UNIVERSIDAD DE SAN MARTÍN DE PORRES – FILIAL NORTE

UNIVERSIDAD DE SAN MARTIN DE PORRES

PROGRAMA DE ODONTOLOGÍA
PRÁCTICA N°3

CURSO: BIOQUIMICA

TEMA: SEMANA N°3 NOTA

CICLO: SEGUNDO

DOCENTE: MSc. Mblgo. WILHELM PADILLA

Docente Responsable de la Asignatura de Bioquímica

GRUPO: LUNES MARTES JUEVES SÁBADO

FECHA DE PRÁCTICA: 16/03/2024

GRUPO DE ESTUDIANTES:
N° Apellidos y Nombres Asistió No Asistió Tardanza
1.- Malca Tello Maria Briggithy X
2.- Edquen Vasquez Luz Judith X
3.- Silva Minchola Cinthia X
4.- Montenegro Cieza Margiory X
5.- Perez Vergara Zary X
6 Rivera Seminario Anderson X
7.- Quiroz Supo Andrea X

2024- I
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Práctica N°3: Determinación de los niveles de proteínas

totales y albúmina a partir de suero de estudiantes de la
facultad de odontología.

 OBJETIVO GENERAL:

Comprender los fundamentos químicos que permiten la cuantificación de proteínas

totales, y albúmina en suero y aplicar las técnicas de laboratorio actuales para el
desarrollo de destrezas procedimentales requeridas para el óptimo desempeño
profesional en el laboratorio clínico

 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

1. Cuantificar proteínas totales en suero humano.

2. Cuantificar albúmina en suero humano.

3. Aplicar la fórmula del proteinograma y su importancia clínica

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INTRODUCCIÓN
Las proteínas son compuestos orgánicos macromoleculares ampliamente
distribuidos en el organismo y esenciales para la vida. Actúan como elementos
estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas,
anticuerpos factores de coagulación. La proteína más abundante en plasma es la
albúmina. Una de sus funciones más importantes es la de permitir el transporte de
ácidos grasos, hormonas esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre
son insolubles en medio acuoso1.Tanto las proteínas como la albúmina, son de gran
importancia. La proteína total y la albúmina pueden utilizarse, junto con otras
pruebas, incluidas en perfiles como el perfil metabólico para ayudar a evaluar el
estado general de salud2.Dicho examen mide la cantidad total de dos clases de
proteínas encontradas en la porción líquida de la sangre: albúmina y globulina. Las
proteínas son partes importantes de todas las células y tejidos. Si los niveles de
proteínas totales o los resultados de la relación A/G no son normales, eso puede
ser signo de un problema de salud grave, como enfermedades del riñon, hígado o
problemas nutricionales4.

La importancia de los niveles de proteína en sangre radica en sus roles

multifacéticos. Por un lado, las proteínas no solo "actúan en la inactivación de
compuestos tóxicos y en la defensa contra agentes invasores" 5, sino que también
desempeñan un papel esencial en la estructura y función celular, contribuyendo a
la formación de enzimas, anticuerpos y hormonas. Por otro lado, la significativa
repercusión de "la proteinuria en la salud pública, que afecta a varios cientos de
millones de personas en el mundo". Dado que "la proteinuria se debe investigar,
idealmente, luego de la pubertad o después de 5 años de iniciada la enfermedad" 8,
se hace evidente que comprender y mantener estos niveles adecuados no solo es
esencial para el funcionamiento óptimo del organismo, sino también para abordar
problemas de salud más amplios.
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MATERIALES, REACTIVOS y EQUIPOS

REACTIVOS PROVISTOS:
A. Reactivo A: Complejo EDTA/Cu 13 mmol/l en hidróxido de sodio 875 mmol/l y
alquil aril poliéter (AAP).
B. Reactivo B: Solución de 3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfonftaleína (en polioxietilén
lauril éter).
S. Standard (Suero Patrón): Solución de albúmina y globulinas de origen bovino,
con título conocido de proteínas. Consultar los valores asignados en el rótulo,
debido a que los mismos son lotes específicos.
MATERIAL REQUERIDO:
Espectrofotómetro o fotocolorímetro: Cuantifica la concentración de
composiciones en una o una variedad de longitudes de onda.
Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados: Absorbe y
transfiere pequeños volúmenes de líquidos para permitir su manejo
Tubos o cubetas espectrofotométricas: Usado para medir la absorbencia de una
longitud de onda específica.
Reloj o timer: Nos permite programar el encendido y apagado de diferentes
dispositivos.
Tubos de recolección de sangre (tapa lila y tapa roja)
Centrífuga: Utilizada para separar solutos de sus solventes
Cronómetro: Usado para contabilizar el tiempo que debe estar un reactivo en algún
instrumento
Máquina de baño maría: se usa para calentar reactivos (siempre a 37°)

