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ANALISIS DE AGUAS

PARÁMETRO: MÉTODOS DE TINCIÓN PARA EL ESTUDIO DE HOJA Nº:

PROTOZOOS
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REF.: UNIDADES: RANGO:

CONC. MAX. ADMISIBLE: NIVEL GUIA:

1. FUNDAMENTO

Para poder hacer un estudio sobre los protozoos que habitan en cualquier sistema acuático, es necesario
realizar análisis cualitativos y cuantitativos.

2. ANÁLISIS CUALITATIVO

Consiste en ver que especies habitan en los sistemas a estudiar. Para ello se recogen muestras de 100mL
y se dejan destapadas para que el oxígeno difunda. Las muestra han de ser observadas a microscopio lo
antes posible ya que las condiciones en el bote cambian y con ellas las poblaciones de microorganismos.
Las muestras se observan en vivo pues el tipo de movimiento de los organismos te indica bastante sobre
el grupo al que pertenecen. Se pone una gota en el portaobjetos y se le pone un cubreobjetos,
posteriormente se observan bajo el microscopio óptico de menor a mayor aumento teniendo en cuenta
que para utilizar el objetivo de mayor aumento es necesario el aceite de inmersión.

Para determinar los organismos es necesario observar sus estructuras internas como el núcleo, vacuolas
pulsátiles, patrones de ciliación, flagelos,etc…

Algunas de estas estructuras sólo son observables mediante métodos de tinción. Para ello a veces se hace
necesario cultivar los organismos.
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PROTOZOOS
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2.1. Método de cultivo

Mediante el medio de lechuga. Se pone a calentar 100mL de agua mineral con un poco de polvo de
lechuga el cual se obtiene por secado de las hojas, se deja hervir un ratito hasta que el agua coja color,
posteriormente se filtra con el kitasato utilizando un filtro de fibra de vidrio con 0,45 µm de diámetro de
poco. Posteriormente se deja enfriar y se siembra en dicho medio sembrado en la estufa a 37ºC durante
24 horas o más. Entonces ya obtienes un medio cargado de bacterias donde puedes sembrar los
protozoos bacterívoros pescándolos con microcapilares directamente del agua visulizándolos
microscópicamente y expulsándolos en el medio preprado. Al cabo de los días tienes un cultivo de los
organismos que quieres.

2.2. Métodos de tinción

- Verde de metilo pironina: se utiliza para poner de manifiesto los núcleos. A una gota de agua se le
añade una gota del tinte con un capilar y se extiende soplando.

Preparación del verde de metilo: solución de verde metilo al 1% a partir de una solución de ácido
acético al 1%. Esta tinción se puede realizar sin necesidad de cultivo.

- Líquido de Noland: se utiliza para poner de manifiesto los flagelos en aquellos organismos que son
flagelados. A una gota de agua se le añade una gota del tinte con un capilar y se extiende soplando.

- Tinción de Fernández-Galiano: se utiliza para poner de manifiesto los patrones de ciliación de los
organismos ciliados.

El procedimiento a seguir es el siguiente:

- 1 gota de formol. 1,7cc. de cultivo, se espera 2 minutos agitándo, 3 gotas de piridina, 0,7 mL de
carbonato de plata amoniacal, 6 gotas de peptona al 4%, 5mL de agua destilada, se pone todo a calentar
hasta que la mezcla alcance los 60ºC y vire de color blanco lechoso a color coñac.

- Rápidamente se le añade 5mL de hiposulfito o de tiosulfato de sodio al 2,5%.

- Preparación de la peptona: se disuelven 0,4g de proteosa peptona e 10mL de agua destilada.

- Preparación del carbonato de plata amoniacal: 50mL de nitrato de plata al 10%, 150mL de carbonato
sódico al 5%, se forma un precipitado de color blanco que se agita y al que se le va añadiendo amoniaco
gota a gota hasta la dilución para posteriormente añadir 550mL de agua destilada. Se guarda en una
botella oscura.
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3. ANÁLISIS CUANTITATIVOS

Dichos análisis pueden ser realizados con los organismos previamente fijados con líquidos de Bouin,
fijador que conserva muy bien las estructuras de los protoozarios. Se añaden 5 mL de líquido de Bouin a
100mL de muestra.

Preparación del líquido de Bouin:

- 15 partes de solución ácida saturada de ácido pícrico, 5 partes de formol al 37% y 1 parte de ácido
acético glacial. Ello se puede hacer para 100mL.