Antifungico Cansa Boca

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
A
IC
M
UI
TESIS II
Q
O
Evaluación de la actividad antioxidante y antimicótica del extracto hidroalcohólico de
BI
Y
las hojas de Bunchosia armeniaca (ciruelo cansa boca)
IA
AC
M
PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE

R
FA
BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

DE
CA
AUTORES : POMA AVILA, Oliver Pierre

TE
MEDINA JUAREZ, Ruth Guadalupe

IO
BL
BI
ASESOR : Dr. RUIZ REYES, Segundo Guillermo
TRUJILLO – PERU
2018
Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú.
Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/
DEDICATORIA
A Dios.
Por darme vida, salud, por fortalecer mi corazón e iluminar mi mente y por haber
puesto en mi camino a aquellas personas que han sido mi soporte y compañía.
A
A mis padres
IC
M
UI
Q
Por ser una fuente de motivación e inspiración inagotable y de alegría, en mi día a día,
O
BI
por estar a mi lado, por su apoyo moral y entusiasmo brindado para seguir adelante en
Y
mis propósitos, por el tiempo que compartieron sus experiencias, conocimientos y
IA
AC
consejos, por todo su amor.

R M
FA
DE
A mis Amigos(a)s
CA
TE
Porque siempre he contado con ellos para todo, gracias por la amistad y por
IO
BL
permitirme aprender más de la vida a su lado.

BI
Ruth Guadalupe
A Dios
Por darme la vida, por poner en mí camino a personas maravillosas y por las
bendiciones y los regalos que recibo día tras día. Y a su siempre apoyo incondicional
para proponerme y alcanzar mis objetivos.
A mis padres
A
Eugenio y Maximina, quienes permanentemente me apoyaron con su espíritu
IC
M
alentador, me acompañaron a lo largo de mi camino, brindándome consejos,
UI
Q
orientación y fuerza en los momentos cruciales de mi vida, levantándome cuando me
O
BI
caí y sosteniendo mi vuelo en los grandes momentos de mí existir.
Y
IA
AC
A mi familia
R M
Rocio y Dayiro, por siempre permanecer a mi lado dándome esa fuerza para seguir
FA
adelante y ser mi compañía en todos los momentos de mi vida

DE
CA
A mis docentes
TE
IO
BL
Quienes laboran con la materia más valiosa de nuestra patria, la mente, formando
BI
hombres y mujeres del mañana, sobre la base de valores morales, éticos y
humanísticos.
Oliver Pierre
ii
AGRADECIMIENTO
Agradecemos a Dios Todopoderoso por estar con nosotros en cada paso que
dimos, por fortalecer nuestros corazones e iluminar nuestras mentes, y por haber
puesto en nuestro camino a personas que han sido de soporte y compañía, así como
habernos ayudado a culminar nuestros estudios.
A
IC
M
UI
Q
Un agradecimiento especial a la cátedra de Farmacognosia y Farmacobotanica
O
BI
a mis profesores y a nuestro asesor Dr. Segundo Guillermo Ruiz Reyes por su apoyo
Y
constante y desinteresado, por su amistad, por sus enseñanzas y disposición en la
IA
AC
conducción del desarrollo de este trabajo de investigación.

R M
FA
DE
Agradecemos también, a los respetables señores miembros del jurado por el

CA
interés y sugerencias para la realización de este trabajo.

TE
IO
BL
BI
Ruth Guadalupe y Oliver Pierre
iii
PRESENTACIÓN
SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:
En cumplimiento de las normas dispuestas en el reglamento interno de la Facultad de
Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a su
consideración la Tesis II intitulado:
A
IC
M
“Evaluación de la actividad antioxidante y antimicótica del extracto hidroalcohólico de
UI
Q
las hojas de Bunchosia armeniaca (ciruelo cansa boca)”
O
BI
Y
IA
AC
Con el Propósito de optar el Grado Académico de Bachiller en Farmacia y Bioquímica.

R M
Dejamos a vuestra consideración señores miembros del jurado la calificación del

FA
siguiente trabajo.
DE
CA
Trujillo, Setiembre del 2018

TE
IO
BL
BI
………………………………. ………..………………………
Medina Juárez Poma Ávila

Ruth Guadalupe Oliver Pierre
iv
JURADO CALIFICADOR
A
IC
M
…………………………………….
UI
Q
Dr. QF. Francisco M. Abanto Zamora
O
PRESIDENTE BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
…..……….………………………… ……………………………………...
BL
Dr. QF. Segundo G. Ruiz Reyes Dra. QF. Marilú R. Soto Vásquez
BI
MIEMBRO MIEMBRO
RESUMEN
En el presente trabajo se determinó la evaluación de la actividad antioxidante y
antimicótica del extracto hidroalcohólico de la hoja de Bunchosia armeniaca “ciruelo
de cansa boca”. Las hojas fueron recolectadas del Jardín Botánico de Plantas
A
medicinales “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y
IC
M
Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, Departamento de La Libertad.
UI
Q
Los extractos hidroalcohólicos fueron preparados mediante reflujo. Se determinó la
O
BI
capacidad antioxidante mediante el método desarrollado por Brand-Williams, cuyas
Y
lecturas espectrofotométricas se realizaron a 520 nm. Los resultados fueron
I A
AC
expresados en porcentaje de captura del radical 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPHº)

RM
a las concentraciones (0,02 Mm, 0,04 mM, 0,06 Mm, 0,08 Mm y 0,1 Mm.)
FA
encontrando un IC50 de 0,4810 mg/mL teniendo capacidad antioxidante prometedora

DE
comparado con los artículos hallados. El efecto antimicótico se realizó en cepas de

CA
Cándida albicans ATCC 10231 empleando el método de Kirby-Bauer (difusión en

TE
agar). Para el efecto antifúngico, el grupo experimental I (extracto hidroalcohólico al

