Laboratorio de Biología Molecular -

Programa de microbiología

LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

Práctica número 1 “Calibración y uso de micropipetas”

Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

Facultad de Ciencias Básicas, Microbiología, Universidad Santiago de Cali, Cali, Colombia;

estudiante1@usc.edu.co (añadir correo INSTITUCIONAL de cada integrante)

Resumen

En el trabajo de laboratorio hay una serie de operaciones básicas, cuya correcta

ejecución es determinante para la obtención de unos resultados analíticos, en esta
práctica de aprendizaje nos centramos en el uso de las micropipetas de
desplazamiento de aire de accionamiento manual, por ser las más utilizadas en el
trabajo rutinario de laboratorio ya que La medida de volúmenes de los líquidos se
puede llevar a cabo mediante diferentes instrumentos como pipetas debido a los
diferentes tipos de pipetas encontramos las pipetas graduadas y aforadas, las
pipetas Pasteur o las micropipetas son de mayor utilidad cuando queremos medir y
transferir pequeños volúmenes de un líquido, en el rango desde unos pocos
microlitros a mililitros, es muy aconsejable el uso de micropipetas, de volumen fijo o
variable porque La técnica utilizada para pipetear con cada una de ella requiere
unas condiciones específicas de uso permite emplear distintos líquidos sin tener que
lavar el aparato; para ello se emplean puntas desechables, de plástico,. Existen
varios tipos de puntas para los diferentes volúmenes de pipeteo debido a que se
Analizaron los resultados obtenidos por cada micropipeta y se determinó mediante
los valores dados en el laboratorio con cada micropipeta no se encuentran dentro
del valor de tolerancia, por lo que la pipeta está mal calibrada.

Palabras clave: Micropipeta, Microlitros, Pipetas, Fórmulas.

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

Abstract

In laboratory work there are a series of basic operations, whose correct execution is decisive
for obtaining analytical results, in this learning practice we will focus on the use of manually
operated air displacement micropipettes, as they are the most used in routine laboratory work
since the measurement of volumes of liquids can be carried out using different instruments
such as pipettes due to the different types of pipettes we find graduated and volumetric
pipettes, Pasteur pipettes or

micropipettes are larger useful when we want to measure and transfer small volumes of a
liquid, in the range from a few microliters to milliliters, it is highly advisable to use
micropipettes, fixed or variable volume because the technique used to pipet with each one
requires specific conditions of use.

Keywords: Micropipette, Microliter, Pipettes, Formulas

INTRODUCCIÓN

Las micropipetas son uno de los equipos de laboratorio característicos de la biología

molecular, porque en realidad su desarrollo promueve la biología molecular, porque
permite obtener conocimiento de los procesos moleculares en las células en gran
medida, porque no hay rastros Las pipetas ni siquiera son posibles para iniciar la
investigación en este tema. Una pipeta es un instrumento que mide el volumen con
mayor precisión que un cilindro graduado o un gotero. Las micropipetas se pueden
utilizar para procedimientos tales como extracción de ADN de tejidos vegetales o
animales, extracción de plásmidos, preparación de soluciones o geles de
electroforesis, y se mencionan algunos ejemplos de procedimientos clásicos
utilizados en laboratorios. En biología molecular, el volumen debe ser del orden de
microlitros y la micropipeta tiene la función de medir con precisión estos volúmenes
en el orden de microlitros y las micros pipetas tienen como función medir con
precisión estos volúmenes Debemos tomar en cuenta que el error que se obtenga no
solo es por la mala calibración del equipo o el mal uso de éste, sino que el error
humano es un factor determinante. Una forma de ver qué tan significativos son estos
errores es conociendo que tanto variarán los datos obtenidos de una experimentación
utilizando la estadística descriptiva como la desviación estándar, media y coeficiente
de variación. [Cruz, K. C. M., Cruces, E. G., Francisco, V. L. H., & Luna, R. M.]

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

MATERIALES Y METODOLOGÍA 2-Llenar la micropipeta con el

Para todo este procedimiento se volumen deseado de agua (con
necesitó (Ver tabla 0) : colorante) del recipiente de
almacenamiento y dispensarla en el
Materiales Reactivos recipiente de pesado. Expulsar la
Balanza analítica Solución totalidad del agua.
Pipeta 1µL-10µL Colorante 3-Registrar el nuevo peso detectado
Pipeta 10µL-100µL por la balanza en la Tabla 1 (Tabla de
Pipeta 100µL-1000µL resultados y cálculos)
2 Beaker de 100mL
1 Beaker de 25mL 4-Repetir los pasos 9 veces
1 Frasco lavador adicionales, registrando al final de
Termómetro digital cada ciclo el peso que registra la
Puntas para cada tipo de balanza.
micro pipeta
5-Registrar la temperatura del líquido
en el recipiente de pesado al final del
décimo ciclo y medir el tiempo
transcurrido desde el inicio de las
mediciones.

6-Evaluar si la evaporación ha sido

significativa, (caso crítico cuando se
trabaja con micropipetas de volumen
muy pequeño). Si así se estima, se
debe permitir que transcurra un
período de tiempo adicional [Ta],
igual al utilizado durante las diez
mediciones, y cuando se complete,
efectuar una nueva lectura del peso
que registra la balanza.

