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TESIS II
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“Cuantificación de antocianinas totales y capacidad antioxidante del fruto
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AUTORES:
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ASESOR:
TRUJILLO – PERÚ
2019
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DEDICATORIAS
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momentos de aprendizaje y felicidad.
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Paola
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A Segundo y Gloria, mis padres, por su
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constante apoyo y empuje para lograr
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mis metas cada día.
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AGRADECIMIENTO
A nuestro asesor:
Por su apoyo, consejos y compresión incondicional que nos brindó durante cada momento
de la realización y las veces que lo necesitábamos para poder culminar nuestro trabajo
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A nuestros distinguidos miembros del jurado dictaminador, les agradecemos por sus
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consejos y recomendaciones que nos sirvió para la culminación de la presentación de
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nuestro trabajo.
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Gracias por sus conocimientos, experiencias, tiempo y dedicación que nos brindaron para
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la realización del trabajo titulado “Cuantificación de antocianinas totales y capacidad
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RESUMEN
“sauco” procedente del centro poblado San José de Porcón, distrito de Quiruvilca,
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provincia de Santiago de Chuco, región La Libertad método: La especie vegetal fue
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recolectada, seleccionada en su estado fresco y maduro, pesada e identificada en el
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Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para luego ser procesada,
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se cuantifico antocianinas totales mediante el método de pH diferencial y se evaluó la
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capacidad antioxidante mediante el método de DPPH (2,2 difenil-1-picrylhidrazilo). Se
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ABSTRACT
The objective of this research was to determine the total anthocyanin content and
antioxidant capacity of the Sambucus peruviana "sauco" fruit from the town of San José
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de Porcón, district of Quiruvilca, province of Santiago de Chuco, La Libertad region,
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method: The plant species was collected, selected in its fresh, mature, heavy state and
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identified in the Herbarium Truxillense of the National University of Trujillo, to be
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processed, total anthocyanins were quantified by the differential pH method and the
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antioxidant capacity was evaluated by means of the DPPH method (2,2 diphenyl-1-
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picrylhydrazyl). Results; The total anthocyanin concentration of 7.094 ± 0.07 mg
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31.3736 ± 0.07 mg expressed ascorbic acid / 100 g fresh sample was determined.
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ÍNDICE
DEDICATORIA ................................................................................................................................ ii
AGRADECIMIENTO.........................................................................................................................iv
PRESENTACIÓN .............................................................................................................................. v
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JURADO DICTAMINADOR ..............................................................................................................vi
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RESUMEN ......................................................................................................................................vii
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ABSTRACT ....................................................................................................................................viii
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INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................. 1
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RESULTADOS ............................................................................................................................... 18
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DISCUSIÓN ................................................................................................................................... 19
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CONCLUSIÓN ............................................................................................................................... 21
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I. INTRODUCCIÓN
pasar de los años, estos que han sido obtenidos mayormente de drogas vegetales, y
funcionalidad biológica1.
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Existen actualmente evidencias epidemiológicas que logran sustentar la acción
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patogénica de los radicales libres en los distintos procesos biológicos. Los radicales libres
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son compuestos químicos altamente reactivos y pueden ser dañinos para las células de
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nuestro organismo2.
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Se forman naturalmente en el cuerpo, pero un aumento en su concentración puede ser
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de alto riesgo para los componentes principales de las células como lo es el ADN,
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inflamatorias, cardiovasculares, cáncer, entre otras que pueden llegar a causar la muerte
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cáncer, etc5.