IO
BL
25%) mostro un promedio de 7,176 mm de diámetro, para el grupo experimental II

BI
(extracto hidroalcohólico al 50%) mostro un promedio de 7,836 mm de diámetro y
para el grupo experimental III (extracto hidroalcohólico al 75%) de mayor
concentración presento un promedio de 8,236 mm de diámetro.
Palabras claves: Bunchosia armeniaca, Cándida albicans, extracto hidroalcohólico
vi
ABSTRACT
In the present work, the evaluation of the antioxidant and antifungal activity of the
hydroalcoholic extract of the Bunchosia armeniaca leaf "plum de cansa boca" was
determined. The leaves were collected from the Botanical Garden of Medicinal Plants
A
IC
"Rosa Elena de los Rios Martinez" of the Faculty of Pharmacy and Biochemistry of the
M
UI
National University of Trujillo, Department of La Libertad. The hydroalcoholic extracts
Q
O
were prepared by reflux. Antioxidant capacity was determined by the method developed by
BI
Brand-Williams, whose spectrophotometric readings were performed at 520 nm. The
Y
A
results were expressed in percentage of capture of the radical 2,2-Diphenyl-1-
I
AC
Picrilhidrazilo (DPPHº) at the concentrations of 0.02 mm, 0.04 mm, 0.06 mm, 0.08 mm and
RM
0, 1 Mm. finding an IC50 of 0.4810 mg / mL having an improved antioxidant capacity with

FA
the articles found. The antifungal effect was performed on strains of Cándida albicans
DE
ATCC 10231 using the Kirby-Bauer method (agar diffusion). For the antifungal effect,
CA
TE
experimental group I (25% hydroalcoholic extract) showed an average of 7.176 mm in

IO
diameter, for experimental group II (hydroalcoholic extract at 50%) it showed an average of

BL
7.836 mm in diameter and for experimental group III (hydroalcoholic extract at 75%) of
BI
higher concentration with an average of 8.236 mm in diameter.
Keywords: Armenian bunchosia, Cándida albicans, hydroalcoholic extract
vii
ÍNDICE
Pág.
DEDICATORIA i
A
AGRADECIMIENTO iii
IC
M
PRESENTACION iv
UI
Q
JURADO CALIFICADOR v
O
BI
RESUMEN vi
ABSTRACT Y vii
I A
AC
I. INTRODUCCION…………………………………………… 1
RM
II. MATERIAL Y METODO…………………………………… 7

FA
2.1. MATERIAL…………………………………………….. 7
DE
2.2. EQUIPOS……….………………………………………. 8
CA
2.3. METODO……..………..……………………………….. 9
TE
III. RESULTADOS……………………………………………… 17
IO
BL
IV. DISCUSION………………………………………………… 20
BI
V. CONCLUSIONES…………………………………………... 24
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………………. 25
VII. ANEXOS …………………………………………………......…... 31
viii
I. INTRODUCCIÓN
Desde la antigüedad las plantas han sido un recurso al alcance del ser humano
para su alimentación y prevención de enfermedades; estas últimas llamadas
plantas medicinales, utilizada para diversas patologías, principalmente a partir
de los extractos de las hojas que tienen propiedades antibacterianas como
A
IC
antiinflamatorias. La organización Mundial de la salud definió en China, en
M
UI
1980, “planta medicinal” como todo vegetal que contiene en uno o más de sus
Q
órganos, sustancias que pueden ser utilizadas con fines terapéuticos,
O
BI
preventivos o que son precursores de hemisintesis farmacéutica, dentro de las
Y
IA
enfermedades más frecuentes tenemos a las crónico-degenerativas que son

AC
las principales causas de muerte en el mundo 2,3.

R M
FA
En los últimos años, han surgidos diferentes teorías que pretenden explicar el
DE
proceso de envejecimiento, entre estas hay una que tiene mayor aprobación
CA
cuya referencia es que esta ocurre a consecuencia de los radicales libres. Esta
TE
teoría propone que, debido a la variación de los mecanismos antioxidantes,

IO
BL
genera y se acumulan los radicales libres cuya consecuencia directa es la

BI
presencia de un estrés oxidativo que destruye estructuras celulares, lo que
conlleva luego a la muerte celular 4, 5, 6.
Los radicales libres es una especie química ya sea atómica o molecular,
inestables de alta energía capaz de existir independientemente y que contiene
uno o más electrones desapareados en el orbital más externo. Estos electrones
generan un campo eléctrico que no es anulado, lo que ocasiona que la especie
química sea paramagnética y por ende altamente reactivo, capaz de actuar en
los sistemas biológicos del organismo causando daños irreversibles 7, 8.
Nuestro organismo está luchando contra los radicales libres cada momento del
día. El problema para nuestra salud se produce cuando nuestro organismo
tiene que soportar un exceso de radicales libres durante años, estos se forman
de dos maneras: “De forma exógena (contaminación atmosférica, el humo del
cigarrillo, los alimentos y los medicamentos) y de forma endógena (se da en la
A
IC
cadena respiratoria y en el sistema inmune como también en enzimas
M
UI
oxidativas)”; estos contribuyen en un aumento de los radicales libres en
Q
O
nuestro organismo, que significa la aparición de las enfermedades como la
arterioesclerosis, la artritis reumatoide, daños pulmonares, cerebrales y

BI
Y
IA
cardiovasculares e incluso el envejecimiento 9,10

.
AC
M
La protección que debemos tener para evitar el aumento de los radicales libres
R
FA
en nuestro organismo que aceleran la rapidez de envejecimiento y

DE
degeneración de las células de nuestro cuerpo es el consumo de antioxidantes

CA
naturales, para equilibrar o neutralizar a los radicales libres se hallan algunos

TE
compuestos que son producidos de forma endógena por las células obtenidos
IO
BL
exógenamente, de manera exógena lo encontramos en los compuestos con

