron diferentes significativamente (𝑃 < 0.5). Por lo cual, se procedió a analizar los
FA
datos mediante la Prueba de Duncan, con la cual podemos corroborar los resultados,
DE
obteniéndose para el extracto mediante reflujo, el promedio de 1.49, siendo seguido por
CA
las demás extracciones, como en el análisis ANOVA.

TE
IO
BL
En el caso de la extracción realizada al fruto (Tabla 6), obtuvimos como

BI
promedio: 0.25, siendo mucho menor que el alcanzado con los extractos de hojas.
Encontramos un estudio del 2008 realizado en Malasia, en el cual se determinó
in vitro la eficacia de extractos de hoja (MLE) y de frutas (MFE) de Morinda citrifolia
L. en la inhibición de la lipoproteína lipasa (LPL). El resultado del estudio demostró
que la inhibición más alta en la actividad de la LPL se exhibió en MLE (66% + / -
xxxiii
2,1%), que fue significativamente mayor que la mostrada con MFE (54,5% + / - 2,5%),
extracto de té verde (GTE) (54,5% + / - 2,6%) y catequina (43,6% + / - 6,1%).31
Los glicósidos flavonoides se extraen de forma eficiente con alcoholes de baja
masa molecular, en particular metanol y etanol, cuando el material es seco, ofrece
ventajas emplear una serie de extracciones con tres o cuatro disolventes, incrementando
la polaridad. Todos los flavonoides en etanol presentan una banda más o menos intensa
A
a 200-270 nm, y otra de mayor intensidad a mayor longitud de onda, donde pueden
IC
M
observarse otras bandas de mayor intensidad.27
UI
Q
O
BI
En las frutas y hortalizas sin tratar, los flavonoles se presentan como glicósidos y
Y
está ausente la aglicona. El flavonol más abundante es la quercetina. Entre las
IA
AC
hortalizas, la concentración más alta de quercetina glicósidos se encuentra en cebollas

RM
(3 a 500 mg/kg), bretones (100 mg/kg), judías francesas (30 a 45 mg/kg) y brócolis (30
FA
mg/kg). Entre las frutas examinadas según un estudio, la concentración de quercetina es

DE
en promedio de 15 mg/kg, teniendo las manzanas la concentración más elevada de 21 a

CA
72 mg/kg. Los flavonol glicósidos están presentes en uvas y se han registrado valores
TE
IO
que van desde 8 a 97 mg/kg de peso en fresco.30

BL
BI
En las Tablas 4, 5 y 6 se observa que el contenido promedio de flavonoides
totales expresados como quercetina alcanzan valores de: 1.9 g/kg y 70 mg/kg, para las
extracciones a reflujo y Soxhlet, respectivamente, en los liofilizados de los extractos
acuoso y etanólico de hoja 1.14 y 1.15 g/kg y en el fruto 319 mg/kg, lo que nos indica
que Morinda Citrifolia L. contiene una alta concentración de flavonoides y comparando
con las hortalizas y frutas antes mencionadas, se encontraría entre las más altas.
xxxiv
V. CONCLUSIONES
De los resultados encontrados en el presente estudio, se concluye que:
1. En la identificación preliminar de los extractos acuosos y etanólicos del fruto y
hojas de Morinda citrifolia L. “noni”, se encontraron metabolitos secundarios
A
como: esteroides, quinonas, flavonoides y leucoantocianidinas.
IC
M
UI
Q
2. En la cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides totales expresados
O
BI
como quercetina, se determinó que el extracto con mayor porcentaje correspondió a
Y
la extracción a reflujo de hoja con 0.191%, seguido de los liofilizados de los
IA
AC
extractos acuoso y etanólico de hoja con 0.114 y 0.115% respectivamente, la