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poseen varias funciones fenol, nombre popular del hidroxibenceno, los cuales están
en el mundo vegetal. Son unos de los principales metabolitos secundarios de las plantas
y su presencia en el reino animal se debe a la ingestión de éstas 6,7. Los fenoles son
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cuantitativo, aunque a este nivel también existen factores ambientales. Además, actúan
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como fitoalexinas (las plantas heridas secretan fenoles para defenderse de posibles
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ataques fúngicos o bacterianos) y contribuyen a la pigmentación de muchas partes de la
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planta (p. ej. los antocianos son los responsables del color rojo, naranja, azul, púrpura o
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violeta que encontramos en las pieles de las frutas y hortalizas). Por otro lado, cuando
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los fenoles son oxidados, dan lugar a las quinonas que dan un color pardo que muchas
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Los fenoles se encuentran casi en todos los alimentos de origen vegetal. Son alimentos
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ricos en fenoles la cebolla, el té, el vino tinto, el cacao, el aceite de oliva virgen, etc. Estas
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Las antocianinas han ganado gran importancia como colorantes naturales en la industria
las frutas y hortalizas. Una molécula de antocianina está constituida por una aglicona o
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antocianidina, la cual en su estado natural está glicosada por uno o más azúcares. Las
Para evaluar la capacidad antioxidante existen diferentes métodos (ya sea in vitro o in
vivo), siendo uno de ellos el Método DPPH, el cual determina la actividad de captura de
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radicales libres, midiendo la inactivación de los radicales en un medio acuoso.
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Los compuestos antocianínicos se caracterizan por carecer de electrones debido a su
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especial estructura química, la cual las hace muy reactivas frente a radicales libres
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presentes en el cuerpo. Lo que conlleva a que pueden ser potentes antioxidantes
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naturales11.
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Las propiedades que se le otorga a las antocianinas para mejorar la salud están
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una alta actividad antioxidante contra el peróxido de hidrógeno (H2O2) y contra radicales
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incrementado por su color, ya que se podrían utilizar como colorantes naturales8. Las
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antocianinas son responsables muchas veces del color atractivo de muchas frutas y
alimentarios sintéticos11.
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En la actualidad el estudio y el uso de colorantes naturales se ha vuelto muy relevante
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debido a que organizaciones internacionales, como la Organización Mundial de la Salud
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(OMS), ha debatido el uso de colorantes sintéticos por su directa relación con el
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desarrollo de enfermedades degenerativas como algunos tipos de cáncer15.
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Los antioxidantes son compuestos químicos, que, por otro lado, contrarrestan el efecto
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del estrés oxidativo producido por los radicales libres. Nuestro cuerpo produce algunos
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pero no son suficientes, por lo que se necesita una fuente exógena de éstos. Los
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El Perú cuenta con una gran diversidad de plantas medicinales lo que nos brinda una
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Sambucus peruviana (sauco), una especie arbórea que se cultiva en las partes altas de
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los Andes (Perú, Bolivia y Norte de Argentina)10,11.
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El sauco es un árbol de 12 metros de alto, con ramas glabras y flores blancas perfumadas,
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ornamental por sus flores y frutos y que crece entre los 40 – 3900 m.s.n.m. prefiere
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suelos profundos, e textura variable; tolera peligrosidad baja a media y requiere buen
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El entendimiento de las flores se emplea como sudorífico y contra la viruela, así como
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de los frutos como colutorios, en las afecciones de la boca y el de las ramas floridas
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contra el alcoholismo11-13.
Los frutos son bayas esféricas o globosas, negras, de 5 – 6 mm. de diámetro; semillas
pequeñas, en número de 3 – 6 por fruto. Los frutos son jugosos, de sabor agradable y
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flores en infusión se utilizan contra la tos y el asma, así también alivian los estados de
ansiedad y nerviosismo16.
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flavonoides totales de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) proveniente de
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la ciudad de Huamachuco” plantea el objetivo de contribuir con el estudio
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farmacognóstico y cuantificar los flavonoides totales de la hoja de Sambucus peruviana,
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llegando a concluir que los resultados se encuentran dentro de los rangos permisibles de
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la Norma Ramal para drogas crudas del MINSAP, así mismo se cuantificó los flavonoides
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totales del extracto fluído de hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) frente al 2,2-
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flavonoides18.
H.B.K.) durante el secado por convección” tuvo como objetivo determinar cómo influirá
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bebida funcional de membrillo (Cydonia vulgaris pers.)”. Tuvo resultado como que, la
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reducción del tamaño de partículas facilita la extracción de un constituyente deseado
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contenido en una estructura compuesta20.