PROCEDIMIENTO (METODOLOGIA)
• DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES
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-Se tomo la muestra de sangre del paciente, previamente desinfectada el área de

extracción (sangre venosa) en un tubo tapa roja

-Llevamos a la centrifuga (recuerda si solo vas a trabajar con una muestra, coloca
un tubo de agua en la misma medida del tubo de la muestra y asi equilibrar la
centrifuga y no ocasionar accidentes), programamos la perilla del tiempo por 5
minutos.

-Una vez cumplido el tiempo, retiramos las muestras de la centrifuga y

procedemos a preparar los reactivos en los tubos de ensayo.

CONDICIONES DE REACCION

 Longitud de onda: 546 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con

filtro verde (520-560 nm).
 Temperatura de reacción: 37°C
 Tiempo de reacción: 5 minutos.
 Volumen de muestra: 20 ul

En tres tubos marcamos B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:

B S D
Reactivo de Biuret 1ml 1ml 1ml
Agua destilada 20ul - -
Standard - 20ul -
Muestra(suero) - - 20ul

 Calibramos el espectrofotómetro a: 546 nm, manipulamos las cubetas

especiales del espectrofotómetro, colocamos la muestra dentro de las
cubetas y luego procedemos a insertarlas en el portamuestras para que el
espectrofotómetro haga las mediciones adecuadamente.
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VALORES DE REFERENCIA

Se determinó el contenido de proteínas totales en suero de personas sanas, de

ambos sexos, con alimentación mixta normal y edades entre 17 y 40 años;
obteniéndose los siguientes rangos:

 Proteínas totales: 6,1 a 7,9 g/dl

RESULTADOS
CALCULO DE LOS RESULTADOS

Empleando el Standard tal como se indica en PROCEDIMIENTO, los cálculos se

realizan como sigue:

Proteínas Totales (g/dl) = D x f f= P.T. (g/dl)

S

Desarrollo:

 Proteínas totales (Kevin paredes)

P.T 0.63 x6
0.226
P. T= 1.60 x 6

= 5.84 g/dL
P.T= 9.3 g/dL

CONCLUSIONES
 La obtención de suero es esencial para realizar sobre las concentraciones
de proteínas totales y albúmina en el cuerpo, siendo la clave para el
diagnóstico de enfermedades y el seguimiento de una buena salud.
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 Los cálculos finales realizados se basan en comparar la absorbancia de las

muestras desconocidas con las absorbancias de estándares de proteínas
totales y albúmina, con la finalidad de conocer las proteínas presentes en
las muestras y evaluar la relación A/G en la albúmina.

 Las condiciones de longitud de onda, temperatura, volumen y tiempo de

reacción fueron establecidas para las determinaciones finales,
proporcionando resultados racionales.

 Los rangos bajos de proteínas pueden ser a causa de una mala

alimentación, enfermedades hepáticas o renales, malnutrición, uso excesivo
de medicamentos, gracias al análisis se pueden tomar las medidas
adecuadas, para mantenernos en el rango.

REFERENCIAS
1. Clinica S. Método colorimétrico para la determinación de Proteínas Totales y
Albúmina en suero [Internet]. Wiener-lab.com. [citado el 21 de agosto de 2023].
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Disponible en: https://access.wiener-

lab.com/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/proti2_sp.pdf

2. Proteínas totales, cociente albúmina-globulina (A/G) [Internet]. Labtestsonline.es.

[citado el 21 de agosto de 2023]. Disponible en:
https://www.labtestsonline.es/tests/proteinas-totales-cociente-albumina-globulina-
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3. Proteína total [Internet]. Medlineplus.gov. [citado el 21 de agosto de 2023].