RM
extracción Soxhlet de hoja con 0.007% y el liofilizado del extracto acuoso de fruto
FA
con 0.032%.
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xxxv
VI. RECOMENDACIONES
1. Considerando que en el Perú hay pocos estudios de la especie Morinda citrifolia L.
“noni”, se recomienda que se profundicen más estudios y análisis fitoquímicos
sobre la misma, a efecto de encontrar otros metabolitos secundarios responsables de
actividades farmacológicas.
A
IC
M
2. Se recomienda que a partir de este tipo de estudios, se realicen otros que
UI
Q
determinen actividades farmacológicas in vitro e in vivo.
O
BI
Y
3. Existe la necesidad de contar con estudios donde se compare esta especie de
IA
AC
diferentes lugares en el Perú y el mundo, ya que siendo ésta una planta de clima
RM
tropical, sus condiciones son variadas respecto al clima, suelo, etc. y por tanto su
FA
composición en fitoconstituyentes puede ser en mayor o menor porcentaje.

DE
CA
4. Así mismo, que las muestras de estudio de la especie sean de diferentes meses y/o
TE
IO
estaciones, ya que en nuestro estudio las muestras fueron recolectadas en el mes de

BL
Octubre, correspondiente a la primavera y eso también podría ser un influyente para

BI
la identificación de los fitoconstituyentes y la cuantificación de los flavonoides
totales.
5. Se hace necesario que de haber estudios de la especie, éstos sean publicados, a fin
de contribuir a enriquecer los mismos y posteriores.
xxxvi
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Trease W, Evans C. Farmacognosia. 13º ed. Ed. Mc Graw-Hill. México, 1991. pp. 3
2. Claus E, Tyler V. Farmacognosia. 6º ed. Ed. El Ateneo S.A. Argentina, 1968. pp. 1,
135
3. Pío Font Quer. Plantas medicinales. 10º ed. Ed. Labor S.A. España, 1962. pp. 595-
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A
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BL
BI
xl
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xli
ANEXO 1: Clasificación Taxonómica de la especie Morinda citrifolia L. “noni”
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xlii
ANEXO 2: Prueba de la Gota
Procedimiento:
- Pesar 2 gramos del material de estudio

- Agregar 30 mL de solvente
- Someterlo a reflujo controlado por 10 minutos a baño María
- Dejar enfriar y filtrar
- Hacer los ensayos que corresponda según el extracto que se tenga (ver la
A
siguiente tabla)
IC
M
UI
Q
O
SOLVENTE ENSAYOS BI METABOLITOS
Y
SECUNDARIOS
IA
AC
Liebermann-Burchard Esteroles
RM
ÉTER
Bornträger Quinonas libres
FA
DE
Liebermann-Burchard Esteroles
Shinoda Flavonoides
CA
METANOL Gelatina Taninos

TE
Dragendorff Alcaloides
IO
Mayer Alcaloides
BL
BI
Dragendorff Alcaloides
H2O / H+
Mayer Alcaloides
Shinoda Flavonoides
Rosenheim Leucoantocianidina
H2O
Espuma Saponinas
Gelatina Taninos
xliii
ANEXO 3: Tamizaje Fitoquímico de Migdalia Miranda
30-50 g MATERIAL
VEGETAL
Extraer con 90-150 mL de éter etílico por

maceración durante 48 h a Tº amb.
A
Filtrar
IC
M
UI
Q
EXTRACTO RESIDUO SÓLIDO
O
ETÉREO secar y pesar
BI
Y
IA
Extraer con 3 veces el peso del residuo en

AC
volumen con etanol por maceración por 48 h

RM
FA
Filtrar
DE
CA
RESIDUO SÓLIDO EXTRACTO

ALCOHÓLICO
TE
secar y pesar
IO
BL
BI
Extraer con 3 veces el peso del residuo en volumen

con agua destilada por maceración por 48 h
Filtrar
RESIDUO SÓLIDO EXTRACTO

secar y pesar ACUOSO
xliv
EXTRACTO DE ETER ETILICO
dividir en 8 fracciones
5 mL 5 mL 10 mL
2 mL
ENSAYO SUDAN ENSAYO BALJET ENSAYO
ENSAYO CAROTENOS
A
(aceites y grasas) (lactonas, cumarinas) HIDROCARBUROS
IC
M
UI
Q
15 mL (dividido en 3) 5 mL 1 gota
O
5 mL
ENSAYOS DRAGENDORFF, ENSAYO LIEBERMANN - ENSAYO HIDROXAMATO
MAYER Y WAGNER BUCHARD BI
ENSAYO ACEITE FIJO,
SECANTE O ESEN CIAL
FERRICO
Y
(alcaloides) (triterpenos, esteroides) (cumarinas)
IA
AC
RM
ESQUEMA DE REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO ETÉREO

FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xlv
ESQUEMA DE REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO ACUOSO
EXTRACTO ACUOSO
dividir en 7 fracciones
A
IC
15 mL (dividido en 3) 1 - 2 gotas
M
2 mL 2 mL
ENSAYOS DRAGENDORFF, ENSAYO PRINCIPIOS
UI
ENSAYO SHINODA ENSAYO ESPUMA
MAYER Y WAGNER AMARGOS Y
(flavonoides) (saponinas)
Q
(alcaloides) ASTRINGENTES
O
BI
Y
IA
2 mL
2 mL
10 mL
AC
ENSAYO CLORURO
ENSAYO FEHLING
FERRICO ENSAYO MUCILAGOS
ESQUEMA DE REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO ALCOHÓLICO
(comp. reductores)
RM
(taninos)
FA
EXTRACTO
DE
ALCOHOLICO A
70ºC
CA
TE
IO
dividir en 13
BL
fracciones
BI
2 mL 2 mL
2 mL
2mL LIEBERMANN - ENSAYO CLORURO
1 mL ENSAYO KEDDE
ENSAYO BALJET BUCHARD FERRICO
ENSAYO CATEQUINAS (glucósidos
(lactonas) (triterpenos, (comp. fenólicos y
cardiotónicos)
esteroides) taninos)
1 gota
ENSAYO 2 mL 2 mL 2 mL
2 mL
HIDROXAMATO ENSAYO ENSAYO FEHLING ENSAYO ESPUMA
ENSAYO RESINAS FERRICO ANTOCIANIDINAS (comp. reductores) (saponinas)
(cumarinas)
xlvi
2 mL 2 mL
2 mL
ENSAYO NINHIDRINA ENSAYO
ENSAYO SHINODA
(aminoácidos libres BORNTRAGER
y http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
Para ver una copia de dicha licencia, visite (flavonoides)
aminas) (quinonas)
ANEXO 4: Cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides totales de la
especie Morinda citrifolia L. “noni” en los diferentes extractos
Contenido de flavonoides
Absorbancia de la
totales expresados como
Muestras Solución Muestra (nm)
quercetina (%)
1.5617 0.1996
1.5747 0.2013
Extracción a Reflujo de 1.5044 0.1923
Hoja 1.5057 0.1925
1.4603 0.1867
A
1.3537 0.1731
IC
M
0.0486 0.0062
UI
0.0655 0.0084
Q
Extracción Continua 0.0522 0.0067
O
Soxhlet de Hoja 0.0474 0.0061
0.0636 BI 0.0081
Y
0.0504 0.0064
IA
1.0032 0.1283
AC
1.0288 0.1315
Liofilizado de Extracto
RM
0.7288 0.0932
Acuoso de Hoja 0.9296 0.1188
FA
0.9293 0.1188
DE
0.7121 0.0910
0.8954 0.1145
CA
0.8913 0.1140
Liofilizado de Extracto
TE
0.8934 0.1142
Etanólico de Hoja 0.9028 0.1154
IO
0.8987 0.1149
BL
0.9007 0.1152
BI
0.2234 0.0286
0.1900 0.0243
Liofilizado de Extracto 0.3339 0.0427
Acuoso de Fruto 0.2277 0.0291
0.1903 0.0243
0.3333 0.0426
Nº LECTURAS PROMEDIO
PATRÓN
1º 2º 3º 4º 5º 6º X
QUERCETINA 3.116 3.091 3.142 3.127 3.209 3.088 3.1288
xlvii
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
RM
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
xlviii