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Las antocianinas son una importante alternativa para la sustitución de los colorantes
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sintéticos, son abundantes en la naturaleza y también debido a los efectos benéficos
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antocianinas totales, así como determinar la capacidad antioxidante obtenidas del fruto
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de Sambucus peruviana (sauco) proveniente del centro poblado San José de Porcón,
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Los recientes trabajos de investigación sobre radicales libres han logrado confirmar que
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los alimentos con un alto nivel de antioxidantes tienen una participación esencial en la
ocasionados por el envejecimiento celular. Es por ello que, en los últimos años, la
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las cuales está implicado el daño oxidativo ha tenido un auge en investigación y una
han demostrado ser una fuente importante de compuestos con marcada actividad
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antioxidante, permitiendo el crecimiento acelerado de investigaciones en este campo2.
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Por lo anterior, los antioxidantes son un campo de amplio estudio y presentan la
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expectativa de brindar nuevas fuentes que sean de utilidad para la salud en la comunidad
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se plantea el siguiente problema: ¿Cuál es la concentración de antocianinas totales y la
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capacidad antioxidante del fruto de Sambucus peruviana “sauco”?
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OBJETIVOS
Objetivo general:
Objetivos específicos:
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Determinar concentración de antocianinas totales mediante el método de pH
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diferencial
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Determinar la capacidad antioxidante in vitro frente al radical libre 2,2 difenil-1-
pricrilhidrazilo (DPPH°). Y
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de Chuco, región La Libertad.
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2.1.2 MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO
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2.1.2.1 MATERIAL DE VIDRIO.
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De uso común en el laboratorio.
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2.1.2.2 EQUIPOS
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2.1.2.3.1 Reactivos
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2.1.2.3.2 Solventes:
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- Etanol de 96º GL. CFK
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2.2 MÉTODO
2.2.1.1 RECOLECCIÓN
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2.2.1.2 ALMACENAMIENTO
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utilización.
2.2.1.3 SELECCIÓN
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2.2.1.4 IDENTIFICACIÓN Y CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
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Un ejemplar completa de la especie de Sambucus peruviana (sauco), se
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llevó al Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo y se
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obtuvo la identificación y clasificación taxonómica con el registro N°
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59748.
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capacidad, luego se adicionó 100 mL de etanol 96°GL y se acidificó con ac. cítrico
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El pH de los buffers se ajustó a medida que se requirió para obtener valores de
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pH final de 1,0 y 4,5.
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2.3.3 CUANTIFICACIÓN MEDIANTE MÉTODO DE PH DIFERENCIAL26
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a. Preparación de la muestra problema
Y
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En una fiola de 100 mL de capacidad, se tomó 10 mL del extracto etanólico
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ácido y se diluyó hasta 100 mL de volumen con etanol de 96° GL con ac. cítrico
RM
al 0,1%.
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(pH 1,0 y pH 4,5). La turbidez de la solución final pudo ser corregida midiendo
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Lambert-Beer:
(A=ε·C·L).
A
𝑨
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𝑪(𝒎𝒈/𝒍) = . 𝑴𝑾. 𝟏𝟎𝟑 . 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊ó𝒏
𝜺. 𝑳
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A: absorbancia
O
ε: absorbancia molar o coeficiente de extinción molar.
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C: concentración molar
L: longitud de recorrido en cm, es igual a 1.
MW: masa molecular Y
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obtenido a pH 1,0.
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b. Preparación de la curva de calibración de solución del radical DPPH •
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De la solución de DPPH• 0.1 mM se midió volúmenes de 2; 4; 6; 8 y 10 mL; y
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se trasvasó a fiolas de 10mL aforándolas con etanol de 96º GL., y se obtuvo
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concentraciones de 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 y 0.1mM respectivamente. Luego
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se realizó un barrido espectrofotométrico con la solución DPPH• 0.1 mM para
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calibración.
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Del extracto ácido obtenido, se tomó 1 ml, se agregó a una fiola y se aforó
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de DPPH• 0,1 mM. Luego se agregó 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800,
0,1 mM. Luego cada fiola se agitó y se dejó en reposo durante 30 min.
A
cubierto por papel aluminio.
