“Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia”

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Facultad de Ingeniería Química

Tema: Análisis de Agua por Filtración

ESTUDIANTES:
Castelo cortez kenyi issac
Ore Sánchez Julissa

DOCENTE
Dra. Sonia Elizabeth Herrera Sánchez

2021
Introducción

El agua es un factor importante en la producción de los medicamentos, por lo

tanto, su calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima más
usada y además está presente en otros procesos relacionados con dicha
producción, como por ejemplo en los de limpieza y sanitarización.

Es por ello que el agua puede considerarse una fuente potencial de

contaminación bacteriana de los medicamentos. En la industria farmacéutica se
conocen cinco tipos de agua: agua potable, agua suavizada, agua desionizada,
agua destilada y agua producida por ósmosis reversa. La calidad
microbiológica de cualquier tipo, dependerá del contenido microbiano del agua
utilizada como materia prima, de los métodos de tratamientos a los que es
sometida, y de los sistemas empleados para su almacenamiento y distribución.
Para garantizar la calidad microbiológica del agua, es necesario realizar el
control de la misma, utilizando diferentes métodos, que nos permitan realizar la
numeración o el recuento de bacterias aerobias mesófilas, mohos y levaduras,
coliformes o la investigación de microorganismos patógenos.
Objetivos

• Cuantificar la cantidad de microorganismos presentes en una

• muestra de agua. Comparar los resultados obtenidos entre los dos
métodos
MARCO TEORICO

En el agua pueden encontrarse una gran variedad de microorganismos, los

cuales afectan en mayor o menor medida a la calidad sanitaria del agua
Además de la flora normal presente en cualquier sistema acuático (ejemplos:
Bacillus, Pseudomonas, etc.), pueden existir otros microorganismos
contaminantes, algunos de ellos patógenos para el ser humano y/u otros
animales. Una de las fuentes principales de contaminación son las aguas
residuales que contienen materia fecal que puede ser vehículo de transmisión
de patógenos.

Análisis del agua

La calidad del agua se valora mediante análisis bacteriológico, utilizando a

distintos tipos de microorganismos. Los ensayos que se realizarán en esta
práctica serán: 1. Recuento de bacterias heterótrofas 2. Valoración de bacterias
indicadoras de contaminación fecal: Coliformes totales (CT), coliformes fecales
(CF) y estreptococos fecales (EF). Los métodos de análisis a emplear serán los
recomendados por la legislación vigente. a) Filtración por membrana b)
Diluciones sucesivas y valoración según el número más probable (NMP) 3.
Otros indicadores o bacterias.

Valoración de bacterias indicadoras de contaminación fecal

Método de la filtración por membrana

La técnica se basa en el crecimiento, identificación y recuento de los

microorganismos retenidos en la superficie de un filtro, a través del cual se ha
filtrado un volumen conocido de agua, incubado en un medio de cultivo durante
un tiempo determinado y a una temperatura adecuada.

Se basa en el crecimiento, la identificación y el recuento de las colonias de los

microorganismos retenidos en la superficie de un filtro, a través del cual se ha
filtrado un volumen conocido de muestra de agua. Incubada en un medio de
cultivo durante un tiempo y a una temperatura adecuadas.
• Se ha convertido en el método más común y preferido para evaluar las
características microbiológicas del agua.

Principio básico del método

En esencia, el método consiste en:

Pasar una muestra de agua a través de un filtro de membrana (0,45 µ tamaño

de poro y 47 mm de diámetro) luego Transferir el filtro con las bacterias
atrapadas a la superficie de un medio sólido (con agar) o a un soporte
absorbente, conteniendo el medio líquido deseado (sin agar), El uso del medio
apropiado permite la detección rápida de los CT, CF y EF.

Ventajas de la filtración por membrana

Las ventajas de usar la filtración a través de membranas para evaluar la calidad

microbiológica del agua, son:

• Buena reproducibilidad.

• Con frecuencia se obtienen resultados en un solo paso.

• Los filtros pueden intercambiarse entre medios diferentes.

• Pueden procesarse grandes volúmenes de agua, para aumentar la

sensibilidad del ensayo.