BI
propiedades antioxidantes que son compuestos fenólicos como los flavonoides
(verduras, hortalizas semillas y legumbres) y precisamente se necesitan para la
protección del cuerpo humano en contra de enfermedades degenerativas, que
se requiere para prevenir la actividad de los radicales libres y que aquel
desequilibrio causa el estrés oxidativo 11, 12, 13

.
Los hongos son agentes causantes de innumerables enfermedades en el
hombre. Cualquier tejido puede ser afectado por lo que se presentan diversos
cuadros clínicos, cada uno de ellos asociado directamente al estado
inmunológico del paciente. El número exacto de hongos Fitopatógenos se
desconoce, pero se estiman en un número superior a las diez mil especies,
pertenecientes a diversas categorías taxonómicas 14, 15

.
Para el manejo de enfermedades, se implementan controles químicos
A
IC
principalmente. Los residuos tóxicos productos del uso continuo de pesticidas,
M
UI
afectan la salud de los trabajadores y deterioran el ambiente. También se debe
Q
tener en cuenta que el problema de la resistencia a fungicidas. Esto se traduce
O
en la inefectividad de algunos de estos, creando la necesidad de nuevos
BI
Y
IA
productos con modos de acción diferentes 16

.
AC
M
La búsqueda de alternativas de manejo como el desarrollo de variedades

R
FA
resistentes, el control biológico y el uso de elicitores bióticos, se constituyen

DE
en campos de particular interés investigativo para el adecuado desarrollo del

CA
cultivo 17.66
TE
En la búsqueda de nuevos controladores de enfermedades, los productos

IO
BL
naturales pueden llegar a ser fuente de compuestos fungicidas o fungistáticos

BI
amigables con el ambiente. Los extractos vegetales, aceites esenciales y
metabolitos secundarios son una fuente botánica de compuestos alternativos a
los fungicidas usados actualmente 18.
Los extractos de muchas plantas contienen compuestos de bajo peso
molecular, que inhiben el crecimiento de hongos. Estos compuestos se
pueden encontrar en plantas sanas o se pueden encontrar en extractos de
plantas que han estado expuestas a patógenos. Dichos compuestos están
involucrados en una multitud de funciones ecológicas entre ellas las
interacciones planta microorganismos 19, 20.
Teniendo en cuenta los problemas de resistencia a fungicidas que podrían
resultar por la biología del patógeno, por el mal manejo de estos productos y
que la acción de los extractos vegetales para el control de fitopatogenos ha
sido demostrada ampliamente, surge la opción de utilizarlos como una
A
IC
alternativa para el manejo de enfermedades fungosas, diferente a los productos
M
UI
tradicionales 21.
Q
O
Bunchosia armeniaca es un género botánico de plantas con flores de 131
BI
Y
especies pertenecientes a la familia Malpighiaceae. Esta planta es originaria de
IA
AC
América conocida como “Cansa boca”, “cafezinho” o “falso – Guaraná”, es un

M
árbol de tamaño mediano que empieza sus ramificaciones a muy baja estatura
R
FA
teniendo así una copa ancha. Sus frutos son de forma elipsoidal que cuando
DE
están maduros toman el color rojizo además generalmente contiene dos

CA
semillas. Su clima es tropical, con una temperatura relativa de 25 a 27°C y

TE
humedad entre 70 y 80 % 22, 23.

IO
BL
Cabe mencionar que actualmente el Perú tiene una gran diversidad de plantas
BI
y se usan de forma empírica algunas de ellas, ya que esto viene de nuestros
antepasados por sus propiedades de sanar o prevenir enfermedades dada la
capacidad que tienen para sintetizar diversos metabolitos secundarios (como
flavonoides, taninos, terpenos, cumarinas, lignanos, etc.) por la cual constituye
una buena alternativa el estudio de sus diversas propiedades 24 - 27

.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) y la Organización de las Naciones
Unidas para la Agricultura y la Alimentación. (FAO) publicaron recientemente
un informe donde se recomienda la ingesta de un mínimo de 400 g diarios de
frutas y verduras (excluidas las patatas y otros tubérculos feculentos) para
prevenir enfermedades crónicas como las cardiopatías, el cáncer, la diabetes o
la obesidad, así como para prevenir y mitigar varias carencias de
micronutrientes 28.
A
IC
El presente trabajo de investigación pretende evaluar la actividad antioxidante y
M
UI
antimicótica del extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca
Q
O
“Ciruelo cansa boca” del Jardín Botánico de Plantas Medicinales “Rosa Elena
de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la

BI
Y
IA
Universidad Nacional de Trujillo, Departamento de La Libertad, lo cual sirve

AC
como aporte para avalar el uso de la planta en medicina tradicional. De esta

R M
manera brindar a la población una alternativa cercana y cómoda para su

FA
DE
atención primaria con esta especie vegetal.

CA
Bajo estas premisas y con el objetivo de contribuir al conocimiento científico de

TE
las plantas medicinales de nuestro país es que el presente trabajo está

IO
BL
orientado a estudiar la especie Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca”.

BI
Con los antecedentes citados los autores del presente trabajo nos planteamos
el siguiente problema:
¿Presentará actividad antioxidante y antimicótica el extracto hidroalcohólico de
las hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo cansa boca”?
1. OBJETIVOS:
1.1. Objetivo General:
- Evaluar la actividad antioxidante y antimicótica del extracto
hidroalcohòlico de las hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo
A
cansa boca”.
IC
M
UI
Q
O
1.2. Objetivos Específicos:
BI
Y
- Determinar la actividad antioxidante del extracto hidroalcohólico
IA
AC
de las hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo cansa boca”

M
frente al radical libre DPPHº

R
FA
DE
- Determinar la actividad antimicótica del extracto hidroalcohòlico

CA
de las hojas de Bunchosia armeniaca “Ciruelo cansa boca”

TE
frente a Cándida albicans ATCC 10231.

