CALIBRACIÓN Y USO DE MICROPIPETAS

Ocampo Valderrama Daniela; Orozco Rojas Natalia; Gallo Torres Yeison Fernando.
Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Microbiología, Universidad Santiago de Cali.
06 de septiembre de 2021.

INTRODUCCIÓN
Trabajar en un laboratorio de biología implica conocer cómo se manipulan ciertos instrumentos
básicos de uso constante como la micropipeta. La micropipeta es un instrumento de laboratorio
empleado para absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos y permitir su manejo en las
distintas técnicas científicas.
Es de destacar que el uso de micropipetas permite emplear distintos líquidos sin tener que lavar el
aparato; para ello se emplean puntas desechables, de plástico, que habitualmente son estériles. Existen
varios tipos de puntas para los diferentes volúmenes de pipeteo. Es necesario el cambio de la punta si
el líquido es diferente al ya muestreado o si el volumen establecido es cambiado. Cuando se pipetean
líquidos que tienen una viscosidad y densidad diferente a la del agua, por ejemplo solventes orgánicos,
una película de líquido se forma sobre las paredes internas de la punta; esta película puede crear error.
Desde que la película remanente sea constante el sucesivas pipeteadas con la misma punta, este error
puede ser evitado mediante la formación de la película antes de transferir la primera muestra; esto es
hacer una aspiración de la muestra y dispensarla en el mismo vaso, cuando la película es formada ya
todas las muestras siguientes tendrán mejor exactitud y reproducibilidad. Esta operación de
pre-enjuague deberá ser repetida cuando el volumen cambie o se use una nueva punta. [DE, L. P. D. E.
C., & DE LA PRÁCTICA, P. N. N. 2009]
Existen diferentes tipos de micropipetas y pueden clasificarse según su funcionamiento, regulación de
volumen, canales de dispersión o su modo de funcionamiento.
Para utilizar una micropipeta es de suma importancia siempre mantenerla de forma vertical, ya que de
lo contrario podríamos dañar el equipo o descalibrar ocasionando que los resultados sean erróneos. La
manera más adecuada de elegir una micropipeta es de acuerdo al volumen que se desea medir
teniendo siempre en cuenta que el volumen a pipetear debe ser lo más cercano a la capacidad máxima
de la pipeta. Por lo que:
Volumen a límite mayor de micropipetas=menor error
Volumen a límite inferior de micropipeta=mayor error
Debemos tomar en cuenta que el error que se obtenga no solo es por la mala calibración del equipo o
el mal uso de éste, sino que el error humano es un factor determinante. Una forma de ver qué tan
significativos son estos errores es conociendo que tanto variarán los datos obtenidos de una
experimentación utilizando la estadística descriptiva como la desviación estándar, media y coeficiente
de variación. [Cruz, K. C. M., Cruces, E. G., Francisco, V. L. H., & Luna, R. M.]

METODOLOGÍA
Para la realización de la práctica se preparó una solución en un vaso de precipitado de agua destilada
con colorante; de esta solución utilizando las micropipetas de 0,5 µL –10 µL, 10 µL –100 µL y 1000
µL se sacaron muestras máximas y mínimas correspondiente al rango de estas, las cuales se
depositaron en un vaso de precipitado previamente pesado y tarado para tomar los pesos de cada
muestra depositada, se realizó el procedimiento 5 veces por cada volumen de muestra, utilizando para
cada medida una punta nueva.
RESULTADOS
Al tomar y pesar las muestras con las respectivas micropipetas obtenemos los datos relacionados en la
tabla 1
Tabla 1. Datos generados por la muestra de agua tomada con la micropipeta

A continuación se relacionan los cálculos correspondientes para cada micropipeta y volumen:

● Micropipeta 0,5 µL –10 µL

MEDICIONES 5,0 µL:

Valores del control a 21,5 °C que corresponde
entonces Z = 1,0032

✓ Volumen controlado Vo (µL): 5,0mg

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 5,0
✓ Valor nominal (mg) = 𝑍
= 1,0032 =4,9840

➢ Peso 1= 4 mg
➢ Peso 2 =5 mg
➢ Peso 3 =3,5 mg
➢ Peso 4 =3,3 mg
➢ Peso 5= 3,7 mg

VALOR MEDIO
∑ 𝑥𝑝
𝑥 = 𝑛
xp: resultado de las pesadas
n: número de pesadas

4+5+3,5+3,3+3,7
𝑥 = 5
=3,9µL
✓ Volumen medio: Z=1,0032
𝑽̅ =𝑥 . Z 3,9×1,0032
𝑽̅ =3,9

✓ Exactitud (E%)

𝑉̅ − 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑬 [%] = 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
×100
3,9−4,98
4,98
× 100
 𝑬 [%]=-21,485
✓ Desviación estándar

1,78
S=1,0032 × 4
S=0,67

✓ Coeficiente de variación

𝑆×100
CV[%]= 𝑽̅
0,67×100
CV[%]= 3,9
CV[%]= 17.1794

● Micropipeta 10 µL –100 µL

MEDICIONES 10 µL:

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 10
✓ Valor nominal (mg) = 𝑍
= 1,0032 =9,968
➢ Peso 1= 8,1 mg
➢ Peso 2= 9,1 mg
➢ Peso 3= 8,6 mg
➢ Peso 4= 8,8 mg
➢ Peso 5= 9,1 mg

VALOR MEDIO
∑ 𝑥𝑝
𝑥 = 𝑛

8,1+9,1+8,6+8,8+9,1
𝑥 = 5
=8,74µL

✓ Volumen medio: Z=1,0032

𝑽̅ =𝑥 . Z 8,74 ×1,0032
𝑽̅ =8,767

✓ Exactitud (E%)
𝑉̅ − 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑬 [%] = 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
×100
8,767−10
10
× 100
𝑬 [%]= -12,33
 0,692
S=1,0032× 4
s=0.4173

✓ Coeficiente de variación

𝑆×100
CV[%]= 𝑽̅
0,4173×100
CV[%]= 8,767
CV[%]= 4.7598

MEDICIONES 10 µL:

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 10
✓ Valor nominal (mg) = 𝑍
= 1,0032 =9,968
● Peso 1= 9,5 mg
● Peso 2= 9,3 mg
● Peso 3= 9,1 mg
● Peso 4= 9,8 mg
● Peso 5= 9,7 mg

VALOR MEDIO
∑ 𝑥𝑝
𝑥 = 𝑛

9,5+9,3+9,1+9,8+9,7
𝑥 = 5
=9,48 µL

✓ Volumen medio: Z=1,0032

𝑽̅ =𝑥 . Z 9,48×1,0032
𝑽̅ =9,51

✓ Exactitud (E%)
𝑉̅ − 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑬 [%] = 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
×100
9,51−10
10
× 100
𝑬 [%]= -4,9

0,328
S=1,0032× 4
s= 0,2872
✓ Coeficiente de variación

𝑆×100
CV[%]= 𝑽̅
0,2872×100
CV[%]= 9,51
CV[%]= 3.01997

MEDICIONES 100 µL:

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 100

✓ Valor nominal (mg) = 𝑍
= 1,0032 =99.68
➢ Peso 1= 97,8 mg
➢ Peso 2= 98,6 mg
➢ Peso 3= 100,9 mg
➢ Peso 4= 99,6 mg
➢ Peso 5= 98,2 mg

VALOR MEDIO
∑ 𝑥𝑝
𝑥 = 𝑛

97,8+98,6+100,9+99,6+98,2
𝑥 = 5
=99,02 µL

✓ Volumen medio: Z=1,0032

𝑽̅ =𝑥 . Z 99,02 ×1,0032
𝑽̅ =99,34

Exactitud (E%)
𝑉̅ − 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑬 [%] = 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
×100
99,34−99,68
99,68
× 100
𝑬 [%]= -0,34

93782882
S=1,0032× 4
s= 4857,6

✓ Coeficiente de variación

𝑆×100
CV[%]= 𝑽̅
 4857,6×100
CV[%]= 99,34
CV[%]= 4889.873

● Micropipeta 1000 µL

MEDICIONES 1000 µL:

𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 1000

✓ Valor nominal (mg) = 𝑍
= 1,0032 =996,8
➢ Peso 1= 962,8 mg
➢ Peso 2= 981,2 mg
➢ Peso 3= 967 mg
➢ Peso 4= 972,1 mg
➢ Peso 5= 969,5 mg

VALOR MEDIO
∑ 𝑥𝑝
𝑥 = 𝑛

962,8+981,2+967,0+972,1+969,5
𝑥 = 5
=970,52 µL

✓ Volumen medio: Z=1,0032

𝑽̅ =𝑥 . Z 970,52 ×1,0032
𝑽̅ =973,63

✓ Exactitud (E%)
𝑉̅ − 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑬 [%] = 𝑉 𝑛𝑜𝑚𝑖𝑛𝑎𝑙
×100
973,63−996,8
996,8
× 100
𝑬 [%]= -2,324

188.9076
S=1,0032× 4
s= 3.447

✓ Coeficiente de variación

𝑆×100
CV[%]= 𝑽̅
3.447×100
CV[%]= 973,63
CV[%]= 0.354035

Si los valores calculados de exactitud (E [%]) y coeficiente de variación (CV [%]) son menores que
los valores de tolerancia o iguales a éstos, entonces la micropipeta está en orden.

Tabla 2. Relación de datos para determinar la calibración de las micropipetas

Medidas Exactitud (E [%]) (CV [%])

5,0 -21,485 17.1794

10 -12,33 0.4173

10 -4,9 3.01997

100 -0,34 4889.873

1000 -2,324 0.354035

Con los valores obtenidos en los cálculos podemos decir que las micropipetas usadas para la práctica
se encuentran descalibradas, por lo tanto los valores obtenidos [tabla 2] no se encuentran entre los
valores de tolerancia establecidos; también podemos tener en consideración el error humano, que se
pudo dar por inexactitud de las muestras tomadas y de los valores pesados.

REFERENCIAS
[1] DE, L. P. D. E. C., & DE LA PRÁCTICA, P. N. N. 2009,. uso correcto de micropipetas.
[2] Cruz, K. C. M., Cruces, E. G., Francisco, V. L. H., & Luna, R. M. Aspectos Básicos para su
Manejo y Parámetros de Calibración.