Aislamiento y cuantificación de microorganismos

Laboratorio de Microbiología General I L-122,

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM, México D.F.
RESUMEN
Se llevaron a cabo dos métodos distintos para la
cuantificación de bacterias en el agua de alfalfa: uno de
ellos por dilución seriada con diluciones secuenciales
-6
hasta obtener una concentración de 10 y se usó el
método de vaciado en placa con AN. La otra técnica
usada fue por asa calibrada sembrando en agar EMB.
Se incubó y leyó a las 48 horas en ambas pruebas.
OBJETIVO
Dominar las técnicas más utilizadas en el aislamiento de
microorganismos (m.o.) de diferentes fuentes. Explicar
el fundamento de las técnicas más utilizadas en el
recuento microbiano: dilución y vaciado en placa
INTRODUCCIÓN
dilución. Se tomó 1 mL de las diluciones 10 -3 a 10-6 y se
vaciaron a una caja Petri cada uno. Luego se vertió en
las cajas con las muestras el agar nutritivo a 50°C y se
homogenizó moviendo lentamente la caja en círculos y
cruces sobre la superficie de la mesa. Se incubaron a
37°C por 48 horas y se efectuó el conteo de las
colonias. Para el asa calibrada se tomó con la misma
una muestra del agua de alfalfa y se sembró en una caja
Petri con agar EMB por estría en 4 cuadrantes, se
incubó a 37°C y se observó a las 48 horas.
RESULTADOS
Se contaron las colonias de la placa con dilución 10 -4
por ser la más viable, resultando en un total de 157
colonias y por consiguiente 1.57x106 UFC/mL.

La separación de m.o. presentes en una población

mixta puede lograrse de varias maneras: separando a
los m.o. físicamente mediante diluciones; por
agotamiento de un pequeño inoculo en un medio de
cultivo sólido. La elección de la técnica y del medio de
cultivo dependen del origen de la muestra y de las
características del m.o. que se desea aislar. En todos los
casos se parte de un volumen o peso de muestra
conocido.

Se determina el número de m.o. cuantificando el

número de células viables, o bien, la masa total de la
población. Posteriormente se hacen cálculos que Ilustración 1. Dilución 10-3.
determinan finalmente el tamaño de la población total.

El método de vertido en placa consiste en usar un

volumen conocido de muestra a analizar y preparar
diluciones seriadas de esta para luego sembrar en
placas volúmenes conocidos. Luego se calcula el
crecimiento bacteriano por mL expresado en UFC según
la fórmula: UFC / mL = (colonias contadas) x (reciproco
de dilución).

MÉTODO

Para las diluciones se colocó en cada uno de los tubos

estériles 9 mL de solución salina y se identificaron como
las diluciones de 10-1 a 10-6, se tomó 1 mL de la muestra Ilustración 2. Dilución 10-4.
problema (agua de alfalfa) y se colocó en el primer
tubo, de ahí se tomó 1 mL para el siguiente tubo y así
secuencialmente para cada tubo hasta llegar a la última
 Aislamiento y cuantificación de microorganismos
Laboratorio de Microbiología General I L-122,
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM, México D.F.

DISCUSIÓN

Se observó crecimiento en las cajas de las diluciones,

sin embargo, sólo la caja con la dilución 10 -4 pudo
contarse dentro del rango de 30 a 300 colonias. Una
vez hecho el conteo se calcularon 1.57x10 6 UFC / mL
(millón y medio de unidades formadoras de colonias).

Se obtuvo crecimiento, más no aislamiento, en el agar

EMB, debido a que no se arrastró muestra de la
descarga masiva, por lo cual no se logró la dilución por
arrastre. Así que no se logró contar colonia alguna.
Ilustración 3. Dilución 10-5.
CONCLUSIONES

Se logró realizar exitosamente el conteo en placa por

medio del método de diluciones seriadas. No se logró
observar aislamiento en el agar EMB por error al
momento de sembrar.

REFERENCIAS

 Brock, T. D. Biología de los microrganismos. 4ª ed.

España: Editorial Omega S.A.; 1982.
 Delaat, N. Microbiología. 2ª ed. México:
Interamericana; 1983.
 Díaz R., Gamazo C., López G. I. Manual práctico de
microbiología. 2ª ed. Barcelona; 2000.
Ilustración 4.Dilución 10-6.
 Pelczar Jr. Michael J. Reid Roger D. Microbiología.
2ª ed. Mexico: Mc Graw-Hill; 1996.
 Tortora, G., Funke, B., Case, C. Microbiology, an
introduction. 8th ed. San Francisco: Pearson-
Benjamin Cummings; 2004.

Ilustración 5. Agar EMB sembrado con asa calibrada.