IO
BL
BI
II. MATERIAL Y METODO
2.1. Material De Estudio.
2.1.1. Material Biológico:
Se utilizó un cultivo puro estandarizado de Cándida albicans
A
ATCC 10231, proporcionadas por el Hospital Referencial del
IC
M
Niño – Belén.
UI
Q
O
BI
Y
2.1.2. Material Botánico
IA
AC
Se utilizó 1 kilogramo de hojas de Bunchosia armeniaca

M
"Ciruelo cansa boca” procedente del Jardín Botánico de

R
FA
Plantas Medicinales “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la

DE
Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional

CA
de Trujillo, Departamento de La Libertad.

TE
IO
2.1.3. Equipos:
BL
- Balanza Analítica “Ohaus-Ga200”, (precisión 0.0001g)

BI
- Refrigerador (Coldex Cool Style )
- Espectrofotómetro Heweltt Packard modelo 8452 A
- Autoclave Autester
- Balanza analítica Sartorius
- Estufa (memmert)
2.1.4. Reactivos
─ Agua destilada
─ Alcohol 96° GL (Dropacksa )
─ 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPHº)
─ Dimetilsulfoxido
A
2.1.5. Medios de cultivo
IC
M
─ Agar Dextrosa Sabouraud al 4%
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
2.2. MÉTODO
2.2.1. Preparación de la especie vegetal
2.2.1.1. Recolección, identificación y preparación del material
botánico.
Se recolectaron las hojas de Bunchosia armeniaca "Ciruelo
cansa boca” procedente del Jardín Botánico de Plantas
A
IC
Medicinales “Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad
M
de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de
UI
Q
Trujillo, Departamento de La Libertad y fueron llevadas para
O
BI
su identificación taxonómica al Herbarium Truxillense (HUT)
Y
IA
de la Universidad Nacional de Trujillo.

AC
R M
2.2.1.2. Procesamiento de las hojas de Bunchosia

FA
DE
armeniaca
CA
Se procedió a seleccionar las hojas de B. armeniaca con el

TE
objetivo de realizar la separación de las partes deterioradas y

IO
BL
evitar la mezcla con otra especie. La droga fue

BI
convenientemente lavada y desecada. Las hojas se colocaron
extendidas sobre papel kraft en un lugar fresco y seco durante
24 horas. Luego fueron pasadas a bolsas hechas de papel
kraft y se llevó a estufa a temperatura de 40 ºC hasta peso
constante.
2.2.2. Obtención del extracto hidroalcohólico de las hojas de B.
armeniaca.
Se colocó 150 g de la droga a un balón de 500 mL con 250 mL
de etanol 50% v/v. luego se llevó a reflujo durante 2 horas, se
dejó en reposo 30 min y se filtró. Se concentró en baño maría
hasta obtener 150 ml del extracto hidroalcohólico.
A
2.2.3. Actividad Antimicótica 29, 30.
IC
M
UI
Se realizó empleando el método de difusión en discos según el
Q
Método de Kirby-Bauer.
O
BI
Y
2.2.3.1. Preparación de las diluciones del extracto hidroalcohólico:
IA
AC
En crioviales de 2ml se colocó el extracto hidroalcohólico y se realizó

R M
las siguientes diluciones:

FA
DE
25% 25 ul de extracto hidroalcohólico + 75 ul de Dimetilsulfoxido.

CA

TE
IO

BL
BI
Se utilizó Dimetilsulfoxido para luego sellar los crioviales y
guardarlos en refrigeración hasta realizar la prueba.
10
2.2.3.2. Ensayo de la actividad antimicótica por el Método de
Difusión en disco:
a. Preparación del Inóculo fúngico
Se tomó colonias del cultivo original del microorganismo (cepas) a
ensayar con el asa bacteriológica y se preparó una suspensión en 8
ml de solución salina fisiológica estéril. Se comparó con el patrón de
A
turbidez, ajustando la densidad de la suspensión problema a la del
IC
M
patrón: 1 de la escala de McFarland.
UI
Q
O
b. Preparación del Medio de Cultivo
BI
Y
Se utilizó como medio de cultivo para cepas de Cándida albicans,
IA
AC
Agar Sabouraud.
R M
Para la preparación del medio se procedió a calentar el agar en la

FA
cocina hasta su homogenización (mezcla con calor), posteriormente

DE
se enfrió y ajustó el pH, se esterilizó en autoclave a 121 ºC x 1atm (45

CA
min de pre esterilización y 15 min de esterilización).

TE
IO
Se agregó en placas Petri de 90x14 mm (15 mL c/u); hasta un grosor

BL
BI
homogéneo de aproximadamente 4 mm. Luego se dejó enfriar las
placas a temperatura ambiente por 40 minutos hasta que gelifique
antes de proceder a la siembra.
11
2.2.3.3. Siembra en las placas:
Después de haber ajustado la densidad del inóculo en la escala de
McFarland, se tomó 100 µl de éste con pipeta estéril y se vertió en
cada placa con agar Sabouraud, luego se procedió a realizar el
hisopado, finalmente se llevó a incubar a temperatura 37 °C.
2.2.3.4. Preparación de los discos:
A
IC
Se prepararón discos de 6 mm de diámetro empleando papel filtro
M
UI
Whatman Nº 2, se esterilizó en estufa a 180 ºC durante 2 horas, se
Q
conservó en frascos cerrados, luego se le colocó 10 µl por disco de
O
BI
cada una de las concentraciones del extracto hidroalcohólico
Y
IA
(25%,50%,75%).
AC
M
2.2.3.5. Aplicación de los discos:

R
FA
Sobre las placas sembradas se colocó los discos con las distintas
DE
concentraciones del extracto hidroalcohólico y también el disco de

CA
sensibilidad del antifúngico correspondiente presionando con

TE
IO
suavidad sobre la superficie del agar con una pinza estéril.

