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Escuela Profesional de Ingeniería

Química Facultad de Ingeniería Química

LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA 9:

GRUPO: 90G
DOCENTE: Dra. Sonia Herrera Sánchez

INTEGRANTES:
Castelo Cortez Kenyi Issac
Quiñonez Moreno Carmen
Oré Sánchez, Julissa

CALLAO – 2021
I. INTRODUCCIÓN

La contaminación fecal de las fuentes de aguas superficiales para abastecimiento de


consumo humano es uno de los problemas más preocupantes en los países en vías
de desarrollo. En las grandes ciudades esta contaminación se debe principalmente al
vertimiento de los desagües sin ningún tratamiento. Además del vertimiento o
infiltración de aguas residuales sin tratar, también aportan contaminantes los lixiviados
de rellenos sanitarios, los efluentes de aguas residuales con tratamiento deficiente,
las infiltraciones de tanques sépticos, etcétera. Asimismo, la escorrentía pluvial y las
inundaciones ocasionan el deterioro de la calidad del agua de los recursos hídricos.
En las zonas rurales la contaminación fecal se origina por la defecación a campo
abierto y por la presencia de animales domésticos y silvestres que actúan como
reservorios de agentes patógenos. En relación con el estándar de calidad del agua.
La presencia de más de un organismo Coliforme por 100 ml. es suficiente para que el
agua se considere como no potable. Las bacterias coliformes, corno grupo, no tienen
el mismo significado en los alimentos que en el agua. Se han instituido normas de
coliformes para determinados alimentos. Muchos bacteriólogos consideran que la
investigación del grupo Coliforme en los alimentos tiene escasa significación y que
únicamente se debe valorar desde el punto de vista de la calidad, la presencia de
Coliformes Fecales (E. coli).
II. OBJETIVOS

● Conocer cómo identificar y realizar el conteo de E. Coli y bacterias coliformes mediante


el método de filtración por membrana para aguas.
MARCO TEÓRICO

El agua es un elemento fundamental en el


proceso de fabricación de alimentos para
el consumo humano y proviene
principalmente de los ríos y pozos
naturales. La calidad de esta agua es un
factor determinante en todas las
industrias. Por ello, se hace necesario
que esta agua cumpla con los requisitos
microbiológicos de la calidad sanitaria del agua potable. Uno de los grupos de
microorganismos recomendados en guías y normas como indicadores de la calidad
del agua potable e importantes para su valoración en términos sanitarios, es el grupo
de las bacterias coliformes, el cual está formado por los coliformes totales y fecales o
termotolerantes, estos últimos relacionados con la posible presencia de
contaminación fecal.

El término Coliformes se utiliza para aquellas bacterias Gram negativas, que son
capaces de fermentar lactosa como única fuente de carbono y con producción de gas
dentro de las 48 hs cuando se incuban a 35-37ºC. La presencia de coliformes indicaría
contaminación fecal lejana en el espacio o en el tiempo. En esta categoría entran
algunos géneros de la Flia. Enterobacteriaceae, algunas de las cuales están
ampliamente distribuidas en la naturaleza y que no necesariamente son patógenas.
Son pequeños, tiene forma de bastoncillos (0,5 um por 3 um), no forman esporas,
pueden ser móviles y formar cadenas.
El grupo de microorganismos Coliformes es adecuado indicador de contaminación
bacteriana ya que los coliformes son:
● Comensales comunes del tracto gastrointestinal tanto del hombre como de los
animales de sangre caliente.
● Están presentes en el tracto gastrointestinal en grandes cantidades.
● Permanecen más tiempo en el agua que las bacterias patógenas.
● Se comportan de igual manera que los patógenos en los sistemas de
desinfección.
Los coliformes fecales y Escherichia coli en particular, se han seleccionado como
indicadores de contaminación fecal debido a su relación con el grupo tifoideparatifoide
y a su alta concentración en diferentes tipos de muestras.
Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaz de fermentar
la lactosa a 44.5°C.
Aproximadamente el 95% del grupo de los coliformes presentes en heces fecales
están formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. ya que los
coliformes fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de animales de
sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminación fecal.
El grupo de los microorganismos Coliformes es adecuado como indicador de
contaminación bacteriana, ya que es el grupo de más rápida y fácil detección. Los
microorganismos indicadores son aquellos que tienen un comportamiento similar a los
patógenos pero son más rápidos, económicos y fáciles de identificar.
Una vez se ha evidenciado la presencia de grupos indicadores, se puede inferir que
los patógenos se encuentran presentes en la misma concentración y que su
comportamiento frente a diferentes factores como pH, temperatura, presencia de
nutrientes o sistemas de desinfección es similar a la del indicador.

