UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTIN – TARAPOTO

FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

DEPARTAMENTO ACADEMICO PROFESIONAL DE

INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

ASIGNATURA : MICROBIOLOGÍA AGROINDUSTRIAL

TEMA : FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE. Coloración

Gram. Galería Bioquímica de
OXNIGLUMOCISKAD.

ALUMNO : NEIVER GUEVARA CORONEL

DOCENTE : INGº M. SC. ROXANA TRUJILLO VALDERRAMA

CICLO : IV

TARAPOTO-PERU

2021
 I. INTRODUCCIÓN.

Existen un conjunto de microorganismos que integran la flora microbiana del

intestino del hombre y de los animales representados por bacilos Gram
negativo no esporulado que se encuentran también en excretas, aguas,
pastos, suelos, alimentos y vegetales al estado y en descomposición.
Nos estamos refiriendo a los integrantes de la Familia Enterobacteriaceae,
cuyo conocimiento racional y orgánico permite establecer el diagnóstico
inmediato de las enfermedades entéricas, dictar las medidas de orden
epidemiológico y establecer las causales de una serie de enfermedades
intestinales, que forman un extenso capítulo de la patogenia infecciosa del
país.
El conocimiento de estos seres vivos, es obligatoria en los estudios
microbiológicos, no sólo porque algunos géneros y especies ocupan
destacada posición en la patogenia entérica de origen humano animal, sino
porque también es una base fundamental en la sanidad pública y en el
diagnóstico bacteriológico en general. Existe un conjunto de microorganismos
que integran la flora microbiana del intestino del que se encuentran también
en las excretas, aguas, pastos, suelos, -alimentos y vegetales al estado.
Características de las Enterobacteriaceae
En la definición clásica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios
básicos, adicional a la aparición de nuevos métodos taxonómicos para incluir
a ciertos géneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que
forman parte de esta familia:
 Son bacterias Gram negativas, la mayoría bacilos, otros
cocobacilos y otros pleomórficos.
 No son exigentes, son de fácil cultivo.
 Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa
positivo), es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
 Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
 Son anaeróbicos facultativos.
 Son fermentadores de carbohidratos en
condiciones anaeróbicas con o sin la producción de gas (en
especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de
substratos en condiciones aeróbicas.
I. REVISION BIBLIOGRAFICA

A las enterobacterias, se les describe como microorganismos Gram

negativo esporulados, móviles o inmóviles, provistos de flagelos en
perítrico, que adoptan la forma de bacilos y cocobacilos; viven normal y
patológicamente como huéspedes en el intestino del hombre y de los
animales, se les halla en los alimentos en descomposición, excretas de
origen humano y animal, en las aguas del albañal y emuntorios en general
viven saprofíticamente en las materias orgánicas en descomposición. Gran
número de especies que integran esta familia son patógenas pura el
hombre y los animales; produciendo infecciones graves en forma
individual, endémica y epidémica (Guia de microbiología agroindustrial).
CLASIFICACION DE LA ENTEROBACTERIAS
 Escherichia coli es un habitante intestinal. No es con mucho el más
abundante numéricamente, sino que está por detrás de Bacteroides y
Bifidobacteriurn. No obstante, E. coli se mantiene viable un cierto
tiempo fuera del intestino y es fácilmente demostrable. Por ello es
apropiado utilizarla como demostración de contaminación fecal en las
aguas de bebida.
 Proteus vulgaris pertenece también a la flora intestinal normal pero
asimismo está ampliamente distribuido en el suelo y en las aguas. Esta
bacteria es conocida debido a su tendencia a la modificación de forma
(nombre), su intensa actividad y la tendencia a diseminarse sobre las
superficies de agar y cubrir toda la superficie.
 Enterobacter aerogenes es en cierto modo el hermano gemelo de E.
coli; ambos se designan como "Coliformes". Es muy abundante en los
suelos. Tal como indica su nombre, esta bacteria forma mucho gas. Se
diferencia de E. coli tan s610 par unas pocas características
bioquímicas.
 Serratia marcescens (anteriormente Bacterium prodigiosum u "hongo
de las hostias") puede ser considerada como una variante pigmentada
de
 Enterobacter. Al género Erwinia pertenecen algunas especies
pat6genas de vegetales, que afectan a los vástagos, las hojas y las
raíces y que desencadenan enfermedades debido a la excreci6n de
pectinasas.
 Klebsiella pneumoniae se diferencia de Enterobacter exclusivamente
para la formaci6n de una capsula gruesa y por su falta de motilidad. Se
presenta en algunas formas muy peligrosas de inflamaci6n de los
pulmones.
 Salmonella typhimurium es la bacteria más extendida de entre
aqueas que provocan una gastroenteritis, la Hamada "intoxicación por
productos alimentarios". Esta intoxicaci6n se debe a la liberaci6n de
lipopolisacáridos que desencadena una irritaci6n de las mucosas; no se
 da ninguna invasi6n del sistema sanguíneo. S. typhi es el causante del
tifus epidémico.