BL
BI
En una placa de 90 mm de diámetro se colocaron 3 discos que serán
distribuidos de manera que no se produzca superposición de los halos
de inhibición. Transcurrido 5 minutos, las placas se invirtieron y son
llevadas a incubar a 37 °C durante 24 horas.
12
2.2.3.6. Medición de los diámetros de inhibición del crecimiento
micótico:
Pasado el tiempo de 24 horas de incubación, se midió el diámetro de
cada halo o zona de inhibición (incluido el diámetro del disco) se
expresó en milímetros. Las mediciones se realizarón colocando una
regla sobre el reverso de la placa.
A
IC
M
UI
2.2.4. Determinación de la capacidad antioxidante del extracto
Q
O
hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca (ciruelo
cansa boca)
BI
Y
IA
AC
2.2.4.1. Fundamento del método:

R M
El fundamento del método descrito por Brand Williams et al,

FA
consiste en que el radical libre estable 2,2-difenil-1-

DE
picrilhidrazilo (DPPH°) tiene un electrón desapareado y es de

CA
TE
color azul-violeta, decolorándose hacia amarillo pálido por

IO
reacción con una sustancia capturadora de radicales libres; la

BL
absorbancia es medida espectrofotométricamente a 517 nm. La

BI
diferencia de absorbancias, permite obtener el porcentaje de
captación de radicales libres 31 - 34.
13
2.2.4.2. Preparación de la solución 2,2-difenil-1-picrilhidracilo
(DPPH°)
Se preparó una solución de DPPH° con etanol de 96° GL a una
concentración de DPPH° 0.1 mM 31 - 34.
2.2.4.3. Preparación de la recta de calibración para la solución de
radical DPPH° 31 - 34
.
A
IC
Procedimiento:
M
UI
- De la solución de DPPH° 0.1 mM se midió volúmenes de 2; 4; 6;
Q
O
8 y 10 mL; y se trasvasó a fiolas de 10 mL aforándolas con
BI
Y
etanol de 96º GL., para obtener concentraciones de 0,02; 0,04;
IA
AC
0,06; 0,08 y 0.1 mM respectivamente. (Cuadro N° 1)

R M
Concentración de Volumen de solución de

FA
Volumen de etanol 96° GL c.s.p.

solución de PPH° DPPH° 0,1 mM
DE
CA
0,02 mM 2 mL 10 mL
TE
0,04 mM 4 mL 10 mL
IO
BL
0,06 mM 6 mL 10 mL
BI
0,08 mM 8 mL 10 mL
0,1 mM 10 mL 10 mL
14
Cuadro N° 1: Concentración de solución de DPPHº para obtener la recta de
calibración.
- Se realizó un barrido espectrofotométrico con la solución DPPHº
0.1 mM para encontrar la longitud de onda de máxima absorbancia
- Se realizó tres lecturas de absorbancias en el espectrofotómetro a
520 nm, de las cuales se sacó un promedio, utilizándose un blanco
que consiste en etanol de 96 ºGL.
A
IC
- Se graficó las concentraciones versus las absorbancias para
M
UI
obtener la recta de calibración.
Q
O
2.2.4.4. Determinación de los porcentajes de captura del radical
BI
31 - 34
.
Y
DPPH°
IA
Procedimiento
AC
M
- En un set de 10 fiolas (problema), se adicionó en cada uno de ellos

R
FA
10 mL de la solución de DPPH° 0,1 mM.

DE
- Se tomó alícuotas de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 mL del extracto

CA
hidroalcohólico y se enfrentó a la solución de DPPH° 0,1 Mm.

TE
- Se realizó tres lecturas de cada sistema a una absorbancia de 520

IO
BL
nm, al minuto 30.

BI
- Se preparó un control (que consiste en 10 mL de solución de
DPPH° 0,1 mM) y se pasó a leer la absorbancia a 520 nm en el
espectrofotómetro.
- Como blanco se utilizó etanol de 96° GL.
15
- Posteriormente, se utilizó los valores de absorbancia de los tubos
problema y la absorbancia del tubo control, calculando el
porcentaje de radicales DPPHº capturado.
- Se calculó el porcentaje de radicales DPPHº capturados, con la
siguiente fórmula:
A
𝐴𝑏𝑠. 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚.−𝐴𝑏𝑠. 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
IC
% de captura de radicales DPPHº = x 100
𝐴𝑏𝑠. 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑚.
M
UI
Q
O
2.2.5. Análisis estadístico BI
Y
IA
Los datos fueron procesados en el programa Microsoft Excel

AC
M
2010. Caracterizados mediante parámetros estadísticos

R
FA
descriptivos: Media Aritmética (𝑥̃) y Desviación Estándar (∂).

DE
CA
TE
IO
BL
BI
16
III. RESULTADOS
Tabla 01. Resultado de la capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico
de las hojas de Bunchosia armeniaca
A
IC
Bunchosia armeniaca
M
UI
Actividad antioxidante IC 50 0,4810 mg/mL
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
17
Tabla Nº 02: Promedio de los halos de inhibición producidos por exposición del
extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa
boca” frente a Cándida albicans ATCC 10231.
PROMEDIO
Control negativo (0%) DMSO 0
A
Grupo experimental I Extracto hidroalcohólico al 7,176 ± 0,2
IC
M
25%
UI
Q
Grupo experimental II Extracto hidroalcohólico al 7,836 ± 0,2
O
50% BI
Y
Grupo experimental Extracto hidroalcohólico al 8,236 ± 0,2
IA
AC
III 75%
M
Leyenda:
R
FA
 Incluye diámetro del disco.