Los coliformes para ser utilizados como indicadores deben poseer las siguientes
propiedades:
1.Especificidad: sólo se deben encontrar en el medio intestinal.
2.Se hallarán en grandes cantidades de tal manera que pueden ser detectadas en altas
diluciones.
3.Ser muy resistente a las condiciones ambientales, extra intestinales.
4.Aunque se encuentran en una baja proporción puedan ser detectados de forma facil y
completa.
5.Su tiempo de supervivencia debe ser igual o un poco superior al de las bacterias
patógenas.
6.Debe ser fácil de aislar y cuantificar.
7.No debe ser patógeno.
La denominación coliformes totales y fecales no tiene validez taxonómica, estos
términos sirven más bien para designar a grupos de bacterias capaces de crecer en
condiciones específicas.
Escherichia coli es una bacteria perteneciente a esta familia que puede tener origen
fecal, por lo que su presencia se considera indicador de contaminación fecal. Este
organismo es bilis tolerante y puede desarrollarse a 44ºC. Habitualmente el recuento
de coliformes se determina empleando el método de Número más Probable (NMP),
aunque también existen métodos por filtración a través de membrana (MF). Pero
también puede ser suficiente el uso de métodos de Presencia / Ausencia (P/A).

Recuento de microorganismos coliformes:


Los recuentos de microorganismos indicadores deben compararse con los límites de
tolerancia definidos por la normatividad vigente, cuyas especificaciones están unidas
al método utilizado para definir los límites
El método del número más probable (NMP) se aplica para recuento de coliformes,
coliformes fecales y de cepas gasógenas (aerógenas) de Escherichia coli. El método
no sirve para aislar ni contar serotipos de E. Coli asociados a enfermedades humanas.
Tales cepas no dan positiva la reacción de los coliformes fecales y por tanto ni pueden
detectarse ni contarse con este método.
Alimentos de cualquier tipo, sus ingredientes y agua, incluyendo la de la instalación
donde se prepara el alimento. Ciertas legislaciones recogen alguna variante del
método para un alimento particular. En tales casos debe seguirse ese método. El
procedimiento es progresivo para detectar tres grupos de microorganismos:
acoliformes, b-coliformes fecales, C- E. Coli
Primero se determina la presencia de coliformes (prueba presuntiva), después se
determina si los cultivos contienen coliformes, además coliformes fecales y finalmente
se confirma la presencia de E. Coli.
Tres o más diluciones de la muestra se inoculan en un medio de cultivo líquido (en
tubos) y se incuban a temperatura definida durante un tiempo definido. El número más
probable de microorganismos de los tres grupos se calcula sobre una tabla estadística
estándar del NMP utilizando el número de cultivos que indican la presencia o ausencia
de estos microorganismos.
III. MATERIALES

Autoclave

Estufa de incubación

Equipo para la filtración en


membrana

Filtros de membrana
Pinza

Probeta

Placa Petri

Mechero Bunsen

Agar
IV. EXPERIMENTACIÓN

PRIMERO USAMOS EL AUTOCLAVE PARA ESTERILIZAR TODO EL MATERIAL

• Filtramos la muestra, en nuestro caso 100ml, los volúmenes muestras de las diluciones

deben ser mayor a 10 ml para asegurar una buena distribución de las bacterias sobre la

membrana, sería ( 10^-1; 10^-2 y 10^-3). Las colonias deben encontrarse dentro del

rango de 10 a 200 colonias filtrados.