7-Dividir la masa de agua perdida por

Metodología
1-Se preparó una solución en un
vaso de precipitado de agua destilada
con colorante; de esta solución
utilizando las micropipetas hasta que
se obtenga una altura del líquido de
al menos 3 mm.
evaporación en el tiempo adicional
[Ta] por el número total de muestras
analizadas (diez). Esto dará un
indicativo promedio de la masa de
líquido pérdida, debido a evaporación
por ciclo, cifra que debe añadirse a
cada una de las lecturas de
masa realizadas (Contreras, ND) Con
todo este procedimiento se obtendrán
los datos e información necesaria para
poder realizar todo lo que el laboratorio
propone.

Para finalizar el procedimiento realizado

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

cabe mencionar que se tiene que para ellos se analizará en cada volumen
analizar si las pipetas están en orden su exactitud (E%) y su coeficiente de vla

MEDICIONES 10 μL:

✓ Volumen controlado Vo (μL): 10 mg

✓ Valor nominal (mg) = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 = 10

Valores del control a 24 °C que corresponde entonces Z = 1,00374

=9,96274

VALOR MEDIO

=0,00459

✓ Volumen medio:

𝑽̅ = 0,00459×1,00374

𝑽̅ =0,00461

✓ Exactitud (E%)

(0.0461−10)/10× 100

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

𝑬 [%]=-99,95%

✓ Desviación estándar

S=0,00092

✓ COEFICIENTE DE VARIACIÓN

𝑽̅ CV[%]= 0.00092×100/0.00459

CV[%]= 19,92%

● Micropipeta 100 μL –1000 μL

MEDICIONES 100μL:

✓ Valor nominal (mg) = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 = 100

𝑍 = 1,00374

Valor medio

5
 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

=0,07770

Volumen medio:

𝑽̅ = 0,07770×1,00374

𝑽̅ =0,07799

✓ Exactitud (E%)

0.07799−100/100× 100

𝑬 [%]=-99.92%

✓ Desviación estándar

S=0.03610

✓ COEFICIENTE DE VARIACIÓN

𝑽̅ CV[%]= 0.03610×100/=0,07770

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

CV[%]=46,29%

● Micropipeta 1000 μL

MEDICIONES 1000μL:

✓ Valor nominal (mg) = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙𝑎𝑑𝑜 = 100

𝑍 = 1,00374

Valor medio

=0.97969

Volumen medio:

𝑽̅ = 0.97969×1,00374

𝑽̅=0.98335

✓ Exactitud (E%)

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

0.98335−1000/1000× 100

𝑬 [%]=-99.90%

✓ Desviación estándar

S=0.01282

✓ COEFICIENTE DE VARIACIÓN

𝑽̅ CV[%]= 0.01282×100/=0.97969

CV[%]=1,30%

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)

Tabla (0)

CV% nominal

Volumen (µL) E% nominal CV% nominal

5-10 1 0,8

20-50 0,7 0,4

100-1000 0,5 0,2

RESULTADOS:

(tabla 1)

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 Primer estudiante; segundo estudiante y tercer estudiante (En orden alfabético)
DISCUSIÓN
De los resultados obtenidos en la tabla n°
1, se hará un análisis tomando en cuenta
cada tipo de micropipeta, comenzando por
Micropipeta 0,5-10µL, de estos resultados se
detallan dos resultados los cuales tienen un
valor alto (0,0074 y 0,0072 mg) cabe resaltar
que esta toma de muestra fue hecha por el
profesor encargado del laboratorio y tomando
en cuenta su experiencia y manejo del
instrumento los valores obtenidos superan la
media que se obtiene de los estudiantes, los
cuales era la primera vez que manipulaban
estos instrumentos, dentro del error humano
cabe resaltar que se pudo observar como
quedaba residuo del líquido, lo que altera el
resultado. Micropipeta 10-100µL Los valores
obtenidos muestran una constante más
estable con relación a las primeras muestras,
esto se debe a una mejor técnica, sobre todo
por seguir instrucciones como mantener la
micropipeta en posición vertical, se mejoró
considerablemente el tema de los residuos
que quedaban en la punta desechable. Para
finalizar, la Micropipeta 100-1000µ, se
observa también una constante con referencia
a los resultados obtenidos.
CONCLUSIONES
Después de realizar el análisis de
resultados nos podemos dar cuenta que los
valores dados al realizar el laboratorio con
las micropipetas no están dentro de los
valores de tolerancia y por ende dichas
pipetas están mal calibradas.
Se puede confirmar esto, si se compara los
valores entregados de laboratorio en la
tabla en la fila diecisiete y dieciocho (17;
18) en la que se menciona los resultados
de “Exactitud (E%) y Coeficiente
variación (CV%)” respectivamente, con
dichos datos y los entregados por el
manual de laboratorio
Gracias al trabajo de la guía y las
instrucciones otorgadas en el manual de
laboratorio se logró comprender el uso y
manejo correcto de este tipo de
herramientas de laboratorio, como también
entender saber si la pipeta se puede usar o
no, mediante las fórmulas prestadas por la
guía.
BIBLIOGRAFÍA
● Brandan, E. LABORATORIO
1:“Aprendiendo a usar el
microscopio y micropipetas”.
● DE, L. P. D. E. C., & DE LA
PRÁCTICA, P. N. N. uso correcto
de micropipetas.
● Eppendorf AG (2020). Eppendorf
Research plus. Manual de
instrucciones. Disponible en:
https://www.eppendorf.com/product-media
/doc/es/174967/Eppendorf_LiquidHandlin
g_Operating-manual_Research-plus.pdf
● Mettler-Toledo AG (2014).
Pipetting Handbook. Disponible
en:
https://www.mt.com/es/es/home/library/gu
ides/rainin-pipettes/rainin-pipettinghandbo
ok.html
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