• Ahorro de tiempo considerable.

• Posibilidad de realizar la filtración in situ.

• El coste es bajo en comparación con el método NMP.

Inconvenientes de la filtración por membrana

• Los inconvenientes son

• El agua con mucha turbidez puede limitar el volumen de las muestras.

• Poblaciones numerosas de bacterias ocasionan una formación excesiva de

colonias, incontables.
• Los metales y los fenoles pueden adsorberse en los filtros e inhibir el
crecimiento.

Volumen De agua a filtrar

Los volúmenes de agua recomendados para la filtración directa sobre membrana

filtrante por la normativa vigente para la vigilancia de la calidad sanitaria de las aguas
costeras y de playas son: 100 ml, 20 ml, y 5 ml. Esto significa la realización de tres
filtraciones e incubaciones para cada muestra de agua y para cada tipo de
microorganismo analizado. Cuando el contenido bacteriano o de materia en
suspensión de la muestra inicial de agua haga necesaria la utilización de un volumen
inferior a 1 ml, la alternativa apropiada es la dilución de la muestra. La utilización
directa de volúmenes inferiores a 1 ml no permite obtener resultados satisfactorios. La
dilución del agua se tiene que llevar a cabo en una botella que contenga el volumen
adecuado del diluyente estéril (botella con capacidad entre 50 y 200 ml).

También se recomiendan los intervalos de colonias que se pueden contar sobre un

filtro que son los de la tabla siguiente:

Microorganismos Numero de colonias Numero de colonias

indicadores mínimo máximo
Coliformes totales 20 80
Coliformes fecales 20 60
Estreptococos fecales 20 100

Cuando se tenga que filtrar volúmenes inferiores a 1 ml, se recomienda diluir la

muestra original y filtrar, a continuación, un volumen superior a 1 ml. La tabla muestra
los factores de proporcionalidad para la dilución progresiva de una muestra inicial de
agua, en función del tipo de microorganismo analizado

Microorganismo Factor de proporcionalidad

Coliformes totales 4
Coliformes fecales 3
Estreptococos fecales 5
Método de las diluciones sucesivas y valoración según el NMP

La técnica de las diluciones sucesivas y la valoración según el NMP es un

método de enumeración indirecta, basado en la interpretación estadística del
crecimiento, o no crecimiento, observado en varias series de tubos, inoculados
con volúmenes decrecientes de la muestra de agua. Ya que el método exige el
no crecimiento de gérmenes en una serie dada de tubos correspondientes a
una determinada dilución, después de la inoculación e incubación adecuadas,
es necesario realizar las diluciones suficientes para ello. El número de
diluciones a realizar dependerá del grado de contaminación de la muestra. La
tabla de la página siguiente muestra las diluciones recomendadas según el tipo
de microorganismo a valorar y el nivel de contaminación presente en el agua.
Materiales y reactivos

• Medios de cultivo: caldo lactosado, caldo verde bilis brillante, caldo EC-
Mug, caldotriptona, reactivo de Kovac, agar LES-ENDO.
• Asas de nicromo
• Mechero
• Bomba de vacío
• Filtros de Membrana
• Equipo para filtración por membrana
• Probeta de 100 mililitros
• Vaso de Precipitado de 100 mililitros

Mechero de bunsen asa de nicromo

Caldo verde bomba de vacío

Filtros de membrana Equipo para filtración

Probeta 100 Ml Vaso precipitado 100 Ml

 Procedimiento experimental

Pesar 50 g de muestra y agregamos diluyente de peptona relación 1:10

Preparamos las diluciones con buffer de fostatoVortex todas las muestras

durante7 segundos Inoculamos 1 mililitro demuestra en 5 tubos con caldo
lauriltriptosa (LST) o caldolactosado, Incubar a 35°Cdurante 24 horas
Reincubar los tubos negativos durante 24 horas después Examinamos y
registramos los tubos positivos.

