7. Titulacion de Anticuerpos.

Principio: La titulacin de anticuerpos es un mtodo semi-cuantitativo determinar la concentracin de dichos anticuerpos en muestras de suero par comparar la intensidad de la expresin antignica en distintas muestras de glbulos rojos. Uso: Las aplicaciones habituales de los estudios de titulacin de anticuerpos en banco de sangre son: 1- Estimar la actividad de los anticuerpos en las embarazadas aloinmunizadas, para establecer si y cuando efectuar investigaciones invasoras ms complejas del estado del feto. 2- Definir la especificidad de los autoanticuerpos. 3- Caracterizar los anticuerpos con ttulos altos y escasa avidez, rasgos comunes de aquellos contra antgenos de los sistemas Knops y Chid-Rodgers, Csa y JMH. 4- Observar el efecto de los reactivos sulfhidrilo sobre el comportamiento de los anticuerpos, para reconocer la clase de inmunoglobulina (IgG IgM). Para los estudios de titulacin tiles en el monitoreo de los anticuerpos significativos en las embarazadas. Procedimiento para titulacin Muestra utilizada: Suero (Anticuerpos a titular) Reactivos: 1. Glbulos rojos que expresen antgenos correspondientes a los anticuerpos en cuestin, suspendidas del 2-5% en solucin salina. 2. Solucin Salina aunque se puede utilizar, para la titulacin, albumina. Procedimiento tcnico: -Rotular 10 tubos de ensayo de acuerdo con la dilucin del suero (1:1, 1:2, etc.) -Colocar 1 volumen de solucin salina en cada tubo excepto en el primero que no es el suero diluido (1:1) -Colocar 1 volumen igual de suero en los primeros 2 tubos (1:1 y 1:2) y transferir del segundo tubo un volumen al tubo siguiente y asi sucesivamente utilizando siempre pipetas limpias o cambio de puntas por cada dilucin. -Transferir 2 gotas de cada suero diluido en otros tubos previa y debidamente rotulado y agregar una gota de suspensin de glbulos rojos. -Mezclar bien y evaluar con la tcnica serolgica apropiada para los anticuerpos en estudio. -Examinar los resultados, graduar y registrar las reacciones Interpretacin de los resultados 1- Observar la dilucin ms alta que produjo una aglutinacin macroscpica de 1+. El titulo es la inversa de la dilucin y se informa como, ejemplo 32 y no 1:32. Si no se alcanzo punto final en el suero mas diluido preparar y evaluar diluciones adicionales.

Variables que pueden interferir -Es esencial pipetear con cuidado. Se aconseja usar pipetas con extremos descartables que se cambian despus de cada dilucin -Es importante respetar el periodo de incubacin, la duracin y potencia de centrifugacin optimos. -La antigedad, el fenotipo y la concentracin de las clulas influyen en los resultados. -Es casi imposible lograr resultados reproducibles en su totalidad. Las comparaciones solo son validas cuando las muestras se analizan en forma simultnea. -Las mediciones son mas exactas en los volmenes grandes que en los pequeos; la tcnica de dilucin maestra ofrece resultados mas confiables que las individuales.