Identificacion Preliminar de Los Metabolitos Secundarios de Los - PXr25mA

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Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

“Identificación preliminar de los metabolitos secundarios de los extractos

acuosos y etanólicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. “noni” y

Cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides totales”

 Chávez Gaona, María Haydée

 Eustaquio Saldarriaga, Carol Lisset

momentos en nuestros años de estudio. Les deseamos lo mejor chicos…

A Dios, Nuestro Señor:

satisfactoriamente y por bendecirme siempre.

A mis queridos padres:

A mis mejores amigos:

mucho y les deseo lo mejor colegas…

A nuestros queridos profesores:

alcanzar el éxito profesional.

Dr. Q.F. Segundo Guillermo Ruíz Reyes

Por su profesionalismo, paciencia y todo el apoyo brindado para la realización de

este trabajo de investigación

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:

De conformidad con las disposiciones legales y vigentes del reglamento de Grados y

Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de

Trujillo-La Libertad, sometemos a vuestro elevado criterio el presente trabajo de

formación profesional que nos han brindado a través de sus enseñanzas.

De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboración de los señores miembros

Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva

calificación del presente informe.

Trujillo, Marzo del 2010

Chávez Gaona, María Haydée Eustaquio Saldarriaga, Carol Lisset

Prof. Segundo Ruíz Reyes ……………… MIEMBRO

Prof. Francisco Saavedra Suárez ……………… MIEMBRO

El presente trabajo de investigación estuvo orientado a la identificación preliminar de

Morinda citrifolia L. “noni” y a la cuantificación espectrofotométrica de los flavonoides

totales. La especie fue recolectada en el Jardín Botánico de Plantas Medicinales “Rosa

quercetina, se encontró que el extracto con mayor porcentaje correspondió a la

acuoso y etanólico de hoja con 0.114 y 0.115% respectivamente, la extracción Soxhlet

resultados obtenidos de los extractos fueron evaluados mediante el Análisis de Varianza

Palabras clave: identificación preliminar, extractos, Morinda citrifolia L.,

This investigation was aimed at the preliminary identification of secondary metabolites

"noni" and spectrophotometric quantification of total flavonoids. The species was

Keywords: preliminary identification, extracts, Morinda citrifolia L., quantification,

AGRADECIMIENTO ................................................................................................... iii

MATERIAL Y MÉTODO .............................................................................................. 9

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................................ 36

El reino vegetal posee muchas especies de plantas que contienen sustancias de

constantemente respecto a su posible valor farmacológico. En las civilizaciones

primitivas, la población estaba interesada principalmente en las virtudes curativas de las

el uso de las plantas o de sus principios activos en la terapéutica. La identificación del

valor curativo de las plantas ha provenido generalmente de la información

proporcionada por el uso de la medicina tradicional, que igualmente ha sido la fuente

para la investigación fitoquímica, y en algunos casos, el desarrollo de nuevos fármacos.3

La investigación en el campo de la Fitoterapia y la Medicina Tradicional son

temáticas importantes en el Perú, país de inmensa riqueza en plantas medicinales, tanto

potencial fitoterapéutico a futuro.4, 5

Un aspecto a mencionar es el problema de la depredación de los productos

naturales de interés fitoterapéutico. En Perú existe una legislación que regula la

exportación de algunas especies de uso medicinal como la uña de gato, la maca, la

indiscriminada de estas especies silvestres para el uso informal.2

utilizadas. Dentro de este arsenal fitoterapéutico, se destaca la Morinda citrifolia L.,

Dicotiledóneas, Orden Gentianales, familia de las Rubiáceas y género Morinda. Es un

aovadas, grandes y de color verde oscuro con enervaciones gruesas, su superficie es

cm de largo, con ápice agudo y redondeadas en la base; flores blancas fragantes,

dispuestas en cabezuelas globosas u ovales; corola tubular de aproximadamente 10 mm;