De los tubos positivos transferirán asa a tubos con caldo verde bilis brillante
Incubar a 35°Cdurante 48 horas Calculamos el NMP de coliformes totales con
los tubos positivos después Transferimos de los tubos positivos de LST una
asada a tubos con caldo EC después una vez más Incubar a 45.5°Cdurante 24
horas Examinar los tubos, los negativos reincubar durante 48 horas Usar los
resultados de esta prueba para calcular coliformesfecalesPara completar E.coli,
agitar los tubos gaseosos de caldo ECy estriar en agar L-EMB Incubar de 18 a
24horas a 35°C Examinar cajar y transferir 5 colonia sospechosas a agar
ACEIncubar durante 18a 24 horas a 35°C y utilizar para su análisis posterior
Inocular tubos de caldo tripona encubar 24 horas a35°C Agregar 0.2 a
0.3mililitros de reactivo de Kovacs. Si aparecen color rojo distintivo es positivo
después reportamos resultados. Esto es para el análisis Coliformes totales,
fecales y E. coli por NMP.

Filtrar 100mililitros de muestra Transferir el filtro aagar M-ENDO o Les Endo

Agar Incubar 24 horas a35°C luego Contamos las colonias de color rosa a rojo
oscuro con un brillo en la superficie color verde metálico

Si hay de 5 a 10colonias con brillo metálico transferirlas a cadoLST Incubar 48

horas a35°C Cualquier tubo con producción de gas transferir una asada a caldo
bilis rojo violeta Incubar 48 horas a35°CCualquierproduccion de gas da como
positivo para coliformes después reportamos resultados.
Paso 1 Materiales para la filtración de membrana

Paso 2 proceso de filtrado

Paso 3 colocación del filtro en agar

Paso 4 en la placa Petri observaremos un crecimiento positivo de
echirichia coli
Resultados

Número más probable.

Microorganism Método Colonia Límites Norma

o s máximos

permisibles

Coliformes Bacteriologic 2 NMP / 100 NORMA

totales al Analytical ml Oficial

Manual FDA Mexican

NOM-127-

SSA1-1994

Coliformes Bacteriologic No detectables NORMA

fecales al Analytical Oficial

Manual FDA MexicanNOM-

127-SSA1-

1994

E. coli Bacteriologic N/A NORMA

al Analytical Oficial

Manual FDA MexicanaNO

M-127-SSA1-

1994
Filtración por membrana

Microorganis Método Colonias Límites Norma

mo máximos

permisibl

es

Coliformes Bacteriologi incontab 2 NMP / NORMA

totales cal le 100 ml Oficial

Analytical MexicanNO

Manual - M-127-

FDA SSA1-1994

Coliformes Bacteriologi <1 No NORMA

fecales cal detectabl Oficial

Analytical es MexicanNO

Manual - M-127-

FDA SSA1-1994

E. coli Bacteriologi Ausente N/A NORMA

cal Oficial

Analytical MexicanNO

Manual - M-127-

FDA SSA1-1994
 Conclusiones

La muestra que se analizó por el método de filtración por membrana no

fue la misma que se analizó por el método del número más probable

debido a que no se encontraba abierto el laboratorio donde se tenía

resguardada la muestra. En realidad, nuestra muestra fue recolectada

de la fuente de un parque por lo que los valores máximos son

sólo representativos.

No se cumplieron los objetivos de la práctica ya que no se analizó la

misma muestra de agua con ambos métodos, es necesario repetir la

determinación de coliformes por el método de filtración por membrana.

Los valores máximos expresados en la tabla de resultados son sólo

representativos ya que la muestra no era para consumo humano.

BIBLIOGRAFIA

• https://www.academia.edu/24474189/An%C3%A1lisis_de_agua

• https://ruc.udc.es/dspace/bitstream/handle/2183/19635/PrietoSierra_

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• http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedra

Micro/10_membrana_filtrante.pdf

• http://www.ideam.gov.co/documents/14691/38155/Coliformes+total

es+y+E.+coli+en+Agua+Filtraci%C3%B3n+por+Membrana.pdf/541

4795c-370e-48ef-9818-ec54a0f01174
• https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35550/analisis_de

_aguas.pdf

• https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35734/tema_7.pd

f
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