 Shigella dysenteriae y cepas relacionadas son los causantes de la

disentería y las diarreas.
 Vibrio cholerae es el causante del colera, una enfermedad epidémica.
Este agente causal no pertenece al grupo de las Enterobacteriaceae,
pero desde el punto de vista metabólico y fisiol6gico es muy pr6ximo.
V. cholerae se reproduce en el intestino. Se fija sobre el epitelio
intestinal, pero no penetra en las células. La enterotoxina del co1era es
una proteína, que se fija a las células del epitelio intestinal (unos
receptores específicos) y que determina la salida de iones sodio,
bicarbonato y cloruro, ¡as! como de agua a la luz intestinal.
 Yersinia pestis es el causante de la peste. Yersinia no pertenece al
grupo taxonómico de las Enterobacteriaceae, pero es muy pr6ximo
desde el punto de vista de su modo de vida facultativamente
anaer6bico y de su tipo de fermentaci6n. EI reservorio natural del
causante de la peste son los roedores salvajes, sobre todo ratas. Las
bacterias son transmitidas par pulgas infectadas 0 por otros
ectoparásitos hasta el hombre y conducen a la peste bub6nica o a la
peste pulmonar. Mediante una multiplicaci6n rápida y la producci6n de
una fuerte toxina conducen rápidamente a la muerte. (Microbiología
General Hans. Scheler nueva edición).

I. OBJETIVO

Hacer que el alumno recuerde las técnicas y procedimientos

básicos de microbiología general, para poderlos aplicar
posteriormente en el control microbiológico de los alimentos.
II. MATERIALES Y METODOS

A) Coloración Gram a partir de una cepa marcada

- Desengrasar un porta-objeto con alcohol-acetona y algodón.
- Descolgar una gota de agua estéril, suspender en ella una pequeña cantidad
de cepa problema y homogenizar.
- Dejar secar y flamear suavemente la extensión para fijarla.
- Cubrir con una solución del colorante primario. Cristal violeta u otro similar y
dejar en contacto por espacio de 2 minutos. Lavar con agua de caño.
- Cubrir con el mordiente o fijador y dejar en contacto por un minuto. Lavar.
- Decolorar con la solución de Alcohol-Acetona (1:1). Lavar.
- Cubrir con solución de contraste, safranina u otro similar y dejar en contacto
por 30 segundos. Lavar.
- Secar suavemente, agregar una gota de aceite de inmersión y observar al
microscopio. Anotar los resultados.

B) Galería Bioquímica de OxNiGLUMoCISKAD para Enterobacteriaceaes

A partir de una cepa marcada, efectuar las siguientes pruebas bioquímicas:
- Reacción de la Oxidasa (Ox)
- Reducción de los Nitratos (Ni)
- Fermentación de la Glucosa (G)
- Fermentación de la Lactosa (L)
- Hidrólisis de la Urea (U)
- Ensayo de Movilidad por cultivo (Mo)
- Asimilación del Citrato (C)
- Formación del Indol (I)
- Formación del Ácido Sulfhídrico (S)
- Prueba de la Tolerancia al Cianuro de Potasio CNK (K)
- Transformación de la Fenilalanina en Acido Phenil Pirúvico APP (A).

C) Fundamento v procedimiento de las pruebas

bioquímicas para la familia Enterobacteriaceae
Constituida por gérmenes de bastón Gram negativo móviles (flagelos en
peritrico) e inmóviles, Oxidasa negativos. Nitratos son reducidos a nitritos.
Todas fermentan la glucosa con o sin producción de gas, la diferencia de
estas bacterias se basa en el comportamiento bioquímico, tratamiento
recomendado por MOSSEL-QUEVEDO y llamado:
OxNiGLUMoCISKAD
Oxidasa (Ox)
Llamada también Citocromo Oxidasa; Es una enzima por la cual las bacterias
que la: poseen, oxidan al Tetrametil-para-fenil-endiamina en Indol (azul).
Prueba: En una placa Petri colocar un papel de nitro, humedecer este con el
reactivo de Kovacs (solución de Tetrametil-parafenil-endiamina al 1% en agua
destilada). Preparar el reactivo inmediatamente antes de usarlo, debido a que
se oxida con el aire y la luz. En la parte humedecida hacer una estría de
cultivo joven (18 a 24 horas de incubación) de más o menos 5 mm de longitud
considerar la prueba como positiva, si en 5 segundos aparece un color azul
intenso. Las enterobacterias no deben dar esta reacción.