Disponible en: https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003483.htm

4. Proteínas totales y relación albúmina/globulina (A/G) [Internet]. Medlineplus.gov.

[citado el 21 de agosto de 2023]. Disponible en:
https://medlineplus.gov/spanish/pruebas-de-laboratorio/proteinas-totales-y-
relacion-albumina-globulinaa-g/

5. Puente C, Barrientos B, Soto M, Perez R, Puente O, Pelaez C, et al.

Determinación de valores de proteínas totales, albumina y globulinas en niños de 1
a 5 años hospitales de clínicas santa bárbara. Sucre. Abril-mayo 2008 [Internet].
Usfx.bo. [citado el 22 de agosto de 2023]. Disponible en:
https://handbook.usfx.bo/nueva/Dicyt/Handbooks/Ciencias%20de%20la%20Salud
_2/Ciencias%20de%20la%20Salud_Handbook_Vol%20I/PAPERS_28/Ciencias%2
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6. Carvajal-Carvajal C. Proteinuria y microalbuminuria. Med Leg Costa Rica

[Internet]. 2017 [citado el 22 de agosto de 2023];34(1):194–201. Disponible en:
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7. Laboratorio Químico: Instrumentos y materiales [Internet]. INFINITIA Industrial

Consulting. Infinitia Research; 2020 [citado el 15 de agosto de 2023]. Disponible en:
https://www.infinitiaresearch.com/noticias/materiales-instrumentos-laboratorio-
quimico/
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8. Aguirre Puig P, Orallo Morán MA, Pereira Matalobos D, Prieto Requeijo P. Papel
actual de la albúmina en cuidados críticos. Rev Esp Anestesiol Reanim [Internet].
2014;61(9):497–504. Disponible en:
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S003493561400156X

9. Álvarez-Cordovés MM, Mirpuri-Mirpuri PG, Pérez-Monje A. Diagnóstico de

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Disponible en: https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003483.htm

11. Exceso de proteínas durante el embarazo [Internet]. Consumer |. Eroski

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embarazo.html

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13. de Proteínas Totales Y Albúminas Séricas En Pacientes Adultos Para Evitar

Problemas Nutricionales Y Enfermedades Metabólicas VR. FACULTAD DE
CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
[Internet]. Edu.ec. [citado el 22 de agosto de 2023]. Disponible en:
http://repositorio.utmachala.edu.ec/bitstream/48000/14684/1/8264_CHALACO%20
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14.Pruebas Funcionales Hepáticas. (s/f). Scribd. Recuperado el 21 de agosto de

2023, de https://es.scribd.com/document/486750574/PRUEBAS FUNCIONALES-
HEPATICAS

15. Suárez López M. M., Kizlansky A., López L. B.. Evaluación de la calidad de las
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16. 6. Scheffer L. Balcells. La Clínica y el Laboratorio. 2020 [citado el 22 de agosto

de 2023]; Disponible en:
https://www.academia.edu/42147056/Balcells_La_Cl%C3%ADnica_y_el_Laborato
rio
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ANEXOS
Anexos I. Materiales usados en la practica

Imagen 1. Reactivos para proteínas Imagen 2. Standard (Suero Patrón)

totales (color azul) y reconocimiento
de albúmina (color amarillo)

Imagen 3. Pipetas automáticas de Imagen 4. Tubos para suero

rangos variables recolectado (tapa roja)

Imagen 5. Cubetas Imagen 6. Centrifuga para obtención

espectrofotométricas de suero
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Imagen 7. Espectrofotómetro Imagen 8. Maquina de baño maría a

37°

Imagen 8. Cronómetro o
temporizador
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CUESTIONARIO
1. Explicar cómo se realiza la determinación de proteínas totales en
suero sanguíneo

a. Preparación de la muestra: Se toma una muestra de suero

sanguíneo, que es la porción líquida de la sangre obtenida después
de la coagulación y la separación de las células sanguíneas.
b. Métodos de determinación: Hay varios métodos para determinar
las proteínas totales en suero, entre los más comunes se
encuentran:
 Método de biuret: Este es uno de los métodos más
utilizados. Consiste en mezclar la muestra de suero con una
solución de reactivo de biuret, que contiene cobre en una
forma alcalina. Las proteínas en la muestra reaccionan con el
reactivo de biuret para formar un complejo de color púrpura.
 Método de absorción a 280 nm: Algunas proteínas, como
las proteínas séricas, absorben luz a una longitud de onda de
280 nanómetros (nm). Este método se basa en la medición de
la absorbancia de la muestra a esta longitud de onda para
calcular la concentración de proteínas totales.