• Luego de la filtración se coloca la membrana filtrante en la placa Petri, con el
agar cromogénico.
• Luego llevarlo esta placa Petri de forma invertida a una estufa donde se incuba a
36 °C durante 21 horas

• Por último, se hace el recuento siguiente: números de colonias que representan


reacción positiva beta D- galactidasa de color rosa a rojo, estas colonias son
presuntas coliformes.
y las que presentan positivas a la beta D- galactidasa y beta D- glucoronidasa
de color azul oscuro a violeta, como E. Colli
V. RESULTADOS

Recuento de bacterias coliformes / 100 mL de muestra:

∑Colonias de color rosa a rojo + ∑Colonias de color azul oscuro a violeta

Recuento de E. Coli / 100 mL de muestra:

∑Colonias de color azul oscuro a violeta

Recordar que para un recuento efectivo se debe limitar el número total de colonias
entre 10 y 200 por filtro incubado

• Para una dilución 10-3:


Se descarta porque el número total de colonias obtenidas es menor a 10.

• Para la dilución 10-2:


Se obtiene 3 colonias azules y 10 colonias rosas, al igual que la primera dilución la
descartamos porque el número total de colonias E. Coli es menor a 10.
• Para la dilución 10-1:
Se obtiene 21 colonias azules y 53 colonias rosas. El cual si cumple ya que el número
total de colonias obtenidas es mayor a 10.

Cálculos Datos:
- Colonias de color rosa: 53
- Colonias de color azul: 21 - Factor de dilución: 10

• Recuento de bacterias coliformes / 100 mL de muestra:

∑Colonias de color rosa a rojo + ∑Colonias de color azul oscuro a violeta

Dilución 10-1 → (53 + 21) * 10 = 740 colonias / 100 mL de muestra Obtenemos:


740 colonias de bacterias coliformes / 100 mL de muestra.
• Recuento de E. coli / 100 mL de muestra:

∑Colonias de color azul oscuro a violeta

Dilución 10-1 → 21 * 10 = 210 colonias / 100 mL de muestra

Obtenemos: 210 colonias de E. coli / 100 mL de muestra.

VI. CONCLUSIONES

Aprendimos a cuantificar e identificar bacterias coliformes y E. coli en muestras de


agua, mediante el método de filtración por membrana.

VII. RECOMENDACIONES

• Al momento de tomar la muestra, tener en consideración todas las normas de


bioseguridad para evitar que los posibles microorganismos no llegan a nuestro
sistema y puedan generar algún daño
• Tener siempre cuidado al momento de realizar las disoluciones evitar usar la
misma pipeta para evitar errores posteriores al momento de hacer lectura de los
resultados
• Pasado el tiempo de incubación de las disoluciones se recomienda agitar y
comparar con un tubo de ensayo inicial para ver si realmente la turbidez cambió
• Al momento de hacer las lecturas procurar llevar el conteo de manera ordenada y
marcando siempre.
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

• Marchand,2002: Microorganismos indicadores de la calidad del agua de consumo


humano en lima metropolitana, Universidad Nacional Mayor de san Marcos.
Perú-Lima. recuperado de:
https://sisbib.unmsm.edu.pe/BibVirtualData/Tesis/Basic/Marchand_P_E/tesi
s_completo.pdf
• Piedad & at et, 2013: LASALLISTA DE INVESTIGACIÓN - Vol. 10 No. 1 - 2013 -
P. Anaya et al - 91•100, recuperado de:
http://www.scielo.org.co/pdf/rlsi/v10n1/v10n1a09.pdf
• León et. al. (2014). ISSU, Análisis de coliformes totales y fecales-número más
probable NMP. Recuperado de
https://issuu.com/holmaneduardo/docs/informe_microbiologia_practica_de
_c_4a5e7904039817
• Paéz Delgado, C. G. (2007). Determinación de coliformes fecales y totales en
expendio de alimentos en establecimientos formales. La Paz, Bolivia: Universidad
Mayor de San Andrés.