FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

BIOQUÍMICA

INFORME 2: DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN SÉRICA

DE PROTEÍNAS TOTALES Y FRACCIONADAS

GRUPO:

INTEGRANTES CARRERA PORCENTAJE

CARRILLO DELGADO, MEDICINA HUMANA 100%

LUCIANA MICAELA

PÉREZ VARGAS, MARIA ENFERMERÍA 100%

PAULA

ROCHABRUN VALDEZ, NUTRICIÓN Y DIETÉTICA 100%

YESSENIA

DOCENTE: HUARANCA, RUDY

SECCIÓN: 3D2

HORA: 16:10 - 18:00

2022-2
 PRÁCTICA N°2 “DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN SÉRICA DE
PROTEÍNAS TOTALES Y FRACCIONADAS”

1. Introducción

Según el Consejo Europeo de Información sobre la Alimentación, 2019 “nuestro cuerpo

necesita proteínas en la dieta para suministrar aminoácidos para el crecimiento y
mantenimiento de nuestras células y tejidos.” Las proteínas son las macromoléculas
más abundantes en el organismo humano. Todas las células y tejidos están
constituidos por proteínas. Estas están formadas por una o varias largas cadenas de
residuos de aminoácidos. Pueden presentar estructura primaria, secundaria, terciaria y
algunas, cuaternaria.

Existen dos tipos principales: albúmina y globulinas, según la Biblioteca Nacional de

Medicina las proteínas son partes importantes de todas las células y tejidos. La
albúmina ayuda a impedir que se escape líquido de los vasos sanguíneos. También
transporta químicos a través de su sangre. Las globulinas son una parte importante del
sistema inmunitario.

Existen distintos métodos para la cuantificación de proteínas como: biuret, Bradford,

BCA, el método de Lowry. Siendo el de Biuret usado ampliamente en laboratorios
clínicos por su bajo costo, alta especificidad para proteínas y por mostrar pocas
interferencias.

La determinación de proteínas totales y globulinas es importante para el diagnóstico de

una serie de condiciones o patologías como enfermedad del riñón e hígado, además
revelan cierto grado de inflamación en el organismo. En este informe demostraremos la
importancia de la determinación de proteínas totales y estructuradas al determinar los
niveles de proteínas y albúminas de cada uno de los casos que se nos presente,
además de prescribir un diagnóstico y brindar recomendaciones.

La sangre es un tejido que circula dentro de un sistema virtualmente cerrado, el de los

vasos sanguíneos. La sangre está compuesta por elementos sólidos, eritrocitos,
leucocitos y plaquetas, suspendidos en un medio líquido, el plasma. El plasma consiste
en agua, electrolitos, metabolitos, nutrientes, proteínas y hormonas. Una vez que la
sangre se ha coagulado, la fase líquida remanente se denomina suero, este carece de
factores de coagulación, que normalmente están presentes en el plasma, pero que ha
sido consumido durante el proceso de coagulación.

El estudio de las proteínas se utiliza para el seguimiento de las enfermedades y no

para diagnóstico o muy rara vez. Por eso es importante tener el valor normal del
paciente y ver qué pasa cuando entra en estado de enfermedad.
En la actualidad se han aislado y caracterizado alrededor de 100 proteínas, sin
embargo, las funciones de una gran parte de ella permanecen aún desconocidas. Las
proteínas purificadas difieren en su movilidad electroforética y peso molecular, también
son muy diferentes por su composición química; algunas contienen lípidos
(lipoproteínas), otros metales (transferrina, ceruloplasmina). La mayoría son
glicoproteínas, presentando en algunos casos variaciones genéticas.

Hoy se acepta clasificar a las proteínas plasmáticas de acuerdo con sus funciones:

• Proteínas con función de transporte y asociados a sistemas buffer.

• Proteínas reactantes de fase aguda (se llaman así porque en situaciones de estrés,
procesos inflamatorios o traumatismos aumentan su concentración para compensar
esos estados).

• Proteínas sintetizadas por el sistema inmunocompetente.