DE
CA
TE
IO
BL
BI
18
GRAFICO N 1: Promedio de los halos de inhibicion del

extracto hidroalcoholico de las hojas de Bunchosia
armeniaca frente a Cándida albicans ATCC 10231
9000 8,236
7,836
8000 7,176
7000
MILIMETROS
6000
5000
4000
3000
2000
1000 0
0
Control negativo Grupo experimental Grupo experimental Grupo experimental
(0%) I II III
A
PROMEDIO DE LOS HALOS DE INHIBICION
IC
M
UI
En el grafico Nº01, se aprecia que conforme aumenta la concentración del
Q
O
extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa
BI
Y
boca” aumenta el diámetro del halo de inhibición, es decir aumenta el efecto
IA
inhibitorio.
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
19
IV. DISCUSION
Es ampliamente conocido que el consumo de frutas está asociado a una menor
incidencia de enfermedades crónicas no transmisibles y envejecimiento. Es así
que, en busca de nuevas fuentes naturales con propiedades antioxidantes, se
ha realizado el presente trabajo de investigación cuyo objetivo es evaluar la
actividad antioxidante y antimicótica del extracto hidroalcohólico de las hojas de
A
Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca”, un fruto nativo del centro de
IC
M
América35.
UI
Q
O
En el presente trabajo de investigación para medir la capacidad antioxidante de
BI
una especie o sustancia se ha utilizado el método espectrofotométrico del
Y
IA
DPPHº basado en la estabilidad del radical 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPHº),

AC
la cual se atribuye a la deslocalización del electrón desapareado, esta

R M
deslocalización también le otorga la coloración violeta caracterizada por una

FA
DE
banda de absorción en solución etanólica de 520 nm 36

.
CA
Se determinó la capacidad antioxidante del extracto hidroalcohólico de las

TE
hojas de Bunchosia armeniaca la cual fue expresada como la concentración

IO
BL
necesaria para reducir al 50% la concentración inicial del DPPHº (IC50), la

BI
tabla 1 muestra los valores obtenidos mediante la correlación lineal,
encontrando un IC50 para extracto etanolico de 0,4810 mg/mL.
Un estudio realizado por Udaweediye R. (2016) en el cual utiliza el extracto
metanólico del fruto de Bunchosia armeniaca, con su artículo Compuestos
bioactivos y actividad antioxidante de la Bunchosia armeniaca mostro un
20
IC50 =0,981 mg/mL en la prueba de DPPHº, es decir mostro una actividad
atrapadora de radicales libres prometedora 37

.
Realizando una comparación entre los extractos se observa un menor
porcentaje de captura de radicales libres de DPPHº y menor IC50 en nuestro
proyecto que se utilizó las hojas en vez del fruto, esto es posible a que en este
extracto existen otras variedades de Fitoconstituyentes presentes que le
podrían estar dando esta capacidad antioxidante, como la presencia de
A
compuestos polifenólicos, taninos y alcaloides 38.
IC
M
UI
El trabajo realizo por Jan Tauchen et al. (2015) en su artículo Composición
Q
O
fenólica, actividades antioxidantes y antiproliferativas de plantas comestibles y
BI
medicinales de la Amazonía peruana, en el cual utilizo 23 extractos de plantas
Y
IA
medicinales entre ellas la Bunchosia armeniaca determinando su actividad

AC
antioxidante del pericarpio de esta planta mediante el método DPPH en medio

R M
FA
metanolico encontrando un IC50 de 1,5 ± 0,1 mg/mL 39

.
DE
En esta investigación se realizó el estudio en extracto metanólico del pericarpio

CA
se sabe por cantidad de compuestos antioxidantes difieren de acuerdo a la

TE
parte de la planta y el medio en el cual se utiliza, en nuestro estudio se utilizó

IO
etanol y las hojas de la planta, por ende, comparándolo con este articulo
BL
BI
nuestro proyecto tendría menor IC 50.
En la investigación de Sara de Fraga (2015) en su título Compuestos bioactivos
y actividad antioxidante de la Bunchosia glandulifera, utilizo la pulpa de esta
planta mediante el método DPPHº para determinar la capacidad antioxidante
en cual fue IC50 0,27 mg/mL DPPHº el cual presento actividad antioxidante
tanto por los compuestos bioactivos que encontró y mediante su IC 50 que
comparado con las investigaciones anteriores presenta una actividad
21
prometedora falta realizar más estudios para poder tener más información, de
acuerdo a estos artículos nuestros valores encontrados estarían dentro del
rango de actividad antioxidante 40

.
Un trabajo realizado por Vanesa P. en el 2017 con el título “Estructura química
de algunos componentes del extracto etanólico del fruto Bunchosia Armeniaca
(Cansa boca) con actividad antioxidante y antimicrobiana” evaluó la actividad
antioxidante del extracto etanólico de la cansa boca aplicando el método
A
IC
DPPHº obteniendo IC 50 de 2,963mg/ml, como resultado, que es levemente
M
UI
inferior comparado con el estándar Vitamina C (IC 50 = 3,275 mg/ml) 41.
Q
O
BI
Con respecto a la determinación de la actividad antimicótica, en la tabla 2 se
Y
muestran los resultados de los diámetros de los halos de inhibición de las
IA
AC
diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico de las hojas de

M
Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca”; así tenemos, para el grupo

R
FA
experimental I (extracto hidroalcohólico al 25%) un promedio de 7,176 mm de

DE
diámetro y para el grupo experimental II (extracto hidroalcohólico al 50%) 7,836

CA
mm de diámetro y para el grupo experimental III (extracto hidroalcohólico al

TE
75%) registro un promedio de 8,236 mm de diámetro.