IC
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Posteriormente se realizó las lecturas en el espectrofotómetro Helwett
UI
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packard a 520 nm y se obtuvo absorbancias por triplicado. Como blanco se
O
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utilizó etanol de 96°GL. Finalmente, se calculó el porcentaje de radicales
Y
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DPPH• capturados utilizando la siguiente fórmula:
I
AC
RM
Donde:
ABS. control: absorción control
CA
50 b
IC50
m
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Los datos fueron procesados en el programa Microsoft Office Excel 2016. Caracterizados
Estándar (δ)
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III. RESULTADOS
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ANTOCIANINAS 7.094 ± 0.07
IC
TOTALES
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Leyenda: (FF: Fruto fresco)
Q
(D.E: Desviación estándar)
O
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Fuente: Laboratorio de Farmacognosia.
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I A
AC
RM
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31.2916
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31.4125
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IV. DISCUSIÓN
A
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En la tabla 1, observamos que la concentración de antocianinas totales fue de 7.094
M
mg/100g de fruto fresco. En comparación con estudios realizados, según Beltran C. et al,
UI
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2010 reportó 450mg/100g de fruto fresco, según Márquez L., 2007 reportó antocianinas totales
O
BI
de 120,2mg cianidina 3-glucósido/100g muestra. La concentración de antocianinas totales es
Y
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menor en el presente estudio.
I
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Las bayas de sauco constituyen una fuente bastante rica de antocianinas, sin embargo la
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peruviana (sauco); en comparación con el estudio de Márquez L., 2007 que reporta
A
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comprenden una transición Redox mediante la cual la molécula antioxidante dona un
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electrón o toma de hidrogeno equivalente (H+) al radical libre. La actividad antioxidante
Q
O
es un parámetro que determina que tanto el compuesto antioxidante evita que su
BI
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sustrato se oxide. Si el valor es cercano a cien, la actividad antioxidante del compuesto
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en cuestión es alta. La inhibición de radicales libres varía dependiendo de la
AC
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V. CONCLUSIONES
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fruto fresco de Sambucus peruviana (sauco), frente al radical libre 2,2.-difenil –
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pricrilhidrazilo (DPPH).
Q
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Se determinó el IC50 de 15.05ug/g de fruto fresco de Sambucus peruviana
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(sauco).
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https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14644322
A
IC
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AC
RM
6. Jimeno E. Ámbito farmacéutico. Compuestos fenólicos. 2004. vol. 23. n°6. [Online] URL
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8. Akerele O. The best of Both Worlds: Bringing Tradicional Medicine up to date. Soc. Sco.
BL
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IC
M
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http://www.pcient.uner.edu.ar/index.php/cdyt/article/view/33/11
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Y
características fisicoquímicas y organolépticas del yogurt natural. Universidad Nacional
I A
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Http://Repositorio.Unh.Edu.Pe/Bitstream/Handle/UNH/91/TP%20-
FA
%20UNH%20AGROIND%20%200008.pdf?sequence=1&isAllowed=y
DE
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CA
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BI
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IO
BL
lipidica de la pulpa de ungurahui (oenacarpus bata u a mart)". [Tesis para optar el Título
60-75.
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A
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ANEXOS I A
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DE
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Anexo 1:
A
IC
SAUCO ET 70
M
método pH diferencial
UI
pH 1.0 pH 4.5
Q
A C g/100g fruto fresco X ± d.e
515 700 510 700
O
m1 3.21E-02 7.84E-03 1.49E-02 7.81E-03 0.0172 2.8666 7.167
BI
m2 3.13E-02 7.14E-03 1.48E-02 7.60E-03 0.0170 2.8384 7.096 7.094 ± 0.07
Y
m3 3.18E-02 7.71E-03 1.45E-02 7.17E-03
A 0.0168 2.8079 7.020
Leyenda:
I
AC
m: muestra
±: media,
FA
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Clasificación taxonómica.
A
IC
M
UI
Q
O
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Y
I A
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RM
FA
DE
CA
TE
IO
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Selección de la muestra
a a
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I A
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estufa
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h h
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i i
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DE
CA
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