Un gran número de las proteínas conocidas tiene micro heterogeneidad, esto es

debido en general a la cantidad variable de ácido siálico y en menor proporción
a la sustitución de aminoácidos en la cadena polipeptídica. Actualmente se
conocen las variables genéticas o polimorfismo genético de muchas proteínas.
Estas se deben a las mutaciones en las cadenas polipeptídicas de las proteínas.
Por ejemplo, el polimorfismo de la haptoglobina, así como las numerosas
variables de la Globulina G, también conocida como proteína unida a vitamina D,
la transferrina o el sistema PI de la alfa 1 antitripsina.

2. Objetivos

● Conocer las técnicas para determinar la concentración sérica de

proteínas totales y albúmina.
● Entender los fundamentos de dichas técnicas y su significado en
diagnóstico.
3. Materiales y métodos

Materiales:
● 04 Tubos de ensayos 13x100 mm
● 01 Pipeta automática de 100-1000 μL
● 01 Pipeta automática de 5 a 50 μL
● 12 Tips
● 01 Gradilla
● 01 Espectrofotómetro
● 01 Baño maría a 37°C
● 12 Cubetas de polietileno
● 01 Piseta de agua destilada
● 01 Propipeta
● 01 Suero sanguíneo tubo con tapa rosca
● 01 Estándar de proteínas frasco
● 01 Reactivo BCF frasco 11Ml
● 01 Reactivo EDTA/Cu frasco
● 01 Vortex

Determinación de proteínas séricas totales

Método de Biuret
Método que se utiliza para detectar la presencia de proteínas, péptidos cortos
y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida.
Se basa en la reacción entre los iones de cobre del reactivo de Biuret y los
átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos de las proteínas. Se
produce un complejo de color violeta que varía en intensidad de acuerdo a la
cantidad de enlaces peptídicos.

Procedimiento

1. Agregar a cada uno de los 3 tubos de ensayo, 1 mL del reactivo.

2. Separar el 1er tubo de ensayo ya que no se le agregara sustancia alguna.
3. Añadir al segundo tubo de ensayo 20 μL (microlitos) de la sustancia
estándar.
 4. Añadir al tercer tubo de ensayo 20 μL (microlitros) del suero del paciente.
5. Llevar al vortex cada uno de los 3 tubos de ensayo.
6. Colocar el contenido de los 3 tubos de ensayo en 3 cubetas de polietileno
respectivamente.
7. Introducir las 3 cubetas de polietileno en el espectrofotómetro para leerlo
a 540 nm.

Determinación de la concentración sérica de albúmina

Método del enlace con tintes (BCG)

La albúmina reacciona con el bromo cresoldulfoftaleína (verde bromocresol) a
un pH de 3.8 formando un compuesto coloreado que absorbe a 625 nm.

Procedimiento

1. Agregar a cada uno de los 3 tubos de ensayo, 1 mL del reactivo.

2. Separar el 1er tubo de ensayo ya que no se le agregara sustancia alguna.
3. Añadir al segundo tubo de ensayo 10 μL (microlitos) de la sustancia
estándar.
4. Añadir al tercer tubo de ensayo 10 μL (microlitos) del suero del paciente.
5. Llevar al vortex cada uno de los 3 tubos de ensayo.
6. Colocar el contenido de los 3 tubos de ensayo en 3 cubetas de polietileno
respectivamente.
7. Introducir las 3 cubetas de polietileno en el espectrofotómetro para leerlo
a 620 nm.

4. Resultados

Determinación de proteínas séricas totales

Absorbancia
Tubo 1 (Blanco): 0
Tubo 2 (Standar): 0.850
Tubo 3 (Muestra): 0.890
 Concentración de la muestra = (6.1 g/dL x 0.890) / 0.850 = 6.387 g/dL

En base a los resultados, se puede afirmar que las proteínas séricas totales del
paciente se encuentran dentro del intervalo de referencia 6.0 – 8.3 g/dL, con un
valor de 6.387 g/dL.

Determinación de la concentración sérica de albúmina

Absorbancia
Tubo 1 (Blanco): 0
Tubo 2 (Estándar): 2.323
Tubo 3 (Muestra): 2.166

Concentración de la muestra = (3.1 g/dL x 2.166) / 2.323 = 2.890 g/dL

En base a los resultados, se puede afirmar que la concentración sérica de

albúmina del paciente se encuentra relativamente dentro del intervalo de
referencia 3.5 – 4.8 g/dL, con un valor de 2.890 g/dL.

5. Discusiones
La mayoría de las proteínas plasmáticas sufren alteraciones por exceso o
disminución de las mismas, debemos aclarar que la excepción es la albúmina,
cuya única patología corresponde a una disminución, siendo los principales
órganos involucrados el hígado (por disminución de la síntesis) y el riñón (por
aumento en la eliminación).
Es de suma importancia la determinación de proteínas plasmáticas puesto que
los niveles ya sean bajos o altos puede llevar a patologías, si esta es alta se
podría tratar de una hiperproteinemia entre otros más o si esta es baja una
hipoproteinemia. Asimismo, los niveles de albúmina fuera de los valores
normales conllevan a patologías como hipoalbuminemia, hipoalbuminemia,
albúmina entre otros.

➔ HIPOALBUMINEMIA:

-Reducción en producción (afección hepática)

-Incremento de la pérdida (Glomérulo Nefritis o nefrosis, quemaduras)

-Mala absorción (afecciones gastrointestinales)

-Disminución en síntesis (analbuminemia, procesos inflamatorios.

 ➔ HIPERALBUMINEMIA:

-Deshidratación aguda

Alteraciones en los valores de proteínas:

➔ HIPOPROTEINEMIA:

-Pérdida proteica, bajo consumo por inanición o malabsorción

-Síndrome nefrótico

-Hemorragias por traumatismos, quemaduras graves

➔ HIPERPROTEINEMIA:

-Deshidratación: disminución del consumo o por pérdida (acidosis diabética,

mal de Addison, diarrea grave)

6. Conclusiones

● Se conocieron las técnicas para determinar tanto la concentración sérica

de proteínas totales como la de albúmina, utilizando el método de Biuret y
el método del enlace con tintes (BCG) respectivamente.
● Se entendieron los fundamentos de dichas técnicas y su significado en
diagnóstico, luego de haber determinado la concentración de las
proteínas séricas totales y la concentración sérica de albúmina.

7. Recomendaciones

● De ser necesario, realizar marcaciones en los tubos de ensayo para

poder diferenciarlos y evitar confusiones.
● Tener presente que la parte lisa de las cubetas de polietileno deben
coincidir con la posición del foco del espectrofotómetro.
● Tener en cuenta el rango de la pipeta automática al momento de medir el
volumen deseado.

8. Referencias

Lemus M, Arríaga J, Salinas M. Deficiencia congénita de proteína C. Informe de

un caso. Gac Méd Méx 2005;141:229-33.
Nelson, D. L., & Cox, M. M. (2017). Lehninger Pinciples of Biochemistry
(Seventh Edition) [Libro electrónico]. W.H Freeman Macmillan Learning.
Reyes, E. F., & Cejudo, A. G. 27. Métodos para la cuantificación de proteínas.
Salazar, J, Salazar Y, Sotelo J. Guía de prácticas de laboratorio. Bioquímica.
UCSUR. Lima. Edición 2021.
9. Anexos
9.1. Síntomas de déficit de proteínas
HIPOPROTEINEMIA
Disminución de la concentración sérica de proteínas (<< 6,5 g/dl). Las
causas más frecuentes son la malnutrición, síndromes de malabsorción,
pérdidas renales (síndrome nefrótico, aminoacidurias), pérdidas
intestinales (malabsorción, enfermedad celíaca, colitis ulcerosa,
pancreatitis crónica, etc.) o déficit de síntesis (hepatopatías tipo cirrosis).
Esta disminución se efectúa a expensas de la albúmina,
fundamentalmente, y condiciona la disminución de la presión oncótica,
pasando y acumulándose el agua desde el espacio intravascular al
intersticial, con desarrollo de edema y ascitis a veces generalizado
(anasarca).
Enfermedades que producen hipoproteinemia:
- Nefropatías con proteinuria crónica:
La alteración crónica de la función del riñón produce aumento de la
pérdida de proteínas, con una disminución tanto de las albúminas
como de las globulinas.
La aparición del síndrome nefrótico como resultado de los
trastornos crónicos de la función renal se caracteriza por la
aparición de proteínas en la orina (proteinuria). La causa de la
pérdida de proteínas plasmáticas a través de la orina es debida al
incremento de la permeabilidad de la membrana glomerular.
- Enteropatías con pérdida proteica:
La diarrea es la manifestación clínica más común de enfermedad
intestinal. Se define como el aumento anormal de la frecuencia,
fluidez o volumen de las heces. La diarrea puede ser el único signo
clínico en pacientes con enteropatía o el signo saliente que
acompaña a otras anormalidades como anorexia, pérdida de peso,
vómito y dolor abdominal.
Las causas generales de diarrea aguda y crónica pueden ser muy
variadas; la dieta, inflamación gastrointestinal por causas
parasitarias o infecciosas, consecuencia de patologías
pancreáticas, hepáticas, renales o el resultado de procesos
sistémicos, alteración general del organismo por drogas,
hipoadrenocorticismo o hipertiroidismo.
- Enfermedades hepáticas:
- Aquellas hepatopatías con presencia de tejido hepático con atrofia
o fibrosis producen disminución de la concentración de proteínas
plasmáticas, en especial hipoalbuminemia ya que se afecta
(disminuye) la síntesis de albúmina. Las alteraciones de la
funcionalidad hepática pueden darse con curso agudo o crónico.
 Las patologías causantes de alteraciones en el metabolismo de las
proteínas plasmáticas son variadas y complejas. Los valores de proteínas
totales pueden mantenerse dentro del rango normal (normoproteinemia)
aún cuando existan alteraciones de las distintas fracciones proteicas del
plasma (disproteinemia) ya que es posible que el descenso de una
fracción compense el aumento anormal de otra. Por todo ello es
importante realizar la determinación no solo de las proteínas totales sino
también del proteinograma y la relación Albúmina/Globulinas para adquirir
una idea más completa del estado clínico del animal.

9.2. Riesgos del exceso de proteínas

HIPERPROTEINEMIA
Esta enfermedad se debe a la concentración elevada de alguna de las
proteínas plasmáticas, mas no indica alteraciones de las cantidades
absolutas de proteínas sanguíneas. Este aumento es relativo, cuando el
incremento se debe a una hemoconcentración provocada por una
deshidratación; o absoluto, si aumentan las proteínas totales por
incremento de las síntesis de globulinas. Esta elevación de las globulinas
en general se observa, en estados de defensa contra agentes
infecciosos, en procesos inflamatorios crónicos, en patologías
imnunomediadas como la artritis reumatoidea o el Lupus eritematoso
sistémico, o como resultado de una vacunación.

HIPERPROTEINURIA
La Proteinuria es una concentración anormal de proteína en la orina y
puede resultar de diversas causas. Los riñones filtran contínuamente a la
sangre para excretar los residuos en la orina mientras que conservan
componentes útiles tales como proteínas. Sin embargo, algunas
condiciones pueden llevar a una desorganización en este proceso y hacer
más proteína presente en la orina que usual.
Algunas situaciones pueden causar un aumento temporal en la
concentración de proteína en la orina que no es permanente y no es
indicativa de daño a la función de los riñones.
Esto puede incluir:
● Temperaturas extremas (caliente o frío)
● Tensión emocional
● Esfuerzo físico
● Fiebre
Cada uno de estos factores tiene el potencial de alterar la función del
riñón temporalmente y puede resultar en presencia de la proteína en la
orina. Sin embargo, la orina debe volver a normal una vez que se quita la
causa.
9.3. Enfermedades que producen altos niveles de proteínas en sangre
● Obesidad: por aporte directo de energía porque van acompañadas
de grasa saturada estructural.
● Aumento de residuos indeseables: urea, ácido úrico.
● Aumento de eliminación de calcio por el riñón.
● Empeoramiento de algunas enfermedades: insuficiencia renal,
afecciones hepáticas, procesos reumáticos.
● Disminución del peso del feto si sobrepasan el 20 % de las calorías
totales de la dieta.