IO
BL
Se encontró que para el grupo control negativo no se obtuvo halos de

BI
inhibición. Es así que el promedio del halo de inhibición del grupo experimental
III (extracto hidroalcohólico al 75%) fue mayor que el de los otros grupos (a
mayor concentración del extracto los halos de inhibición fueron mayores).
Si bien es cierto no hay trabajos previos, en la especie B. armeniaca, con los
cuales se pueda contrastar el trabajo realizado; existen investigaciones sobre la
familia Malpigiácea, como el trabajo realizado por Mijail y Ali, se encontró que
22
la actividad antimicótica del extracto etanólico de Byrsonima crassifolia (Indano)
sobre cepas de Cándida albicans y Trichophiton rubrum donde se obtuvo CMI
de 8 mg/mL frente a Cándida albicans mas no se obtuvo actividad frente a
Trichophiton rubrum, concluyendo que el extracto etanolico de B. crassiflolia
tiene actividad antifúngica. 42.
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
23
V. CONCLUSIONES.
1. Se demostró la capacidad antioxidante del aceite esencial de las hojas
de B. armeniaca según el método con DPPHº, encontrando un IC50 de
0,4810 mg/mL
2. El porcentaje de captación de DPPHº por las hojas de B. armeniaca es
A
IC
mayor a medida que se aumenta la concentración del extracto.
M
UI
3. El extracto hidroalcohólico obtenido de las hojas de Bunchosia armeniaca
Q
O
“ciruelo cansa boca” posee una actividad antimicótica mínima frente a
BI
Y
Cándida albicans a medida que aumentan las concentraciones del extracto
IA
AC
hidroalcohólico (25%, 50%, 75%) se obtiene un mayor diámetro del halo de

M
inhibición de Cándida albicans ATCC 10231.

R
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
24
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30
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
ANEXOS
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
31
I. IDENTIFICACION TAXONOMICA
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
Fig. 1: Identificación y clasificación taxonómica.

BI
32
II. PREPARACION DE LA ESPECIE VEGETAL
Recoleccion y preparacion de las hojas de Bunchosia armeniaca
A
IC
M
UI
Q
O
BI
Y
IA
AC
M
OBTENCION DEL EXTRACTO HIDROALCOHOLICO

R
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Fig. 2: Recolección, preparación y obtención del extracto hidroalcohólico de las
hojas de Bunchosia armeniaca.
33
III. CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
A
IC
M
UI
Q
IV. ACTIVIDAD ANTIMICOTICA
O
BI
Y
IA
AC
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
Fig. 3: Determinación de la actividad antimicótica frente a Cándida albicans
34
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE
Tabla 03. Muestras problema del extracto hidroalcohólico de las hojas de
Bunchosia armeniaca.
Cc extracto (ppm) Abs ̅ Abs

𝒙 % captura
P 0 0.50046 0.5003 0.0000
A
IC
0.5005
M
0.49994
UI
Q
20000 0.41816 0.4182 16.4048
O
M-1
0.41849
BI
Y
IA
0.41803
AC
M-2 40000 0.33216 0.3322 33.6018

R M
0.33291
FA
DE
0.3315
CA
M-3 60000 0.25879 0.2588 48.2777

TE
0.25899
IO
0.25852
BL
BI
M-4 80000 0.13422 0.1404 71.9437
0.13353
0.153347
M-5 100000 8.97E-02 0.0896 82.0981
8.94E-02
8.96E-02
35
Grafico 02. Capacidad antioxidante expresado como “Concentración necesaria
del antioxidante para reducir en un 50% la concentración inicial del DPPHº
(IC50)” dele extracto hidroalcoholico de las hojas de Bunchosia armeniaca
(cansa boca).
Determinacion deIC50
90.0000
80.0000
A
70.0000
% captura DPPH
IC
60.0000
M
50.0000
UI
40.0000 y = 0.0008x - 0.4533
30.0000
Q
R² = 0.9895
20.0000
O
10.0000
0.0000 BI
Y
0 20000 40000 60000 80000 100000 120000
IA
[] extracto (ppm)
AC
M
IC50= (50 - b)/0.0103

R
FA
DE
IC50 0,4810 mg/mL

CA
TE
Imagen 01. Espectrofotometría del extracto realizando el IC 50

IO
BL
BI
36
Tabla 04. Curva de calibración del extracto hidroalcoholico de las hojas de
Bunchosia armeniaca
Cc (ppm) X Cc Abs (nm) X Abs
(ppm) (nm)
st0 4 4 5.95E-02 5.90E-02
4 5.87E-02
4 5.87E-02
A
IC
st1 8 8 9.77E-02 0.1003
M
UI
8 0.10179
Q
O
8 0.10138
BI
Y
st2 16 16 0.19981 0.1999
IA
16 0.1996
AC
M
16 0.20024
R
FA
st3 24 24 0.29559 0.2949

DE
24 0.29507
CA
24 0.29417
TE
st4 32 32 0.39723 0.3972

IO
BL
32 0.39703
BI
32 0.39719
st5 40 40 0.50046 0.5003
40 0.5005
40 0.49994
37
Grafico 03. Curva de calibración del extracto hidroalcoholico de las hojas de
Bunchosia armeniaca.
DPPH curva de calibracion

6.00E-01
5.00E-01
4.00E-01
Absorbancia
y = 0.0123x + 0.0044
3.00E-01 R² = 0.9995
A
IC
2.00E-01
M
1.00E-01
UI
Q
0.00E+00
O
0 10 20 30 40 50
Concentración (ppm) BI
Y
IA
AC
Imagen 02.
R M
FA
DE
CA
TE
IO
BL
BI
38
ACTIVIDAD ANTIMICÓTICA
Anexo 2.- Halos de inhibición (mm) del extracto hidroalcohólico de las hojas
Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca” frente a Cándida albicans ATCC
10231
TABLA Nº1: Halos de inhibición por primera exposición del extracto
hidroalcohólico de Bunchosia armeniaca “ciruelo cansa boca” frente a
A
Cándida albicans ATCC 10231
IC
M
Grupo Grupo Grupo
UI
Q
Control negativo experimental experimental experimental
O
(0%) (25%) BI (50%) (75%)
Y
IA
0 0 0 - - - 1 2 1 - 3 -
AC
0 0 0 1 - - - 2 - 1 3 1
R M
0 0 0 - - 1 - 2 - - 2 3
FA
DE
CA
TABLA Nº2: Halos de inhibición por segunda exposición del extracto

