GUIA DE LABORATORIO DE

QUIMICA ORGÁNICA

Unidad de Formación ECP

Versión: 002 Fecha: 2021-B Manual de calidad
UC-BAC-QUI- Pag1 de 1
Código: GL001
AMINOACIDOS Y PROTEINAS

Tipo de práctica Duración Indicadores de peligro

Grupal ( 4 personas) 2 ½ horas

Recomendaciones partículares Utiliza siempre las normas de bioseguridad

Seguir las instrucciones de la guía de trabajo y las del docente

OBJETIVOS

 Estudiar la estructura, propiedades, funciones de aminoácidos, péptidos y proteínas.

 Conocer y demostrar pruebas que identifiquen cualitativamente aminoácidos, proteínas y su utilidad.

FUNDAMENTO TEÓRICO
 En la naturaleza existen más de 700 aminoácidos naturales y unos 20 aminoácidos que pueden ser
codificados por el ADN.
 El término "proteína" proviene de la palabra griega proteous, que significa primero.
 Las proteínas biológicamente activas son polímeros formados por aminoácidos que se eslabonan mediante
enlaces peptídicos covalentes.
 Las proteínas son los compuestos bioquímicos más abundantes en los seres vivos.
 Son macromoléculas que constituyen el principal nutriente para la formación de los músculos del cuerpo y
de la formación de tejidos.
 Son las sustancias centrales en casi todos los procesos biológicos.
 El tejido conectivo está compuesto de fibras proteicas fuertes.
 Una de la funciones de las proteínas consiste en transportar las sustancias grasas a través de la sangre,
elevando así las defensas de nuestro organismo.
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Claudia arambula CARMELITA MENDOZA PEREZ CLAUDIA MONTEJO
Fecha FEBRERO-2015 Fecha Fecha FEBRERO-2015
LA REACCIÓN DEL MILLÓN. (Hg(NO3)2 * HNO3) Reconoce aminoácidos que contenga grupos fenoles

Se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la molécula proteica. Cualquier compuesto fenólico que no
esté sustituido en la posición 3,5 como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta
reacción. De estos compuestos, sólo la tirosina está presente en las proteínas, de manera que sólo las proteínas
que tienen este aminoácido ofrecen resultados positivos.

En esta prueba los compuestos mercúricos en medio fuertemente ácido (ácido nítrico del reactivo) se
condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo ladrillo o rojizo. La prueba no es
satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo
del Millón es precipitado y se vuelve negativo, además, proteínas como la ovoalbúmina producen un
precipitado blanco que progresivamente por acción del calor se torna rojo; pero, las peptonas, dan solamente
una solución de color rojo.

REACCIÓN DE XANTOPROTEICA Identifica aminoácidos que contengan grupos aromáticos)

Esta prueba caracteriza a los aminoácidos aromáticos. Esta reacción se debe la presencia de un grupo fenilo en
la molécula proteica. Los complejos de la molécula proteica que son de importancia en esta reacción son la
tirosina y el triptófano. La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio.

Para esta prueba se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos obteniéndose
nitrocompuestos de color amarillo, que se vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalinos (formación de
ácido picrámico o trinitrofenol). No puede realizarse esa reacción para identificar albúmina en orina, por el
color anaranjado de la reacción final.

REACCIÓN DE BIURET. Sulfato de cobre en medio básico. Identifica péptidos y proteínas

El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos moléculas de
urea con eliminación de amoníaco. Esta reacción está dada por aquellas sustancias cuyas moléculas contienen
dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a través de un solo átomo de carbono o nitrógeno. El
reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solución acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La
reacción se basa en la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu 2+ y los pares de electrones
no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.

Esta última reacción provoca un cambio de coloración: violeta púrpura o violeta rosado. Debe señalarse que el
color depende de la naturaleza de las proteínas; proteínas y péptidos dan un color rosado; la gelatina da un
color azul.

REACCIÓN DE NINHIDRINA. Identifica aminoácido

Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos libres. Los aminoácidos, en general
reaccionan con la ninhidrina (hidrato de hicelohidrandeno) cuando son calentados con un exceso de la misma.
Todos los aminoácidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y forman dióxido de carbono, amoníaco y
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un aldehído que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la
formación de un producto color azul o púrpura (que posteriormente puede ser utilizado para cuantificar el
aminoácido). En el caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo imino,
la coloración final es amarilla. El amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y las proteínas pueden desarrollar
coloración en esta reacción, pero a diferencia de los aminoácidos, no liberan CO2.
Recuerde que la coloración azulada o violeta será proporcional a la concentración del aminoácido.
Es muy utilizado para detectar los aminoacidos

Materiales y Equipos

Item Tipo Descripción

01 MATERIAL Tubos de ensayo
02 MATERIAL Gradilla
03 MATERIAL Vaso de precipitado
04 MATERIAL Espátula
05 MATERIAL Vidrio reloj
06 MATERIAL Agitador
07 MATERIAL Probeta
08 MATERIAL Pipeta
09 MATERIAL Mechero. placa de cera
10 MATERIAL Trípode

REACTIVOS

Item Descripción
01 Glicina
02 Alanina
03 Sulfato de cobre
04 Hidróxido de sodio
05 Albumina
06 Alcohol etilico
07 Tetracloruro de carbon
08 Benceno
09 Acetona
10 HNO3 concentrado
11 Reactivo de Millón
12 Reactivo de Biuret
13 Ninhidrina
14 Alcohol
14 Ácido acético
15 Arroz, leche en polvo, guayaba, gelatina, o cualquier otro alimento.

PROCEDIMIENTO

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Claudia arambula CARMELITA MENDOZA PEREZ CLAUDIA MONTEJO
Fecha FEBRERO-2015 Fecha Fecha FEBRERO-2015
 Pasos Descripción
01 SOLUBILIDAD Y COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS

 Tomar 4 tubos de ensayo y rotular del 1 al 4,

 Tubo 1: agregar 2 mL de clara de huevo, + 2 ml de agua, observar y llevar al calor
 Tubo 2: agregar 2 ml de albúmina + 1 ml alcohol y observar
 Tubo 3: agregar 2 ml de albúmina de huevo + 1 ml de CuSO4 y observar
 Tubo 4: agregar 2 ml de albumina de huevo + 1 ml de ácido acético y observar

En todos los tubos observar si se quiebra la estructura terciaria de la albúmina y en cuál tubo
hay coagulación.

01 ENSAYO CON NINHIDRINA

Realización de la prueba:
 Se toman y rotulan tres tubos de ensayo Pyrex diferentes (1, 2 y 3).
 En cada uno de ellos se depositan 2 mL de albumina de huevo ovoalbúmina 10%, solución
de glicina 0.1 M y agua destilada, respectivamente.
 Se añaden 5 gotas del reactivo de ninhidrina
 Se colocan los tubos en un baño de María a 100° C por 1 minuto.
 Deje enfriar. Observe los colores desarrollados y anote los resultados.

02 ENSAYO CON BIURET

El reactivo de Biuret está formado por una disolución de sulfato de cobre en medio alcalino,
este reconoce el enlace peptídico de las proteínas mediante la formación de un complejo
de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno
que forma parte de los enlaces peptídicos, lo que produce una coloración rojo-violeta

Realización de la prueba: se toman y rotulan tres tubos de ensayo diferentes (1, 2 y 3).
 En cada uno de ellos se depositan 2 mL de solución de ovoalbúmina 10%, solución de
glicina 0.1M y agua destilada, respectivamente.
 Dos o tres gotas de reactivo de Biuret, ó,
 Añadir 4 o 5 gotas de sulfato cúprico diluida al 1%
 Añadir 2 ml de solución de hidróxido de sodio al 20%
 Los dos reactivos anteriores forman el reactivo de Biuret.
 Aparece una coloración violeta-rosácea es positiva
 Agitar y observar.
 Debe señalarse que el color depende de la naturaleza de las proteínas; proteínas y
péptidos dan un color rosado; la gelatina da un color azul.
 El reactivo Biuret, detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos
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 de dos o más enlaces péptidos en sustancias de composición desconocida. El reactivo de
color azul cambia a violeta en presencia de proteínas y caambia a color rosa cuando se
ombina con polipéptidos de cadena corta. El NaOH no participa en la reacción pero
proporciona el medio alcalino

03 REACCIÓN DE MILLÓN. Se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una

parte de ácido nítrico (HNO3).

Realización de la prueba:
 Se toman y rotulan tres tubos de ensayo diferentes (1, 2 y 3).
 En cada uno de ellos se depositan 2 mL de solución de ovoalbúmina 10%, solución de
glicina 0.1M y agua destilada, respectivamente.
 Se añaden 3 ó 4 gotas del reactivo de millón y se colocan los tubos en un baño de María a
100° C por 1-2 minutos. Se observan los cambios.
 Proteínas como la ovoalbúmina producen un precipitado blanco que progresivamente por
acción del calor se torna rojo; pero, las peptonas, dan solamente una solución de color
rojo.

04 ENSAYO XANTOPROTÉICO (aminoácidos aromáticos en moléculas proteicas que

tengan un grupo fenilo.

Realización de la prueba:
 Se toman y rotulan tres tubos de ensayo diferentes (1, 2 y 3).
 En cada uno de ellos se depositan 2 mL de solución de ovoalbúmina 10%, solución de
glicina 0.1M y agua destilada, respectivamente.
 Agregue a cada tubo 2 mL de la solución correspondiente y 1 mL de ácido nítrico
concentrado. Caliente en baño de agua a ebullición, la aparición de una coloración
amarilla es una prueba positiva para aminoácidos aromáticos.
 Deje enfriar y agregue a cada tubo de ensayo 1.5 mL. de NaOH 40% sin agitar, el cambio
de color a anaranjado confirma la prueba.

CONSULTA

 El nombre de los principales aminoácidos

 Prueba de millón, biuret y xantoproteica (Diga su utilidad).
 Utilidad de las proteínas.
 ¿Qué son las proteínas?.
 ¿Qué reactivos que sirven para identificar proteínas?
 5 alimentos ricos en proteínas.
 ¿Cómo se conoce que una sustancia desconocida en un laboratorio es una proteína?
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Claudia arambula CARMELITA MENDOZA PEREZ CLAUDIA MONTEJO
Fecha FEBRERO-2015 Fecha Fecha FEBRERO-2015
  Si se realiza la reacción Biuret sobre un aminoácido como la glicina, ¿es positiva o negativa? Y ¿por qué?

BIBLIOGRAFÍA

 Garzón, G.G. Fundamentos de Química general, 211 ed., MeGraw-Hili, México, 1 986.
 Brown, T.L., Lemay, H.E. y Bursten, B.E. Quirnica. La CienciaCentral, Prenties&Ha¡¡, México, 1991.
 Química GENERAL 2. MANUAL DE LABORATORIO
 LOZANO J.A. Bioquímica para las ciencias de la salud. Editorial McGraw - Hill. España 1998

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