c. Calibración y estándares: Antes de realizar la determinación en la

muestra de suero, es necesario calibrar el equipo utilizando
estándares de proteínas de concentraciones conocidas.
d. Procedimiento de análisis: Una vez que el equipo está calibrado y
listo, se procede a analizar la muestra de suero siguiendo las
instrucciones específicas del método elegido (biuret, absorción a 280
nm u otro método). La muestra se coloca en el equipo de medición,
se registra la absorbancia o se mide el color desarrollado y se utiliza
la curva de calibración para calcular la concentración de proteínas
totales en la muestra.
e. Interpretación de resultados: Una vez completado el análisis, se
obtiene un valor numérico que representa la concentración de
proteínas totales en el suero sanguíneo.

2. Explicar por qué es importante el uso de espectrofotómetro en la

determinación de proteínas totales en suero sanguíneo

a. Precisión y exactitud: El espectrofotómetro permite una medición

precisa de la absorbancia de la muestra de suero a una longitud de
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onda específica, lo que proporciona resultados más exactos y

confiables en comparación con métodos visuales o colorimétricos
menos precisos.
b. Sensibilidad: Los espectrofotómetros son capaces de detectar
cambios pequeños en la absorbancia de la muestra, lo que los hace
sensibles para medir concentraciones bajas de proteínas en suero
sanguíneo, como ocurre en algunos trastornos de salud.
c. Rango de medición: Estos instrumentos tienen un amplio rango de
medición, lo que permite analizar muestras con diferentes
concentraciones de proteínas sin necesidad de diluciones excesivas
o concentraciones muy altas que podrían afectar la precisión de los
resultados.
d. Curva de calibración: El espectrofotómetro se utiliza junto con
estándares de proteínas de concentraciones conocidas para
construir una curva de calibración.
e. Automatización y rapidez: Los modernos espectrofotómetros
pueden ser automatizados, lo que agiliza el proceso de análisis al
reducir el tiempo requerido para realizar las mediciones y los
cálculos.

3. Explicar las funciones que cumple la ALBUMINA en el organismo

a. Mantenimiento de la presión coloidosmótica: La albúmina es una

proteína que contribuye significativamente a mantener la presión
coloidosmótica en el sistema circulatorio. Esta presión es necesaria
para que el agua y otras moléculas permanezcan en el interior de los
vasos sanguíneos y no se filtren hacia los tejidos.
b. Transporte de sustancias: La albúmina actúa como un
transportador de diversas sustancias en la sangre. Por ejemplo, se
une a hormonas como la tiroxina y hormonas esteroides, transporta
bilirrubina (un producto de la degradación de la hemoglobina), ácidos
grasos, calcio, y otras moléculas importantes para el metabolismo y
la regulación del cuerpo.
c. Regulación del pH sanguíneo: La albúmina tiene la capacidad de
actuar como un tampón, ayudando a mantener el equilibrio del pH
sanguíneo. Esto es importante para asegurar que las reacciones
químicas y las funciones celulares se desarrollen en un entorno con
un pH adecuado para el funcionamiento óptimo del organismo.
d. Defensa inmunológica: Puede desempeñar un papel en la defensa
inmunológica al unirse a ciertas moléculas que participan en
respuestas inflamatorias y de defensa frente a patógenos.
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e. Regulación del volumen sanguíneo: La albúmina, al contribuir a

mantener la presión coloidosmótica, ayuda a regular el volumen
sanguíneo total.

4. Explicar en qué consiste la prueba de PERFIL HEPATICO para detectar

enfermedades en el hígado

5. Mencione los componentes de las distintas fracciones de las

PROTEINAS TOTALES
6. Explica la diferencia entre absorbancia y tramitancia en la prueba de
determinación de PROTEINAS TOTALES

7. Explicar en qué consiste la ELECTROFORESIS para proteínas.