TE

IO
BL

BI
Grupo Grupo Grupo
(0%) (25%) (50%) (75%)
0 0 0 - 1 - - - 1 2 1 1
0 0 0 - 2 1 - 2 2 2 3 3
0 0 0 - - 1 - - 2 3 2 3
39
TABLA Nº3: Halos de inhibición por tercera exposición del extracto
Grupo Grupo Grupo
(0%) (25%) (50%) (75%)
0 0 0 1 - 1 2 2 - 2 3 2
A
IC
0 0 0 2 - 1 - 2 - 3 2 2
M
UI
0 0 0 1 2 1 3 2 2 2 2 3
Q
O
BI
TABLA Nº4.- Promedio por repetición de los halos de inhibición producidos por
Y
IA
exposición del extracto hidroalcohólico de las hojas de Bunchosia armeniaca

AC
“ciruelo de cansa boca” frente a Cándida albicans ATCC

R M
FA
10231
DE
REPETICION DIAMETROS (mm)

CA
Control (-) Gi Gii Giii

TE
1 0 1 1,6 2,16
IO
BL
2 0 1,25 1,75 2,22

BI
3 0 1,28 2,16 2,33
Leyenda:
Control (-): DMSO q.p.
Gi: Extracto hidroalcohólico al 25%, Gii: Extracto hidroalcohólico al 50%,
Giii: Extracto hidroalcohólico al 75%.
º Incluye diámetro del disco
40

Antifungico Cansa Boca

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Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTORES : POMA AVILA, Oliver Pierre

MEDINA JUAREZ, Ruth Guadalupe

ASESOR : Dr. RUIZ REYES, Segundo Guillermo

puesto en mi camino a aquellas personas que han sido mi soporte y compañía.

consejos, por todo su amor.

permitirme aprender más de la vida a su lado.

para proponerme y alcanzar mis objetivos.

adelante y ser mi compañía en todos los momentos de mi vida

hombres y mujeres del mañana, sobre la base de valores morales, éticos y

habernos ayudado a culminar nuestros estudios.

conducción del desarrollo de este trabajo de investigación.

Agradecemos también, a los respetables señores miembros del jurado por el

interés y sugerencias para la realización de este trabajo.

Ruth Guadalupe y Oliver Pierre

SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:

En cumplimiento de las normas dispuestas en el reglamento interno de la Facultad de

Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a su

consideración la Tesis II intitulado:

Con el Propósito de optar el Grado Académico de Bachiller en Farmacia y Bioquímica.

Dejamos a vuestra consideración señores miembros del jurado la calificación del

Trujillo, Setiembre del 2018

Medina Juárez Poma Ávila

En el presente trabajo se determinó la evaluación de la actividad antioxidante y

antimicótica del extracto hidroalcohólico de la hoja de Bunchosia armeniaca “ciruelo

expresados en porcentaje de captura del radical 2,2-Difenil-1-Picrilhidrazilo (DPPHº)

encontrando un IC50 de 0,4810 mg/mL teniendo capacidad antioxidante prometedora

comparado con los artículos hallados. El efecto antimicótico se realizó en cepas de

Cándida albicans ATCC 10231 empleando el método de Kirby-Bauer (difusión en

agar). Para el efecto antifúngico, el grupo experimental I (extracto hidroalcohólico al

25%) mostro un promedio de 7,176 mm de diámetro, para el grupo experimental II

(extracto hidroalcohólico al 50%) mostro un promedio de 7,836 mm de diámetro y

para el grupo experimental III (extracto hidroalcohólico al 75%) de mayor

concentración presento un promedio de 8,236 mm de diámetro.

Palabras claves: Bunchosia armeniaca, Cándida albicans, extracto hidroalcohólico

0, 1 Mm. finding an IC50 of 0.4810 mg / mL having an improved antioxidant capacity with

experimental group I (25% hydroalcoholic extract) showed an average of 7.176 mm in

diameter, for experimental group II (hydroalcoholic extract at 50%) it showed an average of

higher concentration with an average of 8.236 mm in diameter.

Keywords: Armenian bunchosia, Cándida albicans, hydroalcoholic extract

II. MATERIAL Y METODO…………………………………… 7

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS………………………. 25

VII. ANEXOS …………………………………………………......…... 31

para su alimentación y prevención de enfermedades; estas últimas llamadas

plantas medicinales, utilizada para diversas patologías, principalmente a partir

de los extractos de las hojas que tienen propiedades antibacterianas como

enfermedades más frecuentes tenemos a las crónico-degenerativas que son

las principales causas de muerte en el mundo 2,3.

teoría propone que, debido a la variación de los mecanismos antioxidantes,

genera y se acumulan los radicales libres cuya consecuencia directa es la

presencia de un estrés oxidativo que destruye estructuras celulares, lo que

conlleva luego a la muerte celular 4, 5, 6.

Los radicales libres es una especie química ya sea atómica o molecular,

inestables de alta energía capaz de existir independientemente y que contiene

uno o más electrones desapareados en el orbital más externo. Estos electrones

generan un campo eléctrico que no es anulado, lo que ocasiona que la especie

química sea paramagnética y por ende altamente reactivo, capaz de actuar en

los sistemas biológicos del organismo causando daños irreversibles 7, 8.

día. El problema para nuestra salud se produce cuando nuestro organismo