Reducción de Nitratos (Ni)

Las bacterias que poseen las enzimas nitrato-reductasa, tienen la propiedad
de reducir los nitratos a nitritos.
Prueba: Sembrar el germen a estudiar en agar o caldo nutritivo que contenga
además 1/1000 de Nitrato de Potasio. Después de incubar a 37°/24 horas,
añadir gotas de solución A y de solución B (Reactivo de Gries) o en su defecto
reactivo sólido formado por ácido sulfanílico, ácido tartárico, y alfa-naftil
-amina.
La prueba es positiva sí aparece color rojizo en ambos casos. ¡Sino aparece
dicha coloración agregar sobre el cultivo que contiene e! reactivo, Zn o Mg en
polvo; observar después de 10 minutos si la coloración es rojiza, considerarla
como negativa ya que, en el caso, son el Zn, Mg, y no el germen el que se ha
reducido en nitratos.
Fermentación de Glucosa, Lactosa y Producción de H S(GLS)
El H; S es formado por determinadas Enterobacterias, ya sea por
desanimación de aminoácidos azufrados (tiosulfatos, sulfitos), En el medio, el
H2S formado, reacciona con la sal de Fe contenido en él y da sulfuro de fierro
(FeS) de color negro. La prueba en condiciones aerobias, es reversible.
Prueba y lectura: Se puede realizar en un sólo medio: Kligler (Hierro dos
azúcares), en el cual la siembra se realiza por picadura profunda, y una estría
en la superficie. Incubar a 37°C, por 18 a 24 Horas.
Parte inferior amarilla: Fermentación de Glucosa.
Parte superior amarilla: Fermentación de Lactosa.
Ruptura del medio: Producción gas (Glucosa)
Ennegrecimiento en la puntura de inoculación: H2S positivo, indicador del
medio: Rojo de fenol
Hidrólisis de la Urea (U)
Las enterobacterias que poseen la enzima ureasa, hidrolizan la Urea,
alcalinizando en esta forma el medio de cultivo, haciendo virar con ello el rojo
de fenol, indicador de este, del anaranjado a la grosella intensa (prueba
positiva).
Medio de cultivo: Caldo urea
Prueba: Como medio de cultivo se utiliza un medio semi-sólido (agar nitratado
que lleva 3% de agar) distribuidos en tubos de "U" la siembra se realiza por
puntura, introduciendo la aguja de Kolle 5 mm de profundidad, sólo en una de
las ramas.

Lectura
Después de incubar a 37ºC por 24 horas, considerar la prueba positiva, si un
enturbiamiento
Se ertienJe desde la rama cultivada a la otra.
KNO3: ¡Fuente de Oxígeno, necesaria para la movilidad de! germen aerobio.
Asimilación del Citrato (C)
Las enterobacterias que utilizan el Citrato de Sodio como única fuente de
Carbono, alculinizun el medio agar Citrato de Simona, haciendo virar el
indicador azul de bromo timol, del verde al azul intenso. Para esta prueba hay
que tener las siguientes precauciones:
-Utilizar tubos nuevos, o bien los usados, esterilizado al calor seco para
destruir allí los posibles restos de materia orgánica que pudiera contener.
- Realizar siempre la siembra a partir de un medio sólido porque con medio
líquido se arrastraría restos de materia orgánica.
- Realizar la siembra en pequeña cantidad y trazando sólo una línea a lo
largo de la superficie de inclinación.
Producción de Indol(I)
Algunas enterobacterias, tienen las propiedades hidrolizar el aminoácido
triptófano. Uno de los productos finales de esta degradación es el Indol.
Prueba: Para detectarlo, a un cultivo de 18 a 24 Horas en caldo Peptona do,
adicionar el reactivo de Kovacs pura Indol. Prueba positiva: Anillo grosella en
la superficie.
Tolerancia al Cianuro de Potasio (K)
Prueba. Para determinar la resistencia de las diferentes enterobacterias frente
al OTK; se realiza la siembra del germen a estudiar, en medio base al que se
le ha colocado previamente 0.1 mi. De uní solución al 0.5%. Se usan tubos de
8 x 160 mm-, y se siembran tres usadas de más o menos 6 mm. De diámetro,
a partir de un cultivo de 18 a 24 horas Incubar a 37ºC por 18 a 24 horas como
máximo.
Lectura:
Prueba positiva: Disco blanco en la superficie del medio.
Prueba negativa: Turbidez en la parte inferior, con una superficie
completamente
Transparente, o ausencia total de desarrollo.
Prueba de Ácido Phenil Pirú vico (A)
La fenilalanina, es un aminoácido que determinadas enterobacterias pueden
transformar en ácido Phenil pirúvico.
Prueba: Sembrar el germen a estudiar, en forma abundante (estrías)
aminoácido en estudio. Después de la incubación a 37ºC por 24 horas,
investigar en el medio la presencia de ácido fenil pirúvico, adicionando unas
gotas de sal férrica (Cl2 Fe). Prueba positiva: Aparición inmediata de color
verde.
Descarboxilacion de la lisina (D)
Ciertas enterobacterias pueden transformar por desearboxilación la lisina en
Cadaverina, que por desanimación libera grupos amino (NH 3), bajo la forma
de NH, ¡alcalinizando e! medio de cultivo.
Prueba. Esta prueba se realiza en el medio de Taylor, que lleva glucosa, lisina
y púrpura de bromocresol como indicador del medio.
Lectura. Después de incubar a 37ºC por 24 horas, considerar la prueba como
positiva si el Violeta varía al color púrpura.
I. RESULTADOS
En el video se pudo observar un buen resultado en la cuyal nos
queda a nosotros desarrollarlos en la practica que se desarrollara
en las clases presenciales.
III. DISCUCIONES
Que tenemos que proponernos con un objetivo en cada practica que
vamos a desarrollar y tener todas las técnicas y procesos para
poder hacer dicho trabajo.
IV. CONCLUSIONES

En la práctica se pudo comprobar, de acuerdo a los procedimientos

realizados la presencia de shygela en las muestras debido a la
coincidencia de los datos obtenidos con los de la tabla de
diferenciación que nos sirve para la comparación de los resultados.
V. BIBLIOGRAFIA

http://es.wikipedia.org/wiki/Enterobacteriaceae
http://dianayjulian.galeon.com/enterobacte.htm
http://www.slideshare.net/miranda_col/eta-causadas-por-enterobacterias
EPIFANIO MARTINEZ MENA 2000. “Manual de Practicas de <Microbiología
Aplicada”. Primera reimpresión Tarapoto-Perú

VI. ANEXOS

Cuestionario
1) ¿Por qué las bacterias Gram negativas retienen el colorante de
contraste, durante la coloración Gram?
La razón por la cual se da esta característica es porque el yodo forma con el
cristal una molécula soluble por lo que se da una fijación a las bacterias gram
negativas por la permeabilidad de la membrana celular y debido al punto
isoeléctrico menos acido por lo que se demuestra la poca afinidad con los
colorantes básicos.
2) Mencione diferencias entre bacterias Gram negativas y bacterias
gram positivas.
Gram negativas: Gram positivas

- Retiene el colorante de contraste -Complejo CVI se forman dentro de

las bacterias y estas permanecen
-Su coloración es roja
violetas
-Sus proteínas tienen un punto
-Sus proteínas presentan un punto
isoeléctrico menos acido
isoeléctrico más ácido
-Complejo CVI se forma dentro de las
-No presentan capa lipídica
bacterias y permanecen violetas
-Presenta capa lipídica

3) Describa a las bacterias entéricas y nombre a los géneros más

representativos, dando características de cada uno de ellos.
Son parásitos de animales y de algunas plantas que son gram negativos y
todas las especies atacan a los carbohidratos ya que en su mayoría reducen
nitrato o nitrito.
Echerichia: Se encuentra en el tracto intestinal de los mamíferos y utiliza
como única fuente de carbono el ácido cítrico. Las especies de Escherichia
coli oportunistas producen infecciones sólo si abandonan el colon. Otros
grupos producen hasta el 90% de las diarreas infantiles y la denominada
diarrea del viajero. Se desarrollan entre 15ºC y 45ºC, pero optima de 22ºC con
un pH óptimo de 1, son gram negativos y suelen morir a 60ºC en 30 minutos.

4) Mencione las enfermedades que ocasionan algunos géneros de la

familia Enterobacteriaceae.
 Salmonella: Gastro enteritis por salmonella más conocida como
salmonelosis.
 Salmonella thipy: Produce la fiebre tifoidea.
 Shigella: Produce disentería que es una enfermedad aguda o crónica
del intestino grueso del humano.
 Vibrio Cholerae: Produce cólera.
 Echerichia coli: Produce gastro enteritis.