UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA Versión:

SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL Fecha de
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PARA INGENIERÍAS

GUÍA DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. INTRODUCCIÓN

Para poder realizar una correcta identificación de microorganismos se requiere una adecuada técnica de siembra
y aislamiento de éstos en los medios de cultivo. Se hace necesario que el personal que se encuentre en el
laboratorio de microbiología tenga una técnica adecuada de siembra en condiciones asépticas adecuadas.

2. OBJETIVOS

 Conocer los métodos adecuados de siembra y aislamiento de microorganismos ya sea en cajas de petri
o en tubos de agar o medios de cultivo líquidos.

3. FUNDAMENTOS

La siembra o inoculación constituye una actividad de rutina en la práctica microbiológica, y consiste en introducir
artificialmente una porción de muestra (inoculo) en un medio, con el fin de iniciar un cultivo microbiano. En éste
medio se deben encontrar los elementos necesarios para que los microorganismos lleven adelante sus
actividades metabólicas y respiratorias, en condiciones adecuadas de temperatura y concentración de O2 y
CO2. Ello se logra artificialmente utilizando los medios de cultivo, los que una vez sembrados se mantiene a la
temperatura que permite el desarrollo y la multiplicación de los microorganismos.

3.1 Técnica de siembra en caja de petri

 En presencia del mechero se debe hacer la siembra del

inoculo en la caja de petri, teniendo en cuenta los cuidados
pertinentes para evitar contaminación por microorganismos del
ambiente.

Siembra por agotamiento:

 Una vez hecho el inoculo, se puede emplear el asa para
diseminar la muestra en los cuatro cuadrantes del agar.
El propósito de éstas técnicas es diluir el inoculo sobre
el agar para poder obtener colonias aisladas.
 Las colonias aisladas se pueden subcultivar
individualmente transfiriéndolas a otros medios a fin de
obtener cultivos puros.

Siembra para recuento de colonias o siembra en rejilla:

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Esta siembra se utiliza para recuento de colonias. Se hace una sola estría que cruce el centro
del agar. Luego se hacen estrías en ángulo recto con respecto a la estría inicial; se voltea el
agar en un ángulo de 90° y se hacen estrías hasta cubrir todo el agar.

Siembra por cuadrantes:

 Se emplea para cuatro muestras diferentes.

 Se divide la caja en cuatro.
 Marcar en cuada cuadrante, hacer la suspensión y estriar.

Siembra masiva o por extensión:

 Se coloca con una pipeta la muestra sobre la superficie de la placa de agar (0,1 ml o menos).
 La muestra se esparce de modo uniforme sobre la superficie del agar con una varilla estéril de vidrio.
 Se incuba la placa hacia abajo.

Siembra en placa por vertido:

 La muestra se pone de una pipeta en una caja estéril.
 Se adiciona medio estéril y se mezcla con el inoculo.
 Se deja solidificar el agar.
 Se incuba con la tapa hacia abajo.
 Se evidencian las colonias en la superficie y bajo la supreficie.

3.2 Siembra en tubo:

La siembra en medios contenidos en tubos requieren mayor cuidado, ya que un solo organismo contaminante del
aire puede superar en crecimiento al organismo que se desea investigar. Por lo tanto se deben tener en cuenta las
siguientes precauciones:
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 Mantener inclinado el tubo que contiene el cultivo que se va a transferir de modo que los microorganismos
del aire caigan en las paredes externas del tubo y no en la boca.
 Los tapones de los tubos deben mantenerse en la mano derecha sostenidos con el dedo meñique y el
anular y entre el dedo anular y el corazón. Nunca deben colocarse sobre la mesa de trabajo o algún otro
lugar.
 Flamear la boca del tubo.
 Quemar el asa.
 Sumergirla en el medio sin tocar las paredes del tubo.
 Enfriarla en una parte del medio
 Tomar el inoculo con el asa.
 Después de practicar la siembra, esterilizar el asa y flamear nuevamente la boca del tubo. Colocar el tapón
del tubo.
 Transferir el material al otro tubo.

Las clases de siembra en tubo son las siguientes:

Siembra en estría: Se realiza en un tubo con medio sólido

inclinado en bisel, deslizando el asa sobre la superficie y
marcando surcos o estrías.

Siembra en picadura: Se designa con este nombre a la siembra

que se realiza con asa recta en tubos de medios sólidos o
semisólidos generalmente sin inclinar; se introduce el asa
cargada con la bacteria al medio de cultivo pro el centro de la
superficie al fondo.

Siembra mixta: Igualmente se realizan siembras mixtas en

picaduras en el fondo del tubo y luego se desliza el asa por la
superficie en bisel marcanod estrías.

Siembra en medio líquido: Para transferir un producto contenido en un medio líquido o sólido a otro medio líquido
se pueden usar pipetas estériles o asa; si se hace con una pipeta, unas pocas gotas (2 o 3) son suficientes para
el desarrollo bacteriano, si se practica con asa, una o dos asadas.

4. MATERIALES

En el mesón del laboratorio va a encontrar:

 1 agar Mac Conkey esteril
 1 agar Mac conkey con un cultivo bacteriano
 3 medios de cultivo en tubo
 Mechero

Usted debe aportar los demás materiales ya solicitados:

 Material de desinfección: jabón, hipoclorito, alcohol, toallas, pañitos de papel para limpiar, etc
 Asa bacteriológica redonda y recta

5. PROCEDIMIENTO
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 Marque cada uno de los medios de cultivo y realice los siguientes repiques:

a. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a la caja de agar
macConkey esteril, realizando una siembra por agotamiento.

b. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a un tubo realizando una
siembra en estría.

c. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a un tubo realizando una
siembra en picadura.

d. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una colonia aislada a un tubo realizando una
siembra en medio líquido en tubo.

 Incube todos los cultivos durante 24 – 48 horas a 37°C.

 Coordine con el asistente del laboratorio y realice la visualización de cada medio tomando apuntes al
respecto.

6. CUESTIONARIO

 ¿Qué es un cultivo puro y que és un cultivo mixto?

 ¿Que ocurrió con el agar antes de hacer la inoculación y como se tornó éste después de cumplido el
periodo de incubación?
 ¿Como se comportaron las bacterias en el caso de los tubos de agar?
 ¿Qué errores siente ud que cometió su grupo o usted en el momento de hacer los procedimientos?, ¿qué
puede hacer para corregirlos?.

BIBLIOGRAFIA

ORTEGA, Gladys y col. Manual de Microbiología. Universidad Industrial de Santander. 4ta edición. 1985.

RODRIGUEZ VALERA, Francisco. Prácticas de Microbiología. Universidad Miguel Hernandez. España [En Línea]
http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA Y GENÉTICA. Prácticas de Microbiología y Genética. Universidad de

Salamanca. [En Linea] http://imb.usal.es/Practicas2/P2/Practicas2.pdf

ACUA NATURA. Técnicas de Tinción [En Línea]

<http://www.acuanatura.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdetincion.pdf>

SANCHEZ, Maria de Jesús. Microbiología de Suelos: Técnicas, métodos y medios de cultivo. Universidad Nacional
Autónoma de México. 2004 <http://enlinea.zaragoza.unam.mx/didacta/biologia/micorrizas/Microbiol.pdf>

RODRIGUEZ VALERA, Francisco. Prácticas de Microbiología. Universidad Miguel Hernandez